TẠO GIỐNG MỚI BẰNG PHƯƠNG PHÁP GÂY ĐỘT BIẾN VÀ CÔNG NGHỆ TẾ BÀO Giống cà chua Hồng lan được tạo ra từ thể đột biến tự nhiên của giống cà chua Ba lan trắng. Giống ngô lai LVN10 là nhóm giống ngô dài ngày, được lai từ hai dòng thuần (lai đơn) và giống ngô LVN4 đại diện cho nhóm trưng bày, khả năng thích ứng rộng, cùng nhóm còn có giống LVN98 và HQ2000). Giống dâu số 12 là giống dâu tam bội (3n) lai từ thể tứ bội và giống dâu Bắc Ninh với giống lưỡng bội (2n). Dâu có lá dày, màu xanh đậm, thịt lá nhiều, sức ra rễ và tỉ lệ hom sống cao. NUÔI CẤY TẾ BÀO TRẦN VÀ ỨNG DỤNG khái niệm và kỹ thuật tách tế bào trần thực vật a. KN: Tế bào trần thực vật (protoplast) là tế bào đã được loại bỏ thành tế bào chỉ còn màng sinh chất bao bọc khối tế bào chất và nhân tế bào. b. Tế bào trần được sử dụng trong nghiên cứu: + lai cùng loài hay khác loài + chuyển gen + có khả năng tạo màng tế bào nhanh chóng đây là cơ sở ngghiên cứu quá trình tổng hợp màng tế bào c. Tách tế bào trần ( 2 cách : cơ học và enzym): sau đây là các bước cơ bản: - Mẫu lá non được rửa sạch với vòi nước máy.sát trùng bằng cồn 70-75 độ sau đó rửa bằng nước cất 3 lần, sau đó khử trùng bằng Na-hypochlorit hay Ca-hypochlorit khảng 7-15 phút. Lá làm sạch lá bằng Clorox 10% trong Lá làm sạch lá bằng Clorox 10% trong 10 phút, rửa lại lá 3 lần bằng nước cất tiệt 10 phút, rửa lại lá 3 lần bằng nước cất tiệt trùng trùng - Ngâm lá vào dung dịch mannitol 8-15% trong 45-60 phút để tế bào co nguyên sinh. - Tách lớp biểu bì mặt dưới lá để enzym ngấm sâu vào nhu mô thịt lá. - Cắt lá thành từng mảnh nhỏ, ngâm 1g lá trong đĩa petri. Dung dịch enzym gồm cellulase, hemicellulase,pectinase +manitol 13%. Đặt mẫu trong tối qua đêm (12-18 giờ, ở 25 độ) thu được hỗn hợp protoplast. - Dịch protoplast ly tâm trong 5 phút, bỏ phần bã nổi lên trên,protoplast ở đáy. Rửa bằng 10ml dung dịch môi trường MS + Manitol 13%,thao tác thực hiện 3 lần. d. Xác định mật độ protoplast và khả năng sống sót Nhuộm protoplast bằng Fluorescein diacetate để xác định sự sống sót của protoplast. Số lượng protoplast được xác định bằng buồng đếm hồng cầu. e. Nuôi cấy protoplast Dung hợp tế bào trần và lai vô tính a. Tự dung hợp vì màng sinh chất của tế bào(-) do nhóm P và Protein nên các tế bào trần đẩy nhau nên không tự dung hợp. Do đó phải làm các rế bào trần tiếp xúc nhau nhờ PEG hay sốc điện. [...]...b Hóa dung hợp: Sự hóa dung hợp có thể thực hiện với NaNO3 0,25M, PVA 15 %…nhưng tần số dung hợp thấp nên ít được sử dụng Virut Senday đã giảm hoạt tính là chất thường dùng hiện nay bằng cách cho giọt hỗn hợp 2 loại tế bào trần tiếp xúc từ từ với các giọt PEG 25- 50% c.Điện dung hợp (tốtnhất): Khi đặt hỗn hợp 2 loại tế bào trần trong 1 điện trường, các tế bào trần sẽ di chuyển, tiếp xúc nhau và xếp... vết đứt ở màng, sự dung hợp sẽ xảy ra tại nơi tiếp xúc Khi dung hợp tế bào trần với nhau thường có ba nguồn gen tham gia (nhân, ty thể, lạp thể) Có thể xảy ra các hiện tượng: - chỉ dung hợp nguyên sinh chất và các cơ quan tử - chỉ có sự dung hợp nhân - có cả dung hợp nhân và tế bào chất Ứng dụng: bằng phương pháp lai tế bào đã thành công trong tạo cây lai từ hai loài thuốc lá khác nhau, cây lai giữa . cao. NUÔI CẤY TẾ BÀO TRẦN VÀ ỨNG DỤNG khái niệm và kỹ thuật tách tế bào trần thực vật a. KN: Tế bào trần thực vật (protoplast) là tế bào đã được loại bỏ thành tế bào chỉ còn màng sinh. sinh chất bao bọc khối tế bào chất và nhân tế bào. b. Tế bào trần được sử dụng trong nghiên cứu: + lai cùng loài hay khác loài + chuyển gen + có khả năng tạo màng tế bào nhanh chóng đây. hợp tế bào trần và lai vô tính a. Tự dung hợp vì màng sinh chất của tế bào( -) do nhóm P và Protein nên các tế bào trần đẩy nhau nên không tự dung hợp. Do đó phải làm các rế bào trần