VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THU HOẠCH (Ngành Y tế- Môi trường) Đề tài: THAM QUAN QUY TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC TẠI NHÀ MÁY SỐ 2 – CÔNG TY CP MEDIPLANTEX. & KHẢO SÁT CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TW. Giáo viên hướng dẫn: T.s Nguyễn Thị Tâm. Sinh viên : Trần Thị Giang. Lớp: CĐ.08-02 Hà Nội 4/2011 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. MỤC LỤC MỞ ĐẦU 4 PHẦN 2 5 PHẦN 2 5 Đại cương về kháng sinh và công nghệ lên men sản xuất kháng sinh 5 Định nghĩa kháng sinh 5 Đơn vị kháng sinh 5 Phân loại kháng sinh 5 Cơ chế tác dụng của kháng sinh 6 Tính kháng kháng sinh 7 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh 8 Đại cương về vacxin và công nghệ sản xuất vacxin 13 Định nghĩa : 13 Thành phần của vacxin 13 Một số loại vacxin chính 14 Cơ chế hoạt động của vacxin 14 Tác dụng phụ của vacxin 14 Kiểm nghiệm vacxin 15 Quy trình sản xuất một số loại vacxin 17 PHẦN 3 19 KHẢO SÁT QUY TRÌNH CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT THUỐC TẠI NHÀ MÁY DƯỢC SỐ 2- CTCP MEDIPLANTEX 19 Giới thiệu về nhà máy 19 Sơ đồ quy trình sản xuất thuốc 20 Quá trình thử các đặc tính lâm sàng của thuốc Antesik 22 Một số dược phẩm là kháng sinh có mặt trên trên thị trường 26 PHẦN 4 29 Giới thiệu 29 Giới thiệu 29 Một số khâu công nghệ trong việc sản xuất vacxin 30 Tìm hiểu về quy trình kiểm nghiệm vacxin phó thương hàn lợn nhược độc 34 Một số vacxin đã thương mại hóa 36 - - 2 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. Lời cảm ơn! Trong quá trình học tập và tìm hiểu thực tế , em vô cùng biết ơn sự giảng dạy và hướng dẫn nhiệt tình của các thầy cô đã giúp chúng em gắn kết và hình dung được phần nào giữa lý thuyết và thực tế. Xin gửi tới các thầy giáo, cô giáo trong khoa Công nghệ sinh học – Viện Đại học Mở Hà Nội, lời chúc sức khỏe và công tác tốt! Sinh viên : Trần Thị Giang. - - 3 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. I. MỞ ĐẦU Ngày nay Công nghệ sinh học đang được coi là một trong 5 ngành công nghệ tiên phong của nhân loại tiến vào thế kỷ 21. Trong đó , công nghệ vi sinh vật học sản xuất các kháng sinh, vacxin, vitamin và các hoạt chất ứng dụng trong y học, thực phẩm , nông nghiệp…đang có những bước tiến vượt bậc. Ở các nước phát triển trên thế giới thì việc ứng dụng các tiến bộ di truyền học trong phân lập, sàng lọc, cải tạo giống cho phép tạo ra các chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp các hoạt chất sinh học với hiệu suất ngày càng cao. Trình độ tự động hóa, tin học hóa cao cho phép xây dựng được các hệ thống sản xuất ổn định với hiệu suất tối ưu. Cùng với các giải pháp công nghệ mới giúp tiết kiệm mặt bằng và nhân công, bảo vệ môi trường sinh thái. Ở Việt Nam, tuy chưa thể đưa công nghệ vi sinh vật ứng dụng trong lên men sản xuất kháng sinh do một phần khiêm tốn về vốn đầu tư bởi đây cũng là ngành có nhiều thách thức và mang tính cạnh tranh khốc liệt trên quy mô toàn cầu, nhưng cũng có nhiều công ty ( bao gồm cả Nhà nước và Tư nhân) sản xuất, hoàn thiện rất nhiều lọai thuốc, các dược phẩm, lên men sản xuất vacxin…v.v có uy tín nhiều năm nay. Nhà máy Dược phẩm số 2 thuộc công ty CP Mediplantex , Xí nghiệp thuốc Thú y TW là hai trong số những thương hiệu nhiều năm đã được cả trong nước và nhiều nơi trên thế giới công nhận. - - 4 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. II. PHẦN 2. Đại cương về kháng sinh , vacxin & công nghệ lên men sản xuất kháng sinh ,công nghệ sản xuất vacxin. Đại cương về kháng sinh và công nghệ lên men sản xuất kháng sinh. Định nghĩa kháng sinh: Dựa theo định nghĩa kinh điển của Walksmann (1942), thì ngày nay, các nhà khoa học đã cho ra khái niệm về kháng sinh có thể nói là khá chặt chẽ. : “ kháng sinh là những sản phẩm trao đổi chất thứ cấp của vi sinh vật, hoặc có nguồn gốc thực vật, hoặc tổng hợp theo con đường hóa học ,có tác dụng ức chế hoặc tiêu diệt chọn lọc đối với các vi sinh vật khác. Đơn vị kháng sinh: Để biểu thị độ lớn giá trị hoạt tính của kháng sinh trong 1 ml dung dịch (đv/ml) hay 1mg chế phẩm (đv/mg) thường dùng đơn vị kháng sinh. Đó chính là một lượng kháng sinh tối thiểu hòa tan trong một thể tích môi trường xác định có tác dụng ức chế hay tiêu diệt vi sinh vật kiểm định. Đơn vị quốc tế là IU. VD: 1IU penicillin G = 0.6µg (1mg =1667IU), 1IU Streptomycin = 1µg ( 1mg = 1000IU), 1mg neomycin chứa 300 IU (1 IU = 3,3µg)… Phân loại kháng sinh: Danh sách các kháng sinh được phát hiện ngày càng nhiều, việc phân loại kháng sinh là cần thiết vì nó giúp các nhà nghiên cứu tốn ít thời gian khi nghiên cứu các kháng sinh mới về cấu trúc hóa học , cơ chế tác động, độc tính Có thể phân loại kháng sinh theo các cách: - - 5 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. - Phân loại theo nguồn gốc kháng sinh: do xạ khuẩn, vi khuẩn, vi nấm (nấm mốc, nấm men) tạo ra. - Phân loại theo cơ chế tác dụng : kháng sinh tác dụng lên thành tế bào , kháng sinh tác động lên quá trình tổng hợp protein, tổng hợp DNA, mRNA… - Phân loại theo cấu trúc hóa học: đây là cách phân loại khoa học nhất . Theo đó , các chất kháng sinh được chia làm nhiều nhóm. +) Các chất kháng sinh chứa hydratcacbon ( đường tinh khiết, aminoglycosid, N-glycosid, glycopeptid ): streptomycin, eveaninomicin, vancomycin,moenomicin… +) Các lactomacrocylic ( chất kháng sinh macrolid polien , macrotetrolit, azamycin) : rifamycin, tetranactinerythromycin, nystatin +) Các kháng sinh quinon và dẫn xuất: tetracylin, adriamycin, actinorodin… +) Các kháng sinh peptid và các acid amin : cycloloserin, penicillin, bacitracin, actinomycin, bleomycin +) Các kháng sinh dị vòng chứa nitơ: các kháng sinh nucleoside (polysome)… +) Các kháng sinh mạch vòng no : các chất ankan, kháng ainh steroid : cycloheximic, axit fuzidic +) Các kháng sinh chứa nhân thơm : chloramphenicol, gliseofulvin, novobiocin… +) Các kháng sinh mạch thẳng: phosphomycin Cơ chế tác dụng của kháng sinh: Các kháng sinh tác dụng cơ bản qua việc ức chế các phản ứng tổng hợp rất khác nhau của tế bào vi sinh vật gây bệnh. Chúng liên kết vào các vị trí chính xác hoặc các phân tử đích của tế bào vi sinh vật mà tạo ra các phản ứng trao đổi chất. Các đích tác dụng đặc trưng cho từng nhóm kháng sinh , tuy nhiên trong nhiều trường hợp người ta vẫn chưa biết hết chính xác. Có 6 mức tác dụng khác nhau đối với tế bào vi khuẩn hoặc nấm: thành tế bào, màng tế bào, tổng gen( sao chép và phiên mã) tổng - - 6 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. hợp protein, dịch mã mRNA , chao đổi chất hô hấp và trao đổi chất trung gian. Một số ví dụ về cơ chế tác dụng của kháng sinh Mức tác dụng Ví dụ Tổng hợp thành tế bào: Transpeptid hóa Tổng hợp murein β-lactam (penicillin) Vancomycin, phosphomycin, cycloserin,bacitracin Màng nguyên sinh Thay đổi cấu trúc Thay đổi chức năng Polymixin, amphotericin, polyen, gramicidin, sideromycin. valinomycin DNA Phân chia Dịch mã Actinomycin ,antracyclin, rifamicin Tổng hợp protein Ribosome Liên kết t-RNA Kéo dài Aminogucosid , macrolid( erythromycin) chlorocid, tetracycline, acid fuzidic Trao đổi chất hô hấp Antimycin , oligomycin Trao đổi chất folat Sulfamid … Tính kháng kháng sinh: Khái niệm “ tính kháng thuốc” lần đầu tiên được đề cập ở Nhật bản (1959-1960). Nguyên nhân chính của hiện tượng kháng thuốc ở các vi sinh vật vốn nhạy cảm là do chúng ta sử dụng thuốc bừa bãi. Định nghĩa tính kháng thuốc : kháng thuốc là hiện tượng vi sinh vật mất đi tính nhạy ban đầu của nó trong một thời gian hay vĩnh viễn dưới tác dụng của kháng sinh hay hóa trị liệu. Có hai kiểu kháng thuốc : Kháng thuốc tự nhiên: là một đặc trưng của một nòi vi sinh vật nhất định dối với một số kháng sinh nhất định nào đó, tính chất này có từ trước khi sử dụng kháng sinh.Điều này liên quan đến phổ tác dụng của kháng sinh. Ví dụ: proteus kháng các - - 7 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. tetracyclin, trực khuẩn G - kháng các penicillin G, streptococcus nhóm D kháng lincomycin. Về mặt sinh hóa thì đó là do : tính thấm của tế bào và sự thiếu vắng phân tử đích. Kháng thuốc mới nhận: Xuất hiện trong chọn lọc tự nhiên các chủng đề kháng của quần thể vi sinh vật nhạy cảm khi sử dụng kháng sinh. Một vi sinh vật trở thành kháng thuốc khi phát triển được với hàm lương cao đáng kể của kháng sinh ấy so với quần thể vi sinh vật mà nó có nguồn gốc. Về mặt cơ chế di truyền học có 2 nguyên nhân chính: - Do đột biến NST, kiểu này chiếm 10% vi sinh vật kháng thuốc. Ví dụ : β-lactam, aminosid, cloramphenicol, rifamycin… - Do nhân tố di truyền Plasmid: kiểu kháng thuốc này rất phổ biến ( chiếm 90% vi sinh vật kháng thuốc). Plasmid có thể được lan truyền từ tế bào này sang tế bào khác qua các cơ chế : biến nạp, tải nạp, tiếp hợp… Về cơ chế sinh hóa của kháng thuốc mới nhận có 4 cơ chế chính: + Thay đổi tính thấm thành tế bào. + Vô hiệu hóa các kháng sinh bằng enzyme, acetyl hóa, phosphoryl hóa khiến cho các aminosid bị biến đổi , làm chúng không qua được thành tế bào. + Thay đổi phân tử đích ( đích tác dụng của kháng sinh). + Xây dựng con đường trao đổi chất mới mà kháng sinh không tác dụng. Lên men sinh tổng hợp kháng sinh: 2.1.6.1 Khái quát hóa quá trình lên men tổng hợp kháng sinh: Các sản phẩm trao đổi chất bậc một gắn liền với quá trình sinh trưởng, xảy ra trong thời gian sinh trưởng và còn kéo dài sau khi sinh trưởng đã kết thúc. Các sản phẩm trao đổi chất bậc hai (sản phẩm trao đổi chất thứ cấp) là các sản phẩm mà sự có nó không cần thiết cho sinh trưởng, chỉ xảy ra sau khi sinh trưởng kết thúc, tức là trong giai đọan cân bằng. Do đó gọi là lên men hai pha : pha sinh trưởng - pha sản xuất ( trophosphase -idophase).Tại thời kỳ thứ hai, các sản phẩm trao đổi chất được - - 8 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. tích tụ chủ yếu ở pha này. Thời kỳ đầu pha hai ( pha log) vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp cao, cuối pha này, sinh khối giảm.do tế bào tích tụ sản phẩm chậm. Hơn nữa một số sản phẩm có thể trở thành nguồn dinh dưỡng của vi sinh vật. Do đó ta nên kết thúc lên men ở trước thời điểm cuối pha hai để tránh hiện tượng đồng hóa trở lại các sản phẩm làm giảm hiệu suất lên men và để tránh hiện tượng tế bào tự phân gây nhớt. Đường cong sinh trưởng của vi sinh vật. Sự chuyển tiếp giữa pha 1 và pha 2, thành phần môi trường sẽ ảnh hưởng đến hình thái và hoạt lực của giống. Dinh dưỡng cung cấp được vi sinh vật sử dụng để tổng hợp RNA và đồng hóa cacbon. Nếu lượng P dư, hàm lượng RNA ở mức cao trong thời gian dài làm chop ha một khéo dài, pha hai chậm. Bắt đầu rút ngắn hoặc không còn nữa khi chuyển từ pha một sang pha - - 9 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH. hai, hàm lượng RNA giảm dần, do dó P trong môi trường được vi sinh vật sử dụng hết trong pha thứ hai. Nếu trong tế bào , các chất nhân nhanh cùng hàm lượng DNA cao sẽ làm rút ngắn pha hai, kích thích nấm mốc , xạ khuẩn sinh bào tử, làm giảm hoạt lực sinh tổng hợp. * Nhiệm vụ chính của quá trình lên men : - Chọn các điều kiện tối ưu của giống trong pha một để rút ngắn giai đoạn - Xác định những điều kiện chuyển tiếp từ pha một sang pha hai. - Tìm nguyên nhân làm giảm hàm lượng các sản phẩm sau khi đã đạt mức tối đa. * Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình lên men: - pH : ( [H] + , [OH] - )có ảnh hưởng trực tiếp đến tính keo của môt trường, hoạt lực hệ enzyme, Ở mức độ giám tiếp pH điều chỉnh mức độ phân ly các hợp chất của thành phần môi trường. - O 2 : Làm cho sự đồng hóa của vi sinh vật tốt hơn. Nếu sục O 2 mạnh sẽ làm hư hỏng cơ học tế bào. - Trong sản xuất kháng sinh, O 2 trong pha một để phục vụ cho vi sinh vật phát triển, tạo điều kiện cho hệ enzyme được tạo thành , xúc tác trong pha hai. 2.1.6.2 Nguyên liệu và phương pháp lên men: * Nguyên liệu ( tạo môi trường lên men) : - Nguồn cacbon: các loại cacbonhydrat là nguồn nguyên liệu truyền thống của công nghiệp kháng sinh và vitamin. Vi dụ các loại dường sạch làm môi trường: sacaroza ( lên men sản xuất fumagillin), glucoza, lactoza ( lên men sản suất penicillin). Hay nguồn tinh bột ( ngô, sắn, khoai tây) và dextrin dùng cho các chủng vi sinh vật có khả năng tạo enzyme amylaza ( lên men các aminoglucosid)…. - Các nguồn nitơ: Có thể sử dụng các muối amoni, muối nitrat : ( NH 4 ) 2 SO 4 , NaNO 3 , NH 4 NO 3 KNO 3 … ví dụ : cao ngô, cao nấm men , bột đậu tương… - - 10 [...]... nguyên Nhân dòng gen bằng phản ứng PCR Biểu hiện gen - 18 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Tinh sạch kháng nguyên Vacxin tái tổ hợp Vacxin đường uống cho người : Tại khâu biểu hiện gen, chuyển gen và nuôi c y mô trên thực vật để tạo vacxin đường uống ( và phòng bệnh cho thực vật) III PHẦN 3 Khảo sát quy trình công nghệ sản xuất thuốc tại nhà m y Dược phẩm số 2 Giới thiệu về nhà m y : Nhà m y. .. VR 2 chủng được phân lập ở Rumani (1913) - Tạo được các giống ổn định, và sản xuất thành công môi trường nuôi c y vi trùng o Từ năm 1990 – 20 00 : - Tạo được các vacxin liều nhỏ nhờ hệ thống công nghệ mới Từ chỗ 20 – 30 ml/liều giờ còn 2ml/liều - Tạo được thêm một số sản phẩm mới o Từ năm 20 00 đến nay: Cho ra đời một số sản phẩm mới Một số khâu công nghệ trong việc sản xuất vacxin: Phân xưởng sản xuất. .. nguyên liệu và thuốc Nhiệt độ kho 24 0C độ ẩm 65% Sơ đồ quy trình sản xuất thuốc: Nguyên liệu đạt tiêu chuẩn Kho Xay r y Cân chia Pha chế cốm 1 Trộn bột kép Kiểm tra độ đồng đều của bột Nhào ướt S y xe Pha chế cốm 2 Sát hạt S y khô Kiểm tra độ dồng đều của hạt Bao trơn Kiểm tra bán thành phẩm Dập viên, đóng nang Ép vỉ, đóng gói Xuất xưởng - 20 Kiểm tra bán thành phẩm Kiểm nghiệm thành phẩm NGÀNH Y TẾ-MÔI... thống hút nhiệt - 33 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Tìm hiểu về quy trình kiểm nghiệm vacxin phó thương hàn lợn nhược độc Đối tượng áp dụng: Quy trình n y áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin nhược độc chế từ chủng vi khuẩn Salmonella choleraesuis đông khô Quy định về kỹ thuật: • L y mẫu: Mẫu được l y theo TCVN 160 -20 08 “ Quy trình l y mẫu thuốc thú y và vacxin thú y để kiểm tra chất lượng”... dược Bằng các phân tích hóa lý( nhờ các m y móc), có thể định tính được các tính chất( khả năng hòa tan , độ tan rã, bán rã, hàm lượng nước, năng suất phân cực ) của thuốc - M y thử độ hòa tan - M y đo độ mài mòn - M y đo điểm ch y - M y chuẩn độ điện thế - M y thử độ rã - 21 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Kiểm tra hoạt lực kháng sinh của thuốc: c y kháng sinh lên giếng thạch có vi sinh... bào, chúng gắn vào các phân tử DNA và làm phá vỡ nó, g y chết tế bào - Chỉ định: điều trị nhiễm khuẩn trichomonas ở bộ phận tiết niệu, nhiễm giardia lambia, lỵ amip, áp xe gan do lỵ amip… IV PHẦN 4 Khảo sát công nghệ sản xuất vacxin tại Xí nghiệp thuốc Thú y TW Giới thiệu : Xí nghiệp được thành lập năm 1956 và đi vào hoạt động năm 19 62, đến nay đã cung ứng được nhiều loại vacxin phòng bệnh, dược phẩm... phòng ban hành chính, phục vụ Trong đó, xưởng sản xuất sạch ở mức D trong bốn mức quy định của WHO D y truyền hoạt động theo nguyên tắc một chiều, môi trừơng lọc khí 99.99%, tốc độ trao đổi khí 20 lần/h, độ chênh lệch áp suất giữa phòng sản xuất và hành lang 15PA, nhiệt độ duy trì : 20 -25 0C độ ẩm 6065% Tại phòng sản xuất đặc biệt khống chế độ ẩm 20 % - 19 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Người lao... TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH - Pha chế cốm 1 nhờ m y trộn cao tốc: Nguyên liệu cứng nấu hồ  đun trong nồi hai vỏ ( đun cách th y bằng điện hoặc hơi cánh khu y hoạt động tạo thành khối ẩm đầu tiên hạt cốm - S y tĩnh: nguyên liệu cho vào khay , t y từng sản phẩm mà s y ở những nhiệt độ nhất định - Pha chế cốm 2: S y hạtnguyên liệu  m y sát hạttủ s y tầng sôi( dùng gió nóng tạo thành cốm  sữa hạt... chăn nuôi, thú y Xí nghiệp có riêng một phân xưởng ( khu nhà A) sản xuất vacxin, bao gồm cả vacxin có nguồn gốc từ vi khuẩn và virus, là một trong 3 cơ sở sản xuất vacxin trong cả nước Thành tựu của Xí nghiệp: - 29 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH o Từ năm 19 62 – 1990: tạo ra được vacxin chống tụ dấu lợn - Vacxin tụ huyết trùng nhược độc ở lợn: A vP53 chủng được phát hiện và phân lập tại Việt... để thu sản phẩm Lưư ý: tất cả các khâu từ phân lập vi sinh vật đến thu sản phẩm đều phải bảo đảm vô trùng tuyệt đối - 12 NGÀNH Y TẾ-MÔI TRƯỜNG / BÁO CÁO THU HOẠCH Đại cương về vacxin và công nghệ sản xuất vacxin: Định nghĩa : Vacxin là chế phẩm sinh học có tính kháng nguyên , có khả năng tạo miễn dịch đặc hiệu để chống lại các tác nhân g y bệnh có bản chất kháng nguyên giống bản chất kháng nguyên của . NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO THU HOẠCH (Ngành Y tế- Môi trường) Đề tài: THAM QUAN QUY TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC TẠI NHÀ M Y SỐ 2 – CÔNG TY CP MEDIPLANTEX. & KHẢO SÁT CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE. sản xuất một số loại vacxin 17 PHẦN 3 19 KHẢO SÁT QUY TRÌNH CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT THUỐC TẠI NHÀ M Y DƯỢC SỐ 2- CTCP MEDIPLANTEX 19 Giới thiệu về nhà m y 19 Sơ đồ quy trình sản xuất thuốc 20 Quá trình. công ty ( bao gồm cả Nhà nước và Tư nhân) sản xuất, hoàn thiện rất nhiều lọai thuốc, các dược phẩm, lên men sản xuất vacxin…v.v có uy tín nhiều năm nay. Nhà m y Dược phẩm số 2 thuộc công ty