MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu họ Xoan (Meliaceae) 2.2 Giới thiệu chi Dysoxylum 2.2.1 Đặc điểm thực vật 2.2.2 Cơng dụng 2.2.3 Thành phần hóa học 2.3 Cây huỳnh đàng hai tuyến 14 2.3.1 Đặc điểm thực vật 14 2.3.2 Các nghiên cứu hóa học trước 15 NGHIÊN CỨU 16 3.1 Giới thiệu chung 16 3.2 Kết bàn luận 16 3.2.1 Mellein (80) 17 3.2.2 Ferulaldehyd (81) 20 3.2.3 Acid vanillic (82) 23 3.2.4 Lupeol (83) 24 3.2.5 Acid betulinic (84) 26 3.3 Thực nghiệm 28 3.3.1 Thu hái mẫu điều chế cao 28 3.3.2 Phân lập chất 28 KẾT LUẬN 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC PHỔ 1 MỞ ĐẦU Trong đời sống người, cỏ đóng vai trị quan trọng, đặc biệt nhiều loài sử dụng dân gian để làm thuốc chữa bệnh từ lâu Việc phân lập xác định cấu trúc hợp chất tự nhiên từ nguồn sinh vật nói chung thực vật nói riêng cơng việc quan trọng giai đoạn đầu nhằm tìm hiểu hóa thực vật lồi khảo sát, cung cấp cao thơ hợp chất tinh khiết cho thử nghiệm hoạt tính sinh học, tìm kiếm hoạt chất có khả chữa bệnh Với điều kiện khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, thích hợp cho sinh trưởng thực vật, nước ta có nguồn tài nguyên thực vật vơ phong phú Đó điều kiện thuận lợi cho ngành hóa học hợp chất tự nhiên hóa dược phát triển Dysoxylum chi lớn thuộc họ Xoan (Meliaceae), có nhiều lồi có ứng dụng thực tiễn cung cấp gỗ quí phục vụ cho xây dựng, làm đồ dùng gia đình, cung cấp nguồn lớn terpenoid, alkaloid, limonoid có hoạt tính sinh học đa dạng, có khả kháng sâu bệnh, kháng viêm, kháng khuẩn Huỳnh đàng hai tuyến (Dysoxylum binectariferum) sử dụng y học dân gian để trị cùi lở loét Trên giới, có số nghiên cứu lồi chưa có nghiên cứu Việt Nam Do vậy, điều kiện cho phép, tiến hành khảo sát thành phần hóa học huỳnh đàng hai tuyến thu hái Vườn Quốc gia Lò Gò - Xa Mát, tỉnh Tây Ninh 2 TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu họ Xoan (Meliaceae) Cây to hay nhỡ Lá mọc so le, kép lơng chim, đơn Cụm hoa chùm, bơng hay tán Hoa đều, lưỡng tính; đài 4-5, cánh hoa 4-5 có 3, rời hay dính dưới; nhị 510, dính nhiều hay thành ống đính đế hoa, rời, đĩa mật quanh bầu; bầu trên, 2-5 ơ, 6, ô chứa 1-8 noãn, thường gốc nỗn Quả khơ hay nạc, mở hay khơng mở, hạch; hạt có vỏ cứng hay có cánh [1, 2] Gồm 51 chi, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới [1, 2] Theo GS Phạm Hồng Hộ, Việt Nam, họ Xoan có 20 chi với 85 loài phân bố rải rác khắp đất nước [3] 2.2 Giới thiệu chi Dysoxylum 2.2.1 Đặc điểm thực vật Dysoxylum hay huỳnh đàng [2], huỳnh đường, chặc khế [1], chi lớn thuộc họ Xoan (Meliaceae) Cây gỗ Lá mọc so le, khơng có kèm, kép lông chim lẻ hay chẳn; chét nguyên Cụm hoa chùy nách hay gần nách, thường đơn, có dạng bơng, sinh nhánh non thân nhánh già; hoa dài, có bắc Đài ngắn, hợp đài có 4-5 đài rời Cánh hoa 4-5, vượt đài, xếp van lợp đỉnh Nhị 8-10, xếp bó; ống hình trụ; bao phấn 8-10, khơng cuống, đính gốc, hướng Đĩa mật tụ thành bẹ dài, bao quanh gốc nhụy Bầu thượng, hình cầu, vịi mảnh, đầu nhụy hình khiên, dẹp thành đĩa, 3-4, nỗn Quả nang mở ơ, thành 4-5 van; hạt khơng có cánh, thường khơng có áo hạt [1] Có khoảng 200 lồi, phân bố Ấn Độ, Đơng Nam Á, Úc New Zealand [4] Ở Việt Nam, chi Dysoxylum có khoảng 15 lồi, phân bố rải rác khắp đất nước vùng có đất bazan, đất đá vôi, đất sa thạch, đất pha cát [3] 2.2.2 Cơng dụng Đa số lồi thuộc chi Dysoxylum Việt Nam nguồn cung cấp gỗ có giá trị xây dựng, làm đồ dùng gia đình [3] Trong y học dân gian, nhiều loài thuộc chi dùng để chữa bệnh Cao nước vỏ D variabile người dân địa phương PaPua New Guinea dùng chữa táo bón, đau bụng, đau dày, bí tiểu, sốt [5] Lá vỏ D richii người xứ Fiji dùng chữa bệnh méo mặt trẻ em, chân tay cứng, u da, kích ứng da chữa bệnh lây nhiễm qua đường tình dục [6] Lá vỏ D spectabile dùng chữa sốt, xuất huyết, co giật [7] 2.2.3 Thành phần hóa học Cho đến nay, khoảng 20 loài thuộc chi Dysoxylum khảo sát thành phần hóa học Các nghiên cứu cho thấy chi Dysoxylum chứa chủ yếu triterpenoid, limonoid, sesquiterpenoid, diterpenoid alkaloid Triterpenoid Triterpenoid diện phổ biến chi Dysoxylum Năm 1991, Adesanya cs phân lập năm apotirucallan triterpen dysoron A-E (1-5) từ D roseum [8] O H O H R1 R2 R3 R1 = CH2OH, R2, R3 = O R1 = CH2OH, R2 = H, R3 = OH R1 = Me, R2, R3 = O,  R1 = Me, R2 = H, R3 = OH,  R1 = CH2OH, R2, R3 = O,  Bốn tirucallan triterpen 3β,22S-dihydroxy-tirucalla-7,24-dien-23-on (6), 22,23-epoxy-tirucalla-7-en-3β,24,25-triol (7), 3β,25-dihydroxy-tirucalla-7,23-dien (8), 23,26-dihydroxy-tirucalla-7,24-dien-3-on (9) Luo cs tìm thấy vào năm 2000 từ vỏ D hainanense [4] OH O OH OH O HO HO OH H CH2OH OH H HO Năm O 2001, Hisham cs phân lập 21R,23R-epoxy-21α-etoxy-24S,25- dihydroxyapotirucall-7-en-3-on (10) apotirucallan triterpen 24Racetoxy-3β,25-dihydroxycycloartan (11) từ D malabaricum [9] HO H O OH OAc CH3CH2O OH O HO 10 11 Liu cs phát tám tirucallan triterpen dyvariabilin A-H (12-19) từ vỏ D variabile vào năm 2001 [5] O OH OH O O 13 7,8 = -epoxy 14 7,8 = -epoxy O O 12 O O OH OH R O R1 O R2 15 16 R = OH, R1 = O, R2 = H 17 R = H, R1 = O, R2 = OCH3 18 R = H, R1 = -OH, R2 = H O O 19 Năm 2002, Luo cs phân lập hai apo-tirucallol từ vỏ D hainanense 7α-acetoxy-17α-20S-21,24-epoxy-apotirucall-14-en-3α,23R,24S,25-tetraol (20), 7αacetoxy-17α-20S-21,24-epoxy-apotirucall-14-en-3-on-23R,24S,25-triol (21) [10] OH OH OH O HO OH O OAc O OH OH OAc 21 20 Năm 1991, từ D richii, Aalbersberg Singh tìm thấy tám triterpen có bốn dammaran triterpen metyl richenoat (22), richenon (23), richenol (24) acid richenoic (25) [6] Năm sau, hai nhà khoa học phân lập thêm dammaran triterpen acid (20S,24S)-epoxy-4-hydroxy-3,4-seco-dammar-25(26)-en-3-oic (26) [11] O RO2C 22 R = Me 25 R = H O O O 24 H 23 H HO2C HO H O H OH 26 Dymalol (27), dammaran triterpen phân lập từ D malabaricum vào năm 1994 Govindachari cs [12] Năm 1999, Huang cs phân lập abeo-dammaran (20R)-23(24→25)abeo-20,24-dihydroxydammaran-3on (28) từ D cauliflorum [13] OH H O OH OH MeO2C O 28 27 OH Đến năm 2012, từ Dysoxylum hainanense, Wang cs tìm thấy bốn nordammaran triterpenoid Thử nghiệm in vitro cho thấy hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào trung bình bốn dòng tế bào u (tumor) (A549, SK-OV-3, SKMEL-2 HCT15) Đó hợp chất 12β-O-acetyl-15α,28-dihydroxy-17β-metoxy-3-oxo20,21,22-23,24,25,26,27-octanordammanran (29), 12β-O-acetyl-15α,17β,28- trihydroxy-3-oxo-20,21,22-23,24,25,26,27-octanordammanran (30), 12β-O-acetyl- 15α,28-dihydroxy-3-oxo-17-en-20,21,22-23,24,25,26,27-octanordammanran (31) 12β,15α,17β,28-tetrahydroxy-3-oxo-20,21,22-23,24,25,26,27-octanordammanran (32) [14] AcO OMe AcO OH O OH O OH OH 29 30 OH AcO OH OH OH O OH O 31 32 OH OH Năm 2009, Ismail cs tìm thấy hai triterpen từ cao MeOH D acutangulum thu hái Malaysia đặt tên acutaxylin A (33) B (34) Trong acutaxylin B (34) có khả gây độc tế bào ung thư bạch cầu [15] HO O O H H HO HO O H H H O H COOMe 33 O O H OH H COOMe 34 Năm 2011, Kurimoto cs phát sáu triterpen triterpen glucosid (35-41) từ cao MeOH D cumingianum Các hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào yếu ba dòng tế bào ung thư người (KB-ung thư biểu mô, MCF7-ung thư vú KB-C2) [16] OH H OR3 H OH R1O R1 35 H 36 Ac 37 H OR2 OH H R2 Ac H Glc H OH R3 H H Me HO OAc 38 OH OH H O MeO H OH H H OMe H H 39 H HO OH H OAc HO H OH 40 OH H H OH OH H 41 HO H OAc Limonoid Limonoid tetranortriterpenoid tìm thấy phổ biến chi Dysoxylum Năm 1987, Jogia Andersen phân lập limonoid dysoxylin (42) từ D richii [17] 20 3.2.2 Ferulaldehyd (81) H O OMe OH 81 Ferulaldehyd (81) (HD2) thu dạng tinh thể hình kim màu trắng, cho phản ứng màu xanh đậm với thuốc thử FeCl3 EtOH Phổ 1H NMR (Phụ lục 5) cho mũi cộng hưởng ứng với diện proton aldehyd [δH 9.65 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-9)], vòng benzen 1,2,4- tam hoán [δH 7.13 (1H, dd, J= 8.5 2.0 Hz, H-6), 7.07 (1H, d, J= 2.0 Hz, H-2) 6.96 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-5)], hai proton trans olefin [δH 7.40 (1H, d, J= 16.0 Hz, H-7) 6.59 (1H, dd, J= 15.8 7.8 Hz, H-8)] nhóm metoxyl [δH 3.95 (3H, s, 3-OMe)] Phổ 13 C NMR (Phụ lục 6) cho mũi cộng hưởng ứng với 10 carbon gồm carbon carbonyl [δC 193.6 (s, C-9)], ba carbon hương phương trí hốn [δC 149.1, 147.2 126.9 (mỗi mũi s, C-4, C-3 C-1)], ba carbon hương phương mang proton [δC 124.2, 115.1 109.7 (mỗi mũi d, C-6, C-5 C-2)], nối đơi carbon-carbon nhị hốn [δC 153.0 (d, C-7) 126.7 (d, C-8)] nhóm metoxyl [δC 56.2 (q, 3-OMe)] Cấu trúc 81 xác định dựa vào phổ HSQC (Phụ lục 7) HMBC (Phụ lục 8) Trong phổ HMBC, proton aldehyd (δH 9.65, H-9) cho tương quan HMBC với carbon olefin δC 126.7 nên carbon C-7 C-8 Mặt khác, hai proton trans olefin (δH 7.40) cho tương quan HMBC với hai carbon hương phương mang proton (δC 124.2 109.7) carbon hương phương trí hốn (δC 126.9) nên proton gắn C-7 (δC 153.0) Suy proton trans olefin δH 6.59 gắn vào C-8 (δC 126.7) carbon hương phương trí hốn C-1, hai carbon hương phương mang 21 proton C-2 C-6 Hằng số ghép cặp H-6 H-2 [δH 7.13 (1H, dd, J= 8.5 2.0 Hz, H-6), 7.07 (1H, d, J= 2.0 Hz, H-2)] cho thấy C-5 mang proton (δH 6.96; δC 115.1) H O OMe OH Hình 3.2 Các tương quan HMBC ferulaldehyd (81) Proton H-6 cho tương quan HMBC với carbon hương phương trí hốn mang oxygen δC 149.1 nên carbon C-4 Proton H-2 cho tương quan với C-4 carbon hương phương trí hốn mang oxygen δC 147.2 nên carbon C-3 Mặt khác, proton nhóm metoxyl (δH 3.95) cho tương quan HMBC với C-3 nên C-3 mang nhóm metoxyl Proton nhóm hydroxyl tự δH 5.98 cho tương quan với C3, C-4 carbon hương phương mang proton δC 115.1 (C-5), tái xác nhận C-4 mang nhóm -OH Vậy hợp chất (E)-3-(4-hydroxy-3-metoxyphenyl)prop-2-enal hay 4-hydroxy3-metoxycinnamaldehyd (81), cịn gọi ferulaldehyd Các tương quan HMBC 81 biểu diễn Hình 3.2 Số liệu phổ H, 13C NMR tương quan HMBC 81 trình bày Bảng 3.2 22 Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H NMR, 13C NMR tương quan HMBC ferulaldehyd (81) CDCl3 Vị trí H Tương quan HMBC C 126.9 7.07 d (J= 2.0 Hz) C-7, C-3, C-4, C-6 109.7 147.2 149.1 6.96 d (J= 8.0 Hz) C-1, C-3, C-4, C-6 115.1 7.13 dd (J= 8.5 2.0 Hz) C-7, C-2, C-4, C-5 124.2 7.40 d (J= 16.0 Hz) C-9, C-8, C1, C-2, C-6 153.0 6.59 dd (J= 15.8 7.8 Hz) C-1 126.7 9.65 d (J= 8.0 Hz) C-8 193.6 3-OMe 3.95 s C-3 56.2 4-OH 5.98 s C-3, C-4, C-5 23 3.2.3 Acid vanillic (82) COOH OCH3 OH 82 Acid vanillic (82) (HD3) thu dạng tinh thể hình kim màu trắng Phổ 1H NMR (Phụ lục 9) 13 C NMR (Phụ lục 10) cho mũi cộng hưởng ứng với carbon gồm vòng benzen 1,2,4- tam hoán [H 6.90 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-5), 7.56 (1H, m, H-2), 7.56 (1H, m, H-6)], carbon carbonyl acid carboxylic [C 166.9 (C-7)] nhóm metoxyl [H 3.89 (3H, s, 3-OMe); C 55.0 (3-OMe)] So sánh số liệu phổ với tài liệu tham khảo [33] cho thấy hợp chất acid 4hydroxy-3-metoxybenzoic, gọi acid vanillic (82), tìm thấy phổ biến thực vật [34] Số liệu phổ 1H 13C NMR 82 trình bày Bảng 3.3 Bảng 3.3 Số liệu phổ 1H 13C NMR acid vanillic (82) aceton-d6 Vị trí H C 121.7 7.56, m 112.3 146.9 150.9 6.90 d, J= 8.0 Hz 114.3 7.56, m 123.5 7-COOH 166.9 3-OMe 3.89 s 55.0 24 3.2.4 Lupeol (83) H 29 H 20 30 21 19 22 13 11 25 26 H 17 28 15 27 HO 24 23 83 Lupeol (83) (HD4) thu dạng tinh thể hình kim màu trắng, khơng hấp thu tia tử ngoại, điểm nóng chảy 190-192 °C Phổ DEPT 90 DEPT 135 (Phụ lục 11) cho mũi cộng hưởng ứng với diện nhóm CH, 11 nhóm CH2 nhóm CH3 Phổ 13C NMR (Phụ lục 12) cho mũi cộng hưởng ứng với 30 carbon có hai carbon nhóm exometylen [C 151.1 (s, C-20) 109.5 (t, C-29)] carbon oxymetin [C 79.2 (d, C-3)] Phổ 1H NMR (Phụ lục 13) cho mũi cộng hưởng ứng với diện proton nhóm exometylen [H 4.69 (1H, d, J= 2.5 Hz, H-29) 4.57 (1H, m, H-29)], proton alcol bậc hai [H 3.19 (1H, dd, J= 11.5 5.0 Hz, H-3)], proton alyl [H 2.38 (1H, td, J = 11.1 5.8 Hz, H-19)], nhóm metyl gắn vào carbon olefin [H 1.66 (1H, s, H3-30)] nhóm metyl bậc ba [H 0.97 (3H, s, H3-23), 0.83 (3H, s, H3-24), 0.79 (3H, s, H3-25), 1.03 (3H, s, H3-26), 0.95 (3H, s, H3-27), 0.76 (3H, s, H3-28)] Từ số liệu phổ dự đốn 83 có cơng thức phân tử C30H50O với độ bất bão hoà 6, phân tử có nối đơi C=C Vậy triterpen có vịng So sánh phổ 83 với tài liệu tham khảo [35] cho thấy hợp chất lup-20(29)-en-3ol hay gọi lupeol (83), triterpen thường gặp thực vật Số liệu phổ 1H 13C NMR lupeol (83) trình bày Bảng 3.4 25 Bảng 3.4 Số liệu phổ 1H 13C NMR lupeol (83) CDCl3 Vị trí H C 39.0 27.7 3.19 (dd, J= 11.5 5.0 Hz) 79.2 39.1 55.6 18.5 34.5 43.2 50.7 10 37.4 11 21.2 12 25.4 13 38.3 14 41.1 15 27.6 16 35.8 17 43.1 18 48.6 19 2.38 (td, J= 11.1 5.8 Hz) 48.2 20 151.1 21 30.1 22 23 24 25 26 27 28 29 30 40.2 0.97 s 0.83 s 0.79 s 1.03 s 0.95 s 0.76 s 4.69 (d, J= 2.5 Hz) 4.57 m 1.66 s 28.2 16.2 16.3 15.5 14.8 18.2 109.5 19.5 26 3.2.5 Acid betulinic (84) H H 20 30 21 19 22 13 11 25 26 H 17 28 COOH 15 27 HO 24 23 84 Axit betulinic (84) (HD5) phân lập dạng tinh thể màu trắng Phổ DEPT 90 DEPT 135 (Phụ lục 14) cho mũi cộng hưởng ứng với diện nhóm metin, 11 nhóm metylen nhóm metyl Phổ 13C NMR (Phụ lục 15) cho mũi cộng hưởng ứng với 30 carbon có carbon carbonyl acid carboxylic [C 179.7 (s, C-28)], hai carbon nhóm exometylen [C 150.6 (s, C-20) 109.8 (t, C-29)] carbon metin nối với oxygen [C 79.2 (d, C-3)] Phổ 1H NMR (Phụ lục 16) cho mũi cộng hưởng ứng với diện hai proton nhóm exometylen [H 4.74 (1H, s, H-29) 4.61 (1H, s, H-29)], proton alcol bậc hai [H 3.19 (1H, dd, J = 11.3 4.7 Hz, H-3)], proton alyl [H 3.00 (1H, td, J = 11.1 5.8 Hz, H-19)], nhóm metyl gắn vào carbon olefin [H 1.69 (3H, s, H3-30)] năm nhóm metyl bậc ba [H 0.75 (3H, s, H3-23), 0.97 (3H, s, H3-24), 0.83 (3H, s, H3-25), 0.94 (3H, s, H3-26), 0.98 (3H, s, H3-27)] Từ số liệu phổ dự đốn 84 có cơng thức phân tử C30H48O3 với độ bất bão hoà 7, phân tử có nối đơi exometylen Vậy triterpen có vịng So sánh phổ 84 với tài liệu tham khảo [36] cho thấy hợp chất acid lup20(29)-en-3-ol-28-oic hay gọi acid betulinic (84), triterpen thường gặp thực vật Số liệu phổ 1H 13C NMR acid betulinic (84) trình bày Bảng 3.5 27 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1H 13C NMR acid betulinic (84) CDCl3 Vị trí H C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 3.19 (dd, J= 11.3 4.7 Hz) 3.00 (td, J= 10.4 4.7 Hz) 0.75 s 0.97 s 0.83 s 0.94 s 0.98 s 4.74 s, 4.61 s 1.69 s 38.9 27.6 79.2 39.0 55.5 18.5 34.5 40.9 50.7 37.4 21.0 25.7 38.6 42.6 30.7 32.3 56.4 49.5 47.1 150.6 37.2 29.9 15.5 28.2 16.3 16.2 14.9 179.7 109.8 19.5 28 3.3 Thực nghiệm Thiết b điều iện th nghiệm Điểm nóng chảy đo máy đo điểm nóng chảy Wagner & Munz Polytherm A, nhiệt kế không điều chỉnh Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ghi máy Bruker Avance 500 [500 MHz (1H) 125 MHz (13C)] với TMS chất chuẩn nội (= 0.00 ppm) SKC thực silica gel 60 (40-63 µm, Merck) hay RP-18 (40-63 µm, Merck) SKC lọc gel thực Sephadex LH-20 (GE Healthcare) SKBM thực silica gel 60 F254 (250 µm, Merck) hay RP-18 F254s (250 µm, Merck) Các cấu tử mỏng phát đèn tử ngoại hay cách cho vào bình đựng iod Tất dung mơi chưng cất lại trước sử dụng 3.3.1 Thu hái mẫu điều chế cao Lá cành non huỳnh đàng hai tuyến thu hái Vườn Quốc gia Lị Gị Xa Mát, tỉnh Tây Ninh Mẫu khơ xay nhỏ trích kiệt (2.2 kg) Soxhlet với etyl acetat, thu hồi dung môi thu cao EtOAc 3.3.2 Phân lập chất SKC cao EtOAc (70.0 g) silica gel hệ dung ly hexan-EtOAc có độ phân cực tăng dần thu phân đoạn (AH1-8) Kết trình bày Bảng 3.6 29 Bảng 3.6 Kết SKC cao EtOAc huỳnh đàng hai tuyến Phân đoạn Kí hiệu Khối lượng (g) AH1 2.90 AH2 2.25 AH 6.94 AH4 6.40 AH5 1.65 AH6 3.40 AH7 5.65 AH8 6.10 Khảo sát phân đoạn SKC phân đoạn AH3 (6.94 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-100%) thu phân đoạn (AH3.1-8) SKC phân đoạn AH3.2 (2.9 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-100%) thu phân đoạn (AH3.2.1-8) SKC phân đoạn AH3.2.2 (1.12 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-30%) RP-18 (H2O-MeOH 80-100%) thu mellein (80, HD1, 7.4 mg) SKC nhiều lần phân đoạn AH3.3 (1.5 g) silica gel (hexan-EtOAc) RP-18 (H2O-MeOH 80-100%) thu lupeol (83, HD4, 7.1 mg) Quy trình phân lập 80 83 từ phân đoạn AH3 tóm tắt Hình 3.3 30 AH3 (6.94 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH3.2 (2.9 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH3.2.2 (1.12 g) RP-18 (H2O-MeOH) Mellein (80) (7.4 mg) AH3.3 (1.5 g) SKC, silica gel hexan-aceton EtOAc Anh3D (83) AH3.3.2 (100.5 mg) O (7.1 mg) RP-18 (H2O-MeOH) Ac Lupeol (83) (7.1 mg) Hình 3.3 Sơ đồ phân lập mellein (80) lupeol (83) từ phân đoạn AH3 Khảo sát phân đoạn SKC phân đoạn AH4 (6.40 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-100%) thu phân đoạn (AH4.1-7) SKC phân đoạn AH4.4 (2.1 g) silica gel (hexan-aceton 0100%) thu phân đoạn (AH4.4.1-8) SKC phân đoạn AH4.4.3 (850 mg) silica gel (hexan-EtOAc 0-50%) RP-18 (H2O-aceton 70-100%) thu ferulaldehyd (81, HD2, 5.2 mg) SKC phân đoạn AH4.5 (1.45 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-100%) thu phân đoạn (AH4.5.1-6) SKC phân đoạn AH4.5.4 (200 mg) silica gel (hexanEtOAc 0-50%) RP-18 (H2O-MeOH 70-100%) thu acid betulinic (84, HD5, 7.5 mg) Quy trình phân lập 81 84 từ phân đoạn AH4 tóm tắt Hình 3.4 31 AH4 (6.40 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH4.4 (2.1 g) SKC, silica gel hexan-aceton AH4.4.3 (350 g) RP-18 (H2O-aceton) Ferulaldehyd (81) (5.2 mg) AH4.5 (1.45 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH4.5.4 (200 mg) RP-18 (H2O-MeOH) Acid betulinic (84) (7.5 mg) Hình 3.4 Sơ đồ phân lập ferulaldehyd (81) acid betulinic (84) từ phân đoạn AH4 Khảo sát phân đoạn SKC phân đoạn AH7 (5.65 g) silica gel (hexan-EtOAc 0-100%) thu phân đoạn (AH7.1-7) SKC hai lần phân đoạn AH7.4 (1.5 g) silica gel (hexanEtOAc 0-70%) thu phân đoạn AH7.4.3 (85.3 mg) Tinh chế SKC lọc Sephadex LH-20 (CHCl3-MeOH 1:1) thu acid vanillic (82, HD3, 6.3 mg) Quy trình phân lập 82 từ phân đoạn AH7 tóm tắt Hình 3.5 32 AH7 (5.65 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH7.4 (1.5 g) SKC, silica gel hexan-EtOAc AH7.4.3 (85.3 mg) Sephadex LH-20 MeOH-CHCl3 (1:1) Acid vanillic (82) (6.3 mg) Hình 3.5 Sơ đồ phân lập acid vanillic (82) từ phân đoạn AH7 33 KẾT LUẬN Trong đề tài này, chúng tơi khảo sát thành phần hóa học cành non huỳnh đàng hai tuyến (Dysoxylum binectariferum) thu hái Vườn Quốc gia Lò Gò Xa Mát, tỉnh Tây Ninh Quá trình phân lập chất thực phương pháp sắc ký cột kết hợp với sắc ký mỏng silica gel, RP-18 Sephadex LH-20 Việc xác định cấu trúc thực dựa phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H NMR, 13C NMR, DEPT 90, DEPT 135, HSQC HMBC) Từ cao etyl acetat, phân lập định danh hợp chất mellein (80), ferulaldehyd (81), acid vanillic (82), lupeol (83) acid betulinic (84) Đây lần hợp chất tìm thấy huỳnh đàng hai tuyến H O COOH O OH OMe O OCH3 OH 81 80 OH 82 H HO 83 H HO 84 COOH 34 Theo Higgins cs, Mellein (80) có nhiều hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng nấm, kháng ung thư, kháng sốt rét [37] Acid vanillic (82) có hoạt tính kháng nấm [34] Theo Aratanechemuge cs, lupeol (83) có hoạt tính kháng viêm, kháng ung thư, có khả ngăn ngừa tiến trình phát triển bệnh bạch cầu promyelotic nhờ khả chống phân bào, chống sinh mạch xúc tiến trình apoptosis tế bào [35] Theo Patocka, acid betulinic (84) có hoạt tính chống sốt rét, kháng ung thư đặc biệt kháng HIV [38] KIẾN NGHỊ CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO - Tiếp tục khảo sát phân đoạn lại cao etyl acetat - Thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập ... spectabile dùng chữa sốt, xuất huyết, co giật [7] 2.2.3 Thành phần hóa học Cho đến nay, khoảng 20 loài thuộc chi Dysoxylum khảo sát thành phần hóa học Các nghiên cứu cho thấy chi Dysoxylum chứa chủ... cứu hóa học trước Theo tài liệu chúng tơi có được, giới có báo cáo thành phần hóa học hoạt tính sinh học huỳnh đàng hai tuyến Những khảo sát thực mẫu thu hái Ấn Độ Kết cho thấy huỳnh đàng hai tuyến... Me Me 78 79 16 NGHIÊN CỨU 3.1 Giới thiệu chung Trong đề tài này, khảo sát thành phần hóa học huỳnh đàng hai tuyến (Dysoxylum binectariferum) thu hái Vườn Quốc gia Lò Gò - Xa Mát, tỉnh Tây Ninh