C¸c ph¬ng ph¸p C¸c ph¬ng ph¸p xÐt nghiÖm HIVxÐt nghiÖm HIV Nguyen Thi Nhu HaNguyen Thi Nhu Ha XÐt nghiÖm ph¸t hiÖn sµng läcXÐt nghiÖm ph¸t hiÖn sµng läc C¸c kü thuËt ELISAC¸c kü thuËt ELISA + HIV Uniform II plus O+ HIV Uniform II plus O + Genscreen HIV 1/2 version 2+ Genscreen HIV 1/2 version 2 + Murex HIV 1/2+ Murex HIV 1/2 C¸c xÐt nghiÖm nhanhC¸c xÐt nghiÖm nhanh + SFD HIV 1/2 PA+ SFD HIV 1/2 PA + Determine HIV 1/2+ Determine HIV 1/2 + Multispot HIV+ Multispot HIV 1/HIV1/HIV 22 + Genie II HIV 1/2+ Genie II HIV 1/2 Kỹ thuật SFD HIV 1/2 PAKỹ thuật SFD HIV 1/2 PA NhNhữững hạt gelatin đợc gắn với các thành phần kháng nguyên của ng hạt gelatin đợc gắn với các thành phần kháng nguyên của virut HIV(gp41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2) sẽ tạo ngng virut HIV(gp41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2) sẽ tạo ngng kết khi có sự hiện diện của kháng thể đặc hiệu trong huyết thanh kết khi có sự hiện diện của kháng thể đặc hiệu trong huyết thanh (hoặc huyết tơng) bệnh nhân cho phép phát hiện đồng thời (hoặc huyết tơng) bệnh nhân cho phép phát hiện đồng thời kháng thể của virut HIV 1 và 2kháng thể của virut HIV 1 và 2 Trong phản ứng ngng kết, mẫu thử đợc tiến hành đồng thời Trong phản ứng ngng kết, mẫu thử đợc tiến hành đồng thời trên hai giếng: với hạt gelatin không gắn kháng nguyên (giếng trên hai giếng: với hạt gelatin không gắn kháng nguyên (giếng chứng âm) và các hạt gelatin có gắn kháng nguyên (giếng phản chứng âm) và các hạt gelatin có gắn kháng nguyên (giếng phản ứng)ứng) Không có phản ứng ngng kết khi các hạt gelatin tự động lắng Không có phản ứng ngng kết khi các hạt gelatin tự động lắng xuống, gom lại thành nút nhỏ dới đáy giếngxuống, gom lại thành nút nhỏ dới đáy giếng Có phản ứng ngng kết khi các hạt gelatin kết hợp tạo thành một Có phản ứng ngng kết khi các hạt gelatin kết hợp tạo thành một mạng liên kết phủ đều trên giếngmạng liên kết phủ đều trên giếng ĐĐiều kiện để đọc kết quảiều kiện để đọc kết quả * Không có sự ngng kết ở các giếng chứng âm. * Không có sự ngng kết ở các giếng chứng âm. Trong trờng hợp có hiện tợng ngng kết ở Trong trờng hợp có hiện tợng ngng kết ở các giếng chứng âm phải sử lý huyết thanh các giếng chứng âm phải sử lý huyết thanh bằng cách cho hấp phụ các yếu tố làm ngng bằng cách cho hấp phụ các yếu tố làm ngng kết ngẫu nhiên trong huyết thanh thử nghiệm kết ngẫu nhiên trong huyết thanh thử nghiệm với các hạt gelatine không gắn kháng nguyên với các hạt gelatine không gắn kháng nguyên và làm lại phản ứngvà làm lại phản ứng ĐĐọc và biện luận kết quảọc và biện luận kết quả Mẫu âm tính: không có sự ngng kết ở cả hai Mẫu âm tính: không có sự ngng kết ở cả hai giếng chứng âm và giếng phản ứnggiếng chứng âm và giếng phản ứng Mẫu nghi ngờ: không có sự ngng kết ở giếng Mẫu nghi ngờ: không có sự ngng kết ở giếng chứng âm, có sự ngng kết không rõ ràng ở chứng âm, có sự ngng kết không rõ ràng ở giếng phản ứnggiếng phản ứng Mẫu dơng tính: không có ngng kết ở giếng Mẫu dơng tính: không có ngng kết ở giếng chứng âm, có ngng kết rõ ở giếng phản ứngchứng âm, có ngng kết rõ ở giếng phản ứng Ưu điểm của kỹ thuật SFDƯu điểm của kỹ thuật SFD Dễ thực hiệnDễ thực hiện Thao tác đơn giảnThao tác đơn giản Có thể làm hàng loạt Có thể làm hàng loạt Cho kết quả sau 2 giờ và đọc bằng mắt thờngCho kết quả sau 2 giờ và đọc bằng mắt thờng Sinh phẩm có tính đặc hiệu caoSinh phẩm có tính đặc hiệu cao Tỷ lệ dơng tính giả tơng đối thấp hơn so với Tỷ lệ dơng tính giả tơng đối thấp hơn so với kỹ thuật ELISAkỹ thuật ELISA Genscreen HIV1/2 version 2Genscreen HIV1/2 version 2 Là kỹ thuật ELISA sandwich với hai giai đoạnLà kỹ thuật ELISA sandwich với hai giai đoạn Sử dụng giếng microplate có gắn kháng nguyên tinh Sử dụng giếng microplate có gắn kháng nguyên tinh chế là các protein tái tổ hợp và tổng hợp của Gp160, chế là các protein tái tổ hợp và tổng hợp của Gp160, p25 và gp36 của HIV1 và HIV2p25 và gp36 của HIV1 và HIV2 Nếu trong mẫu thử có kháng thể kháng HIV1/HIV2, Nếu trong mẫu thử có kháng thể kháng HIV1/HIV2, kháng thể này sẽ gắn đặc hiệu với các kháng nguyên kháng thể này sẽ gắn đặc hiệu với các kháng nguyên cố định trên giếngcố định trên giếng Cộng hợp đợc cho vào ở giai đoạn hai là kháng Cộng hợp đợc cho vào ở giai đoạn hai là kháng nguyên đánh dấu bằng men Peroxidasenguyên đánh dấu bằng men Peroxidase Phức hợp Kháng nguyênPhức hợp Kháng nguyên Kháng thểKháng thể Cộng hợp sẽ đợc Cộng hợp sẽ đợc phát hiện bằng phản ứng hiện màu với cơ chấtphát hiện bằng phản ứng hiện màu với cơ chất . Genscreen HIV 1/ 2 version 2+ Genscreen HIV 1/ 2 version 2 + Murex HIV 1/ 2+ Murex HIV 1/ 2 C¸c xÐt nghiÖm nhanhC¸c xÐt nghiÖm nhanh + SFD HIV 1/ 2 PA+ SFD HIV 1/ 2 PA + Determine HIV 1/ 2+ Determine HIV 1/ 2 +. HIV 1/ 2 + Multispot HIV+ Multispot HIV 1 /HIV1 /HIV 22 + Genie II HIV 1/ 2+ Genie II HIV 1/ 2 Kỹ thuật SFD HIV 1/ 2 PAKỹ thuật SFD HIV 1/ 2 PA NhNhữững hạt gelatin đợc gắn với các thành phần kháng. của ng hạt gelatin đợc gắn với các thành phần kháng nguyên của virut HIV( gp 41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2 ) sẽ tạo ngng virut HIV( gp 41, p24 của HIV1 và gp36 của HIV2 ) sẽ tạo ngng kết khi có