BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  CAM THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ðỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ TÌNH TRẠNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA PHÂN LẬP TỪ THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ THUỘC HUYỆN GIA LÂM, THÀNH PHỐ HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  CAM THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ðỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ TÌNH TRẠNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA PHÂN LẬP TỪ THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ THUỘC HUYỆN GIA LÂM, THÀNH PHỐ HÀ NỘI CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà NGÀNH : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS. PHẠM HỒNG NGÂN HÀ NỘI – 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan bản luận văn là kết quả nghiên cứu của chính bản thân tôi. Kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực. Các tài liệu viện dẫn trong luận văn ñều ñã ñược công bố và ñược trích dẫn theo ñúng nguyên tắc. Tôi xin chịu trách nhiệm hoàn toàn về nội dung của luận văn. Tác giả Cam Thị Thu Hà Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp ngoài sự nỗ lực của bản thân tôi ñã nhận ñược sự quan tâm giúp ñỡ của rất nhiều cá nhân và tập thể. Lời ñầu tiên, tôi xin trân trọng cảm ơn các thầy giáo, cô giáo trong Khoa Thú Y - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñặc biệt là các thầy giáo, cô giáo trong bộ môn Thú Y Cộng ðồng – Khoa Thú Y ñã tạo mọi ñiều kiện giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo TS. Phạm Hồng Ngân ñã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian học tập và thời gian thực hiện ñề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn gia ñình, bạn bè ñã ñộng viên giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập. Xin chân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng 12 năm 2013 Tác giả luận văn Cam Thị Thu Hà Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iv MỤC LỤC Lời cam ñoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục viết tẳt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Danh mục ảnh ix MỞ ðẦU 1 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Tình hình ngộ ñộc thực phẩm 3 1.1.1 Ngộ ñộc thực phẩm và bệnh truyền qua thực phẩm 3 1.1.2 Nguyên nhân gây ngộ ñộc thực phẩm 3 1.1.3 Tình hình ngộ ñộc thực phẩm do vi sinh vật gây ra trên thế giới và tại Việt Nam 6 1.1.4 Một số nghiên cứu về ô nhiễm thực phẩm do vi khuẩn E.coli và Salmonella gây ra trên thế giới và tại Việt Nam 9 1.2 Nguyên nhân nhiễm khuẩn vào thịt 11 1.2.1 ðường xâm nhập của vi khuẩn vào thịt 11 1.2.2 Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt 12 1.3 Hiểu biết chung về vi khuẩn Escherichia coli 14 1.3.1 ðặc ñiểm hình thái, nuôi cấy, ñặc tính sinh hóa và sức ñề kháng 14 1.3.2 Cấu trúc kháng nguyên 15 1.3.3 ðặc tính gây bệnh 17 1.3.4 Ý nghĩa của việc xác ñịnh tổng số E.coli trong thịt 18 1.4 Hiểu biết chung về vi khuẩn Salmonella 18 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp v 1.4.1 ðặc ñiểm hình thái, nuôi cấy, ñặc tính sinh hóa và sức ñề kháng 18 1.4.2 Cấu trúc kháng nguyên 20 1.4.3 Yếu tố bám dính 22 1.4.4 Khả năng sản sinh ñộc tố 22 1.4.5 Ý nghĩa của việc xác ñịnh sự có mặt của Salmonella trong thịt 24 1.5 Hiện tượng kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli và Salmonella 25 1.5.1 Tính kháng thuốc của vi khuẩn 25 1.5.2 Cơ chế gây hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn 27 1.5.3 Khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli 27 1.5.4 Khả năng kháng kháng sinh của vi khuẩn Salmonella 29 Chương 2 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Nội dung nghiên cứu 33 2.2 Nguyên liệu nghiên cứu 33 2.2.1 Mẫu xét nghiệm 33 2.2.2 Môi trường và hóa chất 33 2.2.3 Trang thiết bị, dụng cụ 34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 34 2.3.1 Phương pháp ñiều tra 34 2.3.2 Phương pháp thu thập mẫu 34 2.3.3 Phương pháp phân lập vi khuẩn E.coli 35 2.3.4 Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella 36 2.3.5 Phương pháp kiểm tra ñộc lực các chủng E.coli, Salmonella phân lập ñược 37 2.3.6 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh của các chủng E.coli và Salmonella phân lập ñược 38 2.3.7 Phương pháp xử lý số liệu 38 2.4 Thời gian nghiên cứu 38 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vi Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Kết quả ñiều tra tình trạng sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi lợn tại huyện Gia lâm 39 3.2 Kết quả phân lập và kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn E.coli, Salmonella trên thịt lợn bán tại một số chợ thuộc huyện Gia lâm 41 3.2.1 Kết quả phân lập và kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn E.coli 41 3.2.2 Kết quả phân lập và kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn Salmonella 50 3.3 Kết quả kiểm tra tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli, Salmonella phân lập ñược 58 3.3.1 Kết quả kiểm tra tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn E.coli phân lập ñược 58 3.3.2 Kết quả kiểm tra tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn Salmonella phân lập ñược 61 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 1 Kết luận 64 2 Kiến nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 73 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vii DANH MỤC VIẾT TẲT BGA Brilliant green agar BHI Brain Heart Infusion E. coli Escherichia coli EHEC Enterohaemorrhagic E. coli EIEC Enteroinvasive E. coli EMB Eosin – Methylene Blue EPEC Enteropathogenic E. coli ETEC FAO Enterotoxigenic E. coli Food and Agriculture Organization FDA Food & Drug Administration Gr (-) Gram âm Gr (+) Gram dương IMViC Indole, Methyl Red, Voges Proskauer và Citrat LT Heat labile enterotoxin MKTTn Muller Kauffman Tetrathionate MPN Most Probable Number MR Methyl red PBW Pepton Buffer Water RV Rappaport – Vassiliadis Soya Pepton SS Salmonella – Shigella ST Heat stable enterotoxin TCVS Tiêu chuẩn vệ sinh TSI Triple sugar iron VP Voges proskauer WHO XLD World Health Organization Xylolysin deoxychocolat XLT 4 Xyloze – Lyzine – Tergitol 4 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp viii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Các loại kháng sinh sử dụng trong chăn nuôi lợn tại huyện Gia Lâm 40 3.2 Kết quả phân lập vi khuẩn E. coli trên các mẫu thịt lợn 42 3.3 Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng E. coli phân lập 48 3.4 Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella trên các mẫu thịt lợn 51 3.5 Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng Salmonella phân lập 57 3.6 Kết quả kiểm tra tình trạng kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 59 3.7 Kết quả kiểm tra tình trạng kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 62 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 3.1 Tỷ lệ mẫu thịt lợn ñạt và không ñạt chỉ tiêu E. coli 43 3.2 Tỷ lệ mẫu thịt lợn ñạt và không ñạt chỉ tiêu Salmonella 52 3.3 Kết quả kiểm tra tính kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 60 3.4 Kết quả kiểm tra tính kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập 63 DANH MỤC ẢNH STT Tên ảnh Trang 3.1 Vi khuẩn E. coli phát triển trên môi trường MacConkey 45 3.2 Vi khuẩn E. coli phát triển trên môi trường EMB 45 3.3 Vi khuẩn E.coli phát triển trên môi trường TSI 46 3.4 Phản ứng thử indol của vi khuẩn E.coli 46 3.5 Kiểm tra ñộc lực của vi khuẩn 47 3.6 Vi khuẩn Salmonella spp phát triển trên môi trường BGA 54 3.7 Vi khuẩn Salmonella spp phát triển trên môi trường XLT 4 54 3.8 Vi khuẩn Salmonella spp phát triển trên môi trường TSI 55 [...]... tài: Nghiên c u xác ñ nh t l nhi m và tinh tr ng kháng kháng sinh c a vi khu n Escherichia coli, Salmonella phân l p t th t l n bán t i m t s ch thu c huy n Gia Lâm, thành ph Hà N i” 2 M c tiêu nghiên c u ðánh giá ñư c th c tr ng s d ng kháng sinh trong chăn nuôi l n trên ñ a bàn huy n Gia Lâm, thành ph Hà N i Xác ñ nh ñư c tình tr ng ô nhi m và tính kháng kháng sinh c a vi khu n E coli, Salmonella trong... ñã nghiên c u v m c ñ Salmonella trên l n ô nhi m vi khu n các lò m và trang tr i Hàn Qu c, năm 2011 Hyobi Kim ñã ti n hành nghiên c u t l Trư ng ð i H c Nông Nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 9 nhi m và tính kháng kháng sinh c a vi khu n Salmonella spp và Escherichia coli phân l p t l n t i lò m 1.1.3.2 Nghiên c u v ô nhi m th c ph m do vi khu n E coli và Salmonella gây ra t i Vi. .. trên th t và s n ph m t th t Beutin và Karch (1997) nghiên c u plasmid mang y u t gây dung huy t c a E coli O157:H7 type EDL 993 Sunpetch Angkititrakul (2005) nghiên c u ñ c ñi m d ch t tính kháng kháng sinh c a vi khu n Salmonella phân l p t th t l n, th t gà và ngư i Thái Lan Chaiwat pulsrikarn (2012) nghiên c u serotype, tính m n c m v i kháng sinh và genotype c a Salmonella phân l p t l n và th t... thành Hà N i cho bi t t l th t nhi m Salmonella là 40,6% Trương Hà Thái và cs (2012) khi nghiên c u tính kháng kháng sinh c a vi khu n Salmonella cho th y 39,6% m u th t l n và 42,9% m u th t gà t i mi n B c Vi t Nam phân l p ñư c vi khu n Salmonella Các nghiên c u trên ñã ñánh giá th c tr ng nhi m E coli và Salmonella trong th c ph m t i m t s ñ a phương, k t qu nghiên c u ñã góp ph n ñưa ra m t s... p 10 nhi m Salmonella trong th t l n là 47,5%, th t bò 30% và th t gà 46,7% Theo nghiên c u g n ñây c a Tr n Th Hương Giang và Huỳnh Th M L (2012) cho th y trong s các m u th t l n phân l p ñư c vi khu n E coli có 44,44% không ñ t tiêu chu n v sinh thú y Nguy n Vi t Không và cs (2012) khi nghiên c u tình tr ng ô nhi m Salmonella các ñi m gi t m gia c m quy mô nh t i các huy n ngo i thành Hà N i cho... nhau) Kháng nguyên c a Salmonella bao g m: kháng nguyên O, kháng nguyên K ho c kháng nguyên OMP, và kháng nguyên H Kháng nguyên H có 2 pha, pha 1 ñ c hi u, pha 2 không ñ c hi u Kháng nguyên O và K ph thu c vào nhau trong quá trình ñáp ng mi n d ch Nh ng năm g n ñây ngư i ta phát hi n thêm kháng nguyên pili c a Salmonella, y u t giúp vi khu n bám dính vào t bào bi u mô Có 80% serotype Salmonella s n sinh. .. 1.5.1.3 Phân lo i Hi n tư ng kháng thu c c a vi khu n ñư c chia thành 2 lo i - Kháng thu c t nhiên: B n thân vi khu n bình thư ng ñã có s n nh ng men hay m t ch t nào ñó có kh năng ch ng l i tác d ng c a kháng sinh, ho c có th lo i vi khu n ñó không có v trí công kích, ñi m tác d ng c a kháng sinh - Kháng thu c thu ñư c: Là hi n tư ng kháng thu c phát sinh do s ti p xúc nhi u l n v i ch t kháng sinh ho... không bào t : Salmonella typhi và Salmonella paratyphi, Shigella spp, Vibrio cholerae O1, Vibrio parahaemolyticus, Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Campylobacter, Mycobacterium bovis Ng ñ c th c ph m do b nhi m vi sinh v t (33 - 49%) – ch y u do các ch ng Salmonella, E coli, Clostridium perfringens, vi khu n Listeria Vi khu n Salmonella là nguyên... khu n vào th t 1.2.1 ðư ng xâm nh p c a vi khu n vào th t Th t không ch là ngu n dinh dư ng cho con ngư i mà còn là môi trư ng lý tư ng cho s phát tri n c a vi khu n S xâm nh p c a vi sinh v t vào th t theo hai con ñư ng: n i sinh và ngo i sinh Nhi m n i sinh: Nh ng ñ ng v t b b nh, m m b nh m t s cơ quan t ch c ho c n i t ng tràn vào máu và vào th t ðôi khi do h u qu c a suy như c cơ th , làm vi c... hành nghiên c u s ô nhi m vi sinh v t trong th c ph m có ngu n g c ñ ng v t trên th trư ng Hà N i và Nguy n Xuân Thu (1999) ñi u tra v s v y nhi m b m t thân th t l n do vi khu n hi u khí Coliform và E coli t i các lò m thành ph Vinh Tr n Xuân ðông (2002) cho bi t t l nhi m Salmonella trong th t s gi t m trên ñ a bàn Qu ng Ninh là 2.12% T l Salmonella t i các cơ s gi t m cơ m u th t phân l p ñư c Hà . HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ðỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ TÌNH TRẠNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI, SALMONELLA PHÂN LẬP TỪ THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ THUỘC HUYỆN GIA LÂM, THÀNH PHỐ HÀ NỘI. tiến hành ñề tài: Nghiên cứu xác ñịnh tỷ lệ nhiễm và tinh trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn Escherichia coli, Salmonella phân lập từ thịt lợn bán tại một số chợ thuộc huyện Gia Lâm, thành phố. tính kháng kháng sinh của vi khuẩn E. coli, Salmonella trong thịt lợn bán tại một số chợ thuộc huyện Gia Lâm, thành phố Hà Nội từ ñó cảnh báo tình trạng lan truyền các vi khuẩn kháng thuốc