BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI TRẦN VIẾT TẬP “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN NHỊ GIÁ ðÔNG KHÔ PHÒNG BỆNH DỊCH TẢ VỊT VÀ VIÊM GAN DO VIRUS Ở VỊT” LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI - 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là ñề tài nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, do tôi khảo sát nghiên cứu, có sự giúp ñỡ của các ñồng nghiệp trong cơ quan và chưa từng ñược sử dụng công bố trong bất kỳ công trình khoa học nào. Tôi xin cam ñoan, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Trần Viết Tập Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân còn có sự hướng dẫn tận tình của thầy hướng dẫn khoa học TS. Nguyễn Bá Hiên. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến thầy hướng dẫn, người ñã dành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban giám ñốc Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương. - Tập thể cán bộ công nhân viên trong phân xưởng vacxin virus, ban kiểm nghiệm vacxin virus – Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương - Viện sau ñại học – Trường ñại học Nông Nghiệp Hà Nội. ðã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân, bạn bè, ñồng nghiệp - Những người luôn tạo ñiều kiện, ñộng viên, giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2012 Tác giả luận văn Trần Viết Tập Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình ix MỞ ðẦU i 1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 2 Mục ñích nghiên cứu ñề tài 2 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 2 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH DỊCH TẢ VỊT 3 1.1.1 Lịch sử và tình hình bệnh dịch tả vịt trên thế giới và Việt Nam 3 1.1.2 Virus dịch tả vịt 6 1.1.3 Bệnh dịch tả vịt 10 1.1.4 Miễn dịch chống virus dịch tả vịt 15 1.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH VIÊM GAN VỊT 19 1.2.1 Lịch sử và tình hình nghiên cứu về bệnh viêm gan vịt 19 1.2.2 Virus học bệnh viêm gan vịt 21 1.2.3 Bệnh Viêm gan Vịt 24 1.2.4 Miễn dịch chống bệnh viêm gan vịt 28 1.2.5 Vacxin và vấn ñề phòng bệnh 30 1.3 ðÔNG KHÔ VACXIN 33 1.3.1 Khái niệm. 33 1.3.2 Mục ñích của kỹ thuật ñông khô 34 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 1.3.3 Tính ưu việt của sản phẩm ñông khô 34 1.3.4 Các giai ñoạn của quá trình ñông khô 34 Chương 2. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 NỘI DUNG 37 2.1.1 Kiểm tra một số chỉ tiêu sinh học của các chủng Master seed dùng chế vacxin nhị giá 37 2.1.2 Xây dựng quy trình sản xuất vacxin 37 2.1.3 ðánh giá chất lượng vacxin nhị giá 37 2.2 ðỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 37 2.3 ðỊA ðIỂM NGHIÊN CỨU 37 2.4 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 37 2.4.1 Chủng virus 37 2.4.2 Phôi gà 38 2.4.3 Phôi vịt 38 2.4.4 Mẫu vacxin nhị giá 38 2.4.5 ðộng vật thí nghiệm 38 2.4.6 Các dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất 38 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.5.1 Kiểm tra một số chỉ tiêu sinh học của giống virus vacxin trước khi ñưa vào sản xuất 39 2.5.2 Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin nhị giá 41 2.5.3 Phương pháp ñông khô vacxin 47 2.5.4 Phương pháp kiểm tra ñộ ẩm, ñộ chân không của vacxin ñông khô 48 2.5.5 Phương pháp xử lý số liệu 49 Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 50 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 3.1 KẾT QUẢ KIỂM TRA MỘT SỐ ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA HAI CHỦNG VIRUS MASTER SEED NHƯỢC ðỘC VIÊM GAN VỊT TYPE I VÀ DỊCH TẢ VỊT CHỦNG C 50 3.1.1 Kết quả kiểm tra khả năng thích ứng của chủng virus nhược ñộc Masterseed trên phôi 51 3.1.2 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD 50 , EID 50 của giống virus viêm gan vịt type I và và dịch tả vịt chủng C. 58 3.2 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN NHỊ GIÁ TỪ CHỦNG VIRUS VACXIN NHƯỢC ðỘC VIÊM GAN VỊT TYPE I, VIRUS NHƯỢC ðỘC DỊCH TẢ VỊT CHỦNG C, KIỂM NGHIỆM CÁC CHỈ TIÊU CƠ BẢN 64 3.2.1 Quy trình sản xuất và kiểm tra chất lượng các lô nguyên dịch vacxin ñơn giá 64 3.2.2 Quy trình kiểm tra chất lượng các lô vacxin nhị giá 71 3.2.1 Kết quả ñược chúng tôi trình bày ở bảng 3.14 73 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 84 I KẾT LUẬN 84 II ðỀ NGHỊ 85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 86 1 TÀI LIỆU TRONG NƯỚC 86 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cs : Cộng sự DNA : Dezoxy ribonucleic acid DTV : Dịch tả vịt VGV : Viêm gan vịt ðHNN HN : ðại học Nông nghiệp Hà Nội ELD 50 : Embryo Lethal Dose 50 percent EID 50 : Embryo Infective Dose 50 percent LD 50 : Lethal Dose 50 percent OIE : Office International des Epizooties PBS : Phosphate Buffered Saline p.p : Paper Tr : Trang Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Tình hình bệnh dịch tả vịt ở một số nước châu Á từ năm 1996- 2004 5 3.1 Kết quả cấy truyền chủng virus nhược ñộc viêm gan vịt type I trên phôi gà 52 3.2 Kết quả kiểm tra bệnh tích ñại thể trên phôi sau khi gây nhiễm virus nhược ñộc viêm gan vịt type I 54 3.3 Kết quả cấy truyền virus nhược ñộc dịch tả vịt chủng C trên phôi vịt 56 3.4 Kết quả kiểm tra bệnh tích ñại thể trên phôi sau khi gây nhiễm virus nhược ñộc dịch tả vịt chủng C 57 3.5 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD 50 của giống virus viêm gan vịt type I 59 3.6 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus (EID 50 ) của giống virus viêm gan vịt type I 60 3.7 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD 50 của giống virus dịch tả vịt chủng C 62 3.8 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus (EID 50 ) của giống virus dịch tả vịt chủng C 63 3.9 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của nguyên dịch vacxin dịch tả vịt chủng C 66 3.10 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của nguyên dịch vacxin viêm gan vịt type I 67 3.11 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của 3 lô nguyên dịch vacxin dịch tả vịt nhược ñộc chủng C 68 3.12 Kết quả xác ñịnh hiệu giá virus của 3 lô nguyên dịch vacxin viêm gan vịt type I 69 3.13 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm và chân không của vacxin nhị giá ñông khô 72 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii 3.14 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin nhị giá 74 3.15 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhị giá. 76 3.16 Kết quả xác ñịnh hiệu lực của vacxin nhị giá bằng phương pháp công cường ñộc với virus viêm gan vịt cường ñộc 78 3.17 Kết quả xác ñịnh hiệu lực của vacxin nhị giá bằng phương pháp công cường ñộc với chủng virus dịch tả vịt cường ñộc 81 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Tóm tắt quy trình sản xuất nguyên dịch vacxin nhược ñộc dịch tả vịt, viêm gan vịt 43 3.1 Sơ ñồ kỹ thuật về giống. 50 3.2 Kích thước phôi gà ñối chứng và phôi gây nhiễm virus VGV chết ở 48 giờ 53 3.3 Kích thước phôi gà ñối chứng và phôi gây nhiễm virus VGV chết ở 72 giờ 54 3.4 Phôi gà xuất huyết, còi cọc; gan sưng, xuất huyết khi gây nhiễm virus VGV 55 3.5 Phôi vịt chết ở 72h và 96h sau khi gây nhiễm virus DTV 57 3.6 Sơ ñồ quy trình sản xuất nguyên dịch vacxin ñơn giá DTV và VGV 65 3.7 Sơ ñồ tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhị giá ñông khô DTV và VGV 70 3.8 Biểu ñồ biểu diễn kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vacxin nhị giá 73 3.9 Vịt chết tư thế opisthotonus sau khi công cường ñộc bằng virus VGV 79 3.10 Bệnh tích gan sưng, xuất huyết ở vịt sau khi công cường ñộc bằng virus VGV 79 [...]... c u, ñòi h i c a th c ti n s n xu t và ñ cung ng s n ph m m i ra th trư ng, t o cơ s cho vi c phòng tr b nh thích h p cho ñàn v t Vi t Nam, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u quy trình s n xu t vacxin nh giá ñông khô phòng b nh D ch t v t và Viêm gan do virus v t” 2 M c ñích nghiên c u ñ tài - Xây d ng qui trình s n xu t vacxin nh giá như c ñ c ñông khô v i qui mô l n, s n xu t công nghi... trong qui trình s n xu t và ki m nghi m vacxin nh giá như c ñ c ñông khô ð tài thành công, s t o ra ñư c m t s n ph m vacxin nh giá phòng m t lúc hai b nh cho V t là b nh D ch t v t và Viêm gan do virus v t 3 Ý nghĩa khoa h c và th c ti n c a ñ tài - Ý nghĩa khoa h c: ð tài ñã xác ñ nh ñư c m t s ch tiêu v gi ng g c, hoàn thi n m t s thông s k thu t v ñông khô và ñã xây d ng m t quy trình s n xu t vacxin. .. thú y 2002) 1.2.2 Virus h c b nh viêm gan v t 1.2.2.1 Phân lo i Virus viêm gan v t n m trong h Picornaviridae, h này ch a h u h t các lo i virus gây h i cho ñ ng v t cách ñ t tên xu t phát t tính ch t nh bé c a virus (Pico) Virus viêm gan v t có 3 type: Type I: là m t Enterovirus Type II: là m t Astrovirus Type III: là m t Picornavirus 1.2.2.2 Hình thái Virus viêm gan v t là m t ARN virus r t nh , xuyên... ñem th thách v i virus d ch t v t cư ng ñ c thì v n ñư c b o h Jansen cho r ng trư ng h p này có vai trò ñáng k c a kháng th t bào và nh n m nh ñ n t m quan tr ng c a vi c dùng virus cư ng ñ c ñ th hi u l c vacxin 1.2 GI I THI U CHUNG V B NH VIÊM GAN V T 1.2.1 L ch s và tình hình nghiên c u v b nh viêm gan v t B nh viêm gan do virus c a v t ñư c phát hi n vào năm 1945 M , Levine và Hofstand[43] quan... là b nh viêm gan do virus c a v t v i t l nhi m trong ñàn t i 100%, t l ch t t 48,57% ñ n 90% Theo Nguy n H u Vũ và c ng s (2001) [20], sáu tháng ñ u năm 2001 s v t, ngan con ch t vì b nh viêm gan do virus c a v t các t nh Hà Nam, Hà Tây, Hưng Yên, Thái Bình, Vĩnh Phúc, Hà N i lên t i hàng nghìn con T i Nam ð nh x y ra m t d ch viêm gan do virus làm 10.000 con v t con b b nh, trong ñó v t ch t và s lý... các nư c khác Năm 1969 Toth cho bi t ñ o Long c a M , b nh viêm gan v t v n s y ra trên ñàn v t con ñã ñư c tiêm phòng b ng v c xin như c ñôc typ I B nh s y ra nh hơn so v i b nh viêm gan v t typ I, t l ch t c a v t con hi m khi vư t quá 30% Haider và Cs (1979) [37] ñã ñ t tên virus này là virus viêm gan v t typ III Cho ñ n nay virus viêm gan v t typ III m i ch ñư c công b M Vi t Nam, t năm 1978 Tr... CPE là nhân b co tròn, nguyên sinh ch t ñông ñ c, không bào và nhân co l i, t bào b v ra r i ch t, căn c vào ñó ta có th ñánh giá hi u giá virus 1.2.3 B nh Viêm gan V t 1.2.3.1 D ch t b nh viêm gan v t B nh viêm gan v t là m t b nh truy n nhi m c p tính, lây lan nhanh do virus viêm gan v t (Duck virus Hepatitis) gây ra B nh ch y u x y ra vt Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h... t p và gây thi t h i l n cho ngư i chăn nuôi Trong ñó có b nh D ch t v t (DTV) và Viêm gan v t (VGV) Bi n pháp t t nh t, an toàn và hi u qu kinh t nh t ñ tránh ñư c hai b nh truy n nhi m trên là tiêm phòng b ng vacxin Hi n t i, lo i vacxin ñơn giá phòng hai b nh trên ñã và ñang ñư c s d ng r t r ng rãi, và r t có hi u qu Nh ng s n ph m này, là nh ng m t hàng truy n th ng c a các cơ s s n xu t vacxin. .. ch ch còn sót m t vài tr i khi b nhi m b nh t l ch t th p kho ng 15% Năm 1950 cũng là Levine và Fabricant ñã phân l p ñư c virus viêm gan v t typ I b ng cách nuôi c y m m b nh trên t bào xơ phôi gà 1 l p Năm 1953 ngư i ta phát hi n b nh các bang khác c a nư c M , năm 1965 t i Norfolk c a Anh, trên nh ng ñàn v t con ñã ñư c tiêm phòng v c xin như c ñ c viêm gan v t typ I, b nh viêm gan v t v n s y ra... p không ñáng k 1.2.3.4 B nh tích a B nh tích ñ i th B nh tích ch y u t p trung gan, gan sưng, nhũn, d b nát khi n nh Trong m t s trư ng h p nó nhũn có hình thái như gelatin B m t loang l do có nhi u xu t huy t, kích thư c và hình d ng khác nhau Xu t huy t lan r ng không có ranh gi i, tuy nhiên xu t huy t gan không ph i có t tc vt ch t do virus viêm gan, lách có th sưng, th n t máu Nguy n Văn C m và . giống virus viêm gan vịt type I và và dịch tả vịt chủng C. 58 3.2 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN NHỊ GIÁ TỪ CHỦNG VIRUS VACXIN NHƯỢC ðỘC VIÊM GAN VỊT TYPE I, VIRUS NHƯỢC ðỘC DỊCH TẢ VỊT. vacxin nhị giá ñông khô phòng bệnh Dịch tả vịt và Viêm gan do virus ở vịt . 2. Mục ñích nghiên cứu ñề tài - Xây dựng qui trình sản xuất vacxin nhị giá nhược ñộc ñông khô với qui mô lớn, sản. BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI TRẦN VIẾT TẬP “NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN NHỊ GIÁ ðÔNG KHÔ PHÒNG BỆNH DỊCH TẢ VỊT VÀ VIÊM GAN DO VIRUS Ở VỊT”