Đang tải... (xem toàn văn)
TRÍCH LY ENZYME FICIN TỪ MỦ CÂY SUNG Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của Công nghệ sinh học, công nghiệp sản xuất các chế phẩm enzyme cũng ngày càng phát triển và có ứng dụng to lớn trong nhiều lĩnh vực khác nhau.
Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của Công nghệ sinh học, công nghiệp sản xuất các chế phẩm enzyme cũng ngày càng phát triển và có ứng dụng to lớn trong nhiều lĩnh vực khác nhau. Trong những năm gần đây, giá trị thương mại của các enzyme công nghiệp trên toàn thế giới đạt khoảng 2 tỷ USD, trong đó chủ yếu là các enzyme thủy phân (75%), và protease là nhóm enzyme được ứng dụng nhiều nhất (60%). (http://ir.cftri.com:8080/417/1/T-1952.pdf) Protease là nhóm enzyme thủy phân liên kết peptide trong phân tử protein, rất cần thiết cho các sinh vật sống nên có mặt trên nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm, virus ) đến động vật (gan, dạ dày bê ) và thực vật (đu đủ, dứa, sung ) rất đa dạng về chức năng từ mức độ tế bào, cơ quan đến cơ thể. So với protease động vật và vi sinh vật, protease thực vật có những đặc điểm rất khác biệt khó có thể thay thế được. Có 3 loại protease thực vật phổ biến nhất là bromelain, papain và ficin. Bên cạnh 2 loại enzyme đã được nghiên cứu rõ ràng và có nhiều ứng dụng cụ thể là bromelain và papain thì ficin cũng là một enzyme quan trọng có nhiều ứng dụng cần được đầu tư nghiên cứu. Ficin được sử dụng nhiều nhất trong một số ngành sản xuất như: chế biến thực phẩm (làm formage, làm mềm thịt, bổ sung để chống lại hiện tượng tủa protein trong quá trình làm trong bia, ngăn cản sự hóa nâu rau củ, xử lý phụ phế phẩm trong chế biến thực phẩm…), trong y học như làm thuốc hỗ trợ tiêu hóa, tẩy giun Ngoài ra, có nhiều ứng dụng đang được nghiên cứu như sản xuất thuốc làm tan máu bầm, trị bệnh ngoài da, mụn nhọt. Có thể thấy, sung là một loại cây dễ trồng, phát triển nhanh và enzyme ficin được trích từ mủ sung là một loại enzyme có nhiều ứng dụng to lớn do đó đề tài “Trích ly enzyme ficin từ mủ cây sung” được thực hiện nhằm tạo cơ sở cho các nghiên cứu ứng dụng về sau. Khảo sát khả năng thu nhận enzyme ficin. Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến hoạt độ enzyme ficin. Khảo sát khả năng bất hoạt sự hóa nâu ở rau quả sơ chế. Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 1 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT !"#$ %&'()*+,) ) /0123)&'()*+,) ) Nhóm enzyme protease (peptide – hydrolase 3.4) xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết peptide R 1 -CO-NH-R 2 trong phân tử protein và polypeptide tạo sản phẩm là pepton, di-, tri-peptide, amino acid và là một trong những nhóm enzyme quan trọng phổ biến có nhiều ứng dụng trong công nghiệp và có thể thu nhận từ nhiều nguồn khác nhau: protease thực vật (papain, bromelain, ficin), động vật (pepsin, trypsin, pancretin, ), vi sinh vật (protease từ nấm mốc, vi khuẩn ). (Đồng Thị Thanh Thu, 1996) Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este và vận chuyển acid amin. Protease (peptidase) thuộc nhóm chính 3, nhóm phụ 4 (EC.3.4) 45/06*571,859()&'()5:'*57*+,) Protease được phân chia thành hai nhóm: endopeptidase và exopeptidase. Exopeptidase: cắt cầu nối peptidic ở đầu mạch (carboxipeptidase, aminopeptidase, dipeptidase…). Dựa vào vị trí tác động trên mạch polypeptide, exopeptidase được phân chia thành hai loại: o Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu N tự do của chuỗi polypeptide để giải phóng ra một amino acid, một dipeptide hoặc một tripeptide. Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 2 Protease (EC.3.4) Exopeptidase (E.C. 3.4.11-17) Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) Aminopeptidase Carboxypeptidase Serine proteinase Cystein proteinase Aspartic proteinase Metallo proteinase Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT o Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu C của chuỗi polypeptide và giải phóng ra một amino acid hoặc một dipeptide. Endopeptidase: tác dụng vào các phần trung tâm của mạch polypeptid (pepsin, tripsin, chymotripsin, papain…). Dựa vào động học của cơ chế xúc tác, endopeptidase được chia thành bốn nhóm: o Serin protease: là những protease chứa nhóm –OH của gốc serine trong trung tâm hoạt động và có vai trò đặc biệt quan trọng đối với hoạt động xúc tác của enzyme. Nhóm này bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin và subtilisin. Nhóm chymotrypsin bao gồm các enzyme động vật như chymotrypsin, trypsin, elastase. Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn như Subtilisin carlsberg, Subtilisin BPN. Các serine protease thường hoạt động mạnh ở vùng kiềm tính và thể hiện tính đặc hiệu cơ chất tương đối rộng. o Cysteine protease: Các protease chứa nhóm –SH trong trung tâm hoạt động. Cystein protease bao gồm các protease thực vật như papain, bromelin, một vài protein động vật và protease ký sinh trùng. Các cystein protease thường hoạt động ở vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu cơ chất rộng. o Aspartic protease: Hầu hết các aspartic protease thuộc nhóm pepsin. Nhóm pepsin bao gồm các enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, renin. Các aspartic protease có chứa nhóm carboxyl trong trung tâm hoạt động và thường hoạt động mạnh ở pH trung tính. o Metallo protease: Metallo protease là nhóm protease được tìm thấy ở vi khuẩn, nấm mốc cũng như các vi sinh vật bậc cao hơn. Các metallo protease thường hoạt động vùng pH trung tính và hoạt độ giảm mạnh dưới tác dụng của EDTA. Ngoài ra, protease được phân loại một cách đơn giản hơn thành ba nhóm: - Protease acid: pH 2-4 - Protease trung tính: pH 7-8 - Protease kiềm: pH 9-11 Nguồn thu nhận enzyme protease: -;+,) ).5< Hầu hết các nhóm vi khuẩn, nấm mốc và xạ khuẩn đều có khả năng tổng hợp protease. Các chủng có khả năng tổng hợp mạnh protease là Bacillus subtilis, B. mesentericus, B. Thermorpoteoliticus, Aspergillus oryzae, A. terricola, A. fumigatus, Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 3 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT A. saitoi, Penicillium chysogenum, A. candidatus, P. cameberti, P. roqueforti…) (Lê Ngọc Tú, 1982) =;+,) )>?< Nguồn protease từ động vật đã được ứng dụng từ lâu đời với nguồn gốc từ nội tạng như pepsin, tripsin, từ dạ dày bê như renin, và cả protease được trích từ ruột cá basa. ;+,) )5@< Có 3 loại protease thực vật phổ biến nhất là bromelain, papain và ficin. Papain thu được từ nhựa của lá, thân, quả đu đủ (Carica papaya) còn bromelain thu từ quả, chồi, và vỏ dứa (Pineapple plant) và ficin thu được từ nhựa cây họ sung (Ficus). A?B?:-)&'()*+,) ) Protease được sử dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp khác nhau: - Trong công nghiệp thực phẩm: Trong công nghiệp thịt, đồ hộp: làm mềm thịt, tăng hương vị và giá trị thịt sau khi chế biến. Trong công nghiệp chế biến sữa: dùng các protease làm đông tụ sữa (renin), protease vi sinh vật khác (Bacillus mensentericus, Mucor…) trong sản xuất fomage. Công nghiệp nước giải khát: làm trong bia, rượu, nước quả. Công nghiệp nước chấm, nước mắm: rút ngắn quá trình thủy phân, chế biến nước mắm, muối cá, sản xuất bột cá… - Trong y học: thuốc tiêu hóa, dùng cô đặc tinh chế huyết thanh miến dịch, thuốc điều trị nghẽn tĩnh mạch, tiêu mủ vết thương… - Trong công nghiệp nhẹ: Mỹ phẩm: dùng trong sản xuất xà phòng, dầu gôi, kem bôi da… Bột giặt: tăng khả năng tẩy rửa các vết bẩn. Thuộc da: làm sạch lông, mềm da. Tơ tằm: có thể sử dụng để làm bóng và tách rời các sợi tơ tằm do thủy phân lớp sericine làm dính bết các sợi tơ tự nhiên. (Lê Ngọc Tú, 2004) %&'()C Enzyme ficin hay còn gọi là ficain là một thiol-protease có trong dịch nhựa của các loài sung,vả thuộc giống Ficus, họ Moraceae. Tương tự các protease thực vật khác Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 4 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT (papain, bromelain) ficin cũng có chứa nhóm sulfhydryl (-SH) ở trung tâm hoạt động, quyết định hoạt tính xúc tác của enzyme. (Nguyễn Đức Lượng, 2004) Mã số phân loại: EC 3.4.22.3 D5.E*5F5G Người ta thấy rằng cách đây hàng mấy thế kỉ, chất dịch nhựa của các cây sung, vả đã được sử dụng để làm đông tụ sữa và sản xuất fomage. Hàng thế kỉ nay, ở Trung Quốc và Nam Mỹ, chất nhựa của loài Ficus glasbrata và Ficus laurifolia được biết đến như một loại thuốc uống để trị các bệnh do ký sinh trùng đường ruột gây ra. (Julia et al., 1987) Robbins (1930) phát hiện ra một loại enzyme có trong nhựa cây sung, vả có thể tiêu hóa được loài giun tròn Acaris còn sống do đó có thể tiêu diệt được chúng. Ông là người đầu tiên nghiên cứu enzyme này và đặt tên là ficin. Caldwel (1943) nhận thấy chất nhựa các loài cây Ficus có khả năng tiêu diệt loài sán dây Trichuris trichura. Walti (1938) là người đầu tiên kết tinh được enzyme từ nhựa sung tươi. Sau này, quá trình tách chiết và tinh sạch ficin được nhiều tác giả nghiên cứu trong thời gian rất dài. Nhìn chung các quá trình tinh sạch ficin đều liên quan đến việc tủa sơ bộ bằng muối. Sự tủa sơ bộ bằng muối đối với ficin được thực hiện lần đầu bởi Englund (1968). (Sidney et al., 1970) ?6?H55< Ficin là một protease được tìm thấy trong dịch nhựa của những cây thuộc giống Ficus. Các cây thuộc giống Ficus có tên gọi thông thường là sung, vả, họ Moraceae, bộ Urticales. Ở Việt Nam, giống Ficus có khá nhiều loài khác nhau. Có thể kể tên một số loài sung, vả theo tài liệu của Giáo sư Phạm Hoàng Hộ (1962) như sau: Sung trổ (Ficus variegata) Sung (Ficus racemosa L.) Sung ba thùy (Ficus hirta) Sung thằn lằn (Ficus pumila L.) Vả (Ficus auriculata Lour) Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 5 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT Sau đây là đặc điểm mô tả của một số loài thuộc giống Ficus có ở Việt Nam: Cây vả (Ficus auricalata Lour): cây đại mộc nhỏ, thân to, nhánh to. Lá to gần như tròn, mặt đưới có 5-7 gân lá, cuống lá khoảng 2,5cm, quả làm rau ăn. Cây được trồng nhiều nơi ở Việt Nam và mọc hoang trong rừng. (Phạm Hoàng Hộ, 2000) Cây sung trổ (hay còn gọi là ngõa rừng, vả rừng) (Ficus variegata Blume) là cây thân gỗ nhỏ, có nhánh, đường kính 5-6 mm rất nhẵn. Lá hình trái xoan ngược, tù và có khi tròn ở gốc, đầu hơi nhọn hoặc không, mặt trên lá rất nhẵn, bóng, mặt dưới màu nhạt, mép lá có hoặc hơi có răng cưa không đều, lá dài 13-22 cm, rộng 5-13 cm, cuống 2-4 cm. Quả xếp 1-2 quả trên các nhánh từ gốc hoặc trên thân già, có cuống, quả hình cầu, nhẵn hoặc có lông mịn, quả khi chín có màu lục sọc đỏ hoặc đỏ, đường kính 3-4 cm. Quả chín có vị ngọt. Cây si (Ficus benjamica L.) là cây ưa ẩm, mọc hoang, hiện nay được trồng ở nhiều nơi. Nhựa để chữa ứ huyết, nhức mỏi, chữa ho, cắt cơn hen. Cây vú bò, hay vú chó (Ficus heterophyllus L.) mọc hoang ở vùng đồi, ven rừng dùng làm thuốc bổ chữa hư lao, bạch đới, ngâm rượu chữa tê thấp. Cây xộp (Ficus pumila L. hay Ficus glomerata Roxb) mọc hoang nhiều nơi và được trồng ở một số vùng, dùng làm thuốc bổ, quả làm mứt ăn ngon. (Luisa et al., 2000) Cây sung (Ficus racemosa L.) là loài cây nhỏ, không có rễ phụ, cành mềm có nhiều vảy, u lồi và sẹo, lúc non có lông nâu mềm, lá hình bầu dục thuôn tù ở gốc, nhọn ở đỉnh, mặt trên bóng, mép nguyên hay nhăn nheo, trên phiến lá có nhiều u nhỏ gọi là vú sung. Quả phức xếp dày đặc ở thân, cành, màu đỏ nâu khi chín, có hoa quanh năm, quả ăn được. Cây thường mọc ở nơi ẩm ướt, bờ ao. (Võ Văn Chi, 1990) Theo Giáo sư Đỗ Tất Lợi (1981) Ficus racemosa L. mọc hoang và được trồng khắp nơi ở Việt Nam. Tên thông thường là sung, ưu đàm hoặc Lova (tiếng Campuchia). Loài sung này có thân cây to, không có rễ phụ. Thân có nhựa màu trắng như sữa, lá hình mũi giáo, đầu nhọn. Lá non cả 2 mặt đều phủ lông, phiến lá nguyên hoặc hơi có răng cưa, dài 4-10 cm, rộng 4-8 cm. Lá sung bị loài sâu Syllidae ký sinh gây ra những mụn nhỏ. Quả mọc thành từng chùm trên thân hoặc những cành to không mang lá. Khi chín quả màu đỏ nâu, mặt quả phủ lông mịn, cuống quả ngắn. Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 6 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT Hầu hết các bộ phận của cây có chứa nhựa, thành phần gồm: cao su 2.4%, resin, albumin, cerin, malic acid, renin, protease, diatase, esterase, lipase, đường, catalase, peroxidase và đặc biệt là ficin (Nguyễn Đức Lượng, 2004). Từ nhựa có thể tách chiết được enzyme ficin sử dụng cho quá trình làm mềm thịt, làm tan máu bầm, hoặc lọc trong nước giải khát Ngoài ra, từ các cây giống Ficus người ta còn tách chiết được một số hợp chất tự nhiên khác như: monoterpenoid, triterpenoid, các hợp chất phenol, flavonoid (Luisa et al., 2000) I8,59-5J Những kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học của enzyme ficin ở những phòng thí nghiệm khác nhau thì khác nhau. Tuy nhiên sự khác nhau này chấp nhận được vì có thể do tính đồng nhất của các chế phẩm enzyme thu được theo những tiến trình khác nhau ở mỗi phòng thí nghiệm. Ngoài ra, một trong những lý do dẫn đến sự khác nhau này liên quan đến những hoạt chất có hoạt tính chuyên biệt được phân tách ra từ dạng nhựa thô. Bên cạnh đó, sự thu nhận chế phẩm enzyme ficin từ những loài khác nhau cũng là một nguyên nhân quan trọng tạo nên sự khác nhau này. (Sidney et al., 1970) Theo Marini-Betolo (1963), Metrione (1963), Gould (1964) thu được kết quả thành phần các acid amin từ quá trình nghiên cứu chế phẩm enzyme ficin được tinh sạch chỉ bằng phương pháp tủa phân đoạn bởi muối trung tính. Ngoài ra Englund (1968) đã xác định thành phần acid amin thu nhận từ quá trình tủa bằng muối và sắc ký trên CM-cellulose. Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 7 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT KL?55*5M-(,-B:-*57E)&'()C / N(,-B F?L?5O -+PK),1, )+,) ,1 B %?1B 1 Lysin 7 9 9 5 2 Histidine 2 2 2 1 3 Amonia - - 52 25 4 Arginine 8 7 10 10 5 Aspartic acid 20 21 21 17 6 Threonine 10 8 10 8 7 Serine 13 10 16 14 8 Glutamic acid 22 23 25 25 9 Proline 11 12 13 11 10 Glycine 28 30 32 28 11 Alanine 19 21 21 20 12 Half-cystine 7 4 9 8 13 Valine 15 15 19 18 14 Methionine 3 3 4 5 15 Isoleucine 7 10 10 7 16 Leucine 14 17 17 15 17 Tyrosine 11 14 15 15 18 Phenylalanine 6 5 6 5 19 Tryptophan 3 - 9 6 Q?.H?H-(,-B R 206 211 300 243 *số lượng các gốc amino acid/ 1 mol protein Cấu trúc bậc I của ficin có chứa nhóm sulfhydryl (-SH). Trình tự các amino acid ở gần trung tâm phản ứng khá giống với trình tự đã được tìm thấy của những thiol- protease thực vật như papain và bromelain. Tuỳ theo nguồn thu nhận enzymee ficin từ các loài khác nhau mà thành phần hóa học sẽ khác nhau. (Nguyễn Đức Lượng, 2004) Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 8 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT 45+45@F-B-(S(TU?17<59(V/5,8>?T )&'()C.,.F5W*-*-=+,()1- (Whitaker, 1994) a: kết quả được trình bày bởi R.C. Wong và I.E. Liener (1964) xác định trên chế phẩm ficin tinh sạch bởi muối. b: kết quả do A. Light, R. Frater, J.R. Kimmel và E.L. Smith (1964). c: kết quả do L.P. Chao và I.E. Liener (1967), Husain và G. Lowe (1968). Tính tương đồng về trình tự của các acid amin nằm quanh vùng hoạt động của các protease thực vật trên phản ánh một cơ chế xúc tác chung. XY55<1Z Tùy theo nguồn thu nhận enzyme ficin mà tính chất vật lý của chúng không giống nhau. Tuy nhiên sự khác nhau này không lớn. Một bảng tóm tắt về những tính chất vật lý nghiên cứu được được trình bày ở bảng 2. Tất cả các số liệu đều thu được từ việc nghiên cứu trên các loài sung ở nước ngoài. Các kết quả ở bảng 3 tuy khác nhau nhưng sự chênh lệch không lớn. Như vậy chúng ta có thể xác định một số tính chất vật lý chung của enzyme ficin như sau: Một số tính chất vật lý: • Trọng lượng phân tử : 23000 – 27000 dalton • Nhiệt độ có hoạt tính : 30 -80 0 C. Nhiệt độ tối ưu cho hoạt tính xúc tác: 50-65 o C • Hệ số lắng : 2,5 - 2,7 S • Điểm đẳng điện : 9-10 • Không tan trong hầu hết dung môi hữu cơ nhưng tan một phần trong nước hoặc glycerine (Nguyễn Đức Lượng, 2004) KL?5[?Y55<1Z:-C\/B)';,1,]^)-1_`abc Nguồn thu nhận Phương pháp tinh sạch Hệ số lắng (S 0 ) Trọng lượng phân tử Điểm đẳng điện Hệ số tinh sạch Hệ số tắt Bước sóng (nm) Tác giả F. glabrata Tủa muối → sắc ký trên CM_cellulose, pH7 25.500 ± 750 1,95 21,0 267 Englund F. glabrata Chỉ tủa muối 2,56 S 26.000 Bernhard và Gutfreund F. glabrata Tủa muối → sắc 2,61 S 23.500 ± 700 Liener Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 9 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2011 Trường ĐHCT ký trên CM_cellulose, pH4,4 F. carica var Kadota Mỗi hợp chất có hoạt tính được tách trực tiếp từ nhựa bằng sắc ký trên CM_cellulose, pH7 > 9,6 1,88 20,2 Kramer và Whitaker F. anthelmitica Chỉ tủa muối 26.500 Marini Bettolo dY5559-5J − Dịch nhựa tươi cây sung có pH = 5 − pH hoạt động của ficin khá rộng, từ pH 4-9,5 − pH tối thích (pH opt ) của ficin phụ thuộc vào loại cơ chất của enzymee: gelatin : pH opt = 5, casein : pH opt = 9.5 , hemoglobin: pH opt =7. Đối với cơ chất nhân tạo như benzoyl-L-arginine ethyl ester, benzoyl L-argininamide, hippurylamide và hippuryl methylester thì pH opt = 6,5 (Nguyễn Đức Lượng, 2004) − Ở dạng nhựa tươi, ficin dễ bị oxy hoá bởi không khí làm cho dịch nhựa chuyển sang màu hồng nâu hoặc nâu và đồng thời hoạt tính xúc tác bị giảm xuống. − Dưới tác dụng của các tác nhân oxy hóa, ficin bị mất hoạt tính. Ie,8>? -05fF>? Hầu hết các tác giả đều thừa nhận vai trò nhóm –SH của cystein, nhóm imidazole của histidine trong hoạt động thủy phân của ficin. Nhóm –SH tham gia tạo thành acyl-thioester trung gian với nhóm carboxyl của cơ chất (nơi các liên kết peptide bị cắt). Nhóm imidazole làm chất trung gian nhận gốc acid và chuyển cho nhóm anion của chất nhận khác. Cầu nối S-S có vai trò duy trì cấu trúc không gian của enzyme. Đầu tiên, ficin kết hợp với protein và thủy phân sơ bộ cho ra polypeptide và acid amin. Protein kết hợp với nhóm –SH của enzyme khiến nó bị ester hóa rồi nhóm imidazole sẽ khử ester để giải phóng enzyme, acid amin và peptide. Chuyên ngành Công nghệ sinh học Viện NC&PT Công nghệ sinh học 10 [...]... các vi sinh vật Enzyme- Mix: Kết hợp các enzymee bromelain các enzyme bromelain từ quả dứa, papain từ quả đu đủ và ficin từ quả sung hỗ trợ tiêu hóa protein Ficin: hỗ trợ tiêu hóa Hình 4 Chế phẩm Enzyme Wied N 2.3.7 Hình 5 Chế phẩm Enzyme- Mix Hình 6 Chế phẩm Ficin Tình hình nghiên cứu về enzyme ficin Nghiên cứu tại Universidade Federal de Rio de Janeiro (Brazil) ghi nhận ficin trích từ F carica khi... phẩm enzyme ficin thương mại Ficin thương mại là hỗn hợp một số protease và một ít peroxidase cộng thêm chất độn (đường hoặc bột), màu nâu nhạt, không mùi hoặc có thể là nhựa sung tươi được trích từ thân sau đó lọc rồi sấy phun hoặc đem sấy rồi nghiền thành bột Enzyme Wied N: Chứa hỗn hợp của các enzyme thực vật như: bromelain, papain, lipase, amylase, ficin, chiết xuất hạt nho và cây cà chua bổ sung. .. 3.1.2 Nguyên vật liệu Mủ sung được thu vào buổi sáng từ khoảng 6-8h; dùng dao chặt trên thân cây cho mủ chảy ra và hứng vào lọ thủy tinh có màu đậy kín Các mẫu khoai lang, táo tây (Malus domestaca), khoai tây dùng khảo sát khả năng kìm hãm sự hóa nâu của enzyme 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Thí nghiệm 1: Xác định thời điểm thu mủ sung a Mục đích Khảo sát thời điểm lấy mủ cho enzyme có hoạt tính thủy... điểm thu mủ sung từ 6-8h sẽ cho dịch trích có hoạt tính cao nhất với 3,205 U/ml và khác biệt có ý nghĩa so với hoạt tính enzyme trích ly vào các thời điểm 10-12h và 16-18h ở độ tin cậy 95% Hệ số tương quan R-sq= 98,95% khá cao do đó số liệu có giá trị tin cậy cao Nguyên nhân có thể là do vào sáng sớm, các hoạt động sinh lý của cây diễn ra mạnh mẽ nhất, trong đó có hoạt động sinh tổng hợp enzyme Enzyme... là do mủ sung bị oxi hóa (hóa nâu) bởi ánh sáng mạnh làm enzyme bị mất hoạt tính 4.2 Tỷ lệ nước thích hợp cho quá trình thu enzyme ficin từ mủ sung Tỷ lệ nước thích hợp được xác định thông qua hoạt độ riêng của mỗi mẫu pha loãng Điều kiện khảo sát: t0 = 370C, t = 15 phút, pH=8.5, VE = 50µl, cơ chất casein 1% Kết quả được trình bày ở bảng 3 Bảng 4 Ảnh hưởng của tỉ lệ nước đến hoạt tính enzyme ficin. .. hóa nâu của enzyme ficin trên rau quả a Mục đích Trong tế bào rau củ, trái cây có chứa các hợp chất phenol và enzyme polyphenoloxydase (PPO) Khi bị cắt gọt, các tế bào vỡ ra ở mặt cắt cơ học, enzyme PPO oxy hóa các hợp chất phenol thành các ortoquinon có màu nâu sẫm trong điều kiện có oxy Hợp chất phenol PPO hợp chất ortoquinon O 2 (màu nâu) Ficin là protease có thể làm bất hoạt enzyme polyphenol oxydase... Trong y học Chế phẩm enzyme ficin chưa được ứng dụng nhiều, tuy nhiên người ta đã sử dụng enzyme này làm thuốc xổ giun, trị các bệnh do ký sinh trùng đường ruột gây ra, loét da, đau họng, dùng làm thuốc thử tế bào máu (Sidney et al., 1970) Ở Việt Nam, enzyme ficin tinh sạch chưa phổ biến và chưa được dùng trong y học nhưng từ lâu, nhân dân ta coi nhựa sung, nguồn thu nhận của enzyme ficin là một vị thuốc... mủ ở 3 thời điểm khác nhau trong ngày: - Buổi sáng: 6-8h - Buổi trưa: 10-12h - Buổi chiều: 16-18h Mủ chứa dịch enzyme thu được sẽ được ly tâm 13.000rpm/10 phút thu dịch trong đo hoạt tính protease bằng phương pháp Anson cải tiến c Chỉ tiêu đánh giá Hoạt tính protease 3.2.2 Thí nghiệm 2: Xác định tỉ lệ pha loãng mủ sung bằng nước cất a Mục đích Xác định lượng nước cho vào mủ sung để hòa tan tối đa enzyme. .. hiệu suất thu hồi hoạt tính enzyme ficin Nhận xét: Theo kết quả phân tích ANOVA cho thấy giá trị P-value = 0 nhỏ hơn rất nhiều so với P = 0,05 nên ta có thể kết luận hoạt tính protease thu được (bảng 5) khi trích ly mủ sung : aceton = 1:2 cũng cho kết quả tốt nhất với hoạt tính là 2,641 U/ml và khác biệt có ý nghĩa ở độ tin cậy 95% so với hoạt tính của ficin sau khi trích ly với tỷ lệ lần lượt là 1:1;... ethanol đến hiệu suất thu hồi hoạt tính enzyme ficin Nhận xét: Kết quả phân tích ANOVA cho thấy giá trị P-value = 0 nhỏ hơn rất nhiều so với P = 0,05 nên ta có thể kết luận hoạt tính protease thu được khi trích ly mủ sung : ethanol = 1:3 cũng cho kết quả tốt nhất với hoạt tính là 2,456 U/ml và khác biệt có ý nghĩa ở độ tin cậy 95% so với hoạt tính của ficin sau khi trích ly với tỷ lệ lần lượt là 1:1; 1:2; . thể thấy, sung là một loại cây dễ trồng, phát triển nhanh và enzyme ficin được trích từ mủ sung là một loại enzyme có nhiều ứng dụng to lớn do đó đề tài Trích ly enzyme ficin từ mủ cây sung được. bromelain, papain và ficin. Papain thu được từ nhựa của lá, thân, quả đu đủ (Carica papaya) còn bromelain thu từ quả, chồi, và vỏ dứa (Pineapple plant) và ficin thu được từ nhựa cây họ sung (Ficus). A?B?:-)&'()*+,). )>?< Nguồn protease từ động vật đã được ứng dụng từ lâu đời với nguồn gốc từ nội tạng như pepsin, tripsin, từ dạ dày bê như renin, và cả protease được trích từ ruột cá basa. ;+,) )5@< Có