ĐẶT VẤN ĐỀ Sự thành công của mỗi chu kỳ thụ tinh trong ống nghiệm (TTTON) phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trong đó, chất lượng phôi chuyển đóng một vai trò quan trọng. Xu hướng hiện nay trên thế giới là tăng tính an toàn và hiệu quả của chu kỳ điều trị, mục đích tạo ra những em bé khoẻ mạnh và hạn chế đa thai, do đó lựa chọn phôi tốt và giảm số phôi chuyển đang là một vấn đề được quan tâm. Trong bối cảnh đó việc lựa chọn phôi có khả năng phát triển và làm tổ cao nhất đóng vai trò quan trọng trong một chu kỳ TTTON. Có nhiều phương pháp đánh giá chất lượng phôi được xây dựng nhưng cho đến nay hệ thống đánh giá bằng hình thái vẫn được xem là vũ khí mạnh nhất cho các nhà phôi học lâm sàng nhằm tìm ra những phôi có chất lượng tốt nhất để chuyển vào buồng tử cung của bệnh nhân. Ngoài ra việc kết hợp đánh giá chất lượng noãn cũng góp phần cung cấp thêm thông tin trong việc lựa chọn phôi chuyển. 1 1. SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA BUỒNG TRỨNG 1.1. Sự hình thành buồng trứng Vào tuần thứ 8 của thời kỳ phôi thai, buồng trứng được hình thành do quá trình biệt hoá của tuyến sinh dục trung tính. Các nang noãn nguyên thuỷ được hình thành từ các dây sinh dục vỏ của tuyến sinh dục trung tính. Mỗi nang noãn nguyên thuỷ gồm có noãn bào I đang ngừng ở cuối giai đoạn tiền kỳ I và một hàng tế bào nang dẹt vây xung quanh. Buồng trứng có rất nhiều nang noãn nguyên thuỷ, số lượng nang noãn này giảm rất nhanh theo thời gian. ở tuần thứ 30 của thai nhi, cả 2 buồng trứng có khoảng 6.000.000 nang noãn nguyên thuỷ, đến tuổi dậy thì chỉ còn khoảng 40.000 nang. Trong suốt thời kỳ sinh sản (30 năm) chỉ có khoảng 400 – 500 nang này phát triển tới chín và phóng noãn hàng tháng. Số còn lại bị thoái hoá [1], [5], [31], [34]. 1.1.1. Sự hình thành và phát triển của dòng noãn (Oogenesis) Sự phát triển của noãn là sự hình thành, lớn lên và trưởng thành của noãn. Quá trình này bắt đầu từ rất sớm trong bào thai và chấm dứt vào tuổi mãn kinh của người phụ nữ, gồm có 4 giai đoạn: - Nguồn gốc ngoài cơ quan sinh dục của tế bào mầm nguyên thủy và sự di chuyển các tế bào mầm vào cơ quan sinh dục. - Sự gia tăng số lượng các tế bào mầm bằng gián phân. - Sự giảm chất liệu di truyền bằng giảm phân. - Sự trưởng thành về cấu trúc và chức năng của noãn. Những noãn chứa trong các nang noãn là những tế bào sinh dục gọi là dòng noãn. Từ đầu dòng đến cuối dòng có: noãn nguyên bào, noãn bào 1, noãn bào 2 và noãn chín [], [3], [5]. 2 Hình 1. Quá trình tạo noãn [] 1.1.2. Noãn nguyên bào Noãn nguyên bào là tế bào đầu dòng noãn phát sinh từ những tế bào sinh dục nguyên thuỷ. Sau khi hình thành, một số noãn nguyên bào biệt hoá thành noãn bào 1. ở buồng trứng thai 7 tháng, đại đa số noãn nguyên bào đã biến mất do thoái triển hoặc do đã biệt hoá thành noãn bào 1. Khi trẻ ra đời, những noãn nguyên bào hoàn toàn không thấy trong buồng trứng. Đó là một điểm khác với quá trình tạo tinh trùng [], [3]. 1.1.3. Noãn bào 1 Sau khi được tạo ra, noãn bào 1 lớn lên vì tích trữ chất dinh dưỡng trong bào tương và được vây quanh bởi một hàng tế bào dẹt gọi là tế bào nang. Những tế bào này tạo ra một cái túi chứa noãn gọi là nang noãn nguyên thuỷ. Noãn bào 1 trong nang noãn nguyên thuỷ tiến hành lần phân chia thứ nhất của quá trình giảm phân nhưng tới cuối kỳ đầu của lần phân chia này thì ngừng lại. Thời gian ngừng phân chia của noãn bào 1 dài hay ngắn tuỳ từng noãn bào 1. Thời gian ngắn nhất là tới tuổi dậy thì, dài nhất là tới khi mãn kinh. 3 Từ tuổi dậy thì đến tuổi mãn kinh, trong buồng trứng của người phụ nữ, hàng tháng thường có một noãn bào 1 nằm trong nang noãn tiếp tục lần phân chia thứ nhất của quá trình giảm phân. Kết quả là một noãn bào 1 sinh ra hai tế bào có bộ nhiễm sắc thể đơn bội n = 22A + X, nhưng có kích thước và tác dụng khác nhau: một tế bào lớn gọi là noãn bào 2 có tác dụng sinh dục và một tế bào nhỏ gọi là cực cầu 1 không có tác dụng sinh dục. Đây cũng là một điểm khác với quá trình tạo tinh trùng. Lần phân chia này hoàn thành trước khi xảy ra sự phóng noãn [], [3]. 1.1.4. Noãn bào 2 Sau khi được sinh ra, noãn bào 2 tiến hành ngay lần phân chia thứ 2 của quá trình giảm phân, song ngừng lại ở biến kỳ 2. Nếu có thụ tinh, sau khi tinh trùng chui vào noãn, giảm phân 2 mới được hoàn tất. Noãn chín và cực cầu 2 được hình thành. Cực cầu 1 cũng phân chia tạo ra 2 cực cầu 2. Giai đoạn trước khi chín, noãn là một tế bào hình tròn lớn có nhân tương đối to, có bộ NST đơn bội n = 22A + X. Nhân này được gọi là nang mầm. Noãn bào được bao quanh bởi lớp trong suốt gọi là màng trong suốt. Lớp tế bào hạt bao quanh màng trong suốt có hình trụ có các nhánh bào tương ấn sâu vào noãn bào là đường vận chuyển thông tin và cung cấp chất dinh dưỡng [], [3]. 1.1.5. Noãn chín Noãn chín là tế bào lớn nhất trong cơ thể người, đường kính tới 200 µm vì bào tương chứa nhiều chất dinh dưỡng. Trong bào tương có nhiều không bào chứa albumin và lipid, ti thể phong phú, phân bố khắp bào tương, bộ Golgi, lưới nội bào phát triển mạnh [], [3]. 4 1.2. Cấu tạo của buồng trứng người phụ nữ đang trong độ tuổi sinh đẻ 1.2.1. Buồng trứng: Mỗi phụ nữ có 2 buồng trứng. Kích thước mỗi buồng trứng trưởng thành là (2,5 - 5) x 2 x 1 cm và nặng từ 4 - 8g, trọng lượng của chúng thay đổi theo chu kỳ kinh nguyệt [4]. Buồng trứng có rất nhiều nang noãn, số lượng nang noãn này giảm rất nhanh theo thời gian. Ở tuần thứ 30 của thai nhi, cả 2 buồng trứng có khoảng 6.000.000 nang noãn nguyên thủy, đến tuổi dậy thì chỉ còn khoảng 40.000 nang. Trong suốt thời kỳ sinh sản (30 năm) chỉ có khoảng 400 - 500 nang phát triển tới chín và phóng noãn hàng tháng. Số còn lại bị thoái hoá [], [4], []. 1.2.2. Cấu tạo nang noãn: Nang noãn là một đơn vị hoạt động của buồng trứng cả về phương diện sinh sản, cả về phương diện nội tiết: nang noãn chín có khả năng phóng ra 1 noãn chín có thể thụ tinh được. Các hormon của nang noãn và cả hoàng thể đủ để làm thay đổi NMTC giúp cho phôi làm tổ và nếu như người phụ nữ không thụ thai thì cũng đủ gây ra kinh nguyệt [Error: Reference source not found], []. Nang noãn nguyên thủy có đường kính 0,05 mm. Dưới tác dụng của FSH nang noãn lớn lên, chín. Nang noãn chín (nang Graaf) có đường kính xấp xỉ 20 mm. Noãn chứa trong nang này có đường kính khoảng 100 µm [] Trong mỗi chu kỳ thường chỉ có một nang noãn phát triển để trở thành nang trưởng thành. Đó là nang nhạy nhất trong vòng kinh ấy. Nang này phát triển từ một nang đã đang phát triển dở dang từ cuối vòng kinh trước [4], [] Cấu trúc của một nang de Graaf từ ngoài vào trong gồm tế bào vỏ ngoài, tế bào vỏ trong, hệ thống lưới mao mạch, màng đáy, lớp các tế bào hạt, khoang chứa dịch nang, noãn, các lớp tế bào hạt bao quanh noãn. 5 Hình 2: Cấu trúc của nang noãn De Graaf [8] 1.2.3. Những nang noãn chưa phát triển Là những nang noãn nguyên thuỷ, thấy trong buồng trứng của thai nhi sắp ra đời, của bé gái từ khi chào đời cho đến phụ nữ trưởng thành đang ở lứa tuổi sinh đẻ. Cấu trúc rất đơn giản, bao gồm: một noãn bào 1 đang ngừng phân chia ở cuối tiền kỳ lần phân chia thứ nhất của quá trình giảm phân. Một hàng tế bào nang dẹt vây quanh noãn bào 1. Tế bào nang rất nghèo bào quan và liên kết với nhau bởi thể liên kết [], [3]. 1.2.4. Những nang noãn phát triển Chỉ thấy từ khi dậy thì đến khi mãn kinh. Quá trình phát triển trải qua nhiều giai đoạn: 6 Nang noãn nguyên phát Nang noãn nguyên phát lớn hơn nang noãn nguyên thuỷ, từ trong ra ngoài cấu tạo bởi: noãn bào 1 đang lớn lên và tiếp tục ngừng quá trình phân bào. Màng trong suốt: nằm giữa noãn và các tế bào nang. Một lớp tế bào nang đã cao lên tạo thành biểu mô vuông đơn hay trụ đơn nằm ngoài màng trong suốt. Màng đáy lót ngoài nang noãn [], [3]. Nang noãn thứ phát: tiến triển qua nhiều giai đoạn ● Nang noãn đặc: Từ trong ra ngoài có cấu tạo: noãn bào 1 nằm ở trung tâm đang tiếp tục lớn lên và vẫn ngừng quá trình phân bào. Màng trong suốt rất rõ vì đã dày lên. Lớp tế bào hạt: gồm những tế bào nang hình đa diện tạo thành một biểu mô tầng gồm nhiều hàng tế bào. Màng đáy, vỏ liên kết mỏng: giới hạn bên ngoài khó phân biệt với mô kẽ [], [3]. ● Nang noãn có hốc Khi nang noãn có đường kính 200 µm và lớp hạt có 6 – 10 hàng tế bào, ở một số nơi trong lớp tế bào nang xuất hiện nhiều khoảng trống nhỏ chứa chất lỏng gọi là dịch nang. Dịch nang là dịch thấm từ huyết tương nhưng có nhiều hyaluronate, những yếu tố phát triển, steroid và các hormon hướng sinh dục. Lúc mới đầu những hốc này nhỏ và nhiều, sau đó họp lại thành những hốc lớn hơn. Noãn bào 1 chứa trong nang noãn lớn dần và vẫn tiếp tục ngừng phân bào. Vỏ liên kết ngày càng rõ rệt [], [3]. ● Nang noãn có hốc điển hình Dịch trong các hốc nang noãn ngày càng nhiều, các hốc ngày càng lớn rồi thông với nhau thành một hốc duy nhất. Các tế bào nang tạo thành hốc nang noãn, đám tế bào nang vây quanh noãn bào 1 tạo thành gò noãn lồi vào 7 trong hốc. Noãn bào 1 tiếp tục lớn lên khi có đường kính 100 µm thì ngừng lại. Nó vẫn được ngăn cách với tế bào nang bởi màng trong suốt. Hàng tế bào nang nằm sát màng trong suốt có hình trụ và được gọi là vòng tia. Màng đáy bọc xung quanh lớp hạt. Vỏ liên kết được phân chia làm 2 lớp rõ rệt: - Lớp vỏ trong: cấu tạo bởi những tế bào hình thoi hay đa diện gọi là tế bào vỏ có đặc điểm cấu tạo của tế bào nội tiết có quan hệ mật thiết với hệ thống lưới mao mạch, tiết ra estrogen. - Lớp vỏ ngoài: cấu tạo bởi những tế bào và sợi liên kết xếp thành vòng đồng tâm xen lẫn với một ít sợi cơ trơn để bọc quanh nang noãn [], [3]. ● Nang noãn chín Nang noãn chín có kích thước khá lớn đường kính có thể lên đến 20 mm, lồi lên bề mặt buồng trứng và có thể thấy bằng mắt thường, cấu trúc tương tự như nang noãn có hốc điển hình, chỉ khác một vài đặc điểm: hốc chứa dịch nang rất lớn. Lớp hạt thành của hốc nang noãn rất mỏng chỉ gồm vài hàng tế bào nang. Gò noãn lồi hẳn vào trong hốc chứa dịch nang noãn và dính vào thành hốc bởi 1 eo nhỏ cấu tạo bởi một ít tế bào nang. Màng trong suốt rất dày khoảng 30 – 40 µm [], [3]. 1.2.5. Sinh lý sự phát triển nang noãn (Folliculogenesis) Ở người phụ nữ, khả năng phát triển của noãn chỉ đạt được sau một thời gian dài phát triển và biệt hoá trong nang noãn. Quá trình này bắt đầu rất sớm trong phôi thai cho đến khi phóng noãn. Hơn nữa, toàn bộ quá trình phát triển của noãn gắn chặt với sự tăng trưởng và sự trưởng thành về mặt chức năng của tế bào vỏ, tế bào hạt của nang noãn, thể hiện qua sự chế tiết các hormon sinh dục của những tế bào này. Vì vậy, sự phát triển và trưởng thành của noãn không thể tách rời với sự phát triển và trưởng thành của nang noãn 8 trong buồng trứng của một người phụ nữ [], [ ], [ Error: Reference source not found]. Sự phát triển của nang noãn gồm một chuỗi các sự kiện xảy ra một cách có trật tự dẫn tới sự phóng noãn ở giữa chu kỳ, bao gồm: sự huy động các nang noãn (recruitment), sự chọn lọc nang noãn (selection), sự vượt trội của một nang noãn (dominance), sự thoái hoá của nang noãn (atresia) và sự phóng noãn (ovulation) [5], [31], [34]. Quá trình này bắt đầu từ sự phát triển của nang noãn nguyên thủy (primordial follicle), qua các giai đoạn nang noãn sơ cấp (preantral follicle), nang noãn thứ cấp (antral follicle) và nang trước phóng noãn (Graafian follicle hay preovulatory follicle) (hình 2). Một chu kỳ phát triển nang noãn trung bình kéo dài 85 ngày (khoảng 3 chu kỳ kinh) và thông thường chỉ có một nang trưởng thành và phóng noãn trong mỗi chu kỳ kinh [5], [31], [34]. 1.2.5.1. Sự huy động các nang noãn (recruitment) Mỗi chu kỳ, có khoảng vài trăm nang noãn nguyên thủy được huy động vào nhóm nang noãn phát triển để sau khoảng 12 tuần có một nang noãn đạt đến giai đoạn trưởng thành và phóng noãn. Sự phát triển tiếp theo của các nang noãn nguyên thủy được huy động là một quá trình phụ thuộc vào hormon ở cuối chu kỳ kinh nguyệt. Sự thoái hoá của hoàng thể dẫn tới sự tăng nồng độ FSH, khoảng 1 ngày trước khi bắt đầu chu kỳ mới FSH tăng làm khởi phát sự phát triển của các nang noãn. Khi các nang noãn thứ cấp đã được huy động, các nang này sẽ phát triển về kích thước và chức năng chế tiết hormon. Các tế bào hạt và các tế bào vỏ nang bên ngoài của màng đáy gia tăng số lượng và có sự tạo khoang chứa dịch nang bên trong nang. Các tế bào hạt chịu trách nhiệm dinh dưỡng cho sự phát triển của noãn và thành phần của dịch nang chủ yếu là các chất thấm từ huyết tương vào. 9 Vì vậy, mỗi noãn được bao quanh bởi một môi trường đồng nhất. Song song với sự phát triển về kích thước, chức năng chế tiết hormon của các nang noãn cũng được phát triển. FSH chủ yếu tác dụng trên tế bào hạt, trong khi LH tác dụng chủ yếu trên tế bào vỏ và một phần trên tế bào hạt. Thụ thể của LH hiện diện trên tế bào vỏ. LH gắn vào thụ thể của nó trên tế bào vỏ kích thích tế bào vỏ sản xuất androgen (chủ yếu là androstenedion và testosteron) từ cholesterole. Androgen được sản xuất từ tế bào vỏ được hấp thu vào dịch nang và sau đó được tế bào hạt chuyển hoá thành estradiol [5], [31], [34]. 1.2.5.2. Sự chọn lọc nang noãn (selection). Khoảng ngày 7 của chu kỳ, sự chọn lọc của nang noãn được tiến hành. Một số nang noãn trong số các nang thứ cấp sẽ được chọn lọc để chuẩn bị cho sự phóng noãn sau này. Các nang noãn này thường là các nang đáp ứng tốt với tác dụng của FSH, có nhiều thụ thể của FSH trên các tế bào hạt và chế tiết nhiều estradiol [5], [31], [34]. 1.2.5.3. Sự vượt trội của một nang noãn (dominance). Khoảng ngày 8 - 10 của chu kỳ, một nang noãn đã được chọn lọc sẽ vượt trội hơn những nang khác đó là do: estradiol tăng sẽ hạn chế giải phóng FSH từ tuyến yên, từ đó làm hạn chế sản xuất estradiol. Bằng cách này, estradiol đã tự hạn chế sự tổng hợp chính nó (hồi tác âm tính). Vì vậy sự phát triển của các nang bị hạn chế mà chỉ có một nang trội có thể tiếp tục phát triển với nồng độ FSH thấp hơn do có sự tăng về số lượng các thụ cảm với FSH [5], [31]. [34]. 1.2.5.4. Sự thoái hoá của nang noãn (atresia) Trong nang noãn vượt trội, hoạt động chế tiết ra estradiol tăng rất nhanh, đồng thời dưới tác dụng của FSH, nang noãn vượt trội tiết ra inhibin. Inhibin ức chế sự chế tiết FSH của tuyến yên, làm cho các nang khác thiếu FSH, làm 10 [...]... bào thụ tinh bình thường có 2 tiền nhân (2PN) sau 18 giờ thụ tinh [4] 4.4 Sự thụ tinh bất thường 4.4.1 Không có tiền nhân (OPN/No pronuclei) Có khoảng 30% noãn được thụ tinh trong thực nghiệm phát triển không có tiền nhân Lý do: - Mẫu tinh dịch kém, khiếm khuyết cơ chế bám và thâm nhập của tinh trùng - Các thụ cảm thiếu hụt ở trong lớp trong suốt hoặc ở noãn cũng có thể hạn chế sự xâm nhập của tinh trùng... tra tìm noãn trong dịch nang [4], [32] - Đánh giá chất lượng của noãn bào 16 - Xử lý hỗn hợp gò mầm: gò mầm xung quanh noãn là một hàng rào đối với tinh trùng Trong thụ tinh ống nghiệm nên loại bỏ gò mầm trước khi thụ tinh [4] 2.2 Một số kỹ thuật đặc biệt khi chuẩn bị noãn làm TTTON 2.2.1 Trưởng thành noãn non trong ống nghiệm (In vitro maturation of oocytes – IVM) Trưởng thành noãn non trong ống nghiệm... có nhân steran còn gọi là các steroid sinh dục Estrogen do các tế bào hạt các lớp áo trong của nang noãn bài tiết trong nửa đầu chu kỳ kinh nguyệt và nửa sau do hoàng thể bài tiết ra Progesteron do các tế bào hạt của hoàng thể chế tiết ra 2 CHUẨN BỊ NOÃN TRONG THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM 2.1.Quy trình chuẩn bị noãn trong TTTON - Kích thích buồng trứng bằng thuốc nội tiết để có nhiều nang noãn, khi có... found] 35 Hình 17 Noãn có 1 tiền nhân (1PN) khoảng 18 giờ sau khi thụ tinh 4.4.3 Noãn có nhiều tiền nhân (3PN, 4PN /polypronuclear) Một tỷ lệ nhỏ noãn được thụ tinh trong thực nghiệm có > 2 tiền nhân Đa số noãn loại này có 3 tiền nhân (3PN) đôi khi thấy 4 hoặc nhiều hơn Tỷ lệ noãn có 3 tiền nhân khoảng 5 – 10% noãn thụ tinh Noãn đa thụ tinh thường không phát triển bình thường vì vậy không được chuyển vào... thường đi kèm với không xuất hiện các hình thái bất thường trong bào tương noãn, cùng với sự di trú của những hạt vỏ từ bộ Golgi di chuyển đến ngay bên dưới bề mặt noãn cho vai trò quan trọng trong ngăn ngừa hiện tượng đa thụ tinh 4.3 Đánh giá noãn sau tách [5] Đánh giá độ trưởng thành của noãn: Noãn sau khi tách ở được đánh giá độ trưởng thành ở 1 trong 3 giai đoạn: GV, MI, MII: - Noãn GV (germinal versicle)... bào, 22 bào tương, màng trong suốt, thể cực, thể hạt ở vùng trung tâm bào tương noãn (junko 2009) Những tiêu chuẩn này chỉ có thể được đánh giá sau khi lớp tế bào quanh noãn đã được loại bỏ Do đó việc đánh giá chất lượng nang noãn bằng hình thái thường chỉ thực hiện được trong các chu kỳ tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ISCI) Mối tương quan giữa hình thái noãn với tỷ lệ thụ tinh, chất lượng phôi và... kết rất rời rạc với nhau, trong khi đó các tế bào vành tia thường đen và nén chặt hơn với noãn bào Khối OCC thoái hoá hay bất thường (Degenerative or atretic COC) Trong quá trình chọc hút và tìm, thu nhận noãn, có khoảng 3% các khối OCC thường có những dấu hiệu bất thường như noãn có hình dạng noãn bào bất thường, đen sạm; tổn thương màng trong suốt; hay noãn trống chỉ có màng trong suốt được bao quanh... nhập của tinh trùng [4], [] 4.4.2 Một tiền nhân (one pronucleus – 1 PN) Các noãn có khả năng thụ tinh bình thường có thể nhìn thấy 2 tiền nhân, khoảng 14 – 20 giờ sau khi thụ tinh Chỉ có khoảng 3 – 6% noãn được thụ tinh nhưng chỉ thấy 1 tiền nhân (1PN) Noãn có 1 tiền nhân không phải luôn luôn không thụ tinh Nếu kiểm tra lại sau 4 – 6h thì có khoảng 25% trường hợp xuất hiện tiền nhân thứ 2, các noãn... đang bao quanh một tế bào noãn hình dạng bất thường với rất nhiều hạt thô cô đặc bên trong bào tương, cùng với 1 phần màng trong suốt bị tổn thương (Nguồn: R.Arisio, Torino, Italy) 4.2 Đánh giá độ trưởng thành của noãn Trưởng thành nhân Trưởng thành nhân của noãn thường chỉ được đánh giá trong các chu kỳ thực hiện tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI), sau khi các tế bào hạt và tế bào vành tia đã... Không lấy được tinh trùng vào ngày chọc hút noãn Nếu noãn đã được lấy ra mà không có tinh trùng để làm TTTON thì noãn đem trữ lạnh là biện 17 pháp cần thiết và tối ưu để có thể sử dụng sau này mà không phải KTBT và chọc noãn - Lập ngân hàng noãn phục vụ cho chương trình TTTON cho – nhận noãn [18], [24], [25], [30] Có 2 phương pháp trữ lạnh noãn: đông chậm (slow freezing) và đông nhanh (thuỷ tinh hoá - . áo trong của nang noãn bài tiết trong nửa đầu chu kỳ kinh nguyệt và nửa sau do hoàng thể bài tiết ra. Progesteron do các tế bào hạt của hoàng thể chế tiết ra. 2. CHUẨN BỊ NOÃN TRONG THỤ TINH TRONG. kiểm tra tìm noãn trong dịch nang [4], [32]. - Đánh giá chất lượng của noãn bào 15 - Xử lý hỗn hợp gò mầm: gò mầm xung quanh noãn là một hàng rào đối với tinh trùng. Trong thụ tinh ống nghiệm. Nhân này được gọi là nang mầm. Noãn bào được bao quanh bởi lớp trong suốt gọi là màng trong suốt. Lớp tế bào hạt bao quanh màng trong suốt có hình trụ có các nhánh bào tương ấn sâu vào noãn bào