Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY VÚ BÒ (FICUS SIMPLICISSIMA LOUR.) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên - 2014 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY VÚ BÒ (FICUS SIMPLICISSIMA LOUR.) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS. NGUYỄN THỊ TÂM Thái Nguyên - 2014 i LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành, sâu sắc tới PGS.TS. Nguyễn Thị Tâm đã tận tình hƣớng dẫn, chỉ bảo và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Trong quá trình nghiên cứu, tôi đã nhận đƣợc sự giúp đỡ của kĩ thuật viên Trần Thị Hồng (Phòng Công nghệ tế bào - Khoa Sinh - Kỹ thuật nông nghiệp - Trƣờng Đại học Sƣ phạm - Đại học Thái Nguyên). Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu đó. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Bộ môn Di truyền và Sinh học hiện đại - Trƣờng Đại học Sƣ phạm - Đại học Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi thực hiện quá trình nghiên cứu. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Ban chủ nhiệm khoa, các thầy cô giáo, cán bộ khoa Khoa học sự sống - Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên, đã giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện luận văn. Tác giả Nguyễn Thị Bích Ngọc ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi dƣới sự hƣớng dẫn của PGS.TS Nguyễn Thị Tâm. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chƣa đƣợc ai công bố. Tác giả Nguyễn Thị Bích Ngọc iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. Nội dung nghiên cứu 2 Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Giới thiệu chung về cây Vú bò 3 1.1.1. Đặc điểm phân loại và sinh học của cây Vú bò 3 1.1.2. Một số thành phần có hoạt tính dƣợc học của cây Vú bò 4 1.1.3. Ứng dụng của cây Vú bò trong y học 5 1.2. Kỹ thuật nhân giống cây trồng trong công nghệ sinh học thực vật 6 1.2.1. Ƣu thế và các phƣơng thức nhân giống in vitro 6 1.2.2. Các giai đoạn trong quy trình nhân giống vô tính in vitro 10 1.3. Chất điều hòa sinh trƣởng thuộc nhóm auxin và cytokinin sử dụng trong nuôi cấy mô thực vật 11 1.3.1. Auxin 11 1.3.2. Cytokinin 13 1.4. Tình hình nhân giống cây dƣợc liệu bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật ở trong nƣớc 14 iv Chƣơng 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1. Vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu 18 2.1.1. Vật liệu thực vật 18 2.1.2. Hoá chất, thiết bị 18 2.1.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu 18 2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1. Phƣơng pháp nuôi cấy in vitro 19 2.2.2. Đƣa cây ra môi trƣờng tự nhiên 21 2.2.3. Phƣơng pháp xử lí và tính toán số liệu 22 2.2.4. Điều kiện thí nghiệm 22 Chƣơng 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1. Kết quả nghiên cứu khử trùng hạt 23 3.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng riêng rẽ của các chất kích thích sinh trƣởng đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò trong ống nghiệm 25 3.2.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của BAP đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 26 3.2.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của kinetin đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 28 3.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp giữa BAP (kinetin) và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 29 3.3.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp giữa BAP và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 29 3.3.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp giữa kinetin và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 31 3.3.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp giữa BAP, kinetin và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 32 v 3.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ của chồi Vú bò 34 3.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể đến tỉ lệ sống và sự sinh trƣởng của cây con trong vƣờn ƣơm 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 1. Kết luận 38 2. Đề nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHỤ LỤC 44 vi NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT BA: 6-Benzyladenine BAP: 6-Benzylaminopurine CS: Cộng sự CT: Công thức DNA: Deoxyribonucleic acid ĐC: Đối chứng IAA: Indole-3-acetic acid IBA: Indole-3-butyric acid Kinetin: 6-furfurylaminopurine LV: Litvay, 1985 MS: Murashige và Skoog, 1962 NAA: Naphthalene acetic acid 2,4-D: 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1. Kết quả khử trùng hạt Vú bò 24 Bảng 3.2. Ảnh hƣởng của BAP đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 26 Bảng 3.3. Ảnh hƣởng của kinetin đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 28 Bảng 3.4. Ảnh hƣởng kết hợp giữa BAP và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 30 Bảng 3.5. Ảnh hƣởng kết hợp giữa kinetin và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 31 Bảng 3.6. Ảnh hƣởng kết hợp giữa BAP, kinetin và NAA đến hiệu quả nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 33 Bảng 3.7. Ảnh hƣởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ của chồi Vú bò 35 Bảng 3.8. Ảnh hƣởng của giá thể đến tỉ lệ sống và sự sinh trƣởng của cây Vú bò in vitro trong vƣờn ƣơm 37 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1. Cây và quả Vú bò 4 Hình 3.1. Ảnh hƣởng của thời gian khử trùng đến tỉ lệ nảy mầm và sự phát triển của chồi mầm Vú bò 25 Hình 3.2. Ảnh hƣởng của nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 27 Hình 3.3. Ảnh hƣởng của nồng độ kinetin đến hệ số nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 29 Hình 3.4. Ảnh hƣởng của của tổ hợp BAP và NAA đến hệ số nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 31 Hình 3.5. Ảnh hƣởng của tổ hợp kinetin và NAA đến hệ số nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 32 Hình 3.6. Ảnh hƣởng của tổ hợp BAP, kinetin và NAA đến hệ số nhân chồi và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò 34 Hình 3.7. Ảnh hƣởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ của chồi Vú bò 36 Hình 3.8. Ảnh hƣởng của giá thể đến sự sinh trƣởng của cây Vú bò in vitro trong vƣờn ƣơm 37 [...]... lớn giống cây Vú bò sạch bệnh, cung cấp cho nuôi trồng là hết sức cần thiết, do vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Nghiên cứu nhân giống cây Vú bò (Ficus simplicissima Lour.) bằng phương pháp nuôi cấy mô thực vật 2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định đƣợc quy trình nhân giống cây Vú bò trong ống nghiệm và giá thể đƣa cây ra môi trƣờng tự nhiên nhằm bảo tồn nguồn gen và tạo ra số lƣợng nhất định cây. .. hình nhân giống cây dƣợc liệu bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật ở trong nƣớc Ở Việt Nam, công nghệ nuôi cấy mô tế bào phục vụ nhân giống cây trồng đã đƣợc triển khai trên 20 năm nay Nhân giống thƣơng mại quy mô lớn đã đạt đƣợc ở một số cây trồng nhƣ nhân nhanh giống chuối (khoảng 2 triệu cây/ năm), nhân nhanh giống khoai tây sạch bệnh, nhân nhanh các giống mía mới nhập nội năng suất cao, nhân. .. Vú bò 1.1.1 Đặc điểm phân loại và sinh học của cây Vú bò Cây Vú bò có tên khoa học là Ficus simplicissima Lour., tên thƣờng gọi: Vú bò sẻ, Vú chó, Vú lợn, Ngải phún, Sung ba thùy [1], [16] Vú bò thuộc chi Đa đề (Ficus) Họ Dâu tằm (Moraceae) Bộ Hoa hồng (Rosales) Lớp Hai lá mầm (Magnoliopsida) Ngành Hạt kín (Magnoliophyta) Giới Thực vật (Plantae) [34] Vú bò thuộc dạng cây nhỏ, cao 1 - 2m Thân Vú bò. .. học trong cây và tác dụng chữa bệnh của nó Từ đó làm cơ sở cho việc phát triển, bảo tồn và ứng dụng nhiều hơn của cây Vú bò trong y học 17 Chƣơng 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu 2.1.1 Vật liệu thực vật Sử dụng hạt giống cây Vú bò (Ficus simplicissima Lour.) thu thập tại khu vực đồi thuộc thị trấn Trại Cau, huyện Đồng Hỷ, tỉnh Thái Nguyên Hạt giống còn... phụ cho ngƣời bệnh Việc nghiên cứu, bảo tồn và phát triển các loại dƣợc liệu, nhất là dƣợc liệu hoang dại là một trong những lĩnh vực phát triển mạnh đi cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học thực vật Do đó việc nghiên cứu nhân giống cây Vú bò bằng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo tồn Hi vọng trong thời gian tới sẽ có các nghiên cứu tìm hiểu sâu hơn để... nảy mầm thấp Kĩ thuật nhân giống cây trồng bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào đã đƣợc áp dụng trên nhiều đối tƣợng cây trồng nhƣ Sa nhân tím [6], Thanh hao hoa vàng [11], Hoắc hƣơng [18], Lô hội [22], Lan Kim tuyến [24], Ba kích [27] …và thu đƣợc thành công lớn trong thực tiễn sản xuất Xuất phát từ giá trị to lớn của cây Vú bò, việc ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật nhằm bảo vệ nguồn gen... dung nghiên cứu - Nghiên cứu khử trùng hạt để có mẫu sạch ban đầu trong ống nghiệm - Nghiên cứu ảnh hƣởng của một số chất điều hòa sinh trƣởng đến khả năng nhân nhanh và sự sinh trƣởng của chồi Vú bò trong ống nghiệm - Nghiên cứu tạo cây hoàn chỉnh thông qua thăm dò ảnh hƣởng của nồng độ NAA - Nghiên cứu giá thể đƣa cây ra môi trƣờng tự nhiên 2 Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung về cây Vú. .. Vú bò thuộc loại quả phức không cuống, có ít lông, có vị chát, giòn, màu lục, khi chín thì mềm màu tím, có vị ngọt nhẹ, bên trong có nhiều hạt (quả thực) Tháng 5 đến tháng 12 là mùa ra hoa kết quả của Vú bò Toàn cây Vú bò có nhựa mủ Rễ Vú bò hình trụ, màu vàng, tƣơng đối thẳng [16] 3 (A) (B) Hình 1.1 Cây (A) và quả (B) Vú bò 1.1.2 Một số thành phần có hoạt tính dƣợc học của cây Vú bò Trong rễ cây Vú. .. tạo chồi; nếu tỉ lệ này bằng 1 thì mô nuôi cấy thƣờng phát sinh callus [10] * Nhân giống in vitro thông qua giai đoạn mô sẹo (callus) Nếu tái sinh cây hoàn chỉnh trực tiếp từ mẫu vật cấy ban đầu thì thu đƣợc nhanh chóng các cây khá đồng nhất về mặt di truyền, tuy nhiên trong nhiều trƣờng hợp mô nuôi cấy không tái sinh cây ngay mà phát triển thành khối mô sẹo Tế bào mô sẹo khi cấy chuyển nhiều lần sẽ... mặt rễ sùi, rễ xốp, màu trắng 2.2.2 Đƣa cây ra môi trƣờng tự nhiên Vật liệu là cây Vú bò con sau nuôi cấy mô Chọn cây có bộ rễ dài, khỏe, lá xanh, đang thời kì sung sức để đƣa ra môi trƣờng tự nhiên Phƣơng pháp ra cây: Trƣớc khi đƣa cây con ra trồng ngoài tự nhiên, thƣờng tiến hành huấn luyện để cây quen dần với điều kiện môi trƣờng bên ngoài bằng cách: đặt bình cây ra điều kiện ánh sáng và nhiệt độ . cấp cho nuôi trồng là hết sức cần thiết, do vậy chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Nghiên cứu nhân giống cây Vú bò (Ficus simplicissima Lour. ) bằng phương pháp nuôi cấy mô thực vật . 2 HỌC KHOA HỌC NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY VÚ BÒ (FICUS SIMPLICISSIMA LOUR. ) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số:. KHOA HỌC NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY VÚ BÒ (FICUS SIMPLICISSIMA LOUR. ) BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH