Bộ giáo dục và đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội NGUYN KIM KIấN NH HNG CA GONADOTROPIN N HOT NG BUNG TRNG V S THNH THC CA TRNG Bề Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyờn ngnh: CHN NUễI Mó s : 60.62.40 Ngi hng dn khoa hc : 1. TS. BI XUN NGUYấN 2. PGS. TS. NGUYN B MI Hà Nội , 2010 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu do chính tôi thực hiện và một số kết quả cùng cộng tác với các cộng sự khác, các số liệu trong luận văn là trung thực và chính xác. Tôi xin cam ñoan mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn ñầy ñủ, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà nội ngày 10 tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Nguyễn Kim Kiên Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới TS. Bùi Xuân Nguyên, người ñã tận tình giúp ñỡ, tạo ñiều kiện và hướng dẫn trực tiếp ñề tài luận văn của tôi cho tới khi hoàn thành luận văn. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và chân thành tới TS. Nguyễn Thị Ước, người ñã giúp tôi thực hiện các thí nghiệm và tạo ñiều kiện ñể tôi hoàn thành luận văn. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và chân thành tới PGS.TS Nguyễn Bá Mùi người ñã tận tình chỉ bảo và giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn. Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới các Cô, Chú, anh chị em thuộc phòng Công nghệ phôi, Viện Công nghệ sinh học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, ñặc biệt tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới Nguyễn Thị Hồng, Nguyễn Thị Mến, Nguyễn Thị Hiệp, ThS. Nguyễn Văn Hạnh, Nguyễn Thùy Anh, Nguyễn Thị Thơm, Nguyễn Thị Nhung, ñã nhiệt tình giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian làm luận văn. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Bộ môn Sinh lý – Sinh hóa ñộng vật, tập thể cán bộ, giáo viên khoa Chăn nuôi và Nuôi trồng thủy sản trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội và các anh em trong phòng Kinh Doanh công ty cổ phần GREENFEED Việt Nam. Cuối cùng tôi xin chân thành cảm ơn gia ñình ñã ñộng viên, ủng hộ, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn Thạc sỹ này. Xin chân thành cảm ơn! Hà nội, ngày 10 tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Nguyễn Kim Kiên Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii MỤC LỤC Lời cam ñoan………………………………………………………………….i Lời cảm ơn……………………………………………………………………ii Mục lục………………………………………………………………………iii Danh mục bảng………………………………………………………………vi Danh mục hình…………………………………………………………… viii PHẦN I. MỞ ðẦU 71 1.1 ðặt vấn ñề 1 1.2. Mục tiêu của ñề tài 2 1.3. Ý nghĩa của ñề tài 2 Phần II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Trứng và sự thành thục tế bào trứng 3 2.1.1 Nguồn gốc, các giai ñoạn hình thành, phát triển nang trứng và tế bào trứng 3 2.1.2 Sự thành thục tế bào trứng 9 2.2. Ảnh hưởng của gonadotropin ñến sự phát triển và thành thục trứng 12 2.2.1. Hệ thống thần kinh thể dịch ñiều khiển sự phát triển và thành thục trứng 12 2.2.2. ðặc ñiểm chu kì phát triển và thành thục trứng bò 16 2.2.3. Sản xuất gonadotropin (phân lập, tổng hợp) và ñiều khiển in vivo ñộng dục, rụng trứng 20 2.3. Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến sự thành thục của trứng in vitro28 2.4 Kết quả thụ tinh từ trứng bò ñược nuôi cấy in vitro 34 2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng ñến sự thành thục của trứng bò nuôi in vitro 35 2.6 Kết quả nuôi thành thục trứng bò trong nước và quốc tế 39 2.6.1 Kết quả nuôi thành thục trứng bò ở nước ngoài 39 2.6.2 Kết quả nuôi thành thục trứng bò trong nước 40 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv Phần III ðỐI TƯỢNG - NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 3.1. ðối tượng, thời gian và ñịa ñiểm nghiên cứu 42 3.1.1. ðối tượng nghiên cứu 42 3.1.2. Thời gian nghiên cứu 42 3.1.3. ðịa ñiểm nghiên cứu 42 3.2. Nội dung nghiên cứu 42 3.2.1. Khảo sát khả năng khai thác trứng phục vụ nuôi thành thục in vitro ở bò 42 3.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của Gonadotropin in vitro ñến hoạt ñộng buồng trứng bò 42 3.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của gonadotropin ñến sự thành thục trứng bò 43 3.2.4. ðánh giá ảnh hưởng của Gonadotropin ñến hình thái, chất lượng của buồng trứng, nang, trứng bò thành thục in vitro 43 3.3. Phương pháp nghiên cứu 43 3.3.1 Phương pháp tiêm hormone trên bò sống 43 3.3.2. Phương pháp thu, bảo quản và vận chuyển buồng trứng bò 43 3.3.3. Chuẩn bị môi trường thu và rửa buồng trứng bò 44 3.3.4. Phân loại nang bề mặt buồng trứng bò 44 3.3.5. Phương pháp thu trứng từ các nang trên bề mặt buồng trứng bò 44 3.3.6. Phân loại trứng bò theo chất lượng 45 3.3.7. Phương pháp nuôi thành thục trứng bò trong ống nghiệm 45 3.3.8. Phương pháp nhuộm nhân tế bào trứng bò 46 3.3.9. Các chỉ tiêu theo dõi 47 3.3.10. Sơ ñồ thí nghiệm 48 3.3.11. Phương pháp xử lý số liệu 48 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 4.1. Hoạt ñộng buồng trứng, nang, trứng bò khi chưa có tác ñộng của gonadotropin ngoại lai 49 4.1.1 Hoạt ñộng buồng trứng bò trên chỉ tiêu các chiều ño 49 4.1.2 Hoạt ñộng buồng trứng bò trên chỉ tiêu khối lượng 51 4.1.3 Hoạt ñộng nang trứng bò trên chỉ tiêu số lượng và mức phân bố nang 52 4.1.4 Hoạt ñộng của trứng bò trên chỉ tiêu chất lượng 55 4.2. Ảnh hưởng nồng ñộ gonadotropin ñến hoạt ñộng buồng trứng, nang trứng và sự thành thục của trứng bò 57 4.2.1 Ảnh hưởng nồng ñộ gonadotropin ñến chiều ño buồng trứng bò 58 4.2.2 Ảnh hưởng nồng ñộ gonadotropin ñến khối lượng buồng trứng bò59 4.2.3 Ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin ñến trạng thái nang trứng bò 61 4.2.4 Ảnh hưởng của nồng ñộ Gonadotropin ñến chất lượng trứng bò 62 4.2.5 Ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin ñến tỷ lệ thành thục trứng bò 64 4.3. Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến hoạt ñộng buồng trứng, nang trứng và sự thành thục của trứng bò in vitro 66 4.3.1 So sánh ảnh hưởng của Gonadotropin ñến các chiều ño của buồng trứng bò 66 4.3.2 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến khối lượng buồng trứng bò 67 4.3.3 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến biến ñộng về số lượng và kích thước trứng bò 69 4.3.4 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến chất lượng trứng bò in vitro 71 4.3.5 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ trứng bò thành thục in vitro 73 4.3.6 ðánh giá yếu tố Gonadotropin tác ñộng ñến sự thành thục trứng bò in vitro 74 4.3.7 ðánh giá ảnh hưởng của Gonadotropin ngoại lai ñến trạng thái phát triển, thành thục của buồng trứng, nang, trứng bò thành thục in vitro 75 V KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 81 5.1 KẾT LUẬN 81 5.2 ðỀ NGHỊ 82 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thời gian chu kỳ ñộng dục ở một số ñộng vật nhai lại 20 Bảng 2.2. Ảnh hưởng của FSH tác ñộng ñến kích thước, số lượng nang 31 Bảng 2.3. Ảnh hưởng của cách xử lý ñến nang trứng, noãn bào ñã thu 32 Bảng 2.4. Ảnh hưởng của cách xử lý ñến loại noãn bào thu ñược 33 Bảng 2.5. Ảnh hưởng của cách xử lý ñến sản xuất phôi in vitro ở ngày 7 sau khi thụ tinh (trung bình ± SEM cho mỗi bê trong một tuần) 33 Bảng 2.6. Một số ñộng vật có vú ra ñời lần ñầu tiên do IVF 34 Bảng 2.7. Ảnh hưởng của nhiệt ñộ nước muối sinh lý sử dụng ñể vận chuyển buồng trứng ñến sự phát triển thành phôi nang sau IVM và IVF 35 Bảng 2.8. Ảnh hưởng của thời gian và nồng ñộ xử lý BLI tới sự thành thục in vitro nhân tế bào trứng bò 36 Bảng 2.9. Ảnh hưởng của thời gian nuôi chín tế bào tới tỷ lệ phát triển thành phôi nang 38 Bảng 2.10 Ảnh hưởng mùa vụ ñến khả năng thành thục trứng bò Vàng 38 Bảng 2.11.Các giai ñoạn phát triển nhân tế bào trứng 39 Bảng 4.1 Các chiều ño buồng trứng bò bình thường 49 Bảng 4.2 Khối lượng buồng trứng bò bình thường 51 Bảng 4.3 Số lượng và mức phân bố nang của buồng trứng bò bình thường .54 Bảng 4.4. Chất lượng trứng bò bình thường 57 Bảng 4.5 Ảnh hưởng của gonadotropin ñến các chiều ño của buồng trứng bò 59 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin ñến khối lượng buồng trứng bò 60 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin ñến trạng thái nang trứng bò 62 Bảng 4. 8 Ảnh hưởng của nồng ñộ Gonadotropin khác nhau lên phân loại chất lượng trứng bò tiêm 63 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii Bảng 4. 9 Ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin khác nhau ñến tỷ lệ thành thục in vitro của trứng bò 65 Bảng 4.10 Ảnh hưởng của Gonadotropin lên hoạt ñộng của buồng trứng bò 66 Bảng 4.11 Ảnh hưởng của Gonadotropin lên khối lượng buồng trứng bò 68 Bảng 4.12 Ảnh hưởng của Gonadotropin lên trạng thái nang trứng bò 70 Bảng 4.13 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến chất lượng trứng bò 72 Bảng 4.14 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ thành thục trứng bò 73 Bảng 4.15 Bảng tổng hợp ñánh giá ảnh hưởng của Gonadotropin ñến sự thành thục của trứng bò 74 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp viii DANH MỤC BIỂU ðỒ VÀ HÌNH ẢNH Hình 2.1: Vị chí, cấu tạo của buồng trứng trong cơ thể bò 3 Hình 2.2: Giải phẫu chi tiết buồng trứng và các nang trứng tồn tại trên cùng một thời ñiểm 3 Hình 2.3: Các giai ñoạn phát triển của nang trứng 6 Hình 2.4: Hình thái cấu tạo một nang trứng 6 Hình 2.5. Cấu tạo tế bào trứng 7 Hình 2.6: Hình dạng và kích thước tế bào trứng 9 Hình 2.7 Ảnh trứng bò ở các giai ñoạn, thành thục khi xuất hiện cực cầu1 12 Hình 2.8: Sơ ñồ mối liên hệ ñiều khiển hoạt ñộng hệ nội tiết 14 Hình 2.9: Mô hình cấu tạo hóa học của Gonadotropin – Raleasing hormone 15 Hình 2.10: Chu kỳ ñộng dục và sự thay ñổi của sóng nang (3 sóng nang) 16 Hình 2.11: Sự thay ñổi kích thước của nang trứng lớn nhất và nang trứng lớn thứ hai cũng như thể vàng trong chu kỳ ñộng dục của bò 3 sóng nang 17 Hình 2.12. Sự thay ñổi kích thước của nang trứng lớn nhất và nang trứng lớn thứ hai cũng như thể vàng trong chu kỳ ñộng dục của bò 2 sóng nang 17 Hình 2.13: Những biến ñổi chính trong chu kỳ tính của ñộng vật ñơn thai 18 Hình 2.14: Tóm tắt kiểm soát hormone của chu kỳ ñộng dục 21 Hình 2.15: Những thay ñổi của nồng ñộ hormone huyết thanh trong chu kỳ ñộng dục ở bò 22 Hình 2.16: Sự kiểm soát chọn lọc nang trứng của Gonadotropin và một số hormone khác 25 Hình 2.17: Công thức cấu tạo của Prostaglandin F2-alpha (PGF2a) 27 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ix Biểu ñồ 4.1 Kích thước trung bình ba chiều ño buồng trứng mùa ðông xuân và Hè thu 50 Biểu ñồ 4.2 Khối lượng trung bình của buồng trứng bò 52 Biểu ñồ 4.3 Tỷ lệ số nang ở hai mùa ðông xuân, Hè thu 55 Biểu ñồ 4.4 Tỷ lệ loại trứng bò ở hai mùa ðông xuân, Hè thu 57 Biểu ñồ 4.5 So sánh trung bình các chiều ño của buồng trứng bò tiêm gonadotropin 59 Biểu ñồ 4.6 So sánh ảnh hưởng nồng ñộ Gonadotropin ñến khối lượng buồng trứng bò 60 Biều ñồ 4.7 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ các loại nang trứng bò 62 Biểu ñồ 4. 8 So sánh ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ loại trứng 64 Biểu ñồ 4. 9 So sánh ảnh hưởng Gonadotropin ñến tỷ lệ trứng bò thành thục 65 Biểu ñồ 4.10 So sánh ảnh hưởng Gonadotropin ñến chiều ño buồng trứng 67 Biểu ñồ 4.11 So sánh ảnh hưởng của Gonadotropin ñến khối lượng buồng trứng bò 68 Biểu ñồ 4.12 So sánh ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ phân loại nang trứng bò 71 Biểu ñồ 4.13 So sánh ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ trứng bò 72 Biểu ñồ 4.14 Ảnh hưởng của Gonadotropin ñến tỷ lệ thành thục trứng bò 74 Biểu ñồ 4.15 ðánh giá chung về tỷ lệ thành thục trứng bò thí nghiệm 75 Hình 4.16 Buồng trứng bò ở ba lô thí nghiệm 76 Hình 4.17 Hình thái loại trứng bò ở ba lô thí nghiệm 77 Hình 4.18 hình thái trứng bò ở 0 giờ 78 Hình 4.19 Trứng bò sau 24 giờ nuôi cấy 79 Hình thái nhân trứng bò sau 24 giờ nuôi cấy 79 Hình 4.20 Nhân trứng bò sau 24 giờ nuôi cấy 80 [...]... ho t ñ ng bu ng tr ng và s thành th c c a tr ng bò 1.2 M c tiêu c a ñ tài - ðánh giá, phân tích tác ñ ng c a hormone gonadotropin ngo i lai trên bò ñ n ho t ñ ng c a bu ng tr ng, s phát tri n và thành th c c a qu n th nang, ch t lư ng t bào tr ng, kh năng thành th c c a tr ng bò in vitro - ðánh giá và ñưa ra ñư c k t lu n v li u lư ng Gonadotropin ngo i lai phù h p cho tr ng bò thành th c in vitro ñ... vàng là th c ng ñư c hình thành ngay sau ñó b i m t h n h p t bào v và t bào h t Có hai lo i t bào ñư c tìm th y trong th vàng Lo i t bào th vàng nh có ngu n g c t t bào v và lo i t bào l n có ngu n g c t t bào h t Trong th vàng có nhi u m ch máu, ñó là ngu n Progesteron và các Progestin khác c a bu ng tr ng Khi th vàng thoái hoá, nó không còn phân ti t Progesteron n a Nó b t ñ u thay ñ i màu s c và. .. qua vùng trong su t (EhenWald và Cs,1988)[36] Hình 2.7 nh tr ng bò các giai ño n, thành th c khi xu t hi n c c c u1 D n theo Hà Văn Huy, 2009[6] 2.2 nh hư ng c a gonadotropin ñ n s phát tri n và thành th c tr ng 2.2.1 H th ng th n kinh th d ch ñi u khi n s phát tri n và thành th c tr ng Ho t ñ ng sinh lý sinh s n c a gia súc cái ch u s ñi u ti t c a h th ng th n kinh và th d ch (Hypothalamus - Tuy... l n và th n kinh, hilus ch a ñ ng m ch xo n c l n và các hilus ho c bu ng tr ng t bào Leydig Kích c và các chi u ño bu ng tr ng bò có s sai khác các gi ng khác nhau: Kích thư c trung bình c a bu ng tr ng là 35mm x 25mm x 15mm (Bearden and Fuquay, 2000)[22] bò Lai Sind, kích thư c 3 chi u dài x r ng x sâu là 23,45mm x 16,50mm x 11,55mm (ð Kim Tuyên, 1995)[11] S hình thành và quá trình phát tri n, thành. .. ng có ñư ng kính t 60 t i 20mcm 1mm ñ n 2mm cá và ch, ñ ng v t có vú và c u gai, t bò sát và chim, tr ng có th có ñư ng kính t i vài centimet và cân n ng t i hàng kilogam Hình 2.6: Hình d ng và kích thư c t bào tr ng Ngu n: http://www.mercksource.com/pp/us/cns/cns_hl_dorlands_split.jspjpg=/ppdoc s/us/co mmon/dorlands/dorland/six/000074939.htm[97] 2.1.2 S thành th c t bào tr ng Sau khi ñ t t i kích thư... phát tri n M t s noãn bào có kh năng phát tri n ñã thành th c hoàn toàn và ñư c gi i phóng vào ñư ng sinh d c ñ th tinh và phát tri n thành bê, h u h t noãn bào còn l i ñã phát tri n và thoái hoá Vì th s noãn bào có kh năng phát tri n thu ñư c t bu ng tr ng ñ t o bê l n hơn r t nhi u so v i th c t nh n th y Nang tr ng thư ng xuyên tr ng thái phát tri n và thành th c, sau giai ño n nang sơ c p là s tăng... hai Gonadotropin ñư c t o ra dư i s ki m soát c a gonadotropin - releasing hormone (GnRH) t nhân arcuate và khu v c Preoptic c a vùng dư i ñ i Các tuy n sinh d c (tinh hoàn và bu ng tr ng) là nh ng cơ quan m c tiêu chính c a LH và FSH Các gonadotropin nh hư ng ñ n nhi u lo i t bào và nhi u ho t ñ ng g i ra t các cơ quan m c tiêu Như m t s t ng quát ñơn gi n, LH kích thích Leydig t bào c a tinh hoàn và. .. c dương tính và âm tính lên vi c phân ti t hormone sinh d c N ng ñ progesterone cao có tác d ng c ch LH và FSH, ñó là tác ñ ng ngư c âm tính và nó cũng phong b tác ñ ng ngư c c a oestradiol Ngư c l i, n ng ñ progesterone th p có tác ñ ng ngư c dương tính ñ n vi c phân ti t c a FSH và LH cu i pha th vàng, n u gia súc không có ch a thì oestrogen và progesterone gi m lúc th vàng thoái hoá và k t thúc tác... ch n l c, tr i và thoái hoá ñ ng th i v i vi c tăng hay gi m FSH (Sunderland và Cs, 1994)[87] Khi không có m t c a gonadotropin thì không có nang tr ng nào ñư c huy ñ ng (McNeilly và Cs, 1986)[67], nhưng s huy ñ ng, ch n l c và tính tr i có th xu t hi n nh ng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ nông nghi p 23 gia súc ñư c s lý b ng nh ng gonadotropin ngo i lai (Fry và Cs, 1988)[37]... bào v và các m ch máu ñư c hình thành khi nang tr ng l n lên và di chuy n vào mi n tu Màng m m tách l p t bào v bên trong kh i l p t bào trong cùng - l p t bào h t và ngăn c n s di chuy n c a h th ng m ch máu vào các t bào này Kh i Cumulus Oophorus - t bào h t n m bên kia c a xoang Noãn bào có kh năng phát tri n n m trong kh i t bào Cumulus v i các t bào h t bao quanh Nh ng t bào h t bao quanh và ti