Đang tải... (xem toàn văn)
với giáo trình thực hành sinh học chức năng động vật này thì các bạn sẻ biết được quy trình thực hành, phương pháp nhận biết: các tế bào bạch cầu, các cặn có trong nước tiểu,... qua cho có thể giúp một phần nhỏ cho các bạn biết được một số bệnh mà người được các bạn lấy mẫu
1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM THỰC HÀNH SINH HỌC CHỨC NĂNG ĐỘNG VẬT Tp. HCM, tháng 10 năm 2012 2 BÀI 1: NHUỘM TIÊU BẢN MÁU VÀ PHÂN BIỆT CÁC LOẠI BẠCH CẦU 1.1 MỤC ĐÍCH Nhận diện, phân biệt các loại tế bào máu từ mẫu tiêu bản máu chuột nhắt trắng (Mus musculus var. Albino) đã nhuộm giemsa 1.2 CƠ SỞ LÝ THUYẾT Bạch cầu là những tế bào có nhân, có khả năng di động, hình dạng kích thước thay đổi tùy loại bạch cầu. Bạch cầu được chia làm hai loại: bạch cầu có hạt và bạch cầu khơng hạt. Sự bắt màu có thể khác nhau khi nhuộm các thuốc nhuộm khác nhau. 1.2.1 Bạch cầu không hạt (Agranulocytes) Khi nhuộm, các tế bào này không có các hạt bắt màu ở nguyên sinh chất. 1.2.1.1. Bạch cầu Lymphocyte: dòng này có 2 loại là Lymphocyte B và Lymphocyte T. Tế bào tròn, nhân hình cầu, nguyên sinh chất hẹp, ưa kiềm, quanh nhân có viền sáng (Hình 1.1). Hình 1.1. Hình thái các bạch cầu không hạt Lymphocyte to có kích thước 6-10 µm, nhân tròn bắt màu tím xanh, nhiễm sắc thô, nguyên sinh chất bắt màu xanh da trời, có viền xanh thẫm ngoại vi. Lymphocyte nhỏ có kích thước 5-9 µm, nhân tròn, nhiễm sắc thô, bắt màu tím sẫm, chiếm 9/10 thể tích tế bào. Nguyên sinh chất ưa base mạnh, khi nhuộm bắt màu xanh. 1.2.1.2. Bạch cầu Monocyte: tế bào lớn, tròn, kích thước 20–25 µm, nguyên sinh chất bắt màu xanh, nhân hình bầu dục hoặc hạt đậu, bắt màu tím đen (Hình 1.1). Tế bào có khả năng thực bào. Lymphocyte Monocyte 3 1.2.2 Bạch cầu có hạt (Granulocytes) Là những tế bào mà trong nguyên sinh chất của chúng có hạt, dựa vào sự bắt màu của các hạt này, người ta chia ra làm 3 loại tế bào khác nhau (Hình 1.2). Hình 1.2. Hình thái các bạch cầu có hạt 1.2.2.1. Bạch cầu trung tính (neutrophile): thường chiếm tới 65% tổng số bạch cầu. Kích thước 10-15 µm, nhân thắt eo, phân thùy, nguyên sinh chất có hạt tròn 0,2-0,4 µm, khi nhuộm, các hạt có màu hồng-xanh tím. Các hạt nguyên sinh chất này có chứa este của acid hyanuronic là thành phần quan trọng của glycogen (đường động vật). Các tế bào này cũng có khả năng thực bào. 1.2.2.2. Bạch cầu ưa acid (eosinophile): kích thước 10-15 µm, nhân thắt eo, chia thùy. Nguyên sinh chất có hạt to, tròn đều khoảng 1µm, hạt ưa acid bắt màu da cam. Bản chất hạt acid chứa nhiều histon, có thể cả histamine và acetylcholin cao, pH rất acid (khoảng 2). 1.2.2.3. Bạch cầu ưa base (basophile): kích thước 10-15 µm, nhân thắt eo, chia đoạn. Nguyên sinh chất có nhiều hạt màu xanh methylen hoặc xanh toluidin. Hạt tế bào chất rất to khoảng 1-2 µm và chúng phân bố không đều trong nguyên sinh chất. Bạch cầu có vai trò quan trọng trong việc bảo vệ cơ thể. Một người trưởng thành có số lượng bạch cầu dao động từ 5000-10000 tế bào/ml máu và thường chỉ chiếm 1% tổng số tế bào máu. Trong tình trạng bệnh lý, số lượng, hình dạng bạch cầu thay đổi dẫn đến tỉ lệ các loại bạch cũng thay đổi theo. Đây là đặc điểm của bạch cầu mà người ta thường dùng trong chẩn đốn trạng thái sinh lý, bệnh lý cơ thể. Basophile Eosinophile Neutrophile 4 1.3 VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP 1.3.1 Vật liệu 1.3.1.1 Mẫu vật - Chuột 1.3.1.2. Hóa chất - Dầu cèdre - Xylene - Ethanol 70 o - Thuốc nhuộm Giemsa 1.3.1.3. Dụng cụ và thiết bị - Đèn chiếu sáng bóng tròn - Kim tiêm 1 ml - Lame - Ống giữ chuột - Giấy lau kính - Găng tay - Gòn thấm - Kính hiển vi 1.3.2. Phƣơng pháp 1.3.2.1 Cách lấy mẫu máu - Chiếu đèn bóng tròn cho chuột giãn nở tĩnh mạch máu - Giữ chuột bằng cách cho chuột ống giữ chuột - Giữ chặt phần đuôi gần mông bằng ngón tay trỏ và ngón tay giữa của tay trái, phần đầu của đuôi chuột được giữ chặt bằng ngón tay áp út và ngón tay cái của tay trái. - Canh vị trí chích máu đuôi cách đầu phải lame khoảng 1,5 cm. - Dùng tay phải cầm kim chích vào tĩnh mạch đuôi chuột, nhỏ 1 giọt máu lên lame. 1.3.2.2 Cách trải lame (Hình 1.3) - Dùng một lame khác chạm vào giọt máu nghiêng một góc 30-45 0 so với lame chứa giọt máu 5 - Kéo nhẹ lame từ đầu này sang đầu kia vẫn giữ nguyên 1 góc 30-45 0 , tốc độ đẩy lame vừa phải. Sau đó để khô tự nhiên. Hình 1.3. Cách dàn tiêu bản máu 1.3.2.3 Cách cố định mẫu - Lame trải mẫu máu sau khi khô tự nhiên được nhúng vào trong lọ chứa ethanol 70 0 trong 15-20 giây. - Sau đó, lấy mẫu ra để khô tự nhiên. 1.3.2.4 Cách nhuộm mẫu - Lame chứa mẫu máu (đã cố định) được nhỏ Giemsa đều lên mặt trải mẫu, để yên trong 15 phút - Sau đó rửa tiêu bản bằng nước cất nhẹ nhàng. Để lame khô tự nhiên. 1.3.2.5 Cách quan sát mẫu bằng vật kính X100 - Đưa mẫu lên kính hiển vi, chỉnh và xem lame ở vật kính X40 - Khi thấy máu, hạ bàn kính xuống, nhỏ 1 giọt dầu cèdre lên lame, chỉnh sang vật kính X100. Chỉnh để thấy tế bào. 1 1 2 2 1,5 cm 1 2 6 Lymphocyte Monocyte Neutrophile Basophile Eosinophile Erythrocyte Megakaryocyte Platelete Hình 1.4. Một số loại tế bào máu 7 1.4. YÊU CẦU - Biết cách thu nhận máu từ tĩnh mạch đuôi chuột. - Biết cách nhuộm tiêu bản máu. - Biết cách quan sát mẫu dưới vật kính X100. - Nhận diện các dạng tế bào máu, phân biệt các loại bạch cầu bạch cầu, hồng cầu. - Chụp hình đủ 6 loại bạch cầu. 1.5. CÂU HỎI 1. So sánh các loại bạch cầu dựa vào kích thước tế bào, kích thước hạt và màu sắc của hạt trong nguyên sinh chất, hình dạng và màu sắc của nhân, màu sắc của nguyên sinh chất. 2. Nêu số lượng bạch cầu mỗi loại trong cơ thể của một người bình thường? Cho biết chức năng của mỗi loại bạch cầu? Nếu các bạch cầu trong cơ thể thay đổi (tăng hay giảm bất thường) thì cơ thể đang gặp những vấn đề gì? Nêu ví dụ cụ thể. 8 BÀI 2 XÉT NGHIỆM NƢỚC TIỂU 2.1. MỤC ĐÍCH Xác định một số thành phần trong nước tiểu nhằm chẩn đoán tương đối chính xác các bệnh lí về tiết niệu, gan, tuyến nội tiết, chuyển hóa trong cơ thể. 2.2. CƠ SỞ LÝ THUYẾT Xét nghiệm nước tiểu là xét nghiệm cơ bản trong niệu khoa, giúp chẩn đoán một cách tương đối chính xác các bệnh lí về tiết niệu, gan, tuyến nội tiết, chuyển hóa trong cơ thể. thận là cơ quan đóng vai trò quan trọng trong sinh lí của cơ thể nên những thay đổi bệnh lí xuất hiện sớm trong nước tiểu trước khi có biểu hiện lâm sàng rõ rệt. Phân tích nước tiểu cung cấp những thông tin có giá trị, cho phép điều trị sớm và ngăn ngừa sự tiến triển của bệnh. Một xét nghiệm nước tiểu đầy đủ nên bao gồm các xét nghiệm sinh hóa và xét nghiệm cặn niệu. Tính chất chung và thành phần của nước tiểu Nước tiểu của người là một chất dịch màu vàng nhạt, trong, có tỉ trọng trung bình từ 1,010 - 1,025, độ pH vào khoảng 5,8 - 6,2. Thành phần của nước tiểu bao gồm nước chiếm 95 - 96%, chất khô 4 – 5%, trong đó có các chất vô cơ và một ít chất hữu cơ chủ yếu là ure. 2.3 VẬT LIỆU-PHƢƠNG PHÁP 2.3.1Vật liệu 2.3.1.1. Mẫu vật Nước tiểu người 2.3.1.2. Dụng cụ và thiết bị - Becher 50 ml - Giấy thử nước tiểu (loại 3 chỉ số) - Găng tay - Máy ly tâm - Ống ly tâm 15 ml - Lame, lamelle - Kính hiển vi - Giấy lọc 9 - Ống nhỏ giọt 2.3.1.3. Hoá chất - Formol 10% - Thuốc nhuộm Sternheiner Malbin Staining gồm: * Dung dịch A: Crystal violet 3 g Ethanol 95% 20 ml NH 4 oxalat 0,8 g Nước cất vừa đủ 100 ml * Dung dịch B: Safranin 0,25 g Ethanol 95% 10 ml Nước cất vừa đủ 100 ml Thuốc nhuộm có thành phần thể tích dung dịch A: dung dịch B là 3:97 2.3.2. Phƣơng pháp 2.3.2.1. Cách lấy và bảo quản mẫu nƣớc tiểu - Tốt nhất nên lấy nước tiểu vào buổi sáng sớm (nước tiểu còn đậm đặc). - Vệ sinh sạch sẽ đường tiểu. - Lấy mẫu giữa dòng (phần đầu và phàn cuối bỏ đi) - Lọ đựng phải sạch và vô trùng. - Để tránh kết quả sai lệch nên tránh lấy mẫu: + Sau khi uống nhiều nước + Sau khi ăn + Sau khi lao động nặng hoặc đứng lâu một chỗ. + Trong lúc đang có kinh nguyệt. - Mẫu nước tiểu sau khi lấy nên xét nghiệm ngay nếu không có thể bảo quản trong tủ lạnh hay dùng chất bảo quản tùy theo mục đích xét nghiệm: + Xét nghiệm soi cặn lắng nước tiểu: có thể bảo quản bằng formol 10%. Nước tiểu này không được dùng để làm các xét nghiệm khác. Không bao giờ làm xét nghiệm soi cặn lắng bằng nước tiểu đã để trong tủ lạnh. 10 + Các xét nghiệm sinh hóa thành phần nước tiểu: có thể bảo quản mẫu trong tủ lạnh. 2.3.2.2. Định tính các thành phần trong nƣớc tiểu bằng phƣơng pháp giấy nhúng Nguyên tắc Giấy nhúng mang các chất thử hóa học được gắn trên phiến plastic, cho phép định tính và bán định lượng một số chỉ số của nước tiểu gồm: urobilinogen, glucose, kentoses, bilirubin, protein, nitrite, pH, máu, tỉ trọng, bạch cầu dựa trên mức độ màu tạo thành so với bảng màu chuẩn bằng mắt thường hay bằng máy bán tự động. Thực hiện - Đảo nhẹ lọ nước tiểu cho các thành phần trong nước tiểu phân tán đều. - Nghiêng lọ nước tiểu và cho que nhúng vào sao cho nước tiểu thấm hết các thành phần trên que nhúng. - Lấy que nhúng ra và thấm khô các giọt nước tiểu còn dư. - So màu, ghi nhận kết quả. * Lƣu ý: phải đọc ngay kết quả, nếu để lâu sẽ cho kết quả sai lệch. 2.3.2.3. Soi cặn lắng nƣớc tiểu Nguyên tắc Trong nước tiểu lơ lửng có các thành phần nhỏ như các tế bào, các tinh thể hóa học, chất nhầy, kí sinh trùng…Khi ly tâm những thành phần đó tập trung lại. Lấy một giọt cặn ly tâm đem soi kính hiển vi, quan sát và nhận xét kết quả. Thực hiện - Đảo nhẹ lọ nước tiểu cho các thành phần trong nước tiểu phân tán đều. - Rót nước tiểu sang ống ly tâm (khoảng 2/3 ống). - Quay ly tâm với tốc độ 2000 vòng/phút trong 5 phút. - Nhẹ nhàng nghiêng ống ly tâm đổ phần nước tiểu ở trên. - Nhuộm cặn lắng dưới đáy ống bằng cách nhỏ một giọt Sternhem Malbin Staining. - Dùng pipette Pasteur hút vào, thổi ra 3-4 lần để cặn lắng được đồng nhất. - Lấy một giọt cặn để lên lam kính, đậy lamemelle lại. - Ghi số trên lam. - Quan sát bằng kính hiển vi với: + Vật kính 10x để nhìn tổng quát quang trường. [...]... cha nhiu c quan nht: h sinh dc, h tiờu hoỏ, h bi tit (Hỡnh 3.1) Hỡnh 3 1 Khoang bng chut nht trng Gii phu h sinh dc chut c: Tinh hon (testis), mo tinh hon (epididymis), ng dn tinh (ductuc deferens), dng vt (penis) (Hỡnh 3.2) Gii phu h sinh dc chut cỏi: Bung trng (ovary), ng dn trng (oviduct), t cung (uterus), õm o (vagina), õm h (Vulva) (Hỡnh 3.2) Cỏc tuyn sinh dc cú chc nng sinh giao t, vn chuyn giao... (vagina), õm h (Vulva) (Hỡnh 3.2) Cỏc tuyn sinh dc cú chc nng sinh giao t, vn chuyn giao t, th tinh, tit mt s hormon sinh dc, nuụi phụi thai, sinh sn th h sau, bo tn cht liu di truyn loi 17 Hỡnh 3.2 H sinh dc chut c v chut cỏi 3.2 MC CH Xỏc nh chớnh xỏc v trớ cỏc c quan, b phn chớnh h sinh dc chut 3.3 DNG C - HểA CHT- MU VT - Chut nht trng - Thuc gõy mờ - Kim tiờm 1 ml - Ch khõu y t - Kim khõu y t -... quan sỏt, nhn din cỏc thnh phn cn lng ú 2.5 CU HI 1 Cỏc ch s ca nc tiu gm: urobilinogen, glucose, kentoses, bilirubin, protein, nitrite, pH, mỏu, t trng, bch cu nh hng nh th no n sinh lý ca c th? 2 Vai trũ ca cn lng i vi sinh lý c th 3 Nờu nhn xột v mu nc tiu ca mt ngi cú mu hng TI LIU THAM KHO [1] www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003579.htm [2] http://library.med.utah.edu/WebPath/TUTORIAL/URINE/URINE.html... 3.4.2.Gii phu tỡm c quan sinh dc cỏi (Hỡnh 3.4) - Gõy mờ chut - M vựng lng bng gia ct sng v chi sau rng khong 1-1,5 cm, xỏc nh v trớ ca 2 nhỏnh t cung - Dựng pank kộo bung trng, ng dn trng v nhỏnh t cung ra ngoi 18 - a cỏc b phn trờn tr li v trớ ban u - Khõu vt m li bng ch y t - Nht riờng, theo dừi s hi phc ca chut sau khi m Hỡnh 3.4 Gii phu chut cỏi 3.4.3 Gii phu tỡm c quan sinh dc c (Hỡnh 3.5) - Gõy... ngay) - Sỏt trựng vt thng, nht riờng v theo dừi s hi phc ca chut 19 Hỡnh 3.5 Gii phu chut c 3.5 YấU CU - Phõn bit c chut c v chut cỏi - Gõy mờ thnh cụng chut - Gii phu tỡm c cỏc b phn sinh dc cỏi - Gii phu tỡm c cỏc b phn sinh dc c - Sau khi gii phu xong, chut vn sng bỡnh thng 3.6 CU HI 1 Nờu cỏc lu ý khi gii phu chut chut vn sng bỡnh thng 20 BI 4 KHO ST TC DNG DC Lí CU A THUễC LI TIấU 4.1 MC CH Kho... dung n 6 gi v b thi tr hon ton sau 24 gi 21 Vũ trớ taực duùng cuỷa thuoỏc Tỏc hi Furosemid qua c hng ro nhau thai v vo trong sa m T ú, gõy ri lon nc v cht in gii thai nhi, nhiu trng hp gim tiu cu tr s sinh Dựng Furosemid trong thi k cho con bỳ cng cú nguy c c ch tit sa ngi m Khi s dng Furosemid liu cao v kộo di cú th lm mt cõn bng in gii, gõy bun nụn, ri lon tiờu hoỏ, ri lon cõn bng mỏu, cú th gõy . người bình th ờng? Cho biết chức năng của mỗi loại bạch cầu? Nếu các bạch cầu trong cơ th thay đổi (tăng hay giảm bất th ờng) th cơ th đang gặp những vấn đề gì? Nêu ví dụ cụ th . . hyanuronic là th nh phần quan trọng của glycogen (đường động vật). Các tế bào này cũng có khả năng th c bào. 1.2.2.2. Bạch cầu ưa acid (eosinophile): kích th ớc 10-15 µm, nhân th t eo, chia th y đổi dẫn đến tỉ lệ các loại bạch cũng thay đổi theo. Đây là đặc điểm của bạch cầu mà người ta th ờng dùng trong chẩn đốn trạng th i sinh lý, bệnh lý cơ th . Basophile Eosinophile Neutrophile