CL C L I C M N L IM U PH N 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 Tình hình nghiên c u v sinh lý máu cá giáp xác th gi i 1.2 Tình hình nghiên c u v máu giáp xác Vi t Nam 12 1.3 Gi i thi u v b nh s a tôm hùm Rickettsia 14 PH N 2: PH 2.1 NG PHÁP NGHIÊN C U 17 it ng, th i gian 2.1.1 it a m nghiên c u 17 ng nghiên c u: sinh lý máu c a tôm Hùm Bông (Panulirus ornatus) 17 2.1.2 Th i gian nghiên c u 17 2.1.3 a m nghiên c u 18 2.2 S kh i n i dung nghiên c u 18 2.3 Ph ng pháp nghiên c u .18 2.3.1 Ph ng pháp thu m u tôm: Thu ch n l c 30 tôm Hùm Bơng ni t i khu v c Hịn M t – Nha Trang 18 2.3.2 Ph 2.4 Ph ng pháp l y máu b o qu n m u máu tôm 19 ng pháp phân tích m u .20 2.4.1 Phân tích ch tiêu h u hình 20 2.4.2 Ph ng pháp xác nh ch tiêu sinh hoá 21 2.5 Thu th p x lý s li u: 21 PH N 3: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 22 3.1 K t qu nghiên c u ch tiêu h u hình 22 3.1.1 Các d ng t bào máu c a tôm hùm Bông (P ornatus) kho m nh nh ng bi n i tôm b b nh 22 3.1.2 T ng s t bào máu 28 3.1.3 Công th c t bào máu 28 3.2 K t qu nghiên c u huy t 29 3.3 K t qu nghiên c u m t s ch tiêu khác 29 3.3.1 Th i gian ông máu 29 3.3.2 l ng máu 30 K T LU N VÀ XU T Ý KI N 31 3.1 K t lu n 31 3.2 xu t ý ki n .31 TÀI LI U THAM KH O 32 DANH M C CÁC B NG B ng 1: S l ng t bào máu 28 B ng 2: Th i gian ông máu 30 B ng 3: l ng máu 30 DANH M C CÁC HÌNH Hình 1: Tơm hùm Bơng 17 Hình 2: S kh i n i dung nghiên c u 18 Hình 3: Cách l y máu tôm 19 Hình 4: M u máu tơm hùm 19 Máu tôm kho g n nh su t (A), máu tôm b nh c nh s a (B) .19 Hình 5: Hình d ng t bào máu tôm kho soi t i (40X) .22 Hình 6: Các t bào máu tơm kho nhu m b ng Giemsa (40X) 23 Hình 7: Các d ng t bào máu c a tôm kho d a vào s t n t i c a h t bào t ng 24 Hình 8: M u máu tơm hùm 25 Hình 9: M u máu tôm hùm b b nh s a nhu m Gram (X40) 25 Hình 10: M u máu tôm hùm b b nh s a nhu m Gram (X40) 26 Hình 11: M u máu tôm hùm b b nh nhu m Bengal Rose Giemsa 26 Hình 12: Các t bào máu c a tôm hùm b b nh s a 27 Hình 13: Công th c t bào máu c a tôm kho 28 Hình 14: Hàm l ng protein huy t 29 KÝ HI U VÀ CÁC CH VI T T T TB: t bào THC (total haemocytes count): t ng s t bào máu TPP (total plasma protein): hàm l X : s trung bình : sai s chu n CV %: h s phân tán mL: mili lit L: lít g: gam ng protein huy t IC M hoàn thành t t N tài nghiên c u khoa h c này, bên c nh s c g ng n l c c a b n thân, ã nh n c r t nhi u s giúp c a nhi u t ch c cá nhân Tơi xin bày t lịng bi t n sâu s c t i: Tr ng i h c Nha Trang, khoa Nuôi tr ng thu s n, B môn C s sinh h c ngh cá, B môn B nh h c Thu S n ã t o m i su t th i gian th c hi n PGS TS u ki n v t ch t k thu t tài Th Hoà, ng i ã tr c ti p h ng d n tơi r t nhi t tình, chu áo Các th y cô ã d y d em su t th i gian h c t p t i tr c ki n th c hoàn thành ng em có tài C m n chú, anh ch l ng nuôi tôm hùm t i khu v c Hịn M t – Nha Trang ã nhi t tình giúp trình thu th p m u Các k thu t viên phịng Sinh hố II – B nh vi n a khoa t nh Khánh Hoà ãt om i u ki n c s v t ch t giúp v ki n th c cho em hồn thành xét nghi m m u máu tơm Cu i xin g i l i c m n t i anh ch , b n ã giúp ng viên su t th i gian th c hi n tài Tôi xin chân thành c m n! Nha Trang, tháng 11 n m 2008 IM Ngh nuôi tôm hùm U Vi t Nam m i ch xu t hi n c g n th p k nh ng ã nhanh chóng tr thành m t ngh quan tr ng mang l i thu nh p cao cho ng i nuôi Vùng bi n Nam Trung B n i có i u ki n thu n l i cho ni tơm hùm, c ni Bình u tiên t i Khánh Hoà vào n m 1990, sau lan r ng t nh nh, Phú Yên, Bình Thu n, Ninh Thu n Tính c t nh, nn m 2007 ã có 41 vùng ni v i 52.696 l ng nuôi, t o h n 2000 t n s n ph m có giá tr 40 tri u ô-la M h ng n m nh ng n m g n ây [3] Tôm hùm gai, Panulirus spp., lồi có giá tr kinh t cao Theo Lê Anh Tu n (2006), Vi t Nam, gi ng Panulirus có lồi x p theo giá tr kinh t nh sau: tôm hùm P ornatus (Fabricius, 1798), tôm hùm P homarus (Linnaeus, 1758), tôm hùm s i P Stimsponi (Holthuis, 1963), tôm hùm P longipes (Edwards, 1868), tôm hùm ma P penicilatus (Olivier, 1791), tôm hùm sen P versicolor (Latraille, 1804), tôm hùm bùn P polyphagus (Herbst, 1793) T i l ng nuôi Vi t Nam ni lồi tơm hùm bơng, tơm hùm (cịn g i tơm hùm xanh), tôm hùm bùn (tôm hùm tre), tôm hùm [3] Trong ó tơm hùm bơng (P ornatus) lồi có giá tr kinh t cao ph bi n, kích th c c th l n, có th t kh i l ng kg , t c c nuôi sinh tr ng cao, 1kg sau 18 tháng nuôi v i giá bán 600.000 – 730.000 VN / kg Ngồi tơm hùm xanh P homarus c ng nh , giá bán th p Cịn tơm hùm c ng c ni r i rác, có kích c th tôm hùm tre không ph i it ng ph m ng nuôi i dân l a ch n mà l n vào gi ng trình khai thác t nhiên V n c coi ngh mang l i l i nhu n cao song c ng không ph n r i ro, m t nh ng m i e d ch b nh Theo th ng kê tơm hùm có 12 b nh tri u ch ng th mang, thân, long c ng g p, nguy hi m nh t b nh: en u, m m v …[3].Tuy nhiên m i ch xác nh c tác nhân c a t ng s 12 b nh en mang n m Fusarium spp., b nh thân vi khu n Vibrio alginolyticus, Vibrio sp., ây tr ng i l n nh t cơng tác phịng, tr b nh Cu i n m 2006 xu t hi n thêm m t b nh l c g i “b nh s a”, phát sinh u tiên t i m t s l ng nuôi thu c t nh Phú Yên Khánh Hoà, sau lan r ng c t nh mi n Trung Nam B 2007 ã gây thi t h i hàng t ng cho ng i nuôi Tác nhân n cu i n m c xác nh m t loài vi khu n gi ng v i Rickettsia, ký sinh n i bào Tôm b b nh có tri u ch ng d nh n bi t nh t t ph n b ng tôm chuy n sang màu tr ng d ch ti t c a c th bao g m c máu b ngày sau b c nh s a, tôm y u ch t sau – 20 n hồn thành ch ng trình t o Thu s n, cs hi n So sánh m t s tài c, i h c chuyên ngành B nh h c ng ý c a khoa NTTS, b môn B nh h c Thu s n, em th c ch tiêu sinh lý máu c a tôm hùm Bông (Panulirus ornatus) b b nh s a v i tôm hùm Bông kho m nh Trong th i gian th c hi n tài em ã nh n c r t nhi u s giúp c a t ch c, th y cô b n, nhiên ki n th c h n ch nên khơng tránh kh i nh ng sai sót Em mong b n tài c s góp ý cua th y c hồn thi n h n M c tiêu c a tài Do nh ng hi u bi t v sinh lý máu c a giáp xác nói chung c a tơm hùm nói riêng k t qu c a Vi t Nam r t h n ch , h u nh ch a c c p n nên tài nh m góp ph n làm phong phú thêm hi u bi t v sinh lý máu giáp xác Ngoài tài ti n hành so sánh m t s ch tiêu huy t h c gi a tôm hùm kho m nh tôm b b nh s a Nh ng bi n th góp ph n xây d ng ph i v máu ghi nh n ng pháp ch n ốn b nh s a có hi u qu c có PH N 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 Tình hình nghiên c u v sinh lý máu cá giáp xác th gi i Máu th d ch l u thông huy t qu n, có vai trị quan tr ng th ng v t nói chung giáp xác nói riêng Máu môi tr ng s ng c a t bào, mô c th , c u n i gi a c th v i mơi tr thơng qua q trình trao i khí Oxy iv i ng bên c l y vào qua mang theo máu i t i t bào c th , t i ây chênh l ch v áp su t riêng ph n gi a oxy, khí cacbonic máu v i mơi tr bào l y oxy t máu ng ng t bào s di n trình trao c l i, máu nh n v khí cacbonic t bào th i Quá trình di n liên l c không ng ng ngh , ng oxy c n thi t cho ho t th m t l ng s ng c a c th m b o cung c p hi n khác ch c n ng liên l c gi a c th môi tr trình trao c M t bi u ng c a máu v n ng ng tiêu hoá c th h p th t môi tr i kh p c th , cung c p cho t ng t bào, y ng th i th i lo i kh i c ng l n khí cacbonic, tránh cho c th không b nhi m chuy n ch t dinh d i khí: t ng ng th i nh n v ch t th i c a i ch t t t bào c quan ti t th i M t ch c n ng n a c a máu, vô quan tr ng không th khơng nh c n ó b o v c th Ch c n ng liên quan n t bào máu nh ng ch t có kh n ng mi n d ch t n t i huy t nh kháng th , lectin… ây v n h t s c ph c t p gây nhi u tranh cãi, c n nhi u h n n a nh ng nghiên c u v l nh v c làm rõ h n vai trò mi n d ch c a máu Ngồi máu cịn nhi u ch c n ng quan tr ng khác i u hoà thân nhi t, ph i h p ho t n n i ti t i v i c th nh : ng c a c th thông qua hoocmon vào… Nghiên c u v máu c a giáp xác c ng nh c a cá k th a nh ng thành t u nghiên c u huy t h c nh ng hi u bi t v máu ng i ng v t có vú So v i giáp xác cá có ph n rõ ràng phong phú h n Máu cá g m hai thành ph n huy t t ng huy t c u (t bào máu) Có th phân chia t bào máu cá thành nhóm c b n h ng c u, b ch c u ti u c u Khác v i ng v t có vú, h ng c u c a cá có nhân ph ng hai m t Còn b ch c u t bào hoàn ch nh v c u trúc nh ng nhóm khơng thu n nh t C n c vào s có hay khơng h t bào t ng có th phân bi t thành b ch c u có h t b ch c u khơng h t, d a vào hình d ng có b ch c u n nhân b ch c u a nhân, xét v m t ngu n g c có b ch c u dịng lympho b ch c u dịng tu Nhóm th ti u c u, th c ch t ti u c u không ph i t bào mà ch m t kh i bào t g c t tu x ng nh t t bào t ng c a t bào nhân kh ng l có ngu n ng Thành ph n vơ hình c a máu cá huy t t c ch t khô, n c chi m t i 80%, cịn l i ch t khơ g m protein, glucose, lipid, m t s ch t khác S l ng có s thay ng h p thành t ng t bào máu c ng nh thành ph n huy t i tu theo tr ng thái sinh lý c a cá [21] S khác c b n nh t gi a máu c a loài giáp xác v i máu cá ng v t có x cao ng s ng nói chung máu giáp xác ch a t nm c ti n hố có th phân bi t thành d ng t bào h ng c u, b ch c u ti u c u Do ó c cách phân lo i d ng t bào máu c ng khơng có s th ng nh t gi a nghiên c u Có th d n ch ng m t vài ví d nh sau: Soderhall Smith (1983) phân lo i c loài cua bi n Carcinus maenas d ng t bào máu t bào không h t (hyaline cell), t bào bán h t (semigranular cell), t bào có h t (granular cell); Sting c ng s (1989) g i tên d ng t bào máu c a tôm he Nh t B n Penaeus japonicus t bào h t l n (large granular haemocyte), t bào h t nh (small granular haemocyte) t bào ch a bi t hoá (undifferentiated haemocyte); nghiên c u lồi tơm Hùm Châu M Homarus americanus, theo Cronick Stewart (1973) có d ng t bào máu t bào không b t màu (prohyalocyte), t bào có h t a bazo (eosinophylic granulocyte) t bào có h t a axit (Chromophylic granulocyte)…[20] Karin van de Braak (1996) l i phân lo i t bào máu c a tôm Sú (Penaeus monodon) theo hai cách Cách th nh t d a vào hình d ng tính ch t b t màu c a t bào máu nhu m b ng Giemsa, qua kính hi n vi quang h c phóng i 1000X ã phát hi n lo i hình d ng t bào máu: - Type 1: t bào hình trịn ho c hình oval, nhân có hình trịn, hình oval ho c hình móng ng a b t màu xanh v i thu c nhu m cịn t bào ch t có màu - Type 2: t bào kéo dài hai u, nhân hình oval ho c hình móng ng a b t màu xanh, t bào ch t không màu ho c màu nh t - Type 3: t bào hình trịn ho c oval, nhân màu xanh hình trịn, oval, hay hình móng ng a, t bào ch t không màu ho c nh t - Type 4: t bào có nhân khơng rõ ràng, ph n trung tâm t bào có màu xanh, bên h t b t màu - Type 5: t bào tròn r t nh , nhân tròn ho c hình oval có màu xanh m, t bào ch t không màu Cách th hai d a vào s t n t i c a h t bào t ng có nhóm t bào là: hyaline cell, semigranular cell, granular cell Các t bào c quan sát th y qua kính hi n vi nt Khi so sánh gi a hai cách phân chia này, ng i ta th y th c t bào type t bào có h t, tye t bào h t nh , type t bào khơng h t, cịn type có th nh ng t bào có h t nh ng khơng có nhân [20] Nh n xét rút t nghiên c u cách g i tên t bào máu c a t ng tác gi khác nh ng u d a s có hay khơng có m t c a h t t bào ch t Do ó nghiên c u g n ây h u h t i theo quan m c a Bauchau (1981), t c phân chia t bào máu giáp xác thành nhóm t bào khơng h t (hyaline cell), nhóm t bào h t nh (semigranular cell, small granular cell) hay g i t bào bán h t, nhóm th t bào h t l n (large granular cell) [12] - T bào không h t (hyaline cell): có kích th c t – 13 µm, t l gi a nhân t bào ch t l n, khơng có h t nh bào t ng óng vai trị tiên phát q trình ơng máu có kh n ng th c bào m nh - T bào h t nh (semigranular cell): dài 10 – 20 µm, t l nhân t bào ch t t ng i l n, có h t nh t bào ch t, d ng trung gian gi a t bào không h t t bào h t l n Có kh n ng th c bào, óng gói ông máu - T bào h t l n (granular cell): kích th c dao µm, t l gi a nhân t bào ch t th p, bào t ng kho ng 12 – 25 ng có r t nhi u h t nh Các t bào ch y u có vài trị q trình ơng máu, ho t hố h th ng phenoloxydaza óng gói [14] 19 Kích c : 150 – 250g Yêu c u thu m u t i m t vùng ni m t kích c gi m thi u nh ng sai s k t qu nghiên c u 2.3.2 Ph ng pháp l y máu b o qu n m u máu tôm Dùng kim tiêm lo i 1ml âm vào g c chân bị th c a tơm l y máu t ng m ch tôm Ho c l y máu tr c ti p t tim Hình 3: Cách l y máu tôm L y máu t tim tôm A B Hình 4: M u máu tơm hùm Máu tôm kho g n nh su t (A), máu tôm b nh Th c nh s a (B) ng v i m i tôm, l y kho ng 1ml máu dùng nghiên c u huy t 1ml máu dùng nghiên c u ch tiêu h u hình 20 - Máu dùng nghiên c u ch tiêu h u hình s d ng ch t c dung d ch Formaline 10% pha n nh c mu i 0,45M v i t l dung d ch c nh : máu tôm :1 Dùng xilanh hút 0,5ml dung d ch c tr n u l p t c M u nh, sau ó hút ti p 0,5ml máu tơm c b o qu n t l nh 50C, dùng nhi t ngày - M u dùng ch t c xác nh hàm l ng protein huy t thanh: không s d ng nh Dùng xilanh hút tr c ti p máu tơm nhanh chóng chuy n máu tôm sang ng effpendof yên cho máu ông l i thu l y ph n n phía Ly tâm v i t c 2500 vòng/ phút phút, thu ph n d ch Có th l u gi t l nh 2.4 Ph c 00C th i gian tu n ng pháp phân tích m u 2.4.1 Phân tích ch tiêu h u hình - Phân lo i d ng t bào máu: ph t tiêu b n Smear máu t m u máu có s d ng ch t c nh Nhu m t i b ng thu c nhu m Giemsa, Bengal Rose Quan sát phân lo i t bào máu theo hai cách: d a vào hình d ng, kích th c s b t màu c a t bào, nhân t bào ch t; cách th hai d a vào s có m t hay khơng c a h t t bào ch t Xác nh s l ng t bào máu: nhu m máu b ng Bengal Rose t ng s t bào máu b ng bu ng m h ng c u, m h ng c u L y 20µl máu tơm m a vào bu ng m s t bào trung bình Cơng th c tính t ng s t bào máu: X = 5A x 104 x B (t bào/ ml) Trong ó: X t ng s t bào có 1ml máu A s t bào m c trung bình B h s pha lỗng - Xác nh cơng th c t bào máu: quan sát tiêu b n smear máu nhu m b ng thu c nhu m Giemsa kính hi n vi quang h c m 200 t bào xác nh h t l n phóng i 1000X nh t l ph n tr m t ng d ng t bào không h t, h t 21 Các ph ng pháp phân tích th c hi n d a theo tài li u “International training course biology and pathology of shrimp – Faculty of Science, Mahidol University” 2.4.2 Ph ng pháp xác Hàm l nh ch tiêu sinh hoá ng protein huy t c nh l ng b ng ph n ng Biuret, k thu t Wendell caraway Nguyên t c: protein tác d ng v i ion Cu2+ môi tr ph c màu tím b n v ng Trong l thu n v i n ng u ki n xác nh, ng ki m cho m màu c a ph n ng t protein có dung d ch Hố ch t d ng c : - Huy t tôm ã ly tâm v i t c 3500 vịng/ phút phút - Hố ch t: thu c th Biuret ã pha s n bán th tr ng - Micropipet, ng nghi m - Máy quang k (effpendoft) Ti n hành: tr n 1000µl hố ch t v i 10µl huy t thanh, phịng 10 phút em o máy quang k , cuvet 1cm, b 560 nm K t qu hàm l ng protein huy t thanh, nhi t c sóng 530 – n v g/l 2.5 Thu th p x lý s li u: Các s li u v t ng s t bào máu, công th c t bào máu, hàm l protein huy t b nh S li u thu ng c làm l p l i nhi u l n 10 tôm kho 10 b c x lý b ng ph n m m Excel, 2003 22 PH N 3: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 3.1 K t qu nghiên c u ch tiêu h u hình 3.1.1 Các d ng t bào máu c a tôm hùm Bông (P ornatus) kho m nh nh ng bi n i tôm b b nh a, Các d ng t bào máu c a tôm hùm Bông (P ornatus) kho m nh Cách phân lo i th d a vào hình d ng t bào máu 12 11 10 Hình 5: Hình d ng t bào máu tôm kho soi t i (40X) 23 Hình 6: Các t bào máu tơm kho nhu m b ng Giemsa (40X) Tơm hùm có r t nhi u d ng t bào khác nhau: hình trịn, hình oval, dài thn nh n u…và nh ng t bào có hình d ng khơng xác hình c u hình oval có m c nh Các t bào b t g p cao h n h n so v i d ng khác Cách phân lo i th d a theo quan m chung c a a s nghiên c u máu giáp xác, t c c n c vào s t n t i hay không c a h t bào ng Theo cách tơm hùm Bơng có nhóm t bào máu t bào khơng h t (d ng – hình 7), t bào h t l n (d ng – hình 7), t bào h t nh (d ng – hình 7) K t qu gi ng v i c m chung c a loài giáp xác Nh n th y r ng t bào khơng h t có kích th ct ng i nh so v i d ng t bào khác có t l nhân : t bào ch t r t l n, nhân h u nh chi m ph n l n di n tích t bào Ng c l i t bào h t l n có kích th nhân : t bào ch t nh , bào t ng có h t l n b t màu tím nhu m Cịn t bào h t nh có t l nhân : t bào ch t bào t ng có h t nh s l ng h n so v i t bào h t l n h p v i th ng kê c a nhà khoa h c nhi u it c l n, t l m v i thu c ng u, i u phù ng giáp xác khác 24 Các t bào h t l n không h t có m c b t g p r t th p, a ph n t bào h t nh , chúng chi m t l cao v i nhi u hình d ng phong phú Khi so sánh gi a ph soi t ng pháp phân tích m u, nh n th y m u máu i m u nhu m b ng Giemsa có th quan sát rõ hình d ng t bào s có m t c a h t t bào ch t A B C D E F f Hình 7: Các d ng t bào máu c a tôm kho d a vào s t n t i c a h t bào t ng 25 Trên tiêu b n máu soi t i (A, B), nhu m b ng Giemsa (C, D) nhu m b ng Bengal Rose (E, F) th y s xu t hi n d ng t bào máu: HC(1), nhóm SC (2), nhóm GC (3) b, Nh ng bi n i máu tôm b b nh s a Máu c a nh ng tôm b b nh s a có màu tr ng c r t khó ơng B A Hình 8: M u máu tơm hùm Máu c a tôm hùm kho (A) g n nh su t, máu tơm b nh (B) có màu tr ng i v i m u tôm b nh, tr máu c nhu m Gram xác c nh s a c ti n hành phân tích khác m u nh s có m t c a t bào vi khu n Rickettsia K t qu m u tôm nghi b b nh s a thu u có vi khu n cong máu Hình 9: M u máu tơm hùm b b nh s a nhu m Gram (X40) 26 Các vi khu n hình que cong b t màu Gram âm t n t i t máu Chúng b t màu Gram âm, cong hình l c a TS i li m, gi ng v i mô t nghiên c u Th Hoà & CTV, 2007 Chúng xu t hi n r t dày máu b v n c máu n c Hình 10: M u máu tôm hùm b b nh s a nhu m Gram (X40) Các khu n l c c a vi khu n d ng Rickettsia t n t i t bào máu c a tôm b b nh s a Máu tôm b b nh, quan sát rõ c bi t giai o n b nh n ng b v n c nên khơng c hình d ng t bào máu Hình 11: M u máu tôm hùm b b nh nhu m Bengal Rose Giemsa M u nhu m Bengal Rose (A), m u nhu m Giemsa (B) 27 V hình d ng, bào máu nh tôm b nh không quan sát rõ c hình d ng c a t kho Các t bào b bi n d ng ho c v không th y s t n t i c a h t bào t ng 11 44 33 55 Hình 12: Các t bào máu c a tôm hùm b b nh s a T bào bi n d ng (2, 3), t bào b v (4), t bào ã phóng thích h t (1), t bào cịn ngun hình d ng ban u (5) K t qu v s xu t hi n vi khu n hình cong máu t bào ch t c a t bào máu phù h p v i báo cáo c a TS truy tìm tác nhân gây b nh s a tơm hùm [1] Th Hồ nghiên c u 28 3.1.2 T ng s t bào máu T ng s t bào máu c xác nh b ng bu ng m h ng c u, l p l i l n v i m i tôm B ng 1: S l Lo i m u Kh i l S l ng (g) ng t bào máu ng t bào máu (106 TB/mL) Min – max Tôm kho X± CV (%) 3.2 – 5.4 4.11± 0.23a S m u 18.14 150 - 250 10 Tôm b nh 150 - 250 1.6 – 4.1 2.8 ± 0.15b 23.28 20 S li u b ng s trung bình c ng tr l ch chu n Các ch khác bi u th s sai khác có ý ngh a, p < 0.05 S l ng t bào máu c a tôm b nh gi m 31.87 % so v i kho , k t qu x lý b ng ph n m m Excel cho th y s suy gi m có ý ngh a th ng kê (p < 0.05) M t s nghiên c u khác v b nh Rickettsia gây giáp xác c ng cho nh ng k t lu n t ng t 3.1.3 Công th c t bào máu l ph n tr m lo i TB máu 14.4 SC 18.04 GC HC 67.56 Hình 13: Cơng th c t bào máu c a tôm kho D a vào b ng ta th y t bào h t nh chi m t l ph n tr m r t cao, 60%, l i t bào h t l n không h t K t qu có s t ng ng l n v i nhi u nghiên c u c a Hijran Yavuzcan Yildiz, Hasan Huseyin Atar cua Potamon fluviatilis [16] 29 V công th c t bào máu, máu tôm b nh nhu m không xác c rõ s có m t c a h t bào t xác sát nh ng nh ã nói nh trên, ó tơi khơng c cơng th c t bào máu c a tôm b nh Ch d a theo hình d ng quan c th y chi m a s t bào hình oval, hình trịn (t bào 1, – hình 4) hình thon dài (t bào – hình 4) H u nh không th y d ng t bào h t l n t bào không h t 3.2 K t qu nghiên c u huy t hàm l ng protein (g/L) Hàm l 50 ng protein 38.5 a 40 30 19.6 b 20 10 tôm kho tôm b nh lo i tôm S li u b ng s trung bình c ng tr l ch chu n Các ch khác bi u th s sai khác có ý ngh a, p < 0.05 Hình 14: Hàm l ng protein huy t So sánh v i k t qu nghiên c u m t s loài giáp xác khác ta th y hàm ng protein huy t c a tôm hùm Bông cao h n so v i tôm hùm Châu M (10 – 40 g/mL) nh ng th p h n nhi u l n so v i tôm hùm (P longipes): 60 – 65 g/mL [20] So v i tơm kho hàm l ng protein c a b nh gi m i 49.09 % Tôm hùm Panulirus argus kho m nh có hàm l ng protein huy t 40 g/L, sau b b nh s a tu n gi m i x p x 20 g/L [18] 3.3 K t qu nghiên c u m t s ch tiêu khác 3.3.1 Th i gian ông máu 30 B ng 2: Th i gian ông máu Lo i m u Tr ng l ng (g) Tôm kho Th i gian ông máu (phút) Min – max X ± 150 - 250 -3 S m u CV (%) 1.9 ± 0.28a Tôm b nh 150 - 250 - 25 10.7 ± 1.81 b S li u b ng s trung bình c ng tr 46.08 10 53.42 10 l ch chu n Các ch khác bi u th s sai khác có ý ngh a, p < 0.05 Máu c a tôm kho m nh ông r t nhanh sau rút kh i m ch máu Cịn máu c a tơm b b nh s a r t khó ơng có th lên t i 25 phút C c máu ông c a tôm kho có qnh cao, cịn c a b nh r i r c, d v S suy gi m kh n ng ông máu c a b nh có ý ngh a liên quan t is l ng t bào máu b gi m sút 3.3.2 l ng máu B ng 3: Lo i m u Tr ng l ng (g) Tôm kho l ng máu l ng máu (mm/h) Min – max X ± -9 6.0 ± 0.39a 150 - 250 S m u CV (%) Tôm b nh 150 - 250 - 13 9.7 ± 0.77 S li u b ng s trung bình c ng tr b 20.79 10 25.28 10 l ch chu n Các ch khác bi u th s sai khác có ý ngh a, p < 0.05 l ng máu ch s liên quan ch t ch v i s l quánh c a huy t t ng S l quánh th p t c l ng máu cao ng ng t bào máu ng t bào máu nh huy t t c l i Do ó ng có tôm b nh, t c l ng máu r t cao (9.7 ± 0.77 mm/h) so v i tôm kho 6.0 ± 0.39 mm/h S t ng nhanh v t c l ng máu c a tơm b nh so v i tơm kho có ý ngh a th ng kê 31 T LU N VÀ XU T Ý KI N 3.1 K t lu n tơm hùm Bơng có 12 lo i t bào máu thu c nhóm t bào khơng h t, t bào h t nh t bào h t l n Khi tôm b b nh s a t bào b bi n d ng, v phóng thích h t Cơng th c t bào máu: t bào h t nh chi m 67.56 %, 14.40 % t bào không h t t bào h t l n chi m 18.04 % T ng s t bào máu c a tôm b nh (2.8 ± 0.15 tri u TB/mL) gi m có ý ngh a so v i tôm kho (4.11 ± 0.23 tri u TB/mL) Hàm l ng protein huy t c a tôm kho 38.5 ± 3.24 g/L cao h n có ý ngh a so v i tôm b nh (19.6 ± 1.33 g/L) Th i gian ông máu (1.9 ± 0.28 phút) t c mm/h) c a tôm kho l ng máu (6.0 ± 0.39 u th p h n có ý ngh a so v i tôm b nh (l n l t 10.7 ± 1.81 phút 9.7 ± 0.77 mm/h) 3.2 xu t ý ki n Ti p t c ý t ng c a o n khác c a b nh, tài v i s l ng m u l n h n, m u c bi t giai o n s m C n nhi u nghiên c u sâu h n n a v huy t h c c a tôm hùm ph giai ng pháp ch n ốn b nh có hi u qu ng d ng thành 32 TÀI LI U THAM KH O Tài li u ti ng Vi t Báo cáo k t qu phân tích m u tơm hùm B Nông Nghi p phát tri n nông thôn, C c qu n lý ch t l ng, an toàn v sinh thú y thu s n, 2007 Báo cáo k t qu th nghi m tr b nh s a tôm hùm B Nông Nghi p phát tri n nông thôn, C c qu n lý ch t l ng, an toàn v sinh thú y thu s n, 2007 Báo cáo ánh giá hi n tr ng nuôi b nh d ch tôm hùm t nh Mi n Trung B Nông Nghi p phát tri n nông thôn, C c qu n lý ch t l ng, an toàn v sinh thú y thu s n, 2007 Báo cáo v công tác quan h qu c t trình th c thi nhi m v nghiên c u gi i quy t b nh s a tôm hùm nuôi t i Phú Yên Khánh Hồ B Nơng Nghi p phát tri n nông thôn, C c qu n lý ch t l ng, an toàn v sinh thú y thu s n, 2007 Nguy n V n Bé, 1999 Th c hành huy t h c truy n máu Nhà xu t b n y h c u Th Dung, 1996 Nghiên c u m t s ch tiêu huy t h c liên quan n tr ng thái sinh lý cá Tr m c (Ctenopharyngodon idellus C & V.), lu n án ti n s, i h c Thu S n, Nha Trang u Th Dung, Ph m Qu c Hùng, 2004 Mô phôi h c thu s n Nhà xu t b n Nông Nghi p, trang 13 – 19 Th Hoà, Bùi Quang T , Nguy n H u D ng, Nguy n Th Mu i, 2004 B nh h c thu s n Nhà xu t b n Nông Nghi p Trang 125 – 165, trang 209 – 215 Ph ng pháp ch n oán b nh vi khu n h c Thu s n, khoa Nuôi tr ng Thu s n, Tr ng v t thu s n B môn B nh ng i h c Nha Trang, 2007 Trang – 11 10 Nguy n V n Mùi Th c hành hoá sinh h c, Nhà xu t b n i h c Qu c gia Hà N i, trang 72 – 92 11 Lê Anh Tu n, 2006 Nuôi tôm hùm l ng, tr ng i h c Thu S n Trang – 33 Tài li u ti ng Anh 12 Bauchau, 1980 Crustaceans, Invertebrate Blood Cell, Academic Press, New York 13 Brian Jones, 2004 Cellular response to injury in spiny lobsters Fisheries western Australia, c/o Animal Health Laboratory 14 Defensive responses crustaceans http://wwwvims.lpl.arizona.edu 15 Fiona Eddy, Adam Powell, Simon Gregory, Linda M Nunan, Donald V Lightner, Paul J Dyson, Andrew F Rowley and Robin J Shields, 2007 Microbiology, 153, 2839 – 2849 16 Hijran Yavuzcan Yildiz, Hasan Huseyin Atar, 2002 Haemocyte classification and differential counts in the Freshwater crab, Potamon fluviatilis Ankara University, Turkey Turk J Vet Anim Sci 26, pp 403 – 406 17 International Training Course Biology and Pathology of Shrimp, laboratory manual, SCBT 609: Biology and Pathology of Shrimp Department of biotechnology, Faculty of Science, Mahidol University 2005 18 Jeffrey D Shields, Donald C Behringer Jr, 2004 A new pathogenic vius in the Caribbean spiny lobster Panulirus argus from the Florida Keys Disease of Aquatic Organisms 59: 109 – 118 19 Johansson M W, Keyser P., Sritunyalucksana K., Soderhall K, 2000 Crustacean haemocyte and haemotopoiesis Aquaculture 191, 45 – 52 20 Karin van de Braak, 2002 Haemocytic defence in black tiger shrimp (Penaeus monodon), Wageningen University 21 Thorson 1958, Mc Cathy & Conte 1996, Satchell 1971, Fort et al 1991, Olson 1992 Fish blood like that of other vertebrates and many invertebrates, is composed of blood cell suspend in plasma that is ciculated throughout the body tissues ... hi n So sánh m t s tài c, i h c chuyên ngành B nh h c ng ý c a khoa NTTS, b môn B nh h c Thu s n, em th c ch tiêu sinh lý máu c a tôm hùm Bông (Panulirus ornatus) b b nh s a v i tôm hùm Bông. .. c Nha Trang, phịng Sinh hố II – B nh vi n a khoa t nh Khánh Hoà 2.2 S kh i n i dung nghiên c u Nghiên c u ch tiêu sinh lý máu c a tôm hùm Bông Tôm kho Tôm b nh s a Các ch tiêu h u hình ng t bào... a tôm hùm Bông cao h n so v i tôm hùm Châu M (10 – 40 g/mL) nh ng th p h n nhi u l n so v i tôm hùm (P longipes): 60 – 65 g/mL [20] So v i tơm kho hàm l ng protein c a b nh gi m i 49.09 % Tôm