MỞ ĐẦU 1. Lý do chọn đề tài   ! " #$%&'() *+&(,-&./"( &0)1  23 &4 4&+2+56789 : ;5* <9 $ =* > *& ?-(&"5  @&!9 A ?B&8"$C @5?&D EFGGHI5 !5J  KALMMNMMM5)2,O*&) P"%;$OD KALNQLMM5,& 8&5 2R*5S58Q&)T @ESyzygiumresinosumEUGHFG$GVGH$   Cây sắn thuyền (Syzygium resinosum) thuộc họ Sim (Myrtaceae), &JOQ,W(XT&) 8)/8444!2+85 2R* 5"&Y@ @Q$CGK * dân gian th+ dùng để chữa một số bệnh như chữa: vết thương, chống nhiễm khuẩn, lên da non nhanh, chữa bệnh tiêu chảy [11]. Nhằm góp phần hiểu biết thêm về thành phần hoá học của cây sắn thuyền, tôi chọn đề tài “T¸ch vµ và xác định cấu trúc một số hợp chất từ vá vµ l¸ cây sắn thuyền” (Syzygium resinosum (gagnep) Merr. et Perry) ë Thanh Ho¸ là nội dung nghiên cứu chính của luận văn. 2. Nhiệm vụ nghiên cứu - Lấy mẫu 15 cây sắn thuyền. 1 - Ngõm vi dung mụi metanol v chit vi cỏc dung mụi khỏc nhau. - Phõn lp cỏc hp cht bng phng phỏp sc ký ct v sc ký lp mng. - Lm sch cỏc cht bng phng phỏp ra v kt tinh phõn on. - Xỏc nh cu trỳc ca cỏc hp cht bng cỏc phng phỏp ph cng hng t ht nhõn mt chiu ( 1 H - NMR, 13 C - NMR, DEPT),HMBC, HSQC. 3. i tng nghiờn cu V15 cõy sn thuyn, mu ly ti huyn Triu Sn, tnh Thanh Húa vo thỏng 10 nm 2010. 4. B cc ca lun vn Lun vn gm 75 trang vi 04 bng s liu, 22 hỡnh, 02 s , 02 nh v 43 ti liu tham kho. kt cu ca lun vn: M u (2 trang), tng quan (20 trang), phng phỏp nghiờn cu thc nghim (6 trang), kt qu tho lun (31 trang), kt lun (1), ti liu tham kho (5 trang) Chng 1: TNG QUAN Phn ny tng hp cỏc ti liu nc ngoi v trong nc v cỏc vn sau: 1.1.ZSyzygium 1.2. Nhng nghiờn cu v thnh phn hoỏ hc ca thc vt chi Syzygium 1.3. Cõy sn thuyn Chng 2: PHNG PHP NGHIấN CU và thực nghiệm 2.1. Phơng pháp nghiên cứu 2.1.1. Phng phỏp ly mu Mu sau khi ly v c ra sch, cht nh sau ú c s lý > etanol 96 0 v phi trong búng rõm cho n khụ. X lý mu khụ bng cỏch 2 ngâm với dung môi thích hợp thu được dịch chiết, chưng cất thu hồi dung môi ở áp suất thấp được các cao tương ứng dùng cho nghiên cứu được nêu ở phần thực nghiệm. 2.1.2. Phương pháp tách và phân lập các hợp chất Để phân lập các hợp chất, chúng tôi tiến hành lần lượt các phương pháp: - Sắc ký cột thường sử dụng silicagen cỡ hạt 0.040 - 0.063 mm (254 - Merck). - Sắc ký lớp mỏng (TLC). - Các phương pháp kết tinh phân đoạn. 2.1.3. Phương pháp khảo sát cấu trúc các hợp chất Cấu trúc của các hợp chất được khảo sát nhờ sự kết hợp giữa các phương pháp phổ: - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1 H - NMR được đo trên máy Bruker 500 MHz, dung môi CDCl 3 . - Phổ 13 C - NMR, DEPT được đo trên máy BRUKER 125 MHz, dung môi CDCl 3 . Ng[\FXZ\D]Z$ 2.2. Thùc nghiÖm 2.2.1. Thiết bị và hóa chất 2.2.2. Tách và xác định cấu trúc hợp chất tõ vá vµ l¸ c©y s¾n thuyÒn 2.2.2.1. Tách các hợp chất 2.2.2.1.1. Thu hái mẫu Rễ cây sắn thuyền được lấy vào tháng 10 năm 2010 tại huyện Triệu Sơn tỉnh Thanh Hoá, mẫu cây sắn thuyền đã được bác sĩ, thầy thuốc ưu tú Vũ Quang Chính - Chủ tịch Hội Đông y tỉnh Thanh Hoá định danh. 2.2.2.1.2. Chiết và tách các hợp chất vá cây sắn thuyền =1 cây sắn thuyền sau khi làm khô ngâm trong metanol trong thời gian 20 ngày. Lọc dịch chiết và chưng cất thu hồi dung môi ở áp suất thấp được 3 cao metanol. Phần bã còn lại tiếp tục được ngâm với metanol trong thời gian 7 ngày rồi chiết nóng 3 lần thu thêm được một lượng cao nữa. Gom tất cả lượng cao này lại rồi phân tán vào nước cất sau đó chiết lần lượt với hexan, clorofom, etylaxetat, butanol. Chưng cất loại dung môi thu được các cao hexan, clorofom, etylaxetat, butanol tương ứng, phần dịch chiết butanol và phần cặn. Cao etylaxetat trộn đều với silicagel theo tỉ lệ 1:1 rồi lấy một phần cao cho vào cột sắc ký đã được nhồi bằng pha tĩnh là silicagel có cỡ hạt 0,040 - 0,063 mm (254 - Merck). Tiến hành sắc ký với hệ dung môi rửa giải là etylaxetat - metanol và tăng dần tỉ lệ độ phân cực. Lấy lần lượt các thể tích xác định chảy ra khỏi cột (mỗi lần lấy 80ml). Cất thu hồi dung môi một phần rồi cho bay hơi tự nhiên thu được các phân đoạn tương ứng. Tại phân đoạn KA^^:_M tương ứng với hệ dung môi 90 : 10 xuất hiện một chất rắn dạng tinh thể màu &? . Z&/@5Q G--GJK,@5Q G5& ! "8"3K K` hiệu là TD31. 2.2.2.1.3. Chiết và tách các hợp chất l¸ cây sắn thuyền a&)  G5KA+bM5 8.,J8 c& G5$Z G5 J,G-&5Q5,8 c 5d 5G5-GI&G J&; YQY$ Z  5d  !  &@    5G5  ỡ ạ  MMe:MMfN   Ebge FGKH,ửả*8 c5 5d 7 G5GW5*à  h8Q&!)ự$ 4 C")&"bL T&4-*$D/84-G 5 8 c&/K,&;&2"K(*5 C%L8"3K  T$ Ngâm trong metanol 20 ngày Lọc dịch chiết và J8 c Chiết nóng 3 lần Ngâm trong metanol 7 ngày Phân tán vào nước Chiết với các dung môi và chưng cất thu hồi dung môi n-hexan clorofom etylaxetat Nhồi cột Rửa giải bằng dung môi clorofom - metanol Sơ đồ 2.1: Sơ đồ tách các chất từ vá cây sắn thuyền 5 MẪU KHÔ (2kg) Bã mẫu CAO METANOL Hệ dung môi 90 : 10 Cao n-hexan (17g) (17g) Cao clorofom (43g) CAO ETYLAXETAT (67g) Z' Hîp chÊt A (TD 31) 4,2mg Sơ đồ 2.2: Sơ đồ tách các chất từ l¸ cây sắn thuyền 2.2.3. Xác định cấu trúc các hợp chất 6 )  G5 a8.,;  \i Z,iJ 8 c n-hexan clorofom etylaxetat J! j/A>8 clorofom - metanol Xk l Cao metanol Cao n-hexan (24g) Cao clorofom (50) Cao etylaxetat (72g) Hîp chÊt B (TD1) 3,5mg MÉu kh« (2K) HÖ dung m«i 90 - 10 Cao butanol (52g) Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1. Xác định cấu trúc các hợp chất TD31 từ vá l¸ cây sắn thuyền Hợp chất TD31 có dạng tinh thể màu ng. Phổ 1 H - NMR của hợp chất TD31 cã những tÝn hiệu cộng hưởng đặc trưng sau: Vổ L \:FjủợấC%NL (ệ$ PhÇn Flavanon C(*!Og; [mEC%NLH[ XEC%LH \; \ f  \ ^  [m độ ể8ịọ ươứ7δnfLb   à δnfLe $J nb\o$; G$ X; \ bp \ gp \ fp [X&!8. ;Y7δnf_e E8q bp:fp ne\o; GE\ bp H δnf_M E8q gp:fp n^g\o;E\ gp H δnf_g E8q fp:gp n^g\o;E\ fp H V\ b độể8ịọδnggM E88q b:N  nLb \oq b:N nN\oH \ừ\ N \ N độể8ịọ δnNbb E88q N:b nLb\oq N:N nLr\oE\ N H δnbrr E88q N:N nLr\oq N:b nN\oE\ N H XA sZ\ N O.(e p độể8ị δnNrr V :s\O.(N p δn_Mr EH V :s\O.(gδnLbML EH 7 PhÇn ®êng : β - D glucopyranosyl V\ Lpp &!8.δne_r E8q  nr\oH V\ fpp &!8.δnN^M E88q  nLL\o q  nb\oH V\ fpp &!8.δnNN^ E88q  nLL\o q  ng\oH PhÇn ®êng : α:a - Rhamnopyranoside V\ Lppp &!8.δnegb  NV\ fppp   Z\ N &!8.δ nLM^  E8q  nf\oH Z,25*!O0")EC%NLH& *OAN$L7. Bảng 3.1. Số liệu cộng hưởng từ hạt nh©n 13 C - NMR của hợp chất TD 31 v chà ất đã c«ng bè. TT Nhãm 1 H - NMR δ (ppm) 13 C - NMR δ (ppm) ChÊt ®· c«ng bè [41] b Z\ r^NN ggMeE88tq b:N nLbtq b:N nN r^g N Z\ b   ebMb NbLrE88tq N:b nLbtq N:N nLrHbrrNE88t q N:N nLrtq N:b nNH ebb e Zns L_f_f L_^b g Z LfNMM Lfbf f Z\ _fNg fLbMEH _gg r Z LfgLM Lfgb ^ Z\ _ggL fLN^E8tq ^:f nbH _fg _ Z Lfbef LfNg LM Z LMNNM LMNe Lu Z LNM^_ LNLM bu Z\ LLeLb f_eeE8tq b  :f neH LLeb Nu Z Lefee Lefg eu Z Ler_N Le^L 8 TT Nhãm 1 H - NMR δ (ppm) 13 C - NMR δ (ppm) ChÊt ®· c«ng bè [41] gu Z\ LLbMe f_MME8tq g  :f n^gH LLbb fu Z\ LLr_M f_e^E8tq f  :g n^gH LL^M eu sZ\ N ggfr NrrbEH gg^ Nu s\ _MrbEH g s\ LbMLLEH Lpp Z\ __eN e_f_E8tq Lpp:bpp nrH __f bpp Z\ rb_f v57Nbf:NNf rNL Npp Z\ rfbe v57Nbf:NNf rfe epp Z\ f_gr v57NLM:NLf f_r gpp Z\ rggM NgNgE888tq gpp:epp nrtq gpp:fpp nbtq gpp:fpp ngH rgg fpp Z\ b   ffMM Nr_fE88tq fpp:fpp nLLtq fpp:gpp nbHtNNrg Eq fpp:fpp nLLtq fpp:gpp ngH ffL bpp s\ gNreE8tqnegH Npp s\ gLeME8tqnegH epp s\ gLfME8tqngMH 6'' -O- 1'''-α -L-Rha Lppp Z\ LMMf egbLEH LMMr bppp Z\ rMb Nfb^EH rMe Nppp Z\ rMr NebrE88tvK-&.&qH rM^ eppp Z\ rbM NLgNE8t_MtgMH rbb gppp Z\ f^N .v57Nbf:NNf f^e fppp Z\ b   Lr^ LM^NE8tqnfH Lr_ bppp s\ eg^ME8tqnegH Nppp s\ eeN_E8tqnfH eppp s\ efg^E8tqnggH C025* L \:Fj LN Z:FjC%NL 8RK* &!O0") 5*weLx&k?8&"C%NL5 \GG8 9 4.2. Xác định cấu trúc TD1 từ l¸ cây sắn thuyền Hợp chất TD1 có dạng tinh thể màu Tng. Phổ 1 H NMR c– ủa hợp chất B (TD1) cã những tÝn hiệu đặc trưng sau: :V\ f E5Hđộể8ịọ7δngNg  E88JnNM\obg\oH$ :V\ N  :Z\s\độể8ịọ7δnNgb  E 55GH$ :f  G5EZ\ N HB.độể8ịọ7 N\ L^ δnMrM EHt N\ L_ δnLML EH N\ bL δnM_b E8qnrM\oHt N\ bf δnM^L  N\ br δnM^N E8qnNg\oHt N\ b_ δnM^g   E8qnLg\oH Bảng 3.2. Số liệu cộng hưởng từ hạt nh©n 1 H - NMR của hợp chất TD 1 v chà ất đ· c«ng bố . 10 [...]... hợp chất B là - sitosterol Công thức cấu tạo 13 14 KT LUN Bng phng pháp chit vi dung môi metanol, sau ó ln lt chit vi các dung môi hexan, clorofom, etylaxetat, butanol v ch ng ct thu hi dung môi áp sut thp, ln lt thu c các cao tng ng Cao etylaxetat của vỏ sắn thuyền s dng sc ký ct vi pha tnh l silicagel, h dung môi ra gii l cloroform - metanol vi phân cc tng dn ln lt thu c các phân on khác nhau Cao . clorofom, etylaxetat, butanol. Chưng cất loại dung môi thu được các cao hexan, clorofom, etylaxetat, butanol tương ứng, phần dịch chiết butanol và phần cặn. Cao etylaxetat trộn đều với silicagel.  i Z,iJ 8 c n-hexan clorofom etylaxetat J! j/A>8 clorofom - metanol Xk l Cao metanol Cao n-hexan (24g) Cao clorofom (50) Cao etylaxetat (72g) Hîp chÊt B (TD1) 3,5mg . Phân tán vào nước Chiết với các dung môi và chưng cất thu hồi dung môi n-hexan clorofom etylaxetat Nhồi cột Rửa giải bằng dung môi clorofom - metanol Sơ đồ 2.1: Sơ đồ tách các chất từ vá