1 Mục Lục Danh mục các chữ viết tắt i Danh mục các bảng ii Danh mục các hình iii MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2 1.1. Giới thiệu về chất kháng sinh 2 1.1.1. Chất kháng sinh (CKS) 2 1.1.2. Sơ lược lịch sử nghiên cứu chất kháng sinh 3 1.2. Cơ chế tác động của CKS 5 1.2.1.Ức chế tổng hợp thành tế bào. 6 1.2.2. Ức chế tổng hợp protein 6 1.2.3. Phá hủy màng sinh chất. 6 1.2.4. Ức chế tổng hợp AND 7 1.2.5. Ức chế cạnh tranh 7 1.3. Xạ khuẩn và sự hình thành CKS từ xạ khuẩn. 7 1.3.1. Định nghĩa xạ khuẩn 7 1.3.2. Một số đặc điểm chung của xạ khuẩn 7 1.3.3. Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS từ tự nhiên 10 1.3.4. Quá trình hình thành CKS của xạ khuẩn 11 1.3.4.1. Các pha sinh trưởng của vi sinh vật 11 1.3.4.2.Các con đường tổng hợp chất kháng sinh 11 1.4. Phân loại xạ khuẩn 12 1.4.1. Phân loại theo phương pháp truyền thống 12 1.4.2. Phân loại theo phương pháp hiện đại 13 1.5. Một số bệnh do nấm gây ra đối với thực vật 15 1.5.1. Bệnh đạo ôn 15 1.5.2. Bệnh thối rễ 15 1.5.3. Bệnh khô vằn 16 1.5.4. Bệnh mốc sương ở khoai tây và cà chua 16 2 1.6. Sử dụng CKS và xạ khuẩn trong bảo vệ thực vật 16 1.6.1. Sử dụng xạ khuẩn chống nấm gây bệnh thực vật 16 1.6.2. Ứng dụng của các CKS trong bảo vệ thực vật 17 CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 2.1. Nguyên liệu 19 2.1.1. Chủng giống 19 2.1.2. Hóa chất và dụng cụ 19 2.1.2.1. Hóa chất 19 2.1.2.2. Dụng cụ 20 2.2. Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1. Phương pháp phân lập và tuyển chọn 20 2.2.1.1. Phân lập xạ khuẩn theo phương pháp Vinograski 20 2.2.1.2. Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh (HTKS) 20 2.2.1.3. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS 21 2.2.2. Bảo quản giống 21 2.2.3. Phương pháp xác định trọng lượng sinh khối khô 21 2.2.4. Nghiên cứu đặc điểm sinh học và phân loại 21 2.2.4.1. Đặc điểm nuôi cấy 21 2.2.4.2. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 21 2.2.4.3. Đặc điểm hình thái 22 2.2.5. Phân loại các chủng xạ khuẩn bằng phương pháp xác định trình tự AND 22 2.2.5.1. Tách chiết ADN từ xạ khuẩn 22 2.2.5.2. Phản ứng khuếch đại ADN 23 2.2.5.3. Phản ứng khuếch đại ADN cho giải trình tự 24 2.2.5.4. Xây dựng cây phát sinh chủng loại 24 2.2.6. Xác định các yếu tố ảnh hưởng tới sinh tổng hợp CKS 24 2.2.6.1. Ảnh hưởng của pH 24 2.2.5.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ 25 2.2.5.3. Ảnh hưởng của thời gian 25 3 2.2.5.4. Ảnh hưởng của nguồn cacbon 25 2.2.6.5. Ảnh hưởng của nguồn nitơ 25 2.2.7. Tách chiết chất kháng sinh từ dịch lên men bằng dung môi hữu cơ 25 2.2.8. Tìm hiểu khả năng ứng dụng của chủng xạ khuẩn XK5 26 2.2.8.1. Ảnh hưởng của dịch nuôi cấy của chủng XK5 đến khả năng nảy mầm của hạt 26 2.2.8.2. Ảnh hưởng của dịch nuôi cấy đến khả năng nảy mầm, sinh trưởng và phát triển của cây 26 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1. Phân lập và tuyển chọn 27 3.1.1. Xác định số lượng xạ khuẩn sinh CKS phân lập được 27 3.1.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS chống nấm có hoạt tính cao 29 3.1.3. Hoạt tính enzyme của 10 chủng xạ khuẩn. 30 3.1.4. Hoạt tính kháng sinh của chủng XK5 32 3.2. Đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại chủng xạ khuẩn XK5 33 3.2.1 Đặc điểm nuôi cấy 33 3.2.2. Đặc điểm hình thái 34 3.2.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 34 3.3. Xác định trình tự gen mã hóa ARNr 16S 35 3.4. Phân loại 37 3.5. Khả năng tổng hợp CKS của chủng XK5 39 3.5.1. Ảnh hưởng của pH ban đầu 39 3.5.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ 40 3.5.3. Ảnh hưởng của thời gian 41 3.5.4. Ảnh hưởng của nguồn cacbon khác nhau lên sinh tổng hợp CKS của chủng xạ khuẩn XK5 42 3.5.5. Ảnh hưởng của nguồn nitơ khác nhau lên sinh tổng hợp CKS của chủng xạ khuẩn XK5 43 3.5. Tách chiết CKS bằng dung môi hữu cơ 45 4 3.5.1. Tách chiết CKS 45 3.5.2. Lựa chọn dung môi thích hợp để tách chiết CKS 45 3.6. Tìm hiểu khả năng ứng dụng của CKS XK5 46 3.6.1. Ảnh hưởng của CKS từ dịch nuôi đến khả năng nảy mầm của hạt 46 3.6.2. Ảnh hưởng của CKS XK5 đến khả năng sinh trưởng của cây. 47 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 48 I KẾT LUẬN : 48 II. ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 1 MỞ ĐẦU Hàng năm, trên thế giới các bệnh ở cây trồng đã gây ra những tổn thất to lớn đối với nền sản xuất nông nghiệp. Theo thống kê của Tổ chức Nông Lương Liên Hiệp Quốc (FAO), thiệt hại trong nông nghiệp do các bệnh vi nấm gây ra tới 537,3 triệu tấn các loại nông sản, chiếm khoảng 11,6% tổng sản lượng nông nghiệp thế giới. Trong đó chiếm 83% là bệnh do vi nấm gây ra, và chủ yếu là các bệnh như: đạo ôn, khô vằn, thối cổ rễ, mốc sương…[7]. Việc sử dụng các hóa chất trong bảo vệ thực vật (BVTV) nhằm tăng sản lượng nông nghiệp từ lâu đã phổ biến ở Việt Nam với các chủng loại thuốc bảo vệ thực vật rất đa dạng. Mỗi năm Việt Nam sử dụng khoảng 25.000 tấn thuốc hóa học diệt sâu bệnh. Theo thống kê năm 2004, ở Việt Nam có tới 436 loại hóa chất với 1231 tên thương phẩm [7]. Tuy nhiên, mặt trái của việc sử dụng các hóa chất bảo vệ thực vật này là nỗi lo của toàn xã hội. Các chất này thường rất độc và khi tồn dư trong đất, nước và nông sản sẽ ảnh hưởng nghiêm trọng tới sức khỏe con người, gây ô nhiễm môi trường và làm mất cân bằng sinh thái. Chính vì vậy việc tìm hiểu các hợp chất tự nhiên, có hoạt tính sinh học, dễ phân giải nên không để lại dư lượng trong đất làm ô nhiễm môi trường, vừa có khả năng chữa bệnh cho cây trồng là mục tiêu phấn đấu của một nền nông nghiệp sạch và bền vững. Chất kháng sinh do vi sinh vật sinh ra là một chất như vậy. Xuất phát từ mục tiêu trên, chúng tôi tiến hành: “Phân lập và tuyển chọn một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật từ các mẫu đất ở Khánh Hòa”. Đồng thời, tiến hành nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng sinh tổng hợp chất kháng sinh của các chủng xạ khuẩn đã được tuyển chọn, nghiên cứu ảnh hưởng của chất kháng sinh đối với sự nảy mầm của một số loại hạt và sự phát triển của cây. Bước đầu tiến hành lựa chọn dung môi thích hợp để tách chiết phục vụ cho những nghiên cứu về khảo sát cấu trúc và bản chất hóa học của các chất kháng sinh đó. 2 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Giới thiệu về chất kháng sinh 1.1.1. Chất kháng sinh (CKS) Chất kháng sinh (antibiotic) là bất kỳ sản phẩm vi sinh nào mà ngay ở nồng độ thấp (µg/ml) cũng có khả năng ức chế hoặc tiêu diệt các VSV khác (vi khuẩn, nấm men, nấm mốc ) một cách chọn lọc [1], [7], [22]. CKS là một trong các sản phẩm trao đổi chất bậc hai quan trọng nhất, là nhóm hợp chất thiên nhiên đa dạng về thành phần hóa học. Chúng có thể là một chất kiềm, axit, trung tính, dễ bay hơi hay một polypeptit, sản phẩm này có thể tiết ra ngoài môi trường sống hay tích luỹ trong tế bào. Trước đây việc sử dụng CKS trong điều trị các bệnh nhiễm trùng thường có nguồn gốc từ VSV (như vi khuẩn, nấm, xạ khuẩn). Những năm gần đây với những tiến bộ về khoa học kỹ thuật, nhiều CKS đã được tạo ra theo con đường bán tổng hợp (ampixillin) hoặc tổng hợp mới hoàn toàn (chloramphenicol) [3], [26]. Bảng 1.1. Tỷ lệ các loài có khả năng sinh CKS [11] Sinh vật sinh CKS Số lượng loài Tỷ lệ (%) Vi khuẩn 950 9 Xạ khuẩn 4.600 43 Nấm 1.600 15 Tổng số VSV 7.150 67 Địa y 100 1 Tảo 250 2 Thực vật bậc cao 2.500 23 Động vật 700 7 Tổng số SV bậc cao 3.550 33 Tổng số 10.700 100 Việc nghiên cứu sử dụng có hiệu quả CKS đã mang lại hiệu quả lớn lao trong lĩnh vực y học, hơn thế nữa nó còn có thể ứng dụng trong cả lĩnh vực bảo vệ thực vật nhằm ức chế tiêu diệt các VSV khác gây bệnh cho cây trồng. CKS có thể do nhiều VSV tạo ra nhưng chủ yếu vẫn là xạ khuẩn, vi khuẩn, nấm sợi. 3 Cách đây 1/4 thế kỷ, số lượng CKS biết đến chỉ có vài trăm loại nhưng cho đến năm 1993 số lượng này đã lên đến 6.000, trong đó 67% do xạ khuẩn sinh ra (90% có nguồn gốc từ chi Streptomyces), 13% từ nấm, 12% từ vi khuẩn, 1% tách được từ địa y. Song, con số này đến nay đã tăng lên trên 10.000 trong đó 7000 CKS có nguồn gốc từ VSV. Đầu thập kỷ này đã phát hiện thêm 2000 các sản phẩm trao đổi chất có hoạt tính sinh học được tách chiết từ VSV. Ước tính số lượng thực sự của các chất này phải lên đến trên 15.000 chất [20], [30]. 1.1.2. Sơ lược lịch sử nghiên cứu chất kháng sinh Vào mùa thu năm 1928, tại St Mary’s Hospital London, Alexander Fleming - một nhà vi sinh vật học trở lại phòng thí nghiệm sau thời gian nghỉ hè. Quan sát các hộp nuôi cấy vi sinh cũ còn sót lại trên bàn, ông phát hiện một hộp cấy tụ cầu Staphylococcus bị nhiễm vi nấm Penicillium, và lấy làm ngạc nhiên vì nấm đã ức chế sự phát triển của tụ cầu. Fleming nhận thức ngay hiện tượng mới lạ này và sau một loạt thử nghiệm đã thấy nấm Penicillium ức chế sự phát triển của nhiều vi nấm gây bệnh như: - Liên cầu khuẩn Streptococcus (thường trú ở họng). - Phế cầu khuẩn Diplococcus pneumoniae gây viêm phế quản, viêm phổi, viêm tai mũi họng. - Vi khuẩn bạch hầu Corynebacterium diphteriae. - Cả xoắn khuẩn giang mai Treponema pallidum lây lan qua đường tình dục. Ông đặt tên hoạt chất được chiết từ nấm là Penicillin. Nhưng sau đó, công trình của Fleming đã bị lãng quên. Cho đến chiến tranh thế giới thứ hai, do sự nỗ lực hợp tác của nhiều nhà khoa học Anh- Mỹ, đứng đầu là Abraham, Chain, Florey thí nghiệm của Fleming đã được lặp lại, đồng thời đã tiến hành chiết rút thành công và khẳng định giá trị to lớn của Penicillin “loại thuốc thần kỳ” này đã mở ra một kỷ nguyên mới - kỷ nguyên kháng sinh trong lịch sử y học của loài người. 4 Hình 1.1. Bức ảnh lịch sử này được A.Fleming chụp vào năm 1928 Vào hè 1942, ở Hoa Kỳ, 129 bệnh nhân bị nhiễm khuẩn lậu cầu (Neisseria gonorrhoeae) đã được chữa lành khi được điều trị với penicillin. Từ đây, penicillin thực sự trở thành một dược phẩm. Năm 1945, Alexander Fleming, E.Chain và H.W.Florey đã được nhận giải thưởng Nobel vì sự khám phá ra giá trị to lớn của penicillin mở ra một kỷ nguyên mới trong y học – kỷ nguyên kháng sinh. Streptomycin - dược phẩm kháng lao được tìm ra vào năm 1943. Những năm 1945-1965, được coi là thời kì hoàng kim của việc nghiên cứu chất kháng sinh. Hàng loạt chất kháng sinh được phát hiện trong giai đoạn này có ứng dụng trong y học như: chloramphenicol (Erhlich,1947) chỉ định cho bệnh thương hàn; tetracyclin cho bệnh nhiễm trùng tai, mũi, họng, phổi, phế quản, vancomycin, gentamicin… Các kháng sinh ngăn chặn được các bệnh bạch cầu, giang mai, bệnh sốt phát ban và đã cứu sống được cả triệu người. Penicillin được coi là thuốc thần kỳ chữa được rất nhiều bệnh. Giờ đây, nhiều vi khuẩn đã kháng với penicillin, do thuốc bị lạm dụng, sử dụng quá mức hay không đúng yêu cầu, một số vi khuẩn không còn nhạy cảm với 8 hoặc 10 kháng sinh khác nhau. Bệnh lao, một thời bị streptomycin khống chế, nay đã trỗi dậy với đại dịch AIDS và giết hại hàng năm cả 3 triệu người. Hiện nay, Vùng ức chế sự sinh trưởng của vi khuẩn Khuẩn lạc tụ cầu vàng S.aureus Khuẩn lạc Penicillium 5 muốn tránh được tình trạng kháng thuốc, cần phối hợp 2 hay 3 kháng sinh hoặc phải có liên tục những kháng sinh mới. Tiếc thay, từ 1970, sáng kiến lụi dần. Ngày 15.6.2005, một kháng sinh mới- Tygacil – của công ty Wyeth, sản xuất từ sự lên men vi khuẩn được chào đón và hoan nghênh nhiệt liệt. Tygacil được chỉ định cho các bệnh nhiễm trong khoang bụng và nhiễm trùng da. Một trong những nguyên nhân kháng thuốc là sử dụng ồ ạt kháng sinh trong chăn nuôi để chữa bệnh và bổ sung vào thức ăn tăng trưởng gia súc nên năm 1974, châu Âu đã cấm sử dụng penicillin, tetracyclin, và nhiều kháng sinh khác để nuôi thúc súc vật. Sự xuất hiện ngày càng nhiều các vi khuẩn đa kháng thuốc và sự thiếu hụt các nhóm kháng sinh mới làm cho chúng ta đang phải đối mặt với thời kì “ hậu kháng sinh”,[16]. Chính vì thế nhiệm vụ đặt ra của ngành công nghệ sản xuất kháng sinh là: một mặt cải biến các chất kháng sinh cũ để tránh tình trạng kháng thuốc, mặt khác phải thúc đẩy nghiên cứu và phát triển ( R$ D) để tìm ra chất kháng sinh mới với cơ chế tác động mới hoàn toàn [27]. Như vậy sau hơn 70 năm kể từ khi khám phá ra chất kháng sinh, đến nay số lượng chất kháng sinh được phát hiện lên tới trên 17.000 chất [21]. Tuy nhiên chỉ có 1-2% CKS được sử dụng rộng rãi trong thực tiễn y học. Thị trường CKS trên thế giới, theo thống kê năm 2002 đã đạt doanh số 26 tỷ đôla [35], và sẽ vẫn còn tăng khoảng 0,6%, từ năm 2002-2008. Con số này cho thấy tiềm năng to lớn của CKS của ngành công nghệ kháng sinh trong nền kinh tế quốc dân. Có thể nói ngành công nghệ sản xuất CKS vẫn đang là một trong những hướng phát triển mạnh mẽ nhất trong công nghệ sinh học. Cùng với sự phát triển mạnh mẽ của các ngành Vi sinh vật học, Hoá sinh học, Di truyền học phân tử và đặc biệt là sự ra đời của CNSH (1975) đã đạt được những thành tựu lớn lao. 1.2. Cơ chế tác động của CKS Cơ chế tác dụng của CKS là những cách thức mà CKS tác động lên những vị trí đích khác nhau trong tế bào, qua đó ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của VSV. Sự tác động của các CKS lên tế bào vi sinh vật phụ thuộc vào bản chất hóa học, nồng độ CKS và cấu trúc hiển vi của tế bào vi sinh vật . Ngoài ra cùng một CKS như 6 nhau nhưng trong các điều kiện khác nhau thì cơ chế cũng có thể khác nhau. Nhìn chung CKS có các cơ chế tác động sau [1]. 1.2.1.Ức chế tổng hợp thành tế bào. Các CKS tác động theo cơ chế này đặc hiệu cao với các vi khuẩn Gram (+) bởi chúng ức chế quá trình tổng hợp peptidoglycan, là đơn vị cấu tạo nên thành tế bào vi khuẩn Gram (+). Các vi khuẩn Gram (-) thì không bị sự tác động của các CKS này, trong đó:  Nhóm - lactam với đại diện là penicillin và cephalosporil ức chế hình thành liên kết giữa các chuỗi Tetrapeptit trong thành phần peptidoglycan. Ở vi khuẩn Gram(+) các CKS này gắn vào Transpeptidase qua đó thực hiện việc gắn enzyme này vào D-Alanin-D-Alanin. Hiệu quả tác động của - lactam còn được xác định bởi các protein có khả năng liên kết với các CKS- lactam gọi là PBP.  Cycloserin có cấu trúc tương tự D-Alanin vì vậy có thể ngăn cản việc gắn D- Alanin vào chuỗi Tetrapeptit theo kiểu ức chế canh tranh.  Vancomicin và Bacitraxin ngăn cản sự tạo thành liên kết giữa N- Acetylglucosamin (NAG) và A.N-Acetylmuramic (NAM). 1.2.2. Ức chế tổng hợp protein Các CKS ức chế tổng hợp protein có thể tiêu diệt được các sinh vật kể cả Gram (-) và Gram (+), đích tác dụng của chúng là ribosome 70S.  Một số CKS tác động vào tiểu phần 30S dẫn đến sinh tổng hợp protein bất thường. Nhóm aminoglycozit làm đọc mã sai, tetracilin ngăn cản kéo dài chuỗi peptit.  Một số CKS tác động vào tiểu phần 50S làm phong bế tổng hợp protein. Nhóm chloramphenicol ngăn cản quá trình gắn giữ các aminoacid –tARN vào các vị trí gắn tạo liên kết peptit trong ribosome do đó liên kết peptit không được hình thành. Nhóm macrolit ức chế việc giải phóng acid amin ra khỏi phúc hệ amino acid –tARN – ribosome - mARN . 1.2.3. Phá hủy màng sinh chất. [...]... và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS từ tự nhiên Tuyển chọn xạ khuẩn sinh kháng sinh bao gồm các bước sau: [7] Thu thập các mẫu đất, bùn, nước, lá, cát,… từ các loại môi trường khác nhau, phân lập và thuần khiết các chủng từ các mẫu đó Thử khả năng ức chế hoặc tiêu diệt vi sinh vật kiểm định của các chủng đã thuần khiết Chọn lựa các chủng thuần khiết có hoạt tính sinh học: kháng khuẩn, kháng nấm, ... Công nghệ Sinh học- ĐHQGHN và Viện Bảo vệ Thực vật cung cấp - Nội dung nghiên cứu 1 Phân lập và tuyển chọn một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh từ môi trường tự nhiên ở Khánh Hòa 2 Nghiên cứu các đặc điểm sinh học của các chủng đã tuyển chọn 3 Thăm dò khả năng ứng dụng của một số chủng có hoạt tính kháng sinh nhằm định hướng nghiên cứu trong bảo vệ thực vật 4 Bước đầu tiến hành lựa chọn dung... 3.1.1 Xác định số lượng xạ khuẩn sinh CKS phân lập được Từ các mẫu đất lấy từ các nơi khác nhau ở Khánh Hòa, chúng tôi đã phân lập và thuần khiết được 105 chủng xạ khuẩn, 165 chủng vi khuẩn Số lượng và sự phân bố xạ khuẩn được trình bày ở bảng 3.1 Bảng 3.1 Số lượng và sự bố xạ khuẩn trong đất ở môi trường tự nhiên ở Khánh Hòa Nơi lấy mẫu Hòn Chồng Hồ cá Trí Nguyên Suối nước nóng Ninh Sinh Suối nước... lượng xạ khuẩn (Streptomyces) có thể dao động Tính đối kháng của các nhóm xạ khuẩn phân lập được với 4 loại vi sinh vật kiểm định đại diện cho các nhóm vi sinh vật khác nhau được trình bày ở bảng 3.2 27 Bảng 3.2 Sự phân bố và hoạt tính kháng sinh của các nhóm xạ khuẩn đã phân lập được Nhóm xạ khuẩn (theo ISP) Trắng (W) Xám (Gy) Lục (Gn) Vàng (Y) Xanh da trời (B) Đỏ (R) Tổng số Tổng số chủng của xạ khuẩn. .. kháng của các vi sinh vật trong đất là cơ sở của biện pháp đấu tranh sinh học phòng chống bệnh cây Do vậy, đã từ lâu các nhà khoa học trên thế giới đã nghiên cứu và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có khả năng ức chế nấm gây bệnh thực vật Nơi nào có mặt vi sinh vật đối kháng trong đất thì tỷ lệ cây bị bệnh giảm đi rõ rệt Sự có mặt của xạ khuẩn đối kháng trong đất làm giảm rõ rệt tỷ lệ mắc bệnh của cây [13]... lutea Nấm: Candida albican, Fusarium oxysprum Từ bảng ta thấy tỷ lệ các chủng có HTKS là khá cao (57.2%) Trong đó số chủng kháng vi khuẩn G (+) là cao nhất (85%), sau đó là kháng vi nấm (78.33%), thấp nhất là số chủng kháng G (-) với tỷ lệ là 70% 3.1.2 Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS chống nấm có hoạt tính cao Xuất phát từ mục tiêu của chúng tôi là tuyển chọn được chủng xạ khuẩn có khả năng sinh. .. Hình 3.1 Tỷ lệ các chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces theo nhóm màu 28 60 Tỷ lệ (%) 50 40 30 53.33 20 10 16.67 15 1.67 0 trắng xám lục vàng 0 xanh da trời 7.62 đỏ Nhóm m àu Hình 3.2 Tỷ lệ phần trăm các chủng có HTKS theo nhóm màu Bảng 3.3 Kết quả sơ tuyển các chủng xạ khuẩn có HTKS Tổng số chủng phân lập Số chủng có hoạt tính kháng sinh Số chủng ức chế vi Số chủng ức khuẩn chế vi nấm G (+) G (-)... tra về xạ khuẩn đối kháng trong đất ở Nhật Bản Kuradu nhận thấy nơi nào có nhiều xạ khuẩn trong đất thì ở đó các chủng Fusarium bị biến mất nhanh chóng [35] Thông thường một loài xạ khuẩn đối kháng có thể ức chế, hoặc tiêu diệt một vài loại nấm gây bệnh, nhưng cũng có loài có phổ rộng Tuy nhiên việc sử dụng các 16 chủng có phổ rộng phải thận trọng để tránh làm ức chế các khu hệ vi sinh vật có lợi trong... 8 bệnh hại trên nhãn có 6 bệnh là do nấm gây ra, 8 bệnh ở vải có 7 bệnh do nấm gây ra, 10 bệnh ở lạc thì có 9 bệnh do nấm gây ra [1] Những bệnh chủ yếu là: đạo ôn, khô vằn, mốc sương, thối rễ, đốm quả… 1.5.1 Bệnh đạo ôn Là bệnh do nấm Pyricularia oryzae đây là bệnh thường gây hại trên cây lúa Bệnh phân bố rộng rãi và thường gặp ở 70 nước trên thế giới [21] Pyricularia oryzae gây ra các đốm hoặc các. .. Tổng Số lượng mẫu 5 10 Tổng số chủng đã phân lập Xạ khuẩn Vi khuẩn Tỷ lệ phần trăm (%) Xạ khuẩn Vi khuẩn 2 70 25 50 7.4 58.3 92.6 41.7 8 20 15 57.1 42.9 6 13 55 19.2 80.8 3 32 0 105 20 165 0 100 Mặc dù ở đây chúng tôi không đi sâu vào nghiên cứu sự phân bố của xạ khuẩn trong đất, tuy nhiên có thể thấy số lượng xạ khuẩn trong các mẫu đất là khá phong phú Tùy thuộc vào vị trí và các địa điểm khác nhau, số . 27 3.1. Phân lập và tuyển chọn 27 3.1.1. Xác định số lượng xạ khuẩn sinh CKS phân lập được 27 3.1.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS chống nấm có hoạt tính cao 29 3.1.3. Hoạt tính enzyme. chống nấm gây bệnh thực vật từ các mẫu đất ở Khánh Hòa . Đồng thời, tiến hành nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng sinh tổng hợp chất kháng sinh của các chủng xạ khuẩn đã được tuyển chọn, . [3]. 1.3.3. Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh CKS từ tự nhiên Tuyển chọn xạ khuẩn sinh kháng sinh bao gồm các bước sau: [7]  Thu thập các mẫu đất, bùn, nước, lá, cát,… từ các loại