CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU MÔ HỌC  Tại sao phải nghiên cứu mô học?  Vai trò của mô học trong công tác nghiên cứu về thủy sản như thế nào?  Mô học hiện nay đã phát triển như thế nào? Lịch sử nghiên cứu mô học  TK XVII TK XIX Hiện nay Bắt đầu nghiên cứu mô học Được công nhận, phát triển mạnh vào cuối tk 19 Phát triển nhiều kĩ thuật mới Phương pháp nghiên cứu mô học  Qui trình cơ bản trong nghiên cứu mô học: 1. Cố định mẫu 2. Xử lí mẫu 3. Nhuộm mẫu 4. Đọc mẫu mô 1. Cố định mẫu: Tại sao phải cố định mẫu?  Mẫu mô hay cơ quan của cá hoặc tôm sau khi tách ra khỏi cơ thể sẽ chết đi và trải qua quá trình hoại tử và nhanh chóng tan rã (trump et al., 1980)  Vì vậy cần phải ngăn chặn sự hoại tử và tan rã đó bằng việc cố định nhanh và ít gây ra sự thay đổi cấu trúc nhất. Mục tiêu cố định mẫu:  Ngăn chặn sự hoại tử và tan rã  Làm các tổ chức mô giữ vững cấu trúc trong suốt quá trình xử lý và nhuộm mẫu bằng nhiều loại hóa chất khác nhau.  Một mẫu mô được cố định tốt khi những tế bào cấu tạo nên mô đó vẫn giữ nguyên hình dáng, thể hiện được nhiều chi tiết và cấu trúc, đồng thời giữ được mối liên quan tương hỗ trong tế bào và mô giống như còn sống  Mô có thể được cố định bằng nhiều phương pháp:  Vật lí : nhiệt độ  Hóa học: các loại hóa chất  Các loại hóa chất cố định  Bouin:  AFA Davidson:  Formol trung tính (10%):  Việc chọn dung dịch cố định phụ thuộc vào mục đích nghiên cứu Thí dụ:  Sử dụng bouin trong nghiên cứu sự phát triển tuyến sinh dục  Sử dụng AFA để cố định mẫu mo bệnh học trên tôm… [...]... định hướng mô  Mục đích: Định hướng những mô cần quan sát  Mẫu mô có thể được cắt bỏ những phần không cần thiết, giúp tiết kiệm thời gian trong quan sát Qui trình xử lý mẫu 1 Loại nước 2 Làm trong mẫu 3 Ngấm paraffin 1 Loại Nước  Việc khử nước phải đảm bảo nguyên tắc là loại bỏ hết nước trong mô mà không làm tế bào bị biến dạng hoặc không làm vị trí của thành phần cấu tạo tế bào trong mô bị thay... thực hiện bằng cách nhúng mẫu mô qua hàng loạt các dung dịch cồn có nồng độ từ thấp đến cao Thời gian khử nước tùy theo độ dày của mẫu mô Ví dụ: xử lí mẫu qua cồn 50-70-95100  2 Làm trong mẫu    Mục đích:Do paraffin không thể hòa tan vào cồn nên cần một dung môi vừa có khả năng hòa tan cồn và paraffin Có nhiều loại dung môi làm trong mẫu: chloroform, xilen… Các dung môi này thường có chỉ số khúc... số qui trình xử lý mẫu sẽ được thay đổi Thí dụ: nghiên cứu tế bào máu … CẮT MẪU  Mục đích của bước này là nhằm cắt mẫu mô thành những lát cắt thật mỏng có khả năng cho ánh sáng xuyên qua để có thể quan sát được bằng kính hiển vi    Có 2 phương pháp cắt mẫu thường được áp dụng Cắt lạnh: Cắt mô đúc trong khối paraffin:     Điểm khác biệt của hai phương pháp này: Nhiệt độ: Dung dịch cố định Hình... trong các lọ paraffin nóng chảy (57-600) với thời gian thay đổi 1-3h tùy theo kích thước mẫu mô Đối với những mẫu mô ngấm chậm phải kéo dài thời gian nâm trong paraffin có thể từ 6-12h   Thông thường trong các qui trình mẫu thường được chuyển qua nhiều dung dịch paraffin Mục đích: dung môi của paraffin trong miếng mô được đẩy ra hết ĐÚC KHỐI   Mục đích: Để cố định mẫu Đối với mẫu cắt lạnh thì khối được... paraffin  Trở ngại chính trong quá trình đúc khối paraffin là làm miếng mô co lại, nguyên nhân là do nhiệt độ nóng chảy của paraffin (Bennett et al., 1976)   gan cá hồi nếu được đúc khối theo kĩ thuật thường sử dụng là paraffin thì mức độ co của mẫu so với ban đầu khoảng 25% trái lại nếu đúc khối bằng glycol methacrylate thì mẫu mô chỉ co lại khoảng 1-2%   Khi cần phân tích các thể huyền phù trong.. .Phương pháp cố định  Kích thước mẫu có ảnh hưởng đến hiệu quả cố định  Tuy nhiên, độ dày của mẫu có tính quyết định đến hiệu quả cố định   Đối với loại dung dịch cố định có khả năng ngấm kém, chiều dày mẫu mô không quá 1-2mm Nếu dung dịch có khả năng ngấm mạnh và sâu thì chiều dài của nó không quá 5mm... (0.002%) NHUỘM MÀU Mục đích: quan sát tế bào rõ hơn  Có nhiều phương pháp để nhuộm mẫu    Loại bỏ paraffin: Do paraffin rất khó thấm được các loại thuốc nhuộm, nên cần phải loại chúng ra khỏi mẫu Xylen là hóa chất thường được sử dụng cho mục đích này Loại xylen bằng cồn tuyệt đối: Xylen không hòa tan được vào các dung dịch có dung môi là nước nên cần phải loại xylen bằng cồn tuyệt đối Xử lý mẫu... dày mẫu mô không quá 1-2mm Nếu dung dịch có khả năng ngấm mạnh và sâu thì chiều dài của nó không quá 5mm   Thể tích dung dịch cố định: thể tích dung dịch cố định cần lớn hơn nhiều so với thể tích mẫu mô (ít nhất 50 lần) Thời gian cố định: thời gian cố định phụ thuộc vào từng loại dung dịch cố định, thường dao động từ 2-4h  Nhiệt độ cố định: Nhiệt độ cao làm tăng và lạnh làm chậm khả năng ngấm của... các dung dịch có dung môi là nước nên cần phải loại xylen bằng cồn tuyệt đối Xử lý mẫu qua cồn với nồng độ giảm dần   Làm cho mẫu ngậm nước: là bước trung gian để chuyển mẫu về cùng điều kiện với dung môi hòa tan loại thuốc nhuộm được sử dụng đầu tiên Thông thường nước cất được sử dụng cho mục đích này Nhuộm màu: mẫu được nhuộm bằng 1 dung dịch hoặc bằng nhiều loại thuốc nhuộm khác nhau Thời gian nhuộm . CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU MÔ HỌC  Tại sao phải nghiên cứu mô học?  Vai trò của mô học trong công tác nghiên cứu về thủy sản như thế nào?  Mô học hiện nay đã phát. nào? Lịch sử nghiên cứu mô học  TK XVII TK XIX Hiện nay Bắt đầu nghiên cứu mô học Được công nhận, phát triển mạnh vào cuối tk 19 Phát triển nhiều kĩ thuật mới Phương pháp nghiên cứu mô học  Qui. cứu mô học  Qui trình cơ bản trong nghiên cứu mô học: 1. Cố định mẫu 2. Xử lí mẫu 3. Nhuộm mẫu 4. Đọc mẫu mô 1. Cố định mẫu: Tại sao phải cố định mẫu?  Mẫu mô hay cơ quan của cá hoặc tôm sau