61 CÁC TRANG WEB THAM KHẢO: 59. http://biologi.uio.no/plfys/haa/gen/gmo.htm 62 PHỤ LỤC Phụ lục 1. Thành phần môi trƣờng MS (Murashige và Skoog, 1962) Thành phần Nộng độ cuối Nồng độ dung dịch mẹ (mg/l) (mg/l) Khoáng đa lƣợng 20X NH 4 NO 3 1650 33000 KNO 3 1900 38000 CaCl 2 .2H 2 O 440 8800 MgSO 4 .7H 2 O 370 7400 KH 2 PO 4 170 3400 Fe-EDTA 100X FeSO 4 .7H 2 O 27,85 2780 Na 2 -EDTA.2H 2 O 37,25 3725 Khoáng vi lƣợng 100X MnSO 4 .4H 2 O 22,300 2230,0 ZnSO 4 .7H 2 O 8,600 860,0 H 3 PO 4 6,200 620,0 KI 0,830 83,0 Na 2 MoO 4 .2H 2 O 0,250 25,0 CuSO 4 .7H 2 O 0,025 2,5 CoCl 2 .6 H 2 O 0,025 2,5 Các vitamin MS 100X Glycin 2,0 100 Acit nicotinic 0,5 50 Pyridoxin. HCl 0,5 50 Thiamin. HCl 1,0 20 63 Phụ lục 2. Thành phần môi trƣờng YEP (An và ctv, 1988) Bacto pepton 10 g/l Chất trích nấm men 10 g/l NaCl 5 g/l Bacto Agar 15 g/l PH 7,0 (bằng NaOH) Phụ lục 3. Thành phần môi trƣờng AB ( Chilton và ctv, 1974 ) Thành phần nồng độ cuối (g/l ) Dung dịch đệm AB (hấp tiệt trùng riêng) K 2 HPO 4 .3H 2 O 3,0 NaH 2 PO 4 1,0 Khoáng AB (hấp tiệt trùng riêng) NH 4 Cl 1,000 MgSO 4 .7H 2 O 0,300 KCl 0,150 CaCl 2 0,010 FeSO 4 .7H 2 O 0,0025 Môi trƣờng ABG Glucoz 5,0 g Agar 15,0 g Nƣớc cất 900,0 ml Khoáng AB 20X 50,0ml Đệm AB 20X 50,0 ml Phụ lục 4. Thành phần môi trƣờng MSG (Murashige và Skoog, 1962) ½ MS salts (Duchefa, M0221) 2,15 g/l MgCl 2 . 6H 2 O 0,9 g/l Glucose 10 g/l Phytagel (Sigma, P8169) 2 g/l PH: 7,0 (Bằng KOH ) 64 Phụ lục 5. Thành phần môi trƣờng lây nhiễm MsCo MS salts và B 5 vitamin (M 0231) 4,4 g/l Glucoz (Art-Nr. 6780.2, Roth, Đức) 30 g/l 2,4-D (2,4- dichlorophenoxyacetic acid) 0,05 mg/l Kinetin 0,1 mg/l MgCl 2 .6H 2 O 0,9 g/l Phytagel (Sigma, P8169) 2 g/l Acetosyringone 200 μM PH: 6,5 (Bằng KOH) Phụ lục 6. Thành phần môi trƣờng phục hồi MsRe Môi trƣờng Ms-Co Carbenicillin 500 mg/l PH: 6,5 (bằng KOH 0,1N) Phụ lục 7. Thành phần môi trƣờng thanh lọc lần MSS MS salts và B 5 vitamin (M 0231) 4,4 g/l Glucoz (Art-Nr. 6780.2, Roth, Đức) (10; 5; 0) g/l Mannose (25; 30; 35) g/l 2,4-D (2,4- dichlorophenoxyacetic acid) 0,05 mg/l Kinetin 0,1 mg/l MgCl 2 .6H 2 O 0,9 g/l Phytagel (Sigma, P8169) 2 g/l Carbenicillin 200 μM pH: 6,5 (bằng KOH) Phụ lục 8. Thành phần môi trƣờng phát sinh phôi DM MS salts và B 5 vitamin (M 0231) 4,4 g/l KNO 3 1,9 g/l Glucose 30 g/l MgCl 2 .6H 2 O 0,9 g/l Phytagel (Sigma, P8169) 2 g/l pH: 6,5 (bằng KOH) 65 Phụ lục 10: DỤNG CỤ DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM - Keo thủy tinh - Nồi hấp tiệt trùng autoclave: Microm (Model No. SA- 252M) - Tủ nuôi cấy: VÖtsch VB 0714 và Sanyo chamber MLR-350H - Cân điện tử: chyo (MJ- 500) và AA-200 - Microwave: Sanyo EM-G4753 - Ống đong (10, 25, 100, 250, 500, 1000 ml) - Đĩa Petri Ф 60 và Ф 90 - Bình tam giác (10, 100, 250, 500 ml) - Ống đong (10, 25, 100, 250, 500, 1000 ml) - Ống ly tâm: Cell Star R (Cat.No. 227261) - Máy đo pH: Themo orion (Model 420) - Kính hiển vi: Olympus TL3 - Máy lắc (200 rpm): Orbital incubator S150 - Tủ cấy: Holten LaminAir (model 1.8) và Microflow laminar (ABS1200) - Tủ lạnh (0, 4, -20 0 C) - Máy ly tâm: Hermle Z323 - Máy đo OD 600 : Bio-Rad Smartspec TM 3000 - Tủ sấy - Kéo, kẹp, dao - Pipet (6, 50, 200, 1000 µl) - Máy khuấy từ: Bioblock cimarec 1 . MgSO 4 .7H 2 O 370 74 00 KH 2 PO 4 170 3400 Fe-EDTA 100X FeSO 4 .7H 2 O 27, 85 278 0 Na 2 -EDTA.2H 2 O 37, 25 372 5 Khoáng vi lƣợng 100X MnSO 4 .4H 2 O 22,300 2230,0 ZnSO 4 .7H 2 O 8,600 860,0. ly tâm: Cell Star R (Cat.No. 2 272 61) - Máy đo pH: Themo orion (Model 420) - Kính hiển vi: Olympus TL3 - Máy lắc (200 rpm ): Orbital incubator S150 - Tủ cấy: Holten LaminAir (model 1.8) và Microflow. g/l pH: 6,5 (bằng KOH) 65 Phụ lục 1 0: DỤNG CỤ DÙNG TRONG THÍ NGHIỆM - Keo thủy tinh - Nồi hấp tiệt trùng autoclave: Microm (Model No. SA- 252M) - Tủ nuôi cấy: VÖtsch VB 071 4 và Sanyo