Đang tải... (xem toàn văn)
Ngày nay xu hướng sử dụng các thảo dược thiên nhiên để trị bệnh đã trở nên phổ biến, việc tìm kiếm những khả năng chữa trị từ các loại thảo dược đã được tiến hành ở nhiều nơi trên thế giới: Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan, ….Trong đó, nấm Linh chi là đối tượng nghiên cứu của nhiều quốc gia. Đặc biệt là các nước vùng Châu Á, vì nó có nhiều tiềm năng về nguồn dược liệu.
LỜI CẢM TẠ Con xin được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến cha mẹ, người đã hết lòng dưỡng dục để cho con có được ngày hôm nay. Xin chân thành cảm ơn! Ban Giám hiệu, quí Thầy Cô trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện cho Tôi trong suốt thời gian học tập. Tất cả các Thầy Cô Bộ môn Công Nghệ Sinh học trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh đã tận tình giúp đỡ và truyền đạt những kiến thức quí báu trong suốt quá trình học tập, cũng như tạo điều kiện tốt cho Tôi thực hiện đề tài. Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy Cổ Đức Trọng và Cô Phan Thị Nhiều đã tận tình giúp đỡ và hướng dẫn Tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Xin chân thành cảm ơn Cô Nguyễn Thị Dung và Thầy Lưu Phúc Lợi đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Cuối cùng, xin gởi lời cảm ơn đến các bạn sinh viên thuộc Bộ môn Công Nghệ Sinh học trường Đại học Nông Lâm, những người động viên Tôi và chia sẻ vui buồn trong suốt thời gian học tập và thực hiện đề tài. Thành Phố Hồ Chí Minh, Ngày 15 tháng 8 năm 2005 Sinh Viên Nguyễn Minh Khang i iii TÓM TẮT NGUYỄN MINH KHANG, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Tháng 8/2005. “KHẢO SÁT SINH TRƯỞNG NẤM LINH CHI ĐEN (Amauroderma subresinosum, Corner) PHÁT HIỆN TẠI VÙNG NÚI CHỨA CHAN - VIỆT NAM” Giáo viên hướng dẫn: ThS. CỔ ĐỨC TRỌNG Đề tài được thực hiện trên đối tượng là nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum), được thu hái từ tự nhiên ở vùng Núi Chứa Chan thuộc tỉnh Đồng Nai - Việt Nam. Do đó, chúng tôi tiến hành khảo sát sinh trưởng nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum) trên các môi trường khác nhau, với mục đích tìm được môi trường thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển. Những kết quả đạt được: - Môi trường nhân giống cấp 1 phù hợp: PGA + 10% dịch chiết cà rốt - Môi trường nhân giống cấp 2 phù hợp: 50% lúa + 25% mạt cưa + 25% cám gạo - Môi trường lỏng PG sợi nấm phát triển tốt - Môi trường sản xuất có hiệu suất cao: Mạt cưa cao su + 5 o / oo SA + 2,5 o / oo DAP - Định tính sơ bộ thành phần hoạt chất sinh học có trong hệ sợi và quả thể nấm Linh chi đen: Saponin, Saponin steroid, triterpenoid, acid béo và hàm lượng polysaccharide thô có trong quả thể nấm Linh chi đen khoảng 1%. i iv MỤC LỤC PHẦN TRANG Trang tựa Cảm tạ .iii Tóm tắt iv Mục lục .v Danh sách các bảng .ix Danh sách các hình x Danh sách các biểu đồ .xi 1. MỞ ĐẦU 1.1. Đặt vấn đề 1 1.2. Mục đích của đề tài .2 1.3. Yêu cầu .2 1.4. Hạn chế .2 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1. Nấm trồng .3 2.1.1. Khái quát về nấm và hình thái học 3 2.1.1.1. Khái quát về nấm .3 2.1.1.2. Hình thái học sợi nấm 4 2.1.1.3. Hình thái học quả thể nấm .5 2.1.2. Sinh lý và biến dưỡng nấm .5 2.1.2.1. Biến dưỡng của sợi nấm 5 2.1.2.2. Sự sinh trưởng của sợi nấm .6 2.1.3. Các giai đoạn phát triển nấm 8 2.1.3.1. Giai đoạn sinh trưởng 8 2.1.3.2. Giai đoạn phát triển 9 2.2. Nấm Linh chi 9 2.2.1. Khái quát chung 9 2.2.2. Vị trí phân loại 10 2.2.3. Đặc điểm hình thái và chu trình sống của nấm Linh chi .10 i v 2.2.3.1. Đặc điểm hình thái của nấm Amauroderma subresinosum 10 2.2.3.2. Chu trình sống sống của nấm Linh chi 11 2.2.4. Điều kiện sống của nấm Linh chi .12 2.3. Nguyên liệu trồng nấm .12 2.4. Thành phần hóa học và đặc tính dược lý của nấm Linh chi .14 2.5. Khả năng chữa bệnh của nấm Linh chi .17 2.6. Giới thiệu sơ lược về hoạt chất sinh học có trong nấm Linh chi 20 2.6.1. Ganoderma polysaccharides (GLPs) 20 2.6.2. Ganoderic Acid .21 2.6.3. Ganoderma Adenosin .22 2.6.4. Alcaloid 22 2.6.4.1. Định nghĩa 22 2.6.4.2. Tính chất 22 2.6.4.3. Công dụng 23 2.6.5. Hợp chất Saponin .23 2.6.5.1. Khái niệm chung về Saponin .23 2.6.5.2. Công dụng 24 2.6.6. Germanium hữu cơ .24 2.7. Phương pháp ổn định dược liệu 24 2.7.1. Chuẩn bị dịch chiết .25 2.7.2. Phương pháp ngâm .25 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 3.1. Thời gian và địa điểm thí nghiệm .26 3.2. Đối tượng thí nghiệm 26 3.3. Vật liệu thí nghiệm .26 3.3.1. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm .26 3.3.2. Hóa chất 26 3.3.3. Môi trường nuôi cấy .26 3.3.3.1. Môi trường dinh dưỡng 26 3.3.3.2. Môi trường nhân giống 28 3.3.3.3. Môi trường mạt cưa cao su 28 3.4. Phương pháp thí nghiệm .28 i vi 3.4.1. Quan sát hình thái quả thể nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum) 28 3.4.1.1. Hình thái quả thể nấm Linh chi đen .28 3.4.1.2. Phương pháp quan sát hệ sợi nấm Linh chi đen 28 3.4.1.3. Phương pháp quan sát bào tử nấm Linh chi đen 28 3.4.2. Khảo sát sinh trưởng sợi nấm Linh chi đen trên môi trường thạch…28 3.4.3. Nghiên cứu quá trình lên men dịch thể .29 3.4.4. Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường nhân giống 30 3.4.5. Khảo sát sinh trưởng và phát triển nấm Linh chi đen trên môi trường mạt cưa cao su .30 3.5. Xác định dược chất có trong nấm Linh chi đen 31 3.5.1. Phương pháp định tính Alcaloid .31 3.5.1.1. Chuẩn bị dịch thử .31 3.5.1.2. Thuốc thử định tính alcaloid 32 3.5.2. Phương pháp xác định hợp chất Saponin .32 3.5.2.1. Thử nghiệm tính tạo bọt .32 3.5.2.2. Thử nghiệm Fontan – Kaudel 33 3.5.3. Định tính Triterpenoid (bằng phản ứng Liebermann - Burchard) 33 3.5.4. Định tính acid hữu cơ .33 3.6. Định lượng polysarcharide (GLPs) .34 3.7. Phương pháp xử lý số liệu 35 4. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 4.1. Quan sát hình thái nấm Amauroderma subresinosum 36 4.1.1. Hệ sợi nấm Amauroderma subresinoum 36 4.1.2. Cấu trúc bào tử nấm Amauroderma subresinosum 36 4.1.3. Hình thái quả thể nấm Amauroderma subresinosum 37 4.2. Sinh trưởng và phát triển của nấm Linh chi đen (Amauroderma subresinosum) …………………………………………………………………………….38 4.2.1. Tốc độ sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên các môi trường thạch…………………………………………………………………….38 i vii 4.2.2. Sự sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường nhân giống …………………………………………………………………… 40 4.2.3. Sự sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường lỏng .42 4.2.4. Sự sinh trưởng và phát triển nấm Linh chi đen trên môi trường mạt cưa cao su .43 4.2.4.1. Giai đoạn sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen .45 4.2.4.2. Giai đoạn phát triển quả thể nấm Linh chi đen 46 4.2.4.3. Đánh giá hiệu suất sinh học trồng nấm Linh chi đen .48 4.3. Xác định dược chất có trong hệ sợi và quả thể nấm Linh chi đen 49 4.3.1. Định tính Alcaloid 49 4.3.2. Định tính Saponin .51 4.3.2.1. Thử nghiệm tính tạo bọt .51 4.3.2.2. Thử nghiệm Fontan – Kaudel 51 4.3.3. Định tính Triterpenoid 52 4.3.4. Định tính acid hữu cơ .52 4.3.5. Định lượng polysaccharide từ quả thể nấm Linh chi đen .53 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận .54 5.2. Đề nghị 54 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 7. PHỤ LỤC i viii DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1. Nồng độ một số dạng muối khoáng cần cho nấm trồng .7 Bảng 2.2. Điều kiện môi trường cần thiết cho sự phát triển nấm Linh chi .12 Bảng 2.3. Hàm lượng các chất có trong mùn cưa .12 Bảng 2.4. Thành phần dinh dưỡng trong cám .13 Bảng 2.5. Các hoạt chất sinh học và dẫn xuất trong nấm Linh chi .15 Bảng 2.6. Lục bảo Linh chi và tác dụng trị liệu 18 Bảng 2.7. Một số bài thuốc chữa bệnh của nấm Linh chi .20 Bảng 2.8. Các hoạt chất Triterpenoid có tác dụng trị bệnh trong nấm Linh chi .21 Bảng 4.1. Tốc độ tăng trưởng của hệ sợi nấm Amauroderma subresinosum trên các môi trường thạch 39 Bảng 4.2. Tốc độ lan sâu hệ sợi nấm Amauroderma subresinosum trên môi trường nhân giống .41 Bảng 4.3. Khả năng tích lũy sinh khối hệ sợi nấm Amauroderma subresinosum trên môi trường lỏng .42 Bảng 4.4. Hiệu suất sinh học đạt được trên các môi trường mạt cưa cao su 48 i ix DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1. Thành phấn cấu tạo nấm Amauroderma subresinosum 11 Hình 2.2. Chu trình phát triển của nấm Linh chi 11 Hình 3.1. Qui trình chiết suất polysaccharide (GLPs) 34 Hình 4.1. Hình thái hệ sợi nấm Amauroderma subresinosum (vật kính x100) 36 Hình 4.2. Cấu trúc bào tử nấm Amauroderma subresinosum (vật kính x100) 37 Hình 4.3. Hình thái quả thể nấm Amauroderma subresinosum 37 Hình 4.4. Hệ sợi nấm Linh chi đen trên các môi trường thạch .39 Hình 4.5. Sự sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường nhân giống 42 Hình 4.6. Sinh khối hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường lỏng PG .43 Hình 4.7. Qui trình nuôi trồng nấm Linh chi 44 Hình 4.8. Bố trí thí nghiệm .45 Hình 4.9. Quá trình hình thành và tăng trưởng quả thể nấm Linh chi đen .47 Hình 4.10. Quả thể nấm Linh chi đen sau 120 ngày .49 Hình 4.11. Kết quả nuôi trồng nấm Linh chi đen .49 Hình 4.12. Định tính Alcaloid với thuốc thử Mayer .50 Hình 4.13. Định tính Alcaloid với thuốc thử Dragendorff .50 Hình 4.14. Thử nghiệm tính tạo bọt từ sinh khối nấm Linh chi đen .51 i x Hình 4.15. Thử nghiệm Saponin toàn phần theo Fontan – Kaudel ở sinh khối nấm Linh chi đen 52 Hình 4.16. Định tính Triterpenoid bằng phản ứng Liebermann – Burchard 52 Hình 4.17. Định tính acid hữu cơ có trong quả thể nấm Linh chi đen 53 Hình 4.18. Sản phẩm bột polysaccharide thô từ quả thể nấm Linh chi đen 53 DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ BIỂU ĐỒ TRANG Biểu đồ 1. Sự sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên các môi trường thạch………40 Biểu đồ 2. Tốc độ lan sâu hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường nhân giống…….41 Biểu đồ 3. Sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường lỏng PG… .………42 Biểu đồ 4. Tỷ lệ sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường mạt cưa cao su ………46 Biểu đồ 5. Hiệu suất sinh học nuôi trồng nấm Linh chi đen ……….48 i xi i xii . Tháng 8/2005. “KHẢO SÁT SINH TRƯỞNG NẤM LINH CHI ĐEN (Amauroderma subresinosum, Corner) PHÁT HIỆN TẠI VÙNG NÚI CHỨA CHAN - VIỆT NAM Giáo viên hướng. thể.................................................29 3.4.4. Khảo sát sinh trưởng hệ sợi nấm Linh chi đen trên môi trường nhân giống 30 3.4.5. Khảo sát sinh trưởng và phát triển nấm Linh chi đen trên môi