ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  NGUYỄN THỊ HẰNG “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SẢN XUẤT, CHẤT LƢỢNG THỊT VÀ PHÂN TÍCH ĐA HÌNH GEN DI TRUYỀN CỦA GEN H-FABP BẰNG PHƢƠNG PHÁP PCR - RFLP TRÊN ĐÀN LỢN MẸO NUÔI TẠI HUYỆN PÁC NẶM - TỈNH BẮC KẠN” LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP THÁI NGUYÊN - 2011 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  NGUYỄN THỊ HẰNG “NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SẢN XUẤT, CHẤT LƢỢNG THỊT VÀ PHÂN TÍCH ĐA HÌNH GEN DI TRUYỀN CỦA GEN H-FABP BẰNG PHƢƠNG PHÁP PCR - RFLP TRÊN ĐÀN LỢN MẸO NUÔI TẠI HUYỆN PÁC NẶM - TỈNH BẮC KẠN” LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH: CHĂN NUÔI Mã số: 60 62 40 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Liên THÁI NGUYÊN - 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực, khách quan chƣa có cơng bố cơng trình nghiên cứu LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Thạc sĩ khoa học nông nghiệp, nhận đƣợc giúp đỡ quý báu Nhà trƣờng địa phƣơng Nhân dịp hoàn thành luận văn xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn kính trọng sâu sắc tới: Ban Giám hiệu Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Khoa Sau Đại học thầy cô giáo Khoa Chăn nuôi Thú y - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Đặc biệt, xin trân trọng cảm ơn quan tâm, giúp đỡ thầy giáo hƣớng dẫn: TS Nguyễn Thị Liên tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi q trình triển khai nội dung nghiên cứu nhƣ góp nhiều ý kiến q báu cho việc hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Chi cục Thú y tỉnh Bắc Kạn, Trạm Thú y huyện Pác Nặm, phịng Cơng nghệ gen động vật, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ thời gian, sở vật chất, nhân lực giúp tơi hồn thành luận văn Nhân dịp xin đƣợc bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới tồn thể gia đình, bạn bè gần xa đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ vơ hạn mặt, động viên, khuyến khích tơi q trình học tập nghiên cứu Tơi xin trân trọng gửi tới thầy cô giáo, quý vị Hội đồng chấm luận văn lời cảm ơn chân thành lời chúc tốt đẹp Thái Nguyên, tháng10 năm 2011 Tác giả Nguyễn Thị Hằng MỤC LỤC Trang Phần mở đầu 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1.1 Đặc điểm sinh học chung lợn 1.1.1.1 Nguồn gốc lợn nhà 1.1.1.2 Lợn lồi có khả sinh sản cao 1.1.1.3 Lợn loài gia súc ăn tạp, khả chịu đựng kham khổ cao 1.1.1.4 Lợn lồi có suất thịt cao, chất lượng thịt mỡ tốt 1.1.1.5 Lợn lồi gia súc có khả thích nghi cao, dễ huấn luyện 1.1.2 Một số đặc điểm giống lợn Mẹo 1.1.3 Tổng quan lĩnh vực bảo tồn phát triển giống vật nuôi địa phƣơng 10 1.1.4 Sự sinh trƣởng phát triển vật nuôi 11 1.1.4.1 Khái niệm sinh trưởng 11 1.1.4.2 Đặc điểm sinh trưởng lợn 13 1.1.4.3 Các nhân tố ảnh hưởng tới sinh trưởng lợn 14 1.1.5 Các tiêu đánh giá khả sinh trƣởng, suất chất lƣợng thịt lợn 19 1.1.6 Thành phần hoá học thịt 20 1.1.7 Đa hình gen di truyền 21 1.1.7.1 Gen 21 1.1.7.2 Chỉ thị di truyền (Gentic marker) 21 1.1.7.3 Ứng dụng thị di truyền đến tính trạng số lƣợng lợn 24 1.1.7.4 Gen Heart-fatty acid binding protein (H-FABP) 25 1.1.7.4.1 Vị trí, cấu trúc, chức gen H-FABP 25 1.1.7.4.2 Đa hình di truyền gen H-FABP 28 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGỒI NƢỚC 31 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 31 1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 36 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG - NỘI DUNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 40 2.2 Địa điểm - thời gian tiến hành 40 2.3 Nội dung nghiên cứu 40 2.3.1 Nghiên cứu khả sinh trưởng qua tháng tuổi lợn thịt 40 2.3.2 Nghiên cứu chất lượng thịt lợn Mẹo 40 2.3.3 Phân tích đa hình gen liên quan đến chất lượng thịt lợn Mẹo 40 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 40 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu khả sinh trưởng đàn lợn Mẹo 41 2.4.1.1 Sinh trưởng tích luỹ 41 2.4.1.2 Sinh trưởng tương đối 41 2.4.1.3 Sinh trưởng tuyệt đối 41 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu chất lượng thịt lợn Mẹo 42 2.4.2.1 Mổ khảo sát 42 2.4.2.2 Phương pháp phân tích mẫu thịt 43 2.4.3 Phân tích đa hình gen 43 2.4.3.1 Nguyên liệu phân tích gen 43 2.4.3.2 Phương pháp tách chiết DNA từ mẫu mô tai lợn 44 2.4.3.3 Phương pháp kiểm tra DNA điện di gel agarose 46 2.4.3.4 Định lượng DNA quang phổ kế 48 2.4.3.5 Phản ứng PCR 49 2.4.3.6 Phương pháp phân tích đa hình đoạn cắt giới hạn (RFLP) 50 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 51 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 3.1 Kết nghiên cứu khả sinh trƣởng đàn lợn Mẹo 52 3.1.1 Sinh trƣởng lợn giai đoạn theo mẹ 52 3.1.2 Sinh trƣởng lợn Mẹo nuôi thịt 56 3.2 Kết mổ khảo sát - đánh giá chất lƣợng thịt lợn Mẹo 59 3.2.1 Kết mổ khảo sát 59 3.2.2 Đánh giá chất lƣợng thịt lợn Mẹo 61 3.2.2.1 Kết phân tích mẫu thịt 61 3.2.2.2 Kết phân tích thành phần acid amine 62 3.3 Kết tách chiết tinh DNA tổng số từ mẫu mô tai lợn 63 3.4 Phân tích đoạn gen H-FABP phƣơng pháp PCR-RFLP 64 3.4.1 Phân tích đoạn gen H-FABP phương pháp PCR 64 3.4.2 Phân tích đoạn gen H-FABP enzyme cắt giới hạn HaeIII 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 69 Kết luận 69 Đề nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 I Tài liệu tiếng Việt 70 II Tài liệu tiếng nƣớc 74 III Tài liệu từ Internet 78 CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên tiếng Anh chữ AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism bp Base paire BF Back fat H-FABP Heart fatty acid binding protein dNTP Deoxynucleoside triphosphate EDTA Ethylene diamine tetracetic acid RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism RNase Ribonuclease SDS Sodium dodecyl sulfate TAG Triacylglycerol TE Tris-EDTA TBE Tris boric acid - EDTA cs tr n ĐVT g kg % Tên tiếng Việt Đa hình chiều dài đoạn DNA đƣợc khuếch đại Cặp bazơ Độ dày mỡ lƣng Protein liên kết acid béo tim Deoxynucleosit triphotphat Axit ethylen diamin tetracetic Đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn Ribonucleaza Sodium dodecyl sunphat Triacylglycerol Đệm TE Đệm TBE Cộng trang Số Đơn vị tính Gam Kilogam Phần trăm DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Vị trí yếu tố phiên mã bám vùng phía trƣớc đầu 5' gen mã hoá H-FABP 26 Bảng 2.1 Đệm dung dịch pha chế 43 Bảng 2.2 Tƣơng quan nồng độ gel agarose kích thƣớc đoạn DNA cần phân tích theo Sambrook cs (1998)[60] 47 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng cắt sản phẩm PCR 51 Bảng 3.1 Khối lƣợng lợn từ sơ sinh đến tuần tuổi (kg/con) 52 Bảng 3.2 Sinh trƣởng tuyệt đối tƣơng đối lợn Mẹo từ sơ sinh đến tuần tuổi 54 Bảng 3.3 Khối lƣợng lợn Mẹo nuôi thịt từ - 12 tháng tuổi (kg/con) 56 Bảng 3.4 Sinh trƣởng tuyệt đối tƣơng đối lợn Mẹo nuôi thịt 57 Bảng 3.5 Năng suất chất lƣợng thân thịt lợn Mẹo theo dõi 59 Bảng 3.6 Thành phần hóa học thịt lợn thí nghiệm (%) 61 Bảng 3.7 Kết phân tích acid amine (% tính theo protein thơ) 62 Bảng 3.8 Tần số allen vị trí RFLP gen H-FABP số giống lợn 66 Bảng 3.9 Các điểm cắt enzyme HaeIII đoạn gen H-FABP 67 Bảng 3.10 Kết phân tích đa hình RFLP kiểu gen H-FABP enzyme HaeIII 68 10 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1: Sơ đồ nguồn gốc lợn nhà Hình 1.2: Vị trí gen mã hố H-FABP nhiễm sắc thể số lợn 25 Hình 1.3: Trình tự aminoacid loại F-ABP 27 Hình 1.4: Cơ chế hoạt động H-FABP tế bào 28 Hình 2.1: Sơ đồ quy trình thí nghiệm 44 Hình 3.1: Đồ thị sinh trƣởng tích luỹ lợn 53 Hình 3.2: Biểu đồ sinh trƣởng tuyệt đối lợn 55 Hình 3.3: Đồ thị sinh trƣởng tƣơng đối lợn 55 Hình 3.4: Biểu đồ sinh trƣởng tuyệt đối lợn Mẹo 58 Hình 3.5: Đồ thị sinh trƣởng tƣơng đối lợn Mẹo 59 Hình 3.6: Ảnh điện di sản phẩm DNA tổng số gel agarose 1% 63 Hình 3.7: Kết hấp thụ tử ngoại mẫu DNA 64 Hình 3.8: Ảnh điện di đồ sản phẩm PCR nhân đoạn gen H-FABP 65 Hình 3.9: Điện di đồ sản phẩm cắt đoạn gen H-FABP enzyme HaeIII 67 11 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu Kết thu đƣợc tiến hành xử lý theo phƣơng pháp thống kê sinh vật học Nguyễn Văn Thiện (2000) EXCEL bao gồm giá trị trung bình mẫu, sai số số trung bình, độ lệch tiêu chuẩn, hệ số biến dị… CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu khả sinh trƣởng đàn lợn Mẹo 3.1.1 Sinh trưởng lợn giai đoạn theo mẹ * Sinh trưởng tích luỹ Sinh trƣởng tích luỹ lợn bú sữa tiêu quan trọng, giai đoạn này, lợn có cƣờng độ sinh trƣởng cao, phù hợp với quy luật sinh trƣởng theo giai đoạn Khả sinh trƣởng lợn nói lên tốc độ phát triển thể, phản ánh trình độ ni dƣỡng, quản lý chăm sóc lợn ảnh hƣởng lớn đến hiệu chăn nuôi lợn thịt Lợn có tốc độ phát triển nhanh, khối lƣợng lớn khả cho thịt sau cao Dựa vào yếu tố này, tiến hành theo dõi sinh trƣởng lợn Mẹo con, thông qua khối lƣợng từ sơ sinh đến tuần tuổi Kết thể bảng 3.1 nhƣ sau: Bảng 3.1 Khối lƣợng lợn từ sơ sinh đến tuần tuổi (kg/con) Tuần tuổi ss n(con) 94 93 92 92 91 91 91 91 91 X  mX 0,48 ± 0,02 1,07 ± 0.03 1,70 ± 0.04 2,36 ± 0.05 2,97 ± 0.06 3,55 ± 0,07 3,89 ± 0,09 4,34 ± 0,10 5,04 ± 0,11 Kết bảng 3.1 cho thấy: Khối lƣợng lợn tăng dần qua tuần tuổi Lúc sơ sinh khối lƣợng lợn 0,49 ± 0.07 đến tuần tuổi đạt 4.34 ± 0,10 kg Lúc 3-4 tuần tuổi, lợn sinh trƣởng chậm lƣợng sữa mẹ giảm nhanh, lợn chƣa biết ăn nên bị thiếu hụt dinh dƣỡng Từ 5- tuần tuổi, sinh trƣởng lợn chậm lại, chƣa hồn tồn thích nghi với thức ăn bên ngoài, lợn hay bị tiêu chảy, tăng khối lƣợng không đáng kể Theo Trần Văn Do (2008)[6], khối lƣợng cai sữa tháng tuổi lợn Vân Pa 3,50 kg Chỉ tiêu giống lợn nội khác cho kết nhƣ sau: lợn Ỉ pha 5,15 kg (Nguyễn Nhƣ Cƣơng cs, 2004)[2]; lợn Mƣờng Khƣơng nuôi thả kết hợp nhốt 4,50 - 5,50 kg, ni nhốt hồn tồn 6,60 - 6,80 kg (Lê Đình Cƣờng, 2004)[3]; lợn Sóc ni thả 3,85 kg nuôi nhốt 4,15 kg (Lê Thị Biên cs, 2006) So với 12 giống lợn nội khác khả sinh trƣởng lợn Mẹo tƣơng đƣơng Nhìn chung, lợn Mẹo có khả sinh trƣởng chậm tập quán chăn nuôi thả rơng, lợn hàng ngày theo mẹ tự tìm kiếm thức ăn tự nhiên nên số lƣợng chất lƣợng thức ăn thu đƣợc Hầu nhƣ lợn không đƣợc ngƣời chăn nuôi cung cấp đầy đủ theo nhu cầu chúng, mà ăn theo thức ăn lợn mẹ Do sở để có hƣớng phát triển cải tạo chất lƣợng đàn lợn theo mẹ, nhằm tối ƣu hoá điều kiện chăn nuôi địa phƣơng cách thiết thực Sinh trƣởng tích luỹ lợn từ sơ sinh đến tuần tuổi đƣợc minh hoạ qua hình 3.1: Khối lượng lợn (kg) Khối lượng lợn ss Tuần tuổi Hình 3.1: Đồ thị sinh trƣởng tích luỹ lợn * Sinh trưởng tuyệt đối tương đối Trên sở số liệu bảng 3.1 sinh trƣởng lợn qua tuần tuổi, chúng tơi tính tốn đƣợc tiêu sinh trƣởng tuyệt đối tƣơng đối, để thể rõ khả sinh trƣởng lợn Mẹo Kết đƣợc trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Sinh trƣởng tuyệt đối tƣơng đối lợn Mẹo từ sơ sinh đến tuần tuổi Giai đoạn sinh trƣởng Sinh trƣởng tuyệt đối Sinh trƣởng tƣơng đối (tuần tuổi) (g/con/ngày) (%) SS - 83,90 75,74 1-2 90,39 45,67 2-3 93,74 32,33 3-4 86,97 22,86 4-5 83,01 17,84 5-6 48,59 9,15 6-7 64,62 10,99 7-8 99,76 14,89 Trung bình 81,37 Sinh trƣởng tuyệt đối lợn giai đoạn ss - tuần tuổi có cƣờng độ sinh trƣởng cao giai đoạn đầu từ ss - tuần tuổi, dao động từ 83,99 đến 93,74g/ngày Từ đến tuần tuổi, mức tăng trọng giảm xuống biến động khoảng 48,59 - 86,96 g/ngày Đến tuần thứ mức tăng trọng lại tăng lên đến 99,76g/ngày Ở tuần đầu phần lớn lợn đƣợc bú sữa mẹ đầy đủ đồng thời sản lƣợng sữa mẹ đạt cao nhất, sau giảm dần, thời gian lợn tập ăn thức ăn theo mẹ Đến tuần thứ lợn thích 13 nghi dần với thức ăn lợn mẹ, bú sữa lợn đƣợc cung cấp thêm thức ăn khác, Nên giai đoạn lợn lại tăng trọng nhanh 100 90 80 (g/con/ngày) 70 60 50 40 30 20 10 ss-1 1-2 2-3 3-4 4-5 5-6 6-7 7-8 Giai đoạn (tuần tuổi) Sinh trưởng ệt đối (g/con/ngày) Hình 3.2: Biểu đồ sinh trƣởng tuyệt đối lợn Sinh trƣởng tƣơng đối lợn giảm dần theo giai đoạn tuần tuổi, hoàn toàn phù hợp với quy luật sinh trƣởng gia súc 80 70 (g/con/ngày) 60 50 40 Sinh trưởng tương đối (% ) 30 20 10 ss-1 1-2 2-3 3-4 4-5 5-6 6-7 7-8 Giai đoạn (tuần tuổi) Hình 3.3: Đồ thị sinh trƣởng tƣơng đối lợn 3.1.2 Sinh trưởng lợn Mẹo nuôi thịt Bảng 3.3 Khối lƣợng lợn Mẹo nuôi thịt từ - 12 tháng tuổi (kg/con) Tháng tuổi n(con) X  mX 10 11 12 90 90 89 85 85 85 85 85 85 85 9,19 ± 0,21 12,56 ± 0,25 16,34 ± 0,23 20,65 ± 0,28 25,35 ± 0,36 30,57 ± 0,42 36,34 ± 0,43 42,76 ± 4,44 49,84 ± 0,44 57,87 ± 0,42 Số liệu bảng 3.3 cho thấy: Khả tăng khối lƣợng lợn thịt tăng dần theo tháng tuổi Lúc tháng tuổi 9,19 ± 0,21 kg, đến 12 tháng tuổi đạt 57,87 ± 0,42 kg Từ tháng tuổi đến tháng tuổi mức tăng trọng chậm, trung bình 3,58kg/tháng; 14 Từ đến tháng mức tăng trọng nhanh hơn, trung bình tăng trọng 5,52kg/tháng Các tháng mức tăng trọng tăng, từ tháng tuổi thứ đến 12 tháng tuổi mức tăng trọng trung bình 7,17kg/ tháng Những tháng đầu giai đoạn nuôi thịt, lợn phát triển dài ra, cao lên, từ tháng tuổi trở lợn bắt đầu béo tăng trọng nhanh Khi so sánh với lợn Sóc lúc 12 tháng tuổi đạt 40,45kg khối lƣợng lợn Mẹo nuôi thịt lứa tuổi cao hơn, nhƣng so với khối lƣợng lợn nuôi thịt Mƣờng Khƣơng, lợn Ba Xuyên 12 tháng tuổi lại thấp lần lƣợt 69,31kg 100,52kg (Theo Lê Viết Ly, Võ Văn Sự, 2001), Dẫn theo Nguyễn Quang Linh cs (2008) [29] Với tập quán chăn nuôi thả rông nuôi nhốt tạm thời qua vụ gieo trồng, bình quân lợn tăng khối lƣợng từ đến kg/tháng, nuôi đến 12 tháng tuổi lợn thịt đạt 55,59 kg/con Do vậy, ngƣời dân thƣờng nuôi kéo dài, đến có việc giết mổ, họ coi tài sản dự trữ cần thiết, khơng tính đến hiệu kinh tế Lợn đƣợc giết mổ thƣờng tuổi từ đến năm Nhìn chung, lợn nuôi thịt hộ dân huyện Pác Nặm có khả tăng khối lƣợng thấp Do ảnh hƣởng tập quán chăn nuôi điều kiện thả rông, lợn thịt đƣợc nuôi rông dài, đƣợc cung cấp thức ăn bữa/ngày, chất lƣợng phần thức ăn thấp, cịn lại lợn tự kiếm thức ăn ngồi tự nhiên Tuy nhiên, khối lƣợng 12 tháng tuổi giết thịt Để thấy rõ biến động khả tăng khối lƣợng chúng tơi minh hoạ đồ thị sinh trƣởng tích luỹ sau: Bảng 3.4 Sinh trƣởng tuyệt đối tƣơng đối lợn Mẹo nuôi thịt Giai đoạn (tháng tuổi) 3-4 4-5 5-6 6-7 7-8 8-9 - 10 10 - 11 11 - 12 Trung bình Sinh trƣởng tuyệt đối (g/con/ngày) 112,33 126,00 143,67 156,67 174,00 192,33 214,00 236,00 267,67 180,30 Sinh trƣởng tƣơng đối (%) 30,99 26,16 23,30 20,43 18,67 17,25 16,23 15,29 14,91 Qua bảng 3.4 cho thấy: Sinh trƣởng tuyệt đối đƣợc tăng dần qua giai đoạn tháng tuổi, tăng từ 112,33 g/ngày tháng tuổi thứ lên 143,67 tháng tuổi thứ 6, đến tháng tuổi thứ tăng trọng tăng lên 174,00 g/ ngày Ở giai đoạn từ đến tháng sinh trƣởng tuyệt đối tăng chậm toàn giai đoạn Sở dĩ nhƣ phần lớn 15 lợn giai đoạn hồn tồn đƣợc thả rơng đƣợc cung cấp thức ăn ít, nên phần ảnh hƣởng đến khả tăng trọng hàng ngày Đến tháng 11 sinh trƣởng lại tăng lên tăng cao đạt 267,67g/ngày Nhìn chung, giai đoạn từ - 12 tháng tuổi, sinh trƣởng tuyệt đối tăng đều, nhƣng sinh trƣởng tuyệt đối lại cao giai đoạn đầu Đây chịu ảnh hƣởng phƣơng thức ni dƣỡng, đa số giai đoạn tháng tuổi ngƣời dân có kế hoạch nhốt lợn để vỗ béo, giết thịt, lợn đƣợc ni nhốt hồn tồn đƣợc ý ni dƣỡng chăm sóc tốt hơn, nên khả sinh trƣởng cao giai đoạn đầu Sinh trƣởng tƣơng đối giảm dần theo thời gian từ 30,99% tháng tuổi thứ 3, giảm xuống 18,67% tháng tuổi thứ 14,91% tháng tuổi 12 Điều hoàn toàn phù hợp với quy luật sinh trƣởng chung gia súc Từ kết cho thấy, tăng trọng cao giai đoạn sau, nhƣng số lƣợng thức ăn cần đáp ứng cao tiêu tốn thức ăn nhiều Vì vậy, nên giết thịt từ 12 tháng tuổi trở 300 (g/con/ngày) 250 200 150 100 50 3-4 4-5 5-6 6-7 7-8 8-9 9-10 10-11 11-12 Tháng tuổi Sinh trưởng tuyệt đối (g/con/ngày) Hình 3.4: Biểu đồ sinh trƣởng tuyệt đối lợn Mẹo % 35 30 Sinh trưởng tương đối (%) 25 20 15 10 3-4 4-5 5-6 6-7 7-8 8-9 9-10 10-11 11-12 Tháng tuổi Hình 3.5: Đồ thị sinh trƣởng tƣơng đối lợn Mẹo 16 3.2 Kết mổ khảo sát - đánh giá chất lƣợng thịt lợn Mẹo 3.2.1 Kết mổ khảo sát Để đánh giá suất chất lƣợng thịt lợn Mẹo, tiến hành mổ khảo sát hộ gia đình theo dõi lợn thí nghiệm xã huyện Pác Nặm Kết thu đƣợc nhƣ sau: Bảng 3.5 Năng suất chất lƣợng thân thịt lợn Mẹo theo dõi TT Chỉ tiêu ĐVT X  mX Khối lƣợng kg 58,80 ± 1.39 Dài thân thịt cm 63,25 ± 0.78 Dày mỡ lƣng cm 3,76 ± 0,47 Diện tích thăn cm 20,05 ± 3,17 Khối lƣợng móc hàm kg 44,81 ± 1,36 Tỷ lệ móc hàm % 76,28 ± 2,04 Khối lƣợng thịt xẻ kg 38,56 ± 1,15 Tỷ lệ thịt xẻ % 65,66 ± 1,90 Khối lƣợng thịt nạc kg 16,06 ± 0,69 10 Tỷ lệ thịt nạc % 35,80 ± 0,81 11 Khối lƣợng mỡ kg 14,83 ± 0,58 12 Tỷ lệ thịt mỡ % 38,56 ± 1,46 13 Khối lƣợng xƣơng kg 5,02 ± 0,50 14 Tỷ lệ xƣơng % 12,70 ± 1,02 15 Khối lƣợng da kg 3,37 ± 0,24 16 Tỷ lệ da % 8,56 ± 0,51 - Tỷ lệ móc hàm Các giống lợn nội thƣờng giống lợn ăn nhiều thức ăn thô, chất lƣợng thức ăn chúng phải ăn nhiều, ống tiêu hoá chiếm phần lớn thể Lợn Mẹo giết thịt 58,80 kg đạt tỷ lệ móc hàm 76,28% Theo Nguyễn Văn Đức cs (2008) [10], tiêu đàn lợn Lũng Pù 68,33% thấp kết đàn lợn Mẹo, nghiên cứu Lê Đình Cƣờng cs (2004) [3] đàn lợn Mƣờng Khƣơng 78,85%; Nguyễn Văn Đức cs (2004) [11] lợn Tạp Ná 80,40% lại cao kết nghiên cứu đàn lợn Mẹo - Tỷ lệ thịt xẻ Tỷ lệ thịt xẻ phụ thuộc lớn vào tỷ lệ móc hàm Đối với lợn Mẹo tỷ lệ thịt xẻ đạt thấp 65,66%, tỷ lệ tƣơng đƣơng số giống lợn nội khác nhƣ lợn Mƣờng Khƣơng 64,86% (Lê Đình Cƣờng cs, 2004)[3]; lợn Lũng Pù 66,02% (Nguyễn Văn Đức cs, 2008)[10] 17 - Độ dày mỡ lƣng Trung bình độ dày mỡ lƣng đo điểm lợn Mẹo 3,76cm So sánh với số giống lợn nội khác nhƣ lợn Lũng Pù tiêu cao 1,53cm (Nguyễn Văn Đức cs, 2008)[10], lợn Mƣờng Khƣơng 3,15cm (Lê Đình Cƣờng cs, 2004)[3] - Diện tích thăn Diện tích thăn có tƣơng quan chặt chẽ với tỷ lệ nạc, giống lợn nội thƣờng có tỷ lệ nạc thấp diện tích thăn nhỏ Đối với đàn lợn Mẹo diện tích thăn đạt 20,05cm2, kết tƣơng đƣơng với lợn Mƣờng Khƣơng, 19,20cm2 (Lê Đình Cƣờng cs, 2004)[3], lợn Lũng Pù tiêu thấp 22,09cm2 (Nguyễn Văn Đức cs, 2008)[10] Nhìn chung, tiêu mổ khảo sát thân thịt lợn Mẹo mức tƣơng đối so với số lợn nội Việt Nam Điều chứng tỏ lợn Mẹo có khả sản xuất tƣơng đối cao, chất lƣợng thịt thơm ngon, nhƣng chủ yếu thiên hƣớng mỡ Tuy nhiên, để nâng cao khả cho thịt lợn Mẹo, cần có biện pháp nghiên cứu thức ăn có số lƣợng chất lƣợng phù hợp theo nhu cầu sinh trƣởng lợn nuôi thịt 3.2.2 Đánh giá chất lượng thịt lợn Mẹo 3.2.2.1 Kết phân tích mẫu thịt Để đánh giá chất lƣợng thịt lợn Mẹo chúng tơi tiến hành phân tích thành phần hóa học thịt lợn Mẹo Viện Khoa học sống Đại học Thái Nguyên Kết phân tích đƣợc trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Thành phần hóa học thịt lợn thí nghiệm (%) Chỉ tiêu Vật chất khơ Protein Lipid Khống tổng số Thịt thăn 26,87 ± 0,63 21,62 ± 1,05 4,15 ± 0,17 1,24 ± 0,07 X  mX Thịt mông 26,77 ± 0,60 20,78 ± 0,71 2,37 ± 0,15 1,12 ± 0,09 Trung bình 26,82 21,20 3,26 1,18 Kết bảng 3.6 cho thấy: Các tiêu thịt thăn thịt mông gần tƣơng đƣơng nhau, Tuy nhiên, hàm lƣợng lipid thịt thăn cao thịt mông, thịt thăn 4,37% thịt mơng 2,37%, trung bình 3,26% So sánh với kết nghiên cứu Trần Thanh Vân, Đinh Thu Hà, 2005 [31] cho thấy: Lợn Mẹo Phù Yên - Sơn La có hàm lƣợng vật chất khơ (27,37%); Protein (21,36%); hàm lƣợng khoáng tổng số (1,1%) tƣơng đƣơng; riêng hàm lƣợng Lipit (5,23%) cao chút 18 Với điều kiện tập quán chăn nuôi nhƣ Pác Nặm, tiêu đạt tỷ lệ gần tƣơng đƣơng với số lợn nội miền núi nhƣ Lợn Mƣờng Khƣơng, Lợn Bảo Lạc, Lợn Bản, 3.2.2.2 Kết phân tích thành phần acid amine Để đánh giá chất lƣợng protein thịt lợn Mẹo chúng tơi tiến hành phân tích acid amine protein thịt lợn Mẹo Kết đƣợc trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết phân tích acid amine (% tính theo protein thơ) Trạng thái mẫu STT Tên acid amin % tính theo Protein ban đầu (%) Aspartic 1,91 9,03 Glutamic 2,58 12,18 Serine 0,86 4,08 Histidine 0,76 3,57 Glycine 1,06 5,02 Threonin 1,16 5,49 Alanine 1,30 6,11 Arginine 1,49 7,02 Tyrosine 1,21 5,70 10 Cystein 0,73 3,43 11 Valine 0,38 1,79 12 Methionine 1,12 5,27 13 Phenylalanine 0,56 2,64 14 Isoleucine 1,48 6,98 15 Leucine 1,18 5,56 16 Lysine 1,19 5,61 17 Proline 0,78 3,70 Chúng tơi phân tích đƣợc 17 acid amine thịt mông thịt thăn lợn Mẹo Kết cho thấy, số acid amine thiết yếu có hàm lƣợng cao nhƣ: Lysine (5,61%), Arginine (7,02%), Phenylalanine (2,64%), Methionine (2,27%), Leucine (5,56%), Isoleucine (6,98%), Histidine (3,57%), Valine (1,79%), Threonine (5,49%) Điều cho thấy thịt lợn Mẹo có chất lƣợng cao, thịt lợn Mẹo đƣợc ƣa chuộng thị trƣờng có giá trị kinh tế cao 3.3 Kết tách chiết tinh DNA tổng số từ mẫu mô tai lợn DNA đƣợc tách chiết từ 10 mẫu mô tai lợn nhƣ trình bày phần vật liệu phƣơng pháp nghiên cứu Sản phẩm DNA tách đƣợc kiểm tra đánh giá điện di gel agarose đo quang phổ Kết điện di sản phẩm DNA tổng số gel agarose 1% đƣợc trình bày hình 3.6 19 Hình 3.6: Ảnh điện di sản phẩm DNA tổng số gel agarose 1% Trên hình 3.6 cho thấy phân tử DNA có phân tử lƣợng lớn, tập trung thành băng vạch rõ nét, chứng tỏ DNA tách chiết không lẫn tạp Một vài sản phẩm chạy thành vệt sáng mờ, DNA bị đứt gãy, Tuy nhiên, không nhiều không ảnh hƣởng đến phản ứng PCR, với cặp mồi đặc hiệu Các mẫu DNA đƣợc định lƣợng xác máy đo quang phổ Kết hấp thụ tử ngoại mẫu DNA đƣợc trình bày hình 3.7 Hình 3.7: Kết hấp thụ tử ngoại mẫu DNA Kết quả: OD260nm/OD280nm = 1,84 Các mẫu có tỷ số OD260nm/OD280nm đạt khoảng 1,68-1,86 đảm bảo độ tinh Nồng độ DNA (µg/ml) đƣợc tính theo cơng thức thành phần phƣơng pháp nghiên cứu, với độ pha loãng 100 lần Sự khác biệt số lƣợng chất lƣợng DNA hệ gen tách chiết từ mẫu giải thích thao tác q trình tách chiết, 20 lƣợng sản phẩm DNA thu đƣợc khơng hồn tồn giống Tuy nhiên, chất lƣợng số lƣợng DNA hệ gen tách chiết phƣơng pháp đạt yêu cầu cho thí nghiệm 3.4 Phân tích đoạn gen H-FABP phƣơng pháp PCR-RFLP 3.4.1 Phân tích đoạn gen H-FABP phương pháp PCR Dựa trình tự gen H-FABP đƣợc cơng bố ngân hàng gen GenBankY15180 để thiết kế cặp mồi dùng cho phản ứng PCR Đoạn gen H-FABP đƣợc nhân lên có kích thƣớc phù hợp với lý thuyết 816bp, vị trí nucleotide 1401 đến vị trí số 2216 iotron thứ Trong trình thao tác, thành phần phản ứng PCR đƣợc đảm bảo hoạt động điều kiện tối ƣu nên đạt kết tốt Kết thúc phản ứng, sản phẩm PCR đƣợc kiểm tra điện di gel agarose 1% Kết điện di đƣợc thể hình 3.8 Hình 3.8: Ảnh điện di đồ sản phẩm PCR nhân đoạn gen H-FABP M: thị DNA 100bp; 1-5: sản phẩm PCR nhân đoạn gen H-FABP Nhìn vào điện di đồ cho ta thấy, sản phẩm PCR xuất tập trung rõ nét thành băng ứng với vị trí có kích thƣớc 816 bp khơng thấy xuất băng phụ, phù hợp với tính tốn lý thuyết Nhƣ vậy, đoạn gen H-FABP đƣợc nhân lên cách đặc hiệu Sản phẩm PCR thu đƣợc có chất lƣợng tốt phục vụ cho việc phân tích đa hình gen H-FABP 3.4.2 Phân tích đoạn gen H-FABP enzyme cắt giới hạn HaeIII Gen H-FABP đƣợc đọc trình tự xác định đa hình độ dài đoạn giới hạn HaeIII, HinfI, MspI Gerbens cs, (1997)[40] Cả vị trí RFLP gen H-FABP đƣợc xác định đa hình hầu hết giống lợn đƣợc nghiên cứu Gerbens cs, (1997)[41] Neijiaang, Rongchang, Bamei, Hanjiang black, Hanzhong White Pang W.J cs, (2006)[54] 21 Bảng tần số allen vị trí RFLP gen H-FABP số giống lợn Gerbens cs, (1998)[41] Bảng 3.8 Tần số allen vị trí RFLP gen H-FABP số giống lợn RFLP MspI HaeIII HinfI Tần số allen Allen DL DU GY HS ME PI WP A 0.98 0.4 0.81 1.0 1.0 0.9 0.7 a 0.02 0.6 0.19 0 0.1 0.3 D 0.32 0.4 0.31 1.0 1.0 0.5 0.1 D 0.68 0.6 0.69 0 0.5 0.9 H 0.7 0.7 0.97 0.67 0.45 0.7 0.9 h 0.3 0.3 0.03 0.33 055 0.3 0.1 Dutch Landrace (DL), Duroc (DU), Great Yorshire (GY), Hamshire (HS), Meishan (ME), Pietrain (PI), Wild Pig (WP) Ở Việt Nam Nguyễn Thu Thuý (2005) [25], đọc trình tự đoạn gen H-FABP số giống lợn Việt Nam tìm đoạn gen H-FABP đƣợc nghiên cứu chứa điểm cắt giới hạn enzyme HaeIII (Trình tự nhận biết GG CC) vị trí 1517, 1533 1811 Trong đó, có điểm đột biến đa hình vị trí 1811, base Guanine (G) bị thay base Cystosine (C) Khi HaeIII cắt đoạn gen H-FABP vị trí tạo đoạn DNA có kích thƣớc 16bp, 117bp, 278bp, 405bp, tƣơng ứng với kiểu allen d Khi xảy đột biến thay base G base C vị trí 1811 làm thay đổi trình tự nhận biết enzyme HaeIII nên đoạn gen H-FABP bị cắt vị trí 1717 1533 Do đó, sản phẩm cắt đoạn gen H-FABP gồm DNA có kích thƣớc phân tử là: 16bp, 117bp, 683bp, tƣơng ứng với kiểu allen D Bảng 3.9 Các điểm cắt enzyme HaeIII đoạn gen H-FABP Allen Vị trí Base Độ dài đoạn cắt (bp) D 1517, 1533 G, G 683/117/16 d 1517, 1533, 1811 G, G, G 405/278/117/16 22 Sơ đồ vị trí cắt enzyme HaeIII đoạn gen H-FABP 117bp Allen D GG CC 117bp Allen d HaeIII 16bp HaeIII 683bp GG CC HaeIII 16bp HaeIII GG CC GG CC 287bp HaeIII GG CC 405bp Chúng tiến hành phản ứng PCR nhân đoạn gen H-FABP nhờ cặp mồi đƣợc thiết kế đặc hiệu, khuôn DNA , chất cần thiết bƣớc miêu tả chi tiết nhƣ phần phƣơng pháp nghiên cứu, sản phẩm PCR đƣợc cắt enzyme HaeIII Kết phân tích đa hình RFLP gen H-FABP với enzyme HaeIII thể hình 3.9 Hình 3.9: Điện di đồ sản phẩm cắt đoạn gen H-FABP enzyme HaeIII M: thị DNA 100BP, 1- sản phẩm PCR; 2-5 sản phẩm cắt đoạn gen H-FABP Trong giếng - kiểu gen dd; giếng 3,4 - kiểu gen Dd; giếng - kiểu gen DD Quan sát điện di đồ thể hình 3.9 thấy rằng, sản phẩm cắt đoạn gen H-FABP enzyme HaeIII gồm đoạn DNA có kích thƣớc khác nhau, phù hợp với tính tốn lý thuyết: Kênh xuất băng có kích thƣớc 816bp sản phẩm PCR gen H-FABP; Kênh có kiểu gen dd, có allen bị cắt enzyme HaeIII thành đoạn có kích thƣớc: 405bp, 287bp, 117bp 16bp Kênh 3,4kiểu gen Dd, allen D d bị cắt enzyme hình thành đoạn: 683bp, 405bp, 287bp, 117bp, 60bp Kênh có kiểu gen DD, bị cắt enzyme hình thành đoạn: 683bp, 117bp 60bp 23 Bảng 3.10 Kết phân tích đa hình RFLP kiểu gen H-FABP enzyme HaeIII Tổng số mẫu Tỷ lệ kiểu gen DD Dd dd mẫu 80 % mẫu % mẫu % 79 99 1 0 Kết phân tích cho thấy xuất kiểu gen DD Dd, DD(99%) cao nhiều kiểu gen Dd(1%) Dựa kết nghiên cứu tƣơng quan kiểu gen H-FABP tỷ lệ mỡ mơ cơng trình đƣợc cơng bố trƣớc thấy lợn mang kiểu gen aa/dd/HH có hàm lƣợng mỡ mơ cao [25] Theo nghiên cứu Pang cs (2006)[54] lợn Duroc, Large White, Landrace, Neijiang, Rongchang, Banmei pig, Hanjiang Black, Hanzhong White số giống lợn địa phƣơng kiểu gen H-FABP có tƣơng quan với hàm lƣợng mỡ (P