B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI ***. NGUYN MNH TUN THựC HàNH Kỹ THUậT NHUộM MASSON S TRÊN MÔ BệNH HọC BệNH NHÂN XƠ GAN Và TìM HIểU MộT Số YếU Tố LIÊN QUAN KHểA LUN TT NGHIP C NHN Y KHOA KHểA 2009- 2013 H Ni- 2013 B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI ***. NGUYN MNH TUN THựC HàNH Kỹ THUậT NHUộM MASSON S TRÊN MÔ BệNH HọC BệNH NHÂN XƠ GAN Và TìM HIểU MộT Số YếU Tố LIÊN QUAN KHểA LUN TT NGHIP C NHN Y KHOA KHểA 2009- 2013 Hng dn khoa hc:ThS. Nguyn Hu Quc ThS. Hong Trung Kiờn H Ni- 2013 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn tới Ban Giám Hiệu, Phòng đào tạo Đại Học- trường Đại Học Y Hà Nội đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện để em được học tập, rèn luyện và tu dưỡng tại trường. Với tất cả lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn thầy giáo, Ths. Nguyễn Hữu Quốc - người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình và đóng góp nhiều ý kiến quý báu để em có thể hoàn thành tốt khóa luận này. Em xin gửi lời cám ơn chân thành tới Ths. Hoàng Trung Kiên, Ban Tuyên giáo Thành ủy Hà Nội, thầy đã tận tình chỉ bảo và tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành khóa luận. Em xin chân thành cảm ơn tới các thầy cô và cán bộ trong Bộ môn Giải phẫu bệnh - trường Đại Học Y Hà Nội đã nhiệt tình giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Cuối cùng, con xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới cha mẹ, những người thân trong gia đình đã tạo mọi điều kiện về tinh thần và vật chất cho con. Cảm ơn những người bạn đã luôn ủng hộ và động viên tôi trong quá trình học tập và thực hiện khóa luận. Nguyễn Mạnh Tuấn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các kết quả nghiên cứu trình bày trong khóa luận là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình khoa học, khóa luận hay tài liệu tham khảo nào. Hà Nội, ngày…… tháng… năm 2013 Sinh viên Nguyễn Mạnh Tuấn MỤC LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 8 DANH MỤC BẢNG 9 DANH MỤC BIỂU ĐỒ 9 DANH MỤC HÌNH 10 ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1 3 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Giải phẫu, mô học và tế bào học bình thường của gan 3 1.1.1. Giải phẫu gan 3 1.1.2. Mô học gan bình thường 3 1.2. Bệnh xơ gan 4 1.3. Vài nét về mô liên kết 5 1.4. Sợi collagen 5 1.4.1. Collagen type 1 6 1.4.2. Collagen type 2 6 1.4.3. Collagen type 3 6 1.4.4. Collagen type 4 6 1.4.5. Collagen type 5 và 6 6 1.5. Phương pháp nhuộm ba màu của Masson 7 1.5.1. Lịch sử phương pháp nhuộm ba màu của Masson 7 1.5.2. Cơ chế nhuộm 7 1.5.3. Hóa chất dùng trong phương pháp nhuộm ba màu Masson 8 1.6. Pha hóa chất 12 1.6.1. Dung dịch Hematoxylin Ferric 12 1.6.2. Dung dịch Fuchsin – Ponceau 12 1.6.3. Dung dịch acid Phosphomolybdic 1% 12 - Nước cất 12 100ml 12 - Acid Phosphomolybdic 12 1g 12 1.6.4. Dung dịch Blue aniline 12 - Blue aniline 12 2,5g 12 - Acid aceJc 12 2,5ml 12 - Nước cất 12 100ml 12 1.6.5. Dung dịch acid aceJc 1% 12 - Nước cất 12 - Acid aceJc 12 1.6.6. Dung dịch cố định Bouin 12 - Dung dịch acid picric bão hòa 13 75ml 13 - Formol 13 20ml 13 - Acid aceJc lạnh, nguyên chất 13 5ml [8] 13 1.7. Tiến hành 13 1.8. Tiến hành quy trình nhuộm 15 1.8.1. Quy trình nhuộm 15 1.8.2. Kết quả chung 15 CHƯƠNG 2 17 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1. Đối tượng nghiên cứu 17 2.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 17 2.3. Mẫu và phương pháp chọn mẫu 17 2.3.1. Tiêu chuẩn chọn mẫu 17 2.3.2. Cỡ mẫu 17 2.4. Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1. Thiết kế nghiên cứu 17 2.4.2. Phương pháp lấy mẫu 17 Các bloc chúng tôi nghiên cứu đều đã được cố định bằng formol 10% 18 2.4.3. Phương Jện nghiên cứu 18 2.5. Đánh giá kết quả nghiên cứu 18 2.5.1. Tiêu chuẩn đánh giá chất lượng Jêu bản 19 2.5.2. Tiêu chuẩn đánh giá Jêu bản đạt yêu cầu 19 CHƯƠNG 3 20 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20 3.1. Đánh giá kết quả thực hành kỹ thuật 20 3.2. Các yếu tố liên quan ảnh hưởng tới kết quả thực hành 22 CHƯƠNG 4 32 BÀN LUẬN 32 4.1. Kết quả thực hành 32 4.2. Các yếu tố liên quan 34 KẾT LUẬN 37 Từ kết quả quá trình nghiên cứu, chúng tôi rút ra một số kết luận sau đây: 37 KIẾN NGHỊ 38 Từ kết quả nghiên cứu, chúng tôi xin được đưa ra một vài kiến nghị với hy vọng sẽ nâng cao được phần nào chất lượng của một tiêu bản nhuộm Masson trong Labo Giải phẫu bệnh phục vụ cho công tác chẩn đoán mức độ xơ gan: 38 1. Đối với phương pháp nhuộm Masson để có được một tiêu bản đẹp thì yếu tố kỹ thuật của người kỹ thuật viên là yếu tố rất quan trọng. Các yếu tố kỹ thuật bao gồm các bước liên hoàn: chuyển, đúc, cắt, nhuộm 39 2. Qua quá trình nghiên cứu, chúng tôi thấy rằng tiêu bản nên được cố định bằng Bouin trước khi thực hiện nhuộm Masson. Nếu bệnh phẩm đã được cố định từ trước bằng formol 10% thì mảnh cắt nên được cố định lại bằng Bouin với thời gian là 1giờ ở nhiệt độ 56oC. Như thế, tiêu bản sẽ rõ ràng hơn độ tương phản của các thành phần 39 Ngoài ra, chúng tôi nhận thấy có thể thay thế Light green cho Blue aniline. Mặc dù Light green nhuộm màu collagen kém tương phản và kém rõ nét hơn Blue aniline nhưng vẫn có thể chấp nhận được nếu như Labo không có Blue aniline 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1. Tiêu chuẩn đánh giá chất lượng Jêu bản 19 Bảng 2.2. Bảng Jêu chuẩn Jêu bản đạt yêu cầu 19 Bảng 3.1: Kết quả thực hành tháng thứ nhất 20 Bảng 3.2: Kết quả thực hành tháng thứ hai 20 Bảng 3.3: Kết quả thực hành tháng thứ ba 21 Bảng 3.4: Kết quả thực hành tháng thứ tư 21 Bảng 3.5. Bảng kết quả chất lượng Jêu bản có và không cố định bằng Bouin 22 Bảng 3.6: Bảng kết quả nhuộm sợi collagen bằng Blue aniline và Light green 23 Bảng 3.7. Bảng kết quả khi biệt hóa bằng Acid aceJc 1% và 23 không biệt hóa bằng Acid aceJc 1% 23 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Đánh giá tổng quan chất lượng Jêu bản sau các tháng 22 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1. Gan và các bộ phận lân cận trong ổ bụng 3 Hình 1.2: Một phần Jểu thùy gan cổ điển 4 Hình 1.3: Hình thái bề mặt gan xơ 5 Hình 1.4: C.L Pierre Masson 7 Hình 1.5: Công thức của Hematoxylin 8 Hình 1.6: Cấu trúc acid Fuchsin 9 Hình 1.7: Cấu trúc Ponceau de xylindine 9 Hình 1.8: Cấu trúc acid Phosphomolybdic 10 Hình 1.9: Cấu trúc Blue aniline 10 Hình 1.10: Cấu trúc acid aceJc 11 Hình 1.11: Cấu trúc Light green 11 [...]... thut chuyn, ỳc, ct, nhum 2 Mt s yu t liờn quan nh hng ti kt qu thc hnh 3 CHNG 1 TNG QUAN TI LIU 1.1 Gii phu, mụ hc v t bo hc bỡnh thng ca gan 1.1.1 Gii phu gan Gan l c quan ln th hai trong c th (sau da) Gan úng nhiu vai trũ quan trng khỏc nhau trong vic bo tn sc khe ca chỳng ta Tựy theo kớch thc v trng lng ca mi cỏ nhõn, gan cú sc nng t 1.100 n 1.800 gram Gan va l tuyn ngoi tit (tit mt vo tỏ trng),... 1.1 Gan v cỏc b phn lõn cn trong bng 1.1.2 Mụ hc gan bỡnh thng Gan c chia lm nhiu thựy Cỏc thựy gan c to thnh bi nhng khi nh vi cu trỳc in hỡnh c gi l tiu thựy gan Mi tiu thựy l mt n v cu trỳc v chc nng ca gan [7] 4 Mi tiu thựy gan l mt khi a din cú ng kớnh khong 1- 2mm Cỏc tiu thựy ch phõn cỏch vi nhau rừ rt khong ca (ch mụ liờn kt dy lờn gúc gia 3- 4 tiu thựy) Gan c to thnh ch yu bi cỏc t bo gan. .. thỏi c gi l Kiernan hay cũn gi l tiu thựy gan Hỡnh 1.2: Mt phn tiu thựy gan c in 1.2 Bnh x gan X gan l bnh mn tớnh gõy thng tn nng lan to cỏc thu gan c im thng tn l mụ x phỏt trin mnh, ng thi cu trỳc cỏc tiu thu v mch mỏu ca gan b o ln mt cỏch khụng hi phc c [1] Hỡnh thỏi hc ca x gan l kt qu ca 3 quỏ trỡnh ng thi hoc ni tip: - Tn thng hoi t ca cỏc t bo nhu mụ gan - S tng sinh ca mụ x - S to thnh nhng... viờm gan v x húa ca nhu mụ gan l thc s cn thit, nht l nhng trng hp x gan nng Cú nhiu k thut hin i giỳp chn oỏn x gan nh: siờu õm, CT scanner nhng sinh thit gan phc v chn oỏn gii phu bnh mi l tiờu chn vng ỏnh giỏ tỡnh trng x gan Phng phỏp nhum hai mu thụng thng bng Hematoxylin v Eosin 2 khụng cho phộp quan sỏt, ỏnh giỏ phõn bit bnh lý ca mụ liờn kt Nm 1951, phng phỏp nhum ba mu ca nh gii phu bnh P Masson... virus viờm gan B ti cng ng chim khong 10- 25% dõn s, trong ú t l nhim virus viờm gan B ngi kho (8- 25%); t l nhim virus viờm gan C (0,4- 4,1%) [2] Mt lý do khỏc gõy x gan l do ru, gp nhiu cỏc nc Chõu u v cỏc nc cú thúi quen s dng ru trong ú cú Vit Nam Ngy nay, tin b trong lnh vc khoa hc ó giỳp chn oỏn sm v iu tr tt cho bnh nhõn x gan nhng tiờn lng ca bnh x gan vn rt dố dt Vic ỏnh giỏ mc viờm gan v x... nc ng dng k thut nhum ba mu chn oỏn, phõn bit bnh lý v mụ liờn kt cũn ớt Mt khỏc, cha cú ti no nghiờn cu mt cỏch ton din v cung cp cỏc thụng tin y v k thut nhum ba mu, cng nh u, khuyt im, cỏc yu t nh hng n k thut nhum ba mu v cỏch khc phc Trờn c s ú, chỳng tụi tin hnh nghiờn cu ti: Thc hnh k thut nhum ba mu ca Massons trờn mụ bnh hc bnh nhõn x gan v tỡm hiu mt s yu t liờn quan, vi mc tiờu: 1 Thc... 1ml 13 - Dung dch acid picric bóo hũa - Formol - Acid acetic lnh, nguyờn cht 1.7 Tin hnh 75ml 20ml 5ml [8] * Bnh phm Hai yêu cầu cơ bản trớc tiên của lấy bệnh phẩm là: phải lấy trúng và lấy đủ Những yêu cầu này dễ thực hiện đối với tử thiết hoặc bệnh phẩm phẫu thuật hơn là với những sinh thiết bằng dụng cụ, nhất là khi tổn thơng ở sâu hoặc trong các tạng [4], [8] Bnh phm sau khi c ly s c c nh ngay Mt... phm x gan ca bnh nhõn c ly ti B mụn Gii phu bnh, trng i hc Y H Ni v Khoa Gii phu bnh bnh vin Hu ngh Vit c Tiến hành chuyển bằng máy chuyển STP 20 Đúc bloc bằng máy đúc AP 280 Tiến hành cắt và dán mảnh: dy ming ct dy 3 àm Sau ú ming ct c ghi rừ h, tờn, kớ hiu khoa, phũng ca bnh nhõn 2.5 ỏnh giỏ kt qu nghiờn cu Nhng mu bnh phm sau khi qua cỏc bc pha, chuyn, ỳc, ct, nhum s c c trờn kớnh hin vi quang... gp ngy cng nhiu X gan l mt minh chng, thng gp nhiu tui 40 õy l mt bnh mn tớnh kộo di cú tiờn lng xu v t l t vong cao n nay, trờn th gii cng nh Vit Nam vn cha cú thuc iu tr c hiu (k c Tõy y v ụng y) Bnh gõy tn thng lan ta cỏc thựy gan vi x húa, o ln cu trỳc bỡnh thng ca gan dn ti hỡnh thnh cỏc u, cc tõn to vi cỏc cu trỳc khụng bỡnh thng [9] Nhim vius B, C l nguy c chớnh gõy x gan Kt qu mt s nghiờn... trong khu vc ranh gii k ca si collagen type 1 v 2, cú chc nng liờn kt cỏc thnh phn khụng phi collagen [6] 1.5 Phng phỏp nhum ba mu ca Masson 1.5.1 Lch s phng phỏp nhum ba mu ca Masson Nhum ba mu l mt trong nhng phng phỏp nhum phõn bit cỏc thnh phn khỏc nhau ca mụ liờn kt Thut ng nhum ba mu l tờn thng dựng ca k thut nhum chn lc cho c, si collagen, si huyt v hng cu C.L Pierre Masson (1880-1959) l mt nh gii . tiến hành nghiên cứu đề tài: Thực hành kỹ thuật nhuộm ba màu của Masson’s trên mô bệnh học bệnh nhân xơ gan và tìm hiểu một số yếu tố liên quan , với mục tiêu: 1. Thực hành thành thạo kỹ thuật. TO B Y T TRNG I HC Y H NI ***. NGUYN MNH TUN THựC HàNH Kỹ THUậT NHUộM MASSON S TRÊN MÔ BệNH HọC BệNH NHÂN XƠ GAN Và TìM HIểU MộT Số YếU Tố LIÊN QUAN KHểA LUN TT NGHIP C NHN Y KHOA KHểA 2009-. TO B Y T TRNG I HC Y H NI ***. NGUYN MNH TUN THựC HàNH Kỹ THUậT NHUộM MASSON S TRÊN MÔ BệNH HọC BệNH NHÂN XƠ GAN Và TìM HIểU MộT Số YếU Tố LIÊN QUAN KHểA LUN TT NGHIP C NHN Y KHOA KHểA 2009-