23 BÀI SỐ 5: TÁCH CHIẾT DNA I. LÝ THUYẾT DNA là vật chất mang thông tin di truyền trong cơ thể. DNA là một polymer được tạo thành từ các monomer là các nucleotide. Năm 1953, Watson và Crick đã khám phá DNA là một cấu trúc xoắn kép, hai sợi đơn nối với nhau thông qua cầu nối hydrogen. Nguyên tắc để tách chiết DNA: phân tử DNA nằm bên trong nhân của tế bào eukaryote. Do đó, muốn tách DNA ra khỏi tế bào, đầu tiên phải phá vỡ màng tế bào và màng nhân để giải phóng phân tử DNA. Sau đó, tiến hành loại bỏ các phân tử protein và các phân tử RNA có trong tế bào. Cuối cùng, sử dụng cồn tuyệt đối để kết tủ DNA  thu được phân tử DNA II. THỰC HÀNH 1. Mục tiêu Tách chiết được DNA ra khỏi tế bào bằng các hóa chất và dụng cụ đơn giản theo quy trình đã cho 2. Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu 2.1. Nguyên liệu - Dứa tươi (không quá tươi hay quá chín): 1 quả: tiến hành gọt sạch vỏ, thái nhỏ và vắt nước  lọc qua giấy lọc và cho vào cốc - Gan gà tươi hoặc gan lợn - Đậu xanh - Giá 2.2. Dụng cụ và hóa chất - Ống nghiệm - Ethanol 90 0 lạnh - Becher - Nước rửa chén - Cối, chày sứ - Nước cất - Phễu thủy tinh - Giấy lọc - Ống đong 24 - Đũa thủy tinh - Dao, thớt 3. Thực hành Để tiến hành thí nghiệm tách chiết DNA từ các tế bào gan ta thực hiện các bước: Bước 1: Nghiền mẫu vật - Trước hết, ta tiến hành loại bỏ lớp màng bao bọc gan rồi thái nhỏ gan, cân chính xác 2 g rồi cho vào cối nghiền để tách rời và phá vỡ các tế bào gan. Sau khi nghiền nát mẫu gan, cho thêm một ít nước rồi khuấy đều. Lượng nước sử dụng gấp đôi với lượng gan. - Sau đó tiến hành lọc dịch nghiền qua giấy lọc để loại bỏ phần xơ và giữ lại phần nước lọc Bước 2: Tách DNA ra khỏi tế bào và nhân tế bào - Lấy lượng dịch lọc cho vào ống nghiệm. Sau đó cho thêm vào dịch lọc một lượng nước rửa chén bằng 1/6 thể tích dịch lọc rồi khuấy nhẹ và để yên trong vòng 15 phút. Không nên khuấy quá mạnh làm xuất hiện bọt trong ống nghiệm. - Sau đó cho tiếp vào ống nghiệm một lượng nước cốt dứa bằng 1/6 thể tích dịch lọc có trong ống nghiệm và khuấy thật nhẹ. Để yên ống nghiệm trong 5 – 10 phút. Bước 3: Kết tủa DNA - Nghiêng ống nghiệm và rót cồn ethanol 90 0 dọc theo thành ống nghiệm một cách nhẹ nhàng và cẩn thận sao cho cồn tạo thành một lớp nổi trên bề mặt. Thể tích cồn sử dụng bằng với thể tích dịch có trong ống nghiệm. - Để ống nghiệm trên giá khoảng 10 phút và quan sát lớp cồn trong ống nghiệm. Chúng ta có thể quan sát được các phân tử DNA kết tủa lơ lửng trong cồn dưới dạng các sợi trắng đục. Bước 4: Dùng đũa thủy tinh đưa vào lớp cồn, khuấy nhẹ cho các phân tử DNA bám vào đũa thủy tinh rồi vớt ra và quan sát. Lưu ý: các phân tử DNA rất dễ gãy nên khi vớt ra khỏi cồn phai thực hiện hết sức cẩn thận và nhẹ nhàng 25 BÀI NỘP 1. Xác định vai trò của nước rửa chén và nước cốt dứa trong quy trình tách chiết DNA 2. Mô tả và giải thích các bước thực hiện tách chiết DNA . Becher - Nước rửa chén - Cối, chày sứ - Nước cất - Phễu thủy tinh - Giấy lọc - Ống đong 24 - Đũa thủy tinh - Dao, thớt 3. Thực hành Để tiến hành thí nghiệm tách chiết DNA từ các tế bào gan ta thực. chín): 1 quả: tiến hành gọt sạch vỏ, thái nhỏ và vắt nước  lọc qua giấy lọc và cho vào cốc - Gan gà tươi hoặc gan lợn - Đậu xanh - Giá 2.2. Dụng cụ và hóa chất - Ống nghiệm - Ethanol 90 0 lạnh -. 23 BÀI SỐ 5: TÁCH CHIẾT DNA I. LÝ THUYẾT DNA là vật chất mang thông tin di truyền trong cơ thể. DNA là một polymer được tạo thành từ các monomer là các nucleotide. Năm 19 53 , Watson