Đang tải... (xem toàn văn)
Sự tinh chế và đặc điểm của serin protease từ khuẩn Bacillus Laterosporus AK1 kiềm, chịu nhiệt Tóm tắt. Một loại protease kiềm , chịu nhiệt , ngoại bào phân lập từ Bacillus Laterosporus _ AK1 được làm sạch bởi phương pháp lọc gel G – 200 và những kĩ thuật của phép sắc ký trao đổi ion cenlulo DEAE. Chế phẩm protease thể hiện độ hoạt động tương đối lớn 100% trong chất nền cozein và xuất hiện như một vạch đơn dựa vào kĩ thuật điện di với phân tử khối 86.29 KDA. Hiệu suất thu hồi enzym protease đã được tinh sạch đến 11.1 lần đạt được 34.3%. Khoa nghiên cứu men chất lỏng cũng đã phát hiện ra một vùng thủy phân hoàn toàn nhờ vào sự hoạt động phân giải protein. Điều này phù hợp với vạch đơn đã thu được bằng phương pháp điện di. Enzym protease có PH = 9 và thể hiện độ hoạt động mạnh nhất ở 750C. Khả năng hoạt động của enzym dễ bị ảnh hưởng bởi chất ức chế protease serin đặc trưng PHSF khi có sự có mặt của protease serin cặn bả tại nơi hoạt động .Hoạt động của enzyme mạnh lên khi có mặt các ion kim loại Ca2+ và Mg2+ và enzyme này thích hợp với màng lọc sạch giữ ổn định 75% thậm chí 1 giờ trước khi vi khuẩn phát triển.Chế phẩm protease chuyển sang màu đỏ máu hoàn toàn khi sử dụng với chất tẩy rửa Wheel.
Sự tinh chế và đặc điểm của Sự tinh chế và đặc điểm của serin protease từ khuẩn serin protease từ khuẩn Bacillus Laterosporus AK1 Bacillus Laterosporus AK1 kiềm, kiềm, chịu nhiệt chịu nhiệt Tóm tắt. Tóm tắt. Một loại protease kiềm , chịu nhiệt , ngoại bào phân lập từ Bacillus Một loại protease kiềm , chịu nhiệt , ngoại bào phân lập từ Bacillus Laterosporus _ AK1 được làm sạch bởi phương pháp lọc gel G – 200 và những Laterosporus _ AK1 được làm sạch bởi phương pháp lọc gel G – 200 và những kĩ thuật của phép sắc ký trao đổi ion cenlulo DEAE. kĩ thuật của phép sắc ký trao đổi ion cenlulo DEAE. Chế phẩm protease thể hiện độ hoạt động tương đối lớn 100% trong chất Chế phẩm protease thể hiện độ hoạt động tương đối lớn 100% trong chất nền cozein và xuất hiện như một vạch đơn dựa vào kĩ thuật điện di với phân tử nền cozein và xuất hiện như một vạch đơn dựa vào kĩ thuật điện di với phân tử khối 86.29 KDA. Hiệu suất thu hồi enzym protease đã được tinh sạch đến 11.1 khối 86.29 KDA. Hiệu suất thu hồi enzym protease đã được tinh sạch đến 11.1 lần đạt được 34.3%. lần đạt được 34.3%. Khoa nghiên cứu men chất lỏng cũng đã phát hiện ra một vùng thủy phân hoàn toàn nhờ vào sự hoạt động phân giải protein. Điều này phù hợp với vạch đơn đã thu được bằng phương pháp điện di. Enzym protease có PH = 9 và thể hiện độ hoạt động mạnh nhất ở 75 0 C. Khả năng hoạt động của enzym dễ bị ảnh hưởng bởi chất ức chế protease serin đặc trưng PHSF khi có sự có mặt của protease serin cặn bả tại nơi hoạt động .Hoạt động của enzyme mạnh lên khi có mặt các ion kim loại Ca 2+ và Mg 2+ và enzyme này thích hợp với màng lọc sạch giữ ổn định 75% thậm chí 1 giờ trước khi vi khuẩn phát triển.Chế phẩm protease chuyển sang màu đỏ máu hoàn toàn khi sử dụng với chất tẩy rửa Wheel. GIỚI THIỆU Vi sinh vật ẩn dấu một sự đa dạng của enzym phân giải protein thuộc lớp thứ tư .Nó cũng được tìm thấy trên cơ thể động vật có vú. Protease có tính kiềm được sản xuất bởi Bacillus kiềm , chịu nhệt có thể chịu đưng với nhiệt độ cao, pH, tác nhân làm biến tính hoá học và môi trường không có nước. Vài tác giả có báo cáo (cho rằng) sự sản xuất của protease kiềm ,chịu nhiệt bởi khuẩn que Bacillus kiềm và trung tính thoe phương pháp tổ hợp trung gian. Tuy nhiên có một vài báo cáo dựa trên sản phẩm của protease có tính kiềm bởi khuẩn que Bacillus trong phương pháp nhân tạo. Protease của vi khuẩn tiêu biểu cho một trong những lớp lớn nhất của những enzym công nghiệp, khoản 40% tổng enzym bán ra trên thế giới . Vi khuẩn thể hiện tốt nhất nguồn gốc của enzym bởi những nét đắc trưng của nó. Ví dụ: Ví dụ: Sự rộng lớn hay tính đa dạng của hóa sinh, phát triển nhanh ,yêu cầu về không Sự rộng lớn hay tính đa dạng của hóa sinh, phát triển nhanh ,yêu cầu về không gian nuôi cấy hạn chế. Như là sự không ràng buộc nơi enzym có thể di truyền gian nuôi cấy hạn chế. Như là sự không ràng buộc nơi enzym có thể di truyền nguồn gốc để sinh sản ra enzym mới cho những ứng dụng khác nhau. nguồn gốc để sinh sản ra enzym mới cho những ứng dụng khác nhau. Mặc dù, sự khác nhau của sự phân giải protein và những vi khuẩn đã biết nhưng chỉ một vài trong chúng cung cấp độ họat động (lớn) với những thành công trong thương mại. Bacillus được khai thác một cách rộng lớn phục vụ cho sự sản xuất protease. Protease kiềm đựơc ứng dụng rộng rãi trong một vài ngành công nghiệp như là thuốc làm sạch áo quần trong tiệm giặc ủi, sự thu hồi hoặc hòa tan protein, sự làm mềm thịt, trong công nghiệp đồ da và các cơ sở tổng hợp nhân tạo. Nói chung, protease kiềm là tế bào ngoài tự nhiên và tham gia vào quá trình lên Nói chung, protease kiềm là tế bào ngoài tự nhiên và tham gia vào quá trình lên men bởi vi sinh vật. Như vậy việc đơn giản quá trình sử lý của enzym được so sánh với men bởi vi sinh vật. Như vậy việc đơn giản quá trình sử lý của enzym được so sánh với những protease thu được từ thực vật và động vật một protease kiềm chịu nhiệt từ B. những protease thu được từ thực vật và động vật một protease kiềm chịu nhiệt từ B. Clausii phát triển trong môi trường trung gian Casein đậu tương, protein kiềm được Clausii phát triển trong môi trường trung gian Casein đậu tương, protein kiềm được sản xuất với số lượng đáng kể (15000 Uml sản xuất với số lượng đáng kể (15000 Uml -1 -1 ). ). Protease kiềm có những thuộc tính bất thường như chịu nhiệt độ tối thích 80 Protease kiềm có những thuộc tính bất thường như chịu nhiệt độ tối thích 80 0 0 C, C, PH = 11.5 tính tưong thích và độ bền có ý nghĩa quan trọng đến những chất hoạt động PH = 11.5 tính tưong thích và độ bền có ý nghĩa quan trọng đến những chất hoạt động bề mặt và những chất ôxi hóa (Ganesh Kumar và cộng sự 2004). bề mặt và những chất ôxi hóa (Ganesh Kumar và cộng sự 2004). Tuy nhiên, giá trị kinh tế lớn của protease đã thúc đẩy quá trình tìm kiếm protease mới với những thuộc tính mới. Protease được dùng làm chất phụ gia, thuốc tẩy nên ổn định và tích cực khi có mặt của thành phần thuốc tẩy như chất hoạt động bề mặt, chất xây dựng, tác nhân tẩy trắng, chất lọc, chất làm mềm cách thức tăng trưởng khác nhau. Enzym này được sử dụng như một thành phần tích cực trong sự phát triển của sản phẩm sinh học như kính áp tròng trong suốt và cũng có hiệu quả trong việc làm sạch. Trong nghiên cứu, hiện tại chúng tôi đang báo cáo về sự cô lập của vi khuẩn phân giải protein Bacillus Laterospeorus AK1 từ sự phân trộn phân lập chất cặn bả và sự tinh chế của protease kiềm. Vật liệu và phương pháp. Vật liệu và phương pháp. Sephadex G – 200, DEAE là những chất ức chế enzym xenluloza và protease Sephadex G – 200, DEAE là những chất ức chế enzym xenluloza và protease được mua từ sigma của Mĩ và là phân tử đánh dấu cho sự phân tích điện di đạt được mua từ sigma của Mĩ và là phân tử đánh dấu cho sự phân tích điện di đạt được từ Genei Banglore, India. Tất cả các hóa chất khác cần thiết trong những được từ Genei Banglore, India. Tất cả các hóa chất khác cần thiết trong những bước phân lập. bước phân lập. Sự phân lập Bacillus Laterosporus – AK1. Những mẫu đất thu thập được từ sự phân hủy chất hữu cơ tại Ariyalur, Tamiler Nadu, ẤnĐộ ,được pha loãng trong dung dịch muối vô trùng. Những mẫu đã pha loãng được đặt ở trong môi trường thạch sữa bao gồm: dung dịch protein 0.1% dung dịch Nacl 0.5%, ván sữa 10% và thạch sữa 2.0%. Những đĩa đó được ủ ở nhệt độ 600 o C trong vòng 24h. Khi sữa đã thủy phân hoàn toàn thì bổ sung thêm enzym protease đã được xác định là sản phẩm của cơ thể sinh vật. Dựa vào vùng phát quang, một dòng vi khuẩn sẽ được chọn cho những nghiên cứu tiếp theo.Dòng vi khuẩn phân giải protein là một bào tử có dạng Gram dương được xác định như loài B .laterosporus và nó có cấu trúc như B. laterosporus- AK1( Holt và cộng sự 1994.). Sản xuất enzyme Sản xuất enzyme . . Qúa trình sản xuất enzym protease bởi Bacillus Laterosporus được thực hiện Qúa trình sản xuất enzym protease bởi Bacillus Laterosporus được thực hiện trong môi trường trung gian chứa các chất sau: dung dịch Glucoza 0.5% dung dịch trong môi trường trung gian chứa các chất sau: dung dịch Glucoza 0.5% dung dịch sucrose 1.0% dung dịch K sucrose 1.0% dung dịch K 2 2 HPO HPO 4 4 0.05%, dung dịch MgSO 0.05%, dung dịch MgSO 4. 4. 7H 7H 2 2 O 0.05%, dung dịch O 0.05%, dung dịch Nacl 0.02% dung dịch CaCl Nacl 0.02% dung dịch CaCl 2. 2. H H 2 2 O 0.05% với PH = 9 và duy trì ở nhiệt độ 37 O 0.05% với PH = 9 và duy trì ở nhiệt độ 37 0 0 C trong C trong 48h trong tủ định ôn (120rpm). Sau khi hoàn thành quá trình lên men toàn bộ men 48h trong tủ định ôn (120rpm). Sau khi hoàn thành quá trình lên men toàn bộ men cho li tâm ở 1000g tại 4 cho li tâm ở 1000g tại 4 0 0 C và dịch nỗi lên trên bề mặt được thu lại và sử dụng như C và dịch nỗi lên trên bề mặt được thu lại và sử dụng như một nguồn enzym. một nguồn enzym. Sự phân tích enzyme và xác định protein. Sự hoạt động của enzym protease kiềm được xác định bằng phương pháp củaTruchia và công sự (1986). Mỗi lần hoạt động của enzym protease được định nghĩa bằng một lượng enzym cần thiết để phân giải một μ mol tryrosine trong 30 phút ở nhiệt độ 45 0 C. Hoạt động đặc biệt này được mô tả bằng những đơn vị/mg protein. Số lượng protein của mẫu được xác định bằng phương pháp nhuộm liên kết của Brad –for (1976) sử dụng huyết thanh gia súc làm tiêu chuẩn chuẩn. Trong những bước lọc sắc kí hàm lượng protein xác định bởi sự hấp thụ ánh sáng tại bước sóng 280nm. Sự kết tủa Sự kết tủa aceton aceton Như đã mô tả ở trên, khuẩn Bacillus Laterosporus AK1 lớn lên trong khoảng Như đã mô tả ở trên, khuẩn Bacillus Laterosporus AK1 lớn lên trong khoảng 36h và những tế bào của nó đựợc tách ra bởi phép li tâm (10.000 x g, 15 phút). 36h và những tế bào của nó đựợc tách ra bởi phép li tâm (10.000 x g, 15 phút). Protease nỗi lên trên mặt được kết tủa với 70% axêton. Tất cả những bước kế tiếp của Protease nỗi lên trên mặt được kết tủa với 70% axêton. Tất cả những bước kế tiếp của quá trình tinh chế đều xảy ra ở nhiệt độ 4 quá trình tinh chế đều xảy ra ở nhiệt độ 4 0 0 C. Protein được tách lơ lững trong 0.05M hệ C. Protein được tách lơ lững trong 0.05M hệ đệm Tris HCl, độ PH = 0.9 và được thẩm tách ngược lại qua cùng một hệ đệm. đệm Tris HCl, độ PH = 0.9 và được thẩm tách ngược lại qua cùng một hệ đệm. Phép lọc sắc ký chất Gel sephadex G – 200 Protein đã kết tủa sẽ được chuyền đến một cột lọc chất làm đông có chứa chất Gel sephadex G – 200 (1.5x24cm) và được cân bằng với bộ đệm Tris – HCl. Cột này được tách rửa với tốc độ chảy 40ml/h với cùng một bộ đệm. Từ những mô tả sơ lược về phép tách rửa, người ta quan sát được rằng chất protease bị tách rửa ra như một đỉnh riêng lẻ. Những phần hoạt động được tổ hợp, thẩm tích và cô đặc lại bằng phương pháp đông khô. Mẫu enzym đã cô đặc được đưa lên một cột phản ứng trao đổi ion của xenluloza. DEAE (2.5cm x 22cm),được cân bằng với 50 M Tris HCl, độ PH = 9 và được làm sạch cùng với cùng một bộ đệm. . Tinh chế enzyme Phương pháp điện di chất Gel SDS – Phương pháp điện di chất Gel SDS – polyacrylamide. polyacrylamide. Theo phương pháp của laemmh (1970) SDS – PAGE được thực hiện trên một Theo phương pháp của laemmh (1970) SDS – PAGE được thực hiện trên một tấm Gel đặc quánh chứa 8% (W/v) polyacrylamide. Theo phương pháp của Davis tấm Gel đặc quánh chứa 8% (W/v) polyacrylamide. Theo phương pháp của Davis (1964), PAGE tự nhiên được thực hiện trong chất Gel đặc quánh chứa 8% (W/v) (1964), PAGE tự nhiên được thực hiện trong chất Gel đặc quánh chứa 8% (W/v) polyacrylamide với bộ đệm Tris/Glyxin, độ Ph = 8.3. polyacrylamide với bộ đệm Tris/Glyxin, độ Ph = 8.3. Theo mô tả của Heusen và Dowdle (1980): protein được phát hiện có màu bạc việc nghiên cứu Gel genlatin được thực hiện trong một tấm Gel đặc quánh polyacrylamide chứa SDS và genlatin (0.1%) như một chất được trùng hợp hóa (như sự mô tả của Heusen và Dowdle). Sau khi điện di chất Gel đặc quánh sẽ được làm trong Triton X – 100 (2.5% v/v) trong 1 giờ ở nhiệt độ 40C để loại SDS và được ủ trong 0.05M bộ đệm Tris – HCl, độ Ph = 9 trong 5 giờ ở nhiệt độ 50 0 C. Sau đó chúng được nhuộm màu xanh Coomass rực rỡ. Nhóm những phần hoạt động được quan sát như một vùng genlatin không màu,trong suốt nỗi bật trên nền màu xanh. Enzyme được tách rửa như một đường thẳng tuyến tính của 0 – 0.5M NaCl trong cùng một bộ đệm. Mỗi phần 3ml được tập hợp lại với tốc độ chảy 30ml/h bằng cách dùng một máy tổng hợp từng phần tự động (máy tổng hợp từng phần LKB 7000 U/tra). Hàm lượng protein của một phần được đọc ở 280nm. Những phần protease hoạt động sẽ được tổng hợp, thẩm tách và cô đặc lại bằng phương pháp đông khô và được sử dụng cho những phân tích sâu hơn về sau Đặc điểm của enzyme Đặc điểm của enzyme protease protease Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của enzyme Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của enzyme . . Nhiệt độ tối thích dành cho hoạt độ của chế phẩm protease được xác Nhiệt độ tối thích dành cho hoạt độ của chế phẩm protease được xác định bằng thí nghiệm nuôi cấy enzyme ở những nhiệt độ khác nhau trong định bằng thí nghiệm nuôi cấy enzyme ở những nhiệt độ khác nhau trong khoảng từ 40 đến 100 trong môi trường dung dịch đệm 50mM Tri-HCl trong khoảng từ 40 đến 100 trong môi trường dung dịch đệm 50mM Tri-HCl trong thời gian 30 phút.khả năng chịu nhiệt của enzyme được duy trì ổn định khi nuôi thời gian 30 phút.khả năng chịu nhiệt của enzyme được duy trì ổn định khi nuôi cấy trong môi trường có cùng dung dịch đệm,trong 30 phút, ở các nhiệt độ khác cấy trong môi trường có cùng dung dịch đệm,trong 30 phút, ở các nhiệt độ khác nhau (40-100 nhau (40-100 o o C). C). Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của enzyme. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của enzyme. Ảnh hưởng của ph đến hoạt tính của enzyme protease được xác dịnh bằng Ảnh hưởng của ph đến hoạt tính của enzyme protease được xác dịnh bằng phương pháp nuôi cấy enzyme tại 40 trong 30 phút tại các giá trị ph khác nhau. phương pháp nuôi cấy enzyme tại 40 trong 30 phút tại các giá trị ph khác nhau. để làm môi trường nuôi cấy người ta sử dụng các hệ đệm (nồng độ 0.05) để làm môi trường nuôi cấy người ta sử dụng các hệ đệm (nồng độ 0.05) sau:phosphate (ph 5.0-7.0),Tri-Hcl (ph 8.0-10.0) và glycine-NaOH (ph 11-12). sau:phosphate (ph 5.0-7.0),Tri-Hcl (ph 8.0-10.0) và glycine-NaOH (ph 11-12). hoạt động của enzyme được duy trì ổn định khi nuôi cấy trong 30 phút,trong các hoạt động của enzyme được duy trì ổn định khi nuôi cấy trong 30 phút,trong các dung dịch đệm có giá trị pH khác nhau (5.0-12.0) tại 40 dung dịch đệm có giá trị pH khác nhau (5.0-12.0) tại 40 o o C . C . [...]... tinh chế tiếp theo của protease kiềm t hời gian ủ bệnh từ B laterosposus- AK1 Fig1:Thời gian xảy ra của quá trình sản xuất protease và được thể hiện ở bảng dưới quá trình phát triển của B laterosporus .Bảng 1 Tóm tắt qúa trình tinh chế của protease kiềm từ B LaterosporusAK1 Sno các bước tinh chế đạt 1.Nuôi cấy bề mặt 2.Kết tủa axeton 3 Sephadex 200 4 DEAE cellulose tổng độ tổng số hoạt động tinhchế... với nước cất và được sấy khô Xem xét kĩ bằng mắt những mẫu khác nhau đã làm Những kết quả và thảo luận Khuẩn que Laterosporus AK1 cho thấy sự phát triển cực đại và sự sản xuất enzyme lớn nhất trong 36 giờ Khi cho vào môi trường trung gian ở nhiệt độ phòng Vi khuẩn này có mặt trong khu vực thuỷ phân trong môi trường trung gian thạch sữa Sự tinh chế protease ngoại bào của B Laterosporus- AK1 Tóm tắt... Kết quả hoạt động đặc trưng tuyệt đối (U) protein(mg) (U/mg protein) fold được 32400 24230 17840 11145 452 120 32 14 71,6 201,9 557,6 796,0 1 2,8 7,7 11,1 100 74,7 55,0 34,3 Xấp xỉ 11,1 folds của sự tinh chế được thực hiện từ sự nuôi cấy vi khuẩn ban đầu với mức cuối cùng là 34,4% Độ hoạt động đặc trưng của chế phẩm enzyme là 796 U/mg SDS-PAGE của chế phẩm protease từ B AK1 Chế phẩm protease được biểu... 125 KDa Fig2: SDS- PAGE và việc nghiên cứu của chế phẩm protease Vạch1: chế phẩm protease Vạch 2: phân tử khối chuẩn Vạch 3:nghiên cứu hoạt tính chế phẩmenzyme Tính chất đặc trưng của chế phẩm enzyme Nhiệt độ tối thích và độ bền: Protease thể hiện độ hoạt động cực đại ở 75oC Ngược lại, Bacillus clussi thể hiện độ hoạt động cực đại ở 80oC vì nó là protease kiềm tính chịu nhiệt và Bacillus sp B21-2 thể... 60oC(Granesh Kumar và cộng sự, 2004 Fujiwara và Yamamoto, 1987) Protease bền trong khoảng rộng từ 55oC-80oC, nhưng nhanh chóng giảm ở nhiệt độ cao hơn, độ bền này cao hơn một ít so với protease kiềm tính TheoKahayashi nhiệt độ ( oC) và cộng sự : một protease kiềm tính từ Fig3 Ảnh hưởng của nhiệt độ khác nhau BacilusspKSM- K16 đên độ hoạt động và độ bền của protease thể hiện độ bền ở 50oC PH tối thích và độ bền... bền nhiệt của protease thu được từ khuẩn que Những kết quả này chỉ ra rằng những ion kim loại bảo vệ enzyme chống lại sự biến tính do nhiệt và đóng một vai trò thiết yếu trog việc duy trì hoạt động ổn định của enzyme ở nhiệt độ cao.( Pan và Lin; Steele và cộng sư 1992 ) Nghiên cứu sự ức chế mang lại những hiểu biết sâu sắc về bản chất của enzyme, về những điều kiện cần thiết động Ion kim loại và chất... chất ức chế nồng độ tỉ lệ hoạt của enzyme của nhóm ngoại và về bảnchất của trung tâm hoạt động Trong những chất ức chế khác nhau thì iodoacetate gây ức chế mạnh nhất đến độ hoạt động của enzyme Kế đến là 2-mercaptoethanol và EDTA (bảng 2) Tuy nhiên PMSM cũng gây ức chế hoàn toàn Sự hoạt động của enzyme, nó đặc trưng cho hệ Enzyme- cơ chất Serin protease Điều này đã được nhận xét bởi Adinrayana và Ellaiah(2003)... Uchida và cộng sự (2004) Sự thuỷ phân của chất nền protein Chất nền đặc trưng của protease được tìm thấy với số lượng lớn khi casein được sử dụng làm chất nền Tiếp theo là Azocasein (85%), albumin của trứng (58%), BAS (52%) và gelatin (22%) tương ứng.Tương tự protease kiềm thu được từ B stearothermophilus F1 và Bcillus sp K5M-K16 được công bố từ độ hoạt động cao nhất về casein (theo Kobayashi và cộng sự. .. của ion kim loại và chất ức chế hoạt tính của enzyme Ảnh hưởng của các ion kim loại như: Ca2+, Na2+, Hg2+ và EDTA được khảo sát khi trộn chúng lại thành một lượng 5mM và ủ ở nhiệt độ 40oC,thời gian 30 phút dưới điều kiện chuẩn của thí nghiệm .Sự ảnh hưởng của 2mM chất ức chế protease khác nhau như: phenyl methyl sulphonyl flouride (PMSF),ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA), 2-mercaptoethanol và. .. được giữ lại 75% , của Henko 63% Surfexcel 43% vàTide38%Anwar và Mohammed (2000) cũng tìm thấy protease kiềm từ Spilosoma obliqua, thể hiện hoạt tính đến 70% khi có mặt chất tẩy rửa thương mại Protease được sản xuất bởi sự phân lập V laterosporusAK1 ổn định trong khoảng pH và nhiệt độ lớn và thể hiện tính tương thích với các chất tẩy rửa thương mại khác nhau được kiểm nghiệm Sự bổ sung của enzyme trong . Sự tinh chế và đặc điểm của Sự tinh chế và đặc điểm của serin protease từ khuẩn serin protease từ khuẩn Bacillus Laterosporus AK1 Bacillus Laterosporus AK1 kiềm, kiềm, chịu nhiệt . bào Sự tinh chế protease ngoại bào của B. Laterosporus- AK1. của B. Laterosporus- AK1. Tóm tắt các bước tinh chế tiếp theo Tóm tắt các bước tinh chế tiếp theo của protease kiềm của protease kiềm . folds của sự tinh chế được thực hiện từ sự nuôi cấy vi khuẩn Xấp xỉ 11,1 folds của sự tinh chế được thực hiện từ sự nuôi cấy vi khuẩn ban đầu với mức cuối cùng là 34,4%. Độ hoạt động đặc trưng của