TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ CÔ LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT CÓ TRONG CÂY LƯỢC VÀNG (CALLISIA FRAGRANS (LINDL.) WOODSON) HỌ THÀI LÀI (COMMELINACEAE) Luận văn Tốt nghiệp Ngành: SƯ PHẠM HÓA HỌC Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: ThS. Nguyễn Văn Hùng Trần Mỹ Hoa Lớp: Sư phạm Hóa Học khóa 35 Mã số sinh viên: 2091965 Cần Thơ, 2013 GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - i - Luận văn tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN  Gần tám tháng thực hiện đề tài ở phòng thí nghiệm Hóa Hữu cơ, bộ môn Hóa học, khoa Sư phạm, ngoài sự nỗ lực làm việc và tìm tòi học hỏi, tôi đã gặp không ít khó khăn, trở ngại. Nhưng bên cạnh đó, tôi nhận được rất nhiều sự quan tâm, ủng hộ, giúp đỡ tận tình của gia đình, quý Thầy, Cô trong bộ môn và bạn bè để tôi có động lực cố gắng vươn lên đạt được kết quả như hôm nay. Vì vậy, trong những dòng đầu tiên của luận văn, tôi xin gởi những lời cám ơn chân thành đến:  Gia đình đã khích lệ, ủng hộ tôi cả về tinh thần và vật chất để tôi có thêm động lực và an tâm hoàn thành tốt luận văn.  Thầy Nguyễn Văn Hùng, người Thầy đã tận tình truyền đạt cho chúng tôi những kiến thức chuyên môn quý báu, những kinh nghiệm hữu ích và là người trực tiếp hướng dẫn, đôn đốc, động viên tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này.  Cô Lê Thị Lộc, cô Thái Thị Tuyết Nhung, cô Nguyễn Thị Thu Thủy, thầy Ngô Quốc Luân, thầy Nguyễn Điền Trung và các thầy cô khác trong bộ môn đã nhiệt tình giúp đỡ, tạo mọi điều kiện và chỉ dẫn những kiến thức hữu ích trong suốt thời gian tôi theo học và làm việc tại phòng thí nghiệm.  Tập thể các bạn lớp Sư phạm Hóa học khóa 35, các anh chị khóa trên, đặc biệt là các bạn ở nhà trọ Kim Ngọc và các bạn cùng làm luận văn ở phòng TN Hữu cơ, phòng TN Vô cơ, phòng TN Hóa lý, phòng TN Hóa phân tích, phòng Phương pháp đã đồng hành, giúp đỡ, chia sẻ, động viên tôi rất nhiều trong quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn! GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - ii - Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN  …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………. GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - iii - Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1  …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - iv - Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2  …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………. GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - v - Luận văn tốt nghiệp MỤC LỤC  LỜI CẢM ƠN i NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1 iii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2 iv MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG, SƠ ĐỒ x DANH MỤC CÁC HÌNH xi TÓM TẮT NỘI DUNG ĐỀ TÀI xii LỜI MỞ ĐẦU xiii Phần một: TỔNG QUAN I. TỔNG QUAN VỀ CÂY LƯỢC VÀNG 1 I.1. Giới thiệu về cây Lược vàng [1], [4], [5], [25] 1 I.2. Mô tả [1], [4], [5] 1 I.3. Phân bố, sinh thái [1], [4], [5] 3 I.4. Công dụng [1], [4], [9], [10] 3 I.4.1. Một số bài thuốc từ cây Lược vàng 4 I.4.2. Một số chế phẩm từ cây Lược vàng 5 II. MỘT SỐ CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LƯỢC VÀNG [1], [4], [5], [10] 6 Phần hai: THỰC NGHIỆM I. DỤNG CỤ - HÓA CHẤT 11 I.1. Dụng cụ 11 I.2. Hóa chất 11 II. NGUYÊN LIỆU 11 II.1. Quá trình thu hái và xử lý nguyên liệu [16] 11 II.1.1. Thu hái nguyên liệu 11 II.1.2. Xử lý nguyên liệu 12 II.2. Xác định độ ẩm nguyên liệu 12 III. QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM 12 III.1. Sơ đồ điều chế cao khảo sát: cao Chloroform 12 III.2. Các bước tiến hành 14 IV. KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRÊN BỘT CÂY LƯỢC VÀNG [14], [16], [22] 14 GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - vi - Luận văn tốt nghiệp IV.1. Thuốc thử và chất chỉ thị 14 IV.2. Xác định sự hiện diện của Alkaloid 14 IV.3. Xác định sự hiện diện của Flavonoid 13 IV.4. Xác định sự hiện diện của Steroid 15 IV.5. Xác định sự hiện diện của Glycosid 15 IV.6. Xác định sự hiện diện của Saponin………………………………………… 15 IV.7. Xác định sự hiện diện của Coumarine 16 IV.8. Xác định sự hiện diện của Tanin…………………………………………… 16 IV.9. Kết quả khảo sát thành phần hóa học có trong cây Lược vàng………………17 V. QUÁ TRÌNH CÔ LẬP VÀ TINH CHẾ HỢP CHẤT TRÊN CAO CHLOROFORM [2], [8], [12], [14], [16], [18], [19], [20], [21] 18 V.1. Quá trình điều chế cao PE 18 V.2. Quá trình điều chế cao Choloroform 18 V.3. Cô lập và tinh chế hợp chất từ cao Choloroform 18 V.4. Xác định các tính chất vật lý, cấu trúc của hợp chất và nhận danh 20 Phần ba: KẾT LUẬN I. KẾT LUẬN 26 II. KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 PHỤ LỤC Phụ lục 1. Phổ IR của hợp chất LV_CLAC55 PL1 Phụ lục 2. Phổ 1 H-NMR của hợp chất LV_CLAC55 PL2 Phụ lục 2a. Phổ 1 H-NMR mở rộng của hợp chất LV_CLAC55 PL3 Phụ lục 2b. Phổ 1 H-NMR mở rộng của hợp chất LV_CLAC55 PL4 Phụ lục 3. Phổ 13 C-NMR của hợp chất LV_CLAC55 PL5 Phụ lục 3a. Phổ 13 C-NMR mở rộng của hợp chất LV_CLAC55 PL6 Phụ lục 3b. Phổ 13 C-NMR mở rộng của hợp chất LV_CLAC55 PL7 Phụ lục 3c. Phổ 13 C-NMR kết hợp với phổ DEPT của hợp chất LV_CLAC55 PL8 Phụ lục 4. Một số hình ảnh minh họa thành phần hóa học trong cây Lược vàng… PL9 Phụ lục 5. Một số hình ảnh minh họa kết quả TLC chọn hệ dung môi giải ly…… PL11 GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - vii - Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT  δ : Chemical shift (Độ dịch chuyển hóa học). ν : Tần số dao động (Số sóng). λ max : Bước sóng hấp thu cực đại. µM : micromol/lít. 1 H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ proton). 13 C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ 13 C). Ace : Acetone. CD 3 OD : CH 3 OH đã thế hydro (H) bằng deuteri (D). CDCl 3 : CHCl 3 đã thay thế hydro (H) bằng deuteri (D) CLF : Chloroform d : Doublet (Mũi đôi). DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer. ED 50 : Effective dose 50 (Liều hữu hiệu cho 50% vật thử nghiệm). EtOAc : Ethyl acetate. EtOH : Ethanol g : Gam. HDL – C : High densitylipoprotein Cholesterol (Lipoprotein có tỉ trọng phân tử cao) In vitro : Trong điều kiện phòng thí nghiệm. In vivo : Trên cơ thể sống. IR : Infrared (Phổ hồng ngoại) J : Hằng số ghép spin. LD 50 : Medium letalisdosis (Độ độc trung bình) m : Multiplet (Mũi đa). MeOH : Methanol. mg : Miligam. MHz : Mega Hertz. mp : Melting point (Nhiệt độ nóng chảy) NMR : Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân). PE : Petroleum Ether (Ether dầu hỏa). ppm : Part per million (Phần tỉ). R f : Retention factor. GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - viii - Luận văn tốt nghiệp s : Singlet (Mũi đơn). Stt : Số thứ tự TLC : Thin layer chromatography (Sắc ký bản mỏng). GVHD: ThS. Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa - ix - Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG, SƠ ĐỒ  Bảng 1. Các dụng cụ sử dụng. 11 Bảng 2. Các hóa chất sử dụng 11 Bảng 3. Kết quả định tính thành phần hóa học cây Lược vàng 17 Bảng 4. Kết quả sắc ký cột silica gel cao Chloroform (14g) của cây Lược vàng 18 Bảng 5. Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy của hợp chất LV_CLAC55 21 Bảng 6. Phổ IR của hợp chất LV_CLAC55 21 Bảng 7. Phổ 13 C-NMR của hợp chất LV_CLAC5 22 Bảng 8. So sánh số liệu phổ NMR của hợp chất LV_CLAC55 với 3-O-(  -D- glucopyranosyl)-  -sitosterol 23 Sơ đồ 1. Quy trình điều chế cao Chloroform 13 [...]... đến nay có rất ít các tài liệu trong nước nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Lược vàng Chính vì vậy, đề tài Khảo sát thành phần hóa học và cô lập một số hợp chất có trong cây Lược vàng (Callisia fragrans (Lindl. ) Woodson) họ Thài lài (Commelinaceae) sẽ góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của cây Lược vàng Do không có nhiều thời gian nên đề tài chỉ giới hạn khảo sát các hợp chất có độ phân... to lớn là có khả năng điều trị được các căn bệnh nan y Cùng với tinh thần ấy, đề tài Khảo sát thành phần hóa học và cô lập một số hợp chất có trong cây Lược vàng (Callisia fragrans (Lindl. ) Woodson) họ Thài lài (Commelinaceae) mong muốn có thể đóng góp một phần nhỏ vào việc nghiên cứu các hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên từ loài cây mới lạ nhưng lại có khả năng tiềm ẩn những hợp chất quý có thể trị... -Hình 1 Cây Lược vàng Callisia fragrans (Lind .) Woodson, Họ Thài Lài (Commelinaceae) 1 Hình 2 Thân, lá và hoa của cây Lược vàng Callisia fragrans (Lind .) Woodson, Họ Thài Lài (Commelinaceae) …………………………………………… 2 Hình 3 Các chế phẩm từ cây Lược vàng ………………………………… 5 Hình 4 Bột cây Lược vàng ………………………………………………….12 Hình 5 Cột sắc ký silicagel và máy cô quay chân không…………………… 19 Hình 6 Chất LV_CLAC55……………………………………………………... của cây Lược vàng  Một số công trình khoa học ở Mỹ và Canada đã công bố kết quả nghiên cứu các hoạt chất sinh học trong cây Lược vàng, bao gồm flavonoid, steroid, vitamin C, B2 (riboflavin), B3 (acid nicotinic), B5 (acid pentothenic) và các vi khoáng như đồng, sắt, nicken Trong số đó, nhóm Flavonoid có tác dụng trị bệnh cao hơn cả Nhóm Flavonoid trong cây Lược vàng bao gồm hoạt chất quercetin và kaempferol... TÀI  -Cây Lược vàng có tên khoa học Callisia fragrans (Lindl. ) Woodson, thuộc họ Thài lài (Commelinaceae) Cây Lược vàng có xuất xứ từ Trung Mỹ, sau đó di thực đến nhiều quốc gia trong đó có Nga Cây Lược vàng được trồng nhiều ở Nga để làm cảnh và chữa bệnh theo kinh nghiệm dân gian từ hơn 100 năm trước Năm 2007, Lược vàng di thực từ Nga sang Việt nam dưới hình thức là cây cảnh, ban đầu chỉ... thành phần hóa học và tác dụng dược lý của Lược vàng được tiến hành tại Đại học Y khoa thành phố Irkyt, khoảng thập niên 80 của thế kỉ XX, dưới sự chỉ đạo của giáo sư Semenov, một nhà khoa học rất nổi tiếng, cho thấy: trong cây Lược vàng có một số hoạt chất sinh học thuộc nhóm Flavonoid và Steroid thực vật Ngoài ra, trong cây còn có một số nguyên tố như sắt, đồng, crom,…là những nguyên tố có tác dụng... đã xuất hiện một loại trà có thành phần của cây Lược vàng là trà túi lọc Tâm Lan, trà túi lọc Lược vàng Thiên Phúc Hình 3 Các chế phẩm từ cây Lược vàng -5- Luận văn tốt nghiệp GVHD: ThS Nguyễn Văn Hùng SVTH: Trần Mỹ Hoa II MỘT SỐ CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY LƯỢC VÀNG [ 1 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 13 ] Theo Từ điển Cây thuốc Việt Nam của Võ Văn Chi năm 1997 là tài liệu công bố nhiều... phân lập và xác định được các hợp chất có trong thân lá cây lược vàng là: HLVE_1 có tên 3-O-(  -D-glucopyranosyl) -sitosterol; hợp chất HLVH_1 có tên (24R-Stigmasta-5-en-  -ol) còn gọi là  - sitosterol; hợp chất HLVE_2 là (2S, 3S, 4R)-2-(2’R- hydroxyhexacosanoyl)-aminohexadeca-1,3,4-triol hay là Calliceramide (do người nghiên cứu đặt tên vì đây là chất lần đầu tiên được phân lập từ cây Lược vàng) và. .. tập III, Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật thuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam cùng Trung tâm Nghiên cứu Tài nguyên và Môi trường, thuộc Đại học quốc gia Hà Nội đã công bố 15 chi, 58 loài Trong cả hai công trình lớn đó đều không có loài Lược vàng cũng như chi Callisia Hình 2 Thân, lá và hoa của cây Lược vàng Callisia fragrans (Lind .) Woodson, Họ Thài Lài (Commelinaceae) -2- Luận văn tốt nghiệp... hoạt chất đã được phát hiện ở nhiều loài thực vật khác nhau, đã được nghiên cứu tác dụng dươc học từ lâu Dựa vào tính chất hóa học và công dụng của chúng, khi chỉ cần phát hiện nó trong cây Lược vàng, nhiều người cũng khẳng định cây Lược vàng có khả năng trị những bệnh mà quercetin và kaempferol có được, mặc dù chưa nghiên cứu cụ thể hàm lượng, cũng chưa thử nghiệm y học trên cơ thể người đối với cây Lược . nay có rất ít các tài liệu trong nước nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Lược vàng. Chính vì vậy, đề tài Khảo sát thành phần hóa học và cô lập một số hợp chất có trong cây Lược vàng (Callisia. TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ CÔ LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT CÓ TRONG CÂY LƯỢC VÀNG (CALLISIA FRAGRANS (LINDL. ) WOODSON) HỌ THÀI LÀI (COMMELINACEAE). fragrans (Lindl. ) Woodson) họ Thài lài (Commelinaceae) sẽ góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của cây Lược vàng. Do không có nhiều thời gian nên đề tài chỉ giới hạn khảo sát các hợp chất