BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ BẨY PHÂN LẬP, XÁC ðỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ ðẶC TÍNH CỦA VI KHUẨN SALMONELLA SPP Ở GÀ RỪNG LAI F2 NUÔI TẠI VƯỜN QUỐC GIA CÚC PHƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y Mà SỐ: 60 62 50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. PHẠM NGỌC THẠCH HÀ NỘI - 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… i Lêi cam ®oan Tôi xin cam ñoan số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực và do nỗ lực của bản thân cùng với sự giúp ñỡ của các thầy cô, cơ quan chuyên môn, bạn bè ñồng nghiệp và số liệu này chưa hề ñược sử dụng cho bất kỳ một luận văn nào. Tôi xin cam ñoan mọi thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bẩy Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… ii Lêi c¶m ¬n ðể hoàn thành khóa học và luận văn này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy cô Khoa Thú y và viện ðào tạo sau ñại học - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội. ðặc biệt, tôi vô cùng biết ơn và bày tỏ lòng kính trọng sâu sắc ñối với sự giúp ñỡ tận tình của Thầy hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Phạm Ngọc Thạch, người Thầy luôn quan tâm, ñộng viên và chỉ bảo tận tình ñể tôi hoàn thành tốt công trình nghiên cứu khoa học của mình. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn tới sự giúp ñỡ quý báu của các thầy cô Bộ môn Nội chẩn - Dược ñộc chất, Khoa Thú y, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội; PGS.TS. Cù Hữu Phú và các cô chú, anh chị ñồng nghiệp, Bộ môn Vi trùng - Viện Thú y Quốc gia; lãnh ñạo và các anh chị CBCNV Trung tâm cứu hộ và bảo tồn ñộng vật hoang dã - vườn Quốc gia Cúc Phương - Nho Quan - Ninh Bình, ñã giành thời gian giúp ñỡ, tạo ñiều kiện cho tôi hoàn thành phần lớn những nội dung quan trọng của luận văn. Nhân dịp này, cho phép tôi bày tỏ lời cảm ơn tới lãnh ñạo, các cô chú, anh chị em ñồng nghiệp Trung tâm Thực nghiệm và ðào tạo nghề - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội, ñã tạo ñiều kiện và giúp ñỡ tôi về thời gian, công việc, tinh thần và vật chất ñể tôi ñược học tập nâng cao trình ñộ chuyên môn và hoàn thành tốt nhiệm vụ ñược giao. Sau cùng, tôi gửi lời cảm ơn chân thành tới tất cả bạn bè, nhất là những người thân trong gia ñình và chồng con của tôi ñã luôn quan tâm, chia sẻ và ñộng viên tôi trong quá trình học tập cũng như hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày 22 tháng 11 năm 2011 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Bẩy Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC BIỂU ðỒ vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii NHỮNG TỪ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN ix PHẦN I. MỞ ðẦU 1 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2. Mục tiêu nghiên cứu 2 1.3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 3 PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1. Lịch sử nghiên cứu về Salmonella 4 2.1.1. Tình hình nghiên cứu Salmonella trên thế giới 4 2.1.2. Tình hình nghiên cứu Salmonella tại Việt Nam 6 2.2. Vi khuẩn Salmonella và bệnh do chúng gây ra 10 2.2.1. Vi khuẩn Salmonella 10 2.2.2. Bệnh do Salmonella gây ra ở gà 26 2.2.3. Các biện pháp phòng trị bệnh 30 2.3. Một số ñặc ñiểm về gà Rừng 34 2.3.1. Nguồn gốc 34 2.3.2. Tập tính sinh học 35 PHẦN III. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 3.1. ðối tượng và ñịa ñiểm nghiên cứu 37 3.1.1. ðối tượng 37 3.1.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 37 3.2. Nội dung nghiên cứu 37 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… iv 3.3. Nguyên liệu nghiên cứu 38 3.3.1. Mẫu nghiên cứu 38 3.3.2. Kháng huyết thanh chẩn ñoán 38 3.3.3. Môi trường phân lập 38 3.4. Phương pháp nghiên cứu 38 3.4.1. Phương pháp lấy mẫu 38 3.4.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn theo quy trình, tiêu chuẩn ISO 6579 – 1993E có cải tiến vì lý do kỹ thuật hoặc thiếu môi trường 40 3.4.3. Phương pháp ñịnh typ Salmonella bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 42 3.4.4. Phương pháp xác ñịnh ñộc lực của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên chuột bạch 46 3.4.5. Xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn Salmonella phân lập ñược bằng phương pháp kháng sinh ñồ trên thạch ñĩa 47 3.5. Phương pháp xử lý số liệu 48 PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 4.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella 49 4.1.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở một số cơ quan của gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 51 4.1.2. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở các mẫu bệnh phẩm có tỷ lệ nhiễm từ mẹ 54 4.2. Kết quả giám ñịnh một số ñặc tính nuôi cấy và sinh hóa của các chủng Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 57 4.3. Kết quả xác ñịnh serotyp của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 62 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… v 4.4. Kết quả xác ñịnh ñộc lực của một số chủng vi khuẩn Salmonella phân lập trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương trên chuột nhắt trắng 65 4.5. Kết quả gây bệnh thực nghiệm trên gà bằng các chủng Salmonella phân lập ñược ở ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 67 4.6. Bệnh tích ñại thể của các gà Rừng lai F2 ñược gây bệnh thực nghiệm 69 4.7. Kết quả kiểm tra mức ñộ mẫn cảm của các chủng Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương với một số loại kháng sinh 70 4.8. ðề xuất các biện pháp phòng Salmonellosis trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 75 PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 80 5.1. Kết luận 80 5.2. ðề nghị 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 82 PHỤ LỤC 90 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1. Bảng ñịnh typ huyết thanh học (serotyp) của vi khuẩn Salmonella – theo Kauffmann (1972) 45 Bảng 4.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella từ các mẫu phân, trứng, gà con chết, phủ tạng gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 50 Bảng 4.2. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở một số cơ quan của gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 52 Bảng 4.3. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở các mẫu có tỷ lệ lây nhiễm từ gà mẹ trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 54 Bảng 4.4. Kết quả kiểm tra một số ñặc tính nuôi cấy của các chủng vi khuẩn Salmonela phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 58 Bảng 4.5. Kết quả giám ñịnh một số ñặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 59 Bảng 4.6. Kết quả xác ñịnh serotyp của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 63 Bảng 4.7. Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 66 Bảng 4.8. Kết quả gây bệnh thực nghiệm Salmonella trên gà Rừng lai F2 20 ngày tuổi nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 68 Bảng 4.9. Bệnh tích ñại thể các gà Rừng lai F2 ñược gây bệnh thực nghiệm 70 Bảng 4.10. Kết quả kiểm tra mức ñộ mẫn cảm với một số loại kháng sinh của các chủng vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 72 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… vii DANH MỤC CÁC BIỂU ðỒ Trang Biểu ñồ 4.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella trên các mẫu bệnh phẩm thu ñược ở gà Rừng lai F2 51 Biểu ñồ 4.2. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở một số cơ quan phủ tạng của gà Rừng lai F2 bệnh nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 53 Biểu ñồ 4.3. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở các mẫu bị lây nhiễm từ gà mẹ 55 Biểu ñồ 4.4. Kết quả ñịnh typ vi khuẩn Salmonella 64 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 4.1. Khuẩn lạc Salmonella trên môi trường DHL 60 Hình 4.2. Khuẩn lạc Salmonella trên môi trường CHROM 60 Hình 4.3. Vi khuẩn Salmonella trên môi trường thạch TSI, thạch LIM, môi trường Manonate 61 Hình 4.4. Phản ứng lên men sinh hơi các loại ñường của vi khuẩn Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 61 Hình 4.5. Kết quả thử kháng sinh ñồ của các chủng Salmonella phân lập ñược trên ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 75 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………………… ix NHỮNG TỪ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN ADP : Adenosine diphosphate ATP : Adenosine triphosphate BHI : Brain Heart Infusion CFA : Colonization Factor Antigen CFU : Colony Forming Unit CHO : Chinese Hamster ovry cells Cs : Cộng sự DPF : Delayed permeability factor E.coli : Escherichia coli LPS : Lipopolysaccharide MR : Metyl-Red mt : Môi trường RV : Rappaport-vassiliadis S. : Salmonella SPV : Salmonella plasmid Virulence TSI : Triple Sugan Iron VP : Voges-proskauer XLD : Xylose lysine Deoxycholate Agar % : Phần trăm [...]... nhi m Salmonella spp ñàn gà R ng lai F2 nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương - ðánh giá t l nhi m Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis gây b nh ñàn gà R ng lai F2 nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương - ð ra bi n pháp phòng b nh cho ñàn gà R ng lai F2 nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương Trư ng ð i h c Nông Nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………………… 2 1.3 Ý nghĩa khoa h c và th... Salmonella gây b nh gia c m cho ñ n nay chưa ñư c nghiên c u nhi u, ñ c bi t là 2 loài Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis gây b nh gà R ng lai F2 Xu t phát t v n ñ nêu trên, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: “Tình hình nhi m Salmonella spp, phân l p ñ nh typ Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis gà R ng lai F2 (♀ Ri vàng rơm x ♂ R ng) nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương 1.2 M... chăn nuôi trang tr i thu c cơ c u chăn nuôi gà công nghi p Hi n nay ñàn gà R ng ñã phát tri n r t nhanh v m t s lư ng, ñ ñáp ng nhu c u th trư ng và b o t n ngu n gen quý hi m c a gà R ng, bên c nh ñó Trung tâm c u h và b o t n ñ ng v t hoang dã thu c vư n Qu c gia Cúc Phương ñã nghiên c u lai t o gà R ng v i gà Ri vàng rơm t o ra ñư c con lai F2 v i 3/4 máu gà R ng và 1/4 máu gà Ri vàng rơm Con lai. .. c ti n - T l nhi m Salmonella spp gà R ng lai F2 nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương - Xác ñ nh ñư c 2 loài Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis và các y u t gây b nh c a chúng trong ñi u ki n phòng thí nghi m và trên ñ ng v t thí nghi m - ðưa ra các bi n pháp phòng, tr thích h p nh m làm gi m thi t h i do 2 loài ñó gây ra trên ñàn gà R ng lai F2 nuôi t i vư n Qu c gia Cúc Phương Trư ng ð i... ñàn gà R ng ñang nuôi t i Trung tâm nói chung Salmonella spp thu c h vi khu n ñư ng ru t Enterobacteriaceae Salmonella spp gây b nh cho h u h t các loài gia súc, gia c m, ñ ng v t máu nóng, máu l nh, các loài g m nh m, côn trùng và ngư i B nh do Salmonella gây ra ph bi n kh p các châu l c Salmonella ñã ñư c phát hi n t cu i th k 18 và ñư c nghiên c u t hơn 100 năm nay Song nh ng v n ñ v Salmonella ngày... ñ c tính t t c a gà R ng và gà Ri Do v y, con lai có giá tr kinh t cao, như: th t thơm ngon, ñ m n, sinh trư ng nhanh, s c ñ kháng cao ðây là m t loài v t nuôi m i ñ y tri n v ng, góp ph n c i thi n ñ i s ng kinh t cho bà con vùng cao và vùng ñ m c a vư n Qu c gia Cúc Phương Tuy nhiên, v n ñ g p ph i ñây là tình hình d ch b nh, ñ c bi t là b nh do Salmonella gây ra trên ñàn gà lai F2 nói riêng và ñàn... Wilcock B.P và Schwartz K.J (1992); Selbizt H-J và cs (1995), b nh phó thương hàn c p tính l n con do S.choleraesuis và Kunzendorf b nh vi m ru t mãn tính do S.typhimurium các loài S.dubtin, S.anatum ng a do S.abortusequi trâu, bò ch y u là do gia c m và chim là do S.pullorum, S.gallinarum và S.enteritidis 2.1.2 Tình hình nghiên c u Salmonella t i Vi t Nam Vi t Nam, vi khu n Salmonella và b nh do chúng... c a White và Kauffmann v c u trúc kháng nguyên c a Salmonella (Sam và cs, 1970) – Trích theo Tr n Quang Diên (2001) Trên ngư i và ñ ng v t, các tác nhân gây b nh như vi khu n Salmonella, vi khu n lao, nhi t thán,… ñã ñư c nghiên c u và phát hi n hơn 100 năm nay Năm 1880, Eberth l n ñ u tiên quan sát th y vi khu n trên kính hi n vi Năm 1884, Gaffky nuôi c y thành công vi khu n Loài vi khu n Salmonella. ..PH N I M ð U 1.1 Tính c p thi t c a ñ tài Vư n Qu c gia Cúc Phương là m t ñ a ñi m kh o c , v i t ng di n tích 22.200 ha, vư n có h ñ ng v t r t phong phú: g m 97 loài thú, 137 loài chim, 76 loài bò sát, 46 loài lư ng cư, 11 loài cá và hàng ngàn loài côn trùng Nhi u loài n m trong sách ñ Vi t Nam, và g n ñây cũng ph i k ñ n gi ng gà R ng mà vư n Qu c gia Cúc Phương ñã và ñang áp d ng nuôi v i m t quy... bi u th b ng các ký hi u SPV (Salmonella plasmid Virulence) R, A, B, C và D Dư i kính hi n vi ñi n t có th quan sát và xác ñ nh ñư c tính ñ ng nh t c a các plasmid ñ c l c (35 - 99%) - Cơ ch gây b nh c a vi khu n Salmonella Theo Jones, Richarson (1981), vi khu n Salmonella gây b nh thông qua hai phương th c: m t là tác ñ ng cơ h c do quá trình bám dính và xâm nh p c a vi khu n, hai là tác ñ ng do các . Salmonella spp ở ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương. - ðánh giá tỷ lệ nhiễm Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis gây bệnh ở ñàn gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc. mẫu phân, trứng, gà con chết, phủ tạng gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 50 Bảng 4.2. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở một số cơ quan của gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc. quả phân lập vi khuẩn Salmonella 49 4.1.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella ở một số cơ quan của gà Rừng lai F2 nuôi tại vườn Quốc gia Cúc Phương 51 4.1.2. Kết quả phân lập vi khuẩn Salmonella