Đang tải... (xem toàn văn)
Trong công nghệ di truyền muốn tạo ra ADN tái tổ hợp để đưa vào tế bào chủ cần phải có công cụ cắt plasmid hình vòng và đoạn ADN của tế bào rồi cho chúng nối lại với nhau. Công cụ cắt ADN là các enzym giới hạn 1.Enzyme giới hạn là gì? Enzym giới hạn là enzym có khả năng nhận biết những đoạn trình tự ADN nhất định và cắt ADN ở ngay thời điểm này hay ở điểm kế cận. Tuỳ theo phương thức cắt và nguồi gốc của enzym giới hạn mà người ta phân loại và đặt tên cho các enzym giới hạn đó. Ví dụ : E.coRI, E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, …
GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN : NGUYỄN THỊ VÂN ANH THÀNH VIÊN THỰC HIỆN: TRẦN THĂNG MAI THỊ HỒNG ĐINH THỊ MỸ LIÊN TRẦN QUỐC THIỆN VÕ THỊ QUỲNH ANH NỘI DUNG : 1. EZYME GIỚI HẠN LÀ GÌ ? 2. PHÂN LOẠI ENZYME GIỚI HẠN 3. CÁCH GỌI TÊN 4. ỨNG DỤNG Trong công nghệ di truyền muốn tạo ra ADN tái tổ hợp để đưa vào tế bào chủ cần phải có công cụ cắt plasmid hình vòng và đoạn ADN của tế bào rồi cho chúng nối lại với nhau. Công cụ cắt ADN là các enzym giới hạn 1.Enzyme giới hạn là gì? Enzym giới hạn là enzym có khả năng nhận biết những đoạn trình tự ADN nhất định và cắt ADN ở ngay thời điểm này hay ở điểm kế cận. Tuỳ theo phương thức cắt và nguồi gốc của enzym giới hạn mà người ta phân loại và đặt tên cho các enzym giới hạn đó. Ví dụ : E.coRI, E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, … Các enzyme giới hạn có 2 đặc tính : - Không cắt các liên kết Photphodieste ở đầu đoạn tận cùng thay vào đó là cắt bên trong phân tử DNA - Chỉ cắt khi nhận ra các trình tự đặc thù thường gồm 4-8 nucleotid 2.Phõn loi enzyme gii hn Cỏc enzym gii hn c phõn thnh 3 kiu I, II v III. Nhóm Hoạt động Cofactor Cơ chất I Enzym đa chức năng nucleaza / methylaza, đa tiểu phần, 400.000 dalton ATP Mg 2+ SAM Cắt ngẫu nhiên trên phân tử ADN sợi kép cách trình tự giới hạn 4000 - 7000 bp II Endonucleaza / methylaza Mg 2+ Cắt phân tử ADN sợi kép thành 2 phần ở vị trí giới hạn III Enzym đa chức năng nucleaza / methylaza, đa tiểu phần, 250.000 dalton ATP a Mg 2+ b SAM Có trình tự nhận biết đặc hiệu gồm 5 hoặc 6 bp, nh ng cắt cách trình tự này 10 - 27 bp về phía đầu 3 Enzyme giới hạn loại II được sử dụng chủ yếu vì nó cắt tại vị trí giới hạn thường cắt ở trình tự dọc theo chiều xuôi-ngược như nhau. Phải chọn enzyme giới hạn cắt ở 2 đầu gen nhưng không cắt bên trong gen. Các vị trí cắt của Enzym giới hạn Cắt đầu lệch Cắt đầu bằng Tªn enzym Tr×nh tù nhËn biÕt Dde I C TNAG Hae III GG CC Hga I GACGC (N) 5 Hha I GCG C Hinf I G ANTC Hin PI G CGC Mnl I CCTC (N) 7 Rsa I GT AC Taq I T CGA Một số enzyme giới hạn cắt trên mạch đơn : 3.Cách gọi tên Tên enzym giới hạn được ghép bởi chữ cái đầu tiên là tên chi và hai chữ tiếp theo là hai chữ cái tên loài của vi sinh vật mà enzym được tách chiết. Nhưng chữ và số La mã tiếp theo là tên của chủng và dòng của loài sinh vật cụ thể đã tách chiết enzym. Ví dụ: E.coRI (thuộc chi Escherichia, loài coli, chủng Ry 13) Một số loại khác như E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, … Enzym giới hạn được gọi tên dựa vào vi khuẩn mà chúng được phân lập theo cách dưới đây : E Escherichia (giống ) Co coli (loài ) R RY13 ( chủng ) I First identified Order ID'd in bacterium 4. Ứng dụng Ngày nay người ta biết rất nhiều enzyme khác nhau loại này và chúng là một trong những công cụ sinh học phân tử thiết yếu, đặc biệt thường gặp trong các ứng dụng dòng hóa gene hay phân tích DNA. a. DNase I : tạo ra các phân đoạn DNA, vector đầu tư… b. Mungbean nuclease : “cắt gọt” các plasmid, gắn phân tử DNA vào đúng khung đọc theo đúng chiều mong muốn,… c. RNaseH : - Cắt một trình tự đặc hiệu bằng cách tạo ra đoạn lai RNA/DNA - Loại đi đầu Poly (A) của phân tử mRNA trong điện di để làm giảm hiện tượng nhiễu khi phân tích RNA - Loại bỏ phân tử mRNA khi tổng hợp cDNA . về phía đầu 3 Enzyme giới hạn loại II được sử dụng chủ yếu vì nó cắt tại vị trí giới hạn thường cắt ở trình tự dọc theo chiều xuôi-ngược như nhau. Phải chọn enzyme giới hạn cắt ở 2 đầu gen. cắt và nguồi gốc của enzym giới hạn mà người ta phân loại và đặt tên cho các enzym giới hạn đó. Ví dụ : E.coRI, E.coRV, BamHI, HaeIII, Smal, … Các enzyme giới hạn có 2 đặc tính : - Không. của tế bào rồi cho chúng nối lại với nhau. Công cụ cắt ADN là các enzym giới hạn 1 .Enzyme giới hạn là gì? Enzym giới hạn là enzym có khả năng nhận biết những đoạn trình tự ADN nhất định và