72 Chương PHẢN ỨNG KẾT HỢP KHÁNG NGUYÊN - KHÁNG THỂ I Cơ chế kết hợp kháng nguyên - kháng thể Sự kết hợp kháng nguyên-kháng thể dịch thể đặc hiệu nhờ vào lực liên kết lý hóa sau: * Lực liên kết phân tử với hay gọi lực liên kết Wander-Wals * Lực hút tĩnh điện nhóm chức khác Ví dụ nhóm amin nhóm carboxyl * Lực liên kết cầu nối hydro với * Lực kỵ nước Phản ứng kết hợp kháng nguyên kháng thể khơng phải phản ứng hóa học hồn tồn, nên người ta tách trở lại thành phần kháng nguyên kháng thể II Phản ứng ngưng kết - Agglutination test Nguyên lý Đây phản ứng với kháng ngun hữu hình (ví dụ xác vi khuẩn) Khi găp kháng thể đặc hiệu, kháng nguyên kết lại với thành đám lớn mà mắt thường quan sát Đó tượng ngưng kết trực tiếp, Khi thể miễn dịch, huyết có chứa nhiều kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên tương ứng Khi cho kháng nguyên hữu hình trộn với kháng thể đặc hiệu tương ứng, vi khuẩn kết lại với qua cầu nối kháng thể đặc hiệu Do cầu nối với kháng nguyên hình thức mạng lưới nhiều chiều, tạo nên đám ngưng kết biểu 73 đám lấm lổn nhổn hạt cát cụm lơ lửng Các phản ứng ngưng kết thường đơn giản, dễ làm, có độ nhạy cao, không tốn kém, sử dụng rộng rãi, có nhược điểm khó đạt trình độ xác cao, thường hay cho phản ứng dương tính giả Hình 20: Phản ứng ngưng kết A - Khơng xẩy vị trí IgG gắn vào xác vi khuẩn B - Xảy IgG trở thành cầu nối xác vi khuẩn C - Rất dễ xảy kháng thể loại IgM Các loại phản ứng ngưng kết 2.1 Phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính Là phản ứng có tính chất định tính, thường sử dụng kháng nguyên biết nhuộm màu để phát kháng thể tương ứng huyết 74 Dùng phiến kính, nhỏ giọt huyết cần chẩn đốn, sau nhỏ vào giọt kháng nguyên biết, trộn đều, sau vài phút đọc kết quả, huyết có kháng thể tương ứng, kết hợp kháng nguyên kháng thể tạo thành đám ngưng kết, kháng nguyên nhuộm màu, đám ngưng kết có màu cụm lại, xung quanh nhạt màu 2.2 Phản ứng ngưng kết chậm ống nghiệm Là phản ứng vừa có tính định tính vừa định lượng hàm lượng kháng thể Dùng loạt ống nghiệm, ống cho vào lượng không đổi huyết có độ pha lỗng khác theo số (1/2, 1/4, 1/8, 1/16 ) theo số 10 (1/10, 1/100, 1/1000, 1/10.000 ) sau cho vào ống nghiệm lượng tương đương kháng nguyên, để nhiệt độ thích hợp theo yêu cầu phản ứng, sau 30 phút vài đọc kết tính hiệu giá ngưng kết Hiệu giá ngưng kết độ pha lỗng cao mà xảy tượng ngưng kết 2.3 Phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động Khi dùng kháng nguyên hòa tan để phát kháng thể tương ứng phản ứng ngưng kết, phải cần đến tế bào mang, người ta thường dùng hồng cầu, hạt chất dẻo hạt latex, bentonit Nguyên lý: Làm cho kháng ngun hịa tan trở thành kháng ngun hữu hình, cách gắn kháng nguyên vào hồng cầu, hồng cầu đóng vai trị giá đỡ cho kháng ngun, kháng nguyên gắn hồng cầu kháng ngun trở thành kháng ngun hữu hình phản ứng ngưng kết xảy dễ dàng Có nhiều phương pháp để gắn kháng nguyên hòa tan bề mặt hồng cầu Có thể xử lý hóa chất a xít tanic, benzidin, muối crom, glutaraldehyd hóa chất có nhóm chức gắn với hồng cầu nhóm chức cịn lại gắn với kháng ngun 75 Khi có phản ứng xảy ra, nghĩa có kháng thể tương ứng với kháng ngun, kháng thể nối kháng nguyên lại kháng nguyên gắn với hồng cầu hấp phụ vào hạt chất dẻo, tạo nên ngưng kết nhìn thấy rõ ràng Hình 21 Phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (Phản ứng HI) Nguyên lý: Một số loại vi rút (vi rút cúm, vi rút Newcastle) có đặc tính gây ngưng kết hồng cầu số loài gia súc gia cầm Nếu gặp kháng thể đặc hiệu tương ứng, vi rút bị kháng thể trung hịa, khơng cịn vi rút để tiếp xúc với hồng cầu, hay nói cách khác, kháng thể ngăn trở ngưng kết hồng cầu vi rút Còn vi rút không gặp kháng thể đặc hiệu tương ứng, vi rút khơng bị trung hịa vi rút làm hồng cầu ngưng kết lại với - Phương pháp tiến hành phản ứng: thường dùng vi rút biết để làm phản ứng HI với huyết cần chẩn đốn Phản ứng vừa có tính chất định tính vừa có tính chất định lượng Vi rút pha với nồng độ đơn vị HA (Haemagglutination) 76 Huyết pha loãng theo số 2: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 theo số 10 : 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000 Cho hỗn hợp vi rút huyết nồng độ với lượng định, để nhiệt độ thích hợp Sau thời gian 10-20 phút, cho lượng hồng cầu pha loãng từ 0,5-1% với lượng định vào tất ống Đọc kết sau 15-30 phút Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống đáy thành cục trịn đỏ, chứng tỏ huyết tương ứng với vi rút Phản ứng âm tính: Hồng cầu bị ngưng kết thành mạng, chứng tỏ huyết không tương ứng với vi rút, nên vi rút làm ngưng kết hồng cầu III Phản ứng kết tủa (Precipitation test) 1- Nguyên lý: Giống phản ứng ngưng kết, khác kháng nguyên phản ứng kháng nguyên hòa tan trộn với kháng thể dịch thể tương ứng, chất hòa tan huyết Nếu thiếu thừa thành phần kết tủa khó xảy ra, kết tủa biểu chất cặn màu sáng trắng dễ quan sát Phản ứng kết tủa cần có số điều kiện như: nhiệt độ, pH, ion môi trường điện giải Phản ứng kết tủa môi trường lỏng 1.1 Phản ứng kết tủa vịng Là phản ứng có tính chất định tính Dùng ống nghiệm loại nhỏ, cho kháng ngun hịa tan vào trước, sau dùng pipet hút huyết có kháng thể tương ứng, để đầu mút pipet vào sát đáy ống nghiệm nhỏ từ từ cho kháng thể vào, với lượng tương đương, kháng thể đội kháng ngun lên (vì kháng ngun hịa tan nên nhẹ kháng thể) 77 Để yên vòng 15-20 phút thấy xuất vòng kết tủa màu trắng chỗ tiếp xúc lớp kháng nguyên kháng thể, kháng nguyên kháng thể tương ứng (hình 23a) Người ta thường dùng kháng thể dịch thể chuẩn biết để chẩn đoán kháng nguyên chưa biết với điều kiện kháng nguyên phải chiết xuất thành dung dịch hòa tan Phản ứng kết tủa vịng ứng dụng nhiều chẩn đốn bệnh nhiệt thán, gọi phản ứng kết tủa Ascoli (hình 23b) Kháng huyết 0,5ml Dung dịch kháng nguyên Kháng nguyên 0,5ml Kháng nguyên âm 0,5ml Vòng ngưng kết Kháng huyết Kháng nguyên Vòng trắng đục Kháng nguyên âm Kháng huyết Hình 22a Phản ứng Hình 22b Phương pháp làm phản ứng kết tủa vòng Ascoli 78 1.2 Phản ứng kết tủa ống nghiệm Là phản ứng vừa có tính định tính, vừa có tính định lượng Dùng loạt ống nghiệm, cho huyết vào ống nghiệm đó, sau cho kháng nguyên vào với lượng từ đến nhiều Kết thấy có kết tủa xảy rõ ống có kháng nguyên vừa đủ với kháng thể, ống có thừa kháng ngun kết tủa khơng xảy 1.3 Phản ứng kết tủa môi trường đặc Cho kháng nguyên kháng thể gặp môi trường thạch quan sát đường kết tủa Kháng nguyên Vùng trung gian Kháng thể Hình 23 Miễn dịch khuếch tán đơn (A) miễn dịch khuếch tán kép (B) ống nghiệm 79 Nguyên lý: Lợi dụng tính chất khuếch tán chúng phía nhau, gặp nhau, kết hợp với bão hòa kết tủa vùng có tỷ lệ tương ứng đồng kháng nguyên kháng thể Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch ống nghiệm (Kỹ thuật Oudin): Có thể chia làm hai loại: Phản ứng kết tủa khuếch tán đơn kép Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch đơn Thạch trộn sẵn kháng thể (hoặc kháng nguyên) cho vào ống nghiệm trước, sau cho lên mặt thạch lượng dung dịch kháng nguyên (hoặc kháng thể) Kháng nguyên (hoặc kháng thể) khuếch tán vào thạch xuống phía gặp kháng thể (hoặc kháng nguyên) có kết hợp, bão hòa, kết tủa thành đường màu trắng Nếu dùng nhiều đôi kháng nguyên kháng thể khác ống nghiệm để chẩn đốn xuất nhiều đường kết tủa riêng rẽ độ nông sâu khác theo cặp kháng nguyên-kháng thể tương ứng 1.4 Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch kép Cho kháng thể vào trước, cho vào kháng thể lớp thạch bình thường: (khơng chứa kháng nguyên, kháng thể) Sau cho lên mặt thạch dung dịch kháng nguyên hòa tan (hoặc ngược lại) Kháng nguyên bên khuyêch tán xuống vào thạch, kháng thể bên khuếch tán lên vào thạch, gặp nơi đó, kết hợp bão hịa kết tủa Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch phiến kính đĩa petri, thạch đơng đặc, đục lỗ trịn nhỏ có kích thước khoảng cách nhau, tthường đục cụm lỗ, lỗ trung tâm lỗ xung quanh 80 Nhỏ vào lỗ trung tâm kháng nguyên kháng thể chuẩn biết, lỗ xung quanh nhỏ kháng thể kháng nguyên cần chẩn đoán, chúng khuếch tán phía xuất vạch kết tủa, kháng nguyên kháng thể tương ứng I II Hình 24a (Theo Ian R Tizard 2004) I Định hiệu giá huyết II Định hiệu gía kháng nguyên - Kháng nguyên - Kháng thể 2, 3, 4, 5, - kháng thể pha loãng 2, 3, 4, 5, - kháng thể pha loãng từ: 1/2, 1/4, 1/8, 1/32 từ: 1/2, 1/4, 1/8, 1/32 I II Hình 24b (Theo Ian R Tizard 2004) I Định loại kháng nguyên II Định loại kháng thể - Kháng thể biết 1- Kháng nguyên biết 2, 3, 4, - kháng nguyên chưa biết 2, 3, 4, - kháng thể chưa biết - kháng nguyên tương ứng - kháng thể tương ứng Phản ứng dương tính Phản ứng âm tính 81 Hình 24c Phản ứng kết tủa khuyếch tán làm đĩa lồng (Theo Ian R Tizard 2004) A B C Hình 25 Hiện tượng hai kháng ngun: Khơng đồng (A); đồng (B); đồng phần (C) phát phản ứng Ouchterlony 82 Nhận định kết vào đường kết tủa, có trường hợp sau: Các lỗ chứa kháng nguyên đồng tương ứng với kháng thể đường kết tủa gặp nối liền Nếu hai lỗ chứa kháng nguyên có phần tương ứng với phần khác kháng thể xuất hai đường kết tủa cắt nhau, tức kháng ngun khơng có liên quan với Nếu lỗ chứa kháng nguyên có liên quan phần có chung nhóm định X (KN XY KNXZ) phản ứng với hỗn hợp kháng thể chống XY, tạo đường kết tủa gặp nhau, đường dài đường ngắn (giống hình cựa gà) 1.5 Phương pháp điện di miễn dịch (Electrophoresis) Là phương pháp cải tiến phương pháp kết tủa khuếch tán thạch sử dụng điện trường kháng nguyên kháng thể gặp nhau, phương pháp thực qua giai đoạn Giai đoạn 1, tách rời thành phần kháng nguyên trước điện di Giai đoạn 2, miễn dịch khuếch tán, đặt huyết có chứa kháng thể vào rãnh dọc theo trục đi, kháng nguyên kháng thể khuếch tán để gặp kết tủa IV Phản ứng kết hợp bổ thể Phản ứng kết hợp bổ thể thực nhờ hệ thống: hệ thống dung khuẩn hệ thống dung huyết với tham gia bổ thể, tượng dung huyết quan sát mắt thường, phải dùng hệ thống dung huyết để đánh giá kết Cho hệ thống dung khuẩn (hệ thống 1) vào ống nghiệm trước, gồm có kháng nguyên biết huyết vật cần chẩn đoán đun lên 56° 30 phút để diệt bổ thể, sau cho tiếp vào ống nghiệm lượng bổ thể chuẩn độ vủa đủ lượng cần thiết (thường dùng huyết tươi chuột lang) ủ 37°trong vòng 20-30 phút 83 Hình 26 Nguyên lý phản ứng kết hợp bổ thể (Theo Ian R Tizard 2004) Nếu bổ thể kết hợp với KN-KT không xảy tượng tan hồng cầu Nếu khơng có kháng thể để kết hợp bổ thể làm tan hồng cầu - Sau cho tiếp vào ống nghiệm hệ thống (hệ thống dung huyết) gồm có hồng cầu huyết miễn dịch chống hồng cầu cừu đun 56° 30 phút để diệt bổ thể, ủ tiếp hệ thống 37° 20-30 phút đọc kết Nếu hệ thống (hệ thống dung khuẩn), kháng nguyên kháng thể tương ứng, kết hợp kháng nguyên kháng thể chiếm lấy bổ thể, khơng cịn bổ thể cho hệ thống 2, nên khơng có dung huyết, hồng cầu đóng thành cục trịn đỏ đáy ống nghiệm Phản ứng dương tính, tức vật có kháng thể tương ứng với kháng nguyên - Nếu hệ thống khơng có kết hợp kháng ngun kháng thể huyết khơng có kháng thể tương ứng, bổ thể không dùng cho hệ thống 1, bổ thể tham gia vào hệ thống làm tan hồng cầu, tạo nên huyễn dịch có màu đỏ Phản ứng âm tính, tức huyết khơng có kháng thể tương ứng V Phản ứng trung hòa Phản ứng trung hòa độc tố Độc tố vi khuẩn vơ độc formol trở thành giải độc tố, khơng cịn tính độc cịn tính kháng ngun cao, nên người ta thường dùng giải độc tố làm vắc xin, tiêm cho thể, chúng kích thích thể sinh kháng thể tốt Khi kháng thể đặc hiệu 84 gặp độc tố tương ứng chúng kết hợp làm cho độc tố khơng cịn hoạt tính hay gọi độc tố bị trung hòa Huyết chứa kháng thể kháng độc tố gọi huyết kháng độc tố sử dụng vào mục đích chữa bệnh Khi tiêm huyết kháng độc tố vào thể, gặp độc tố, chúng kết hợp trung hịa độc tố đó, phản ứng trung hòa thể Nếu cho kháng độc tố (kháng thể đặc hiệu chống độc tố) kết hợp với độc tố tương đương, phản ứng trung hòa xảy ra, thực in vitro ống nghiệm, thấy phức hợp miễn dịch biểu cụm bơng lơ lửng, người ta gọi phản ứng lên Phản ứng trung hòa virus Khi virus bị kháng thể đặc hiệu kết hợp khơng cịn khả gây bệnh nên phản ứng kết hợp virus với kháng thể gọi phản ứng trung hòa virus Người ta dùng kháng huyết liệu pháp (huyết miễn dịch có chứa kháng thể đặc hiệu) để can thiệp vào ổ dịch virus gây Lúc trung hòa virus xảy sau tiêm huyết miễn dịch vào thể vật khơng cịn bị virus gây bệnh Với mục đích chẩn đốn virus phịng thí nghiệm in vitro, người ta thực phản ứng trung hịa virus phôi gà, động vật cảm thụ, môi trường tế bào nuôi cấy Nguyên lý phương pháp này: đối tượng nuôi cấy (phôi gà, động vật cảm thụ, môi trường tế bào) virus nhân lên gây bệnh tích cho đối tượng trên, hỗn hợp virus với kháng thể đặc hiệu tương ứng, chúng bị trung hòa, khơng nhân lên khơng gây bệnh tích Nếu pha loãng virus (theo số 10) hỗn hợp với lượng tương đương huyết miễn dịch nồng độ, thực phản ứng trung hòa đối tượng trên, người ta gọi phản ứng trung 85 hòa theo phương pháp virus pha loãng, huyết cố định Bằng phản ứng người ta chuẩn độ virus Nếu nồng độ virus cố định (thường dùng 100 đến 1000 liều ID50 LD50) pha loãng huyết theo số 2: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 hỗn hợp trên, thực phản ứng trung hịa người ta gọi phản ứng trung hòa theo phương pháp virus cố định, huyết pha loãng Bằng phương pháp người ta xác định hiệu giá huyết trung hòa Phản ứng trung hịa có ý nghĩa, người ta sử dụng để định typ virus, định lượng kháng thể, chuẩn độ liều gây nhiễm liều gây chết 50% đối tượng thí nghiệm loại virus VI Các phản ứng sử dụng kháng thể đánh dấu Trong nhiều trường hợp để phát phức hợp kháng nguyênkháng thể cần phải sử dụng số kỹ thuật nhìn thấy Người ta thường dùng ký thuật sau đây: Phản ứng miễn dịch huỳnh quang: Dùng thuốc nhuộm huỳnh quang để nhuộm kháng thể cho kết hợp với kháng nguyên (trực tiếp gián tiếp) phát phức hợp kháng nguyên-kháng thể kính hiển vi huỳnh quang Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzym hay gọi phản ứng ELISA Phản ứng miễn dịch huỳnh quang (Immuno-fluorescent test) Khi kháng thể kháng-kháng thể nhuộm màu thuốc nhuộm huỳnh quang (thường dùng Fluoescein isothiocyanat có màu xanh lục, rodamin có màu đỏ gạch) cho kết hợp với kháng nguyên, phức hợp kháng nguyên- kháng thể soi kính hiển vi huỳnh quang phát sáng Thuốc nhuộm huỳnh quang phải đạt tiêu chuẩn: Không làm tổn thương tới tính sinh miễn dịch kháng thể Kết hợp với kháng thể cách bền vững Với lượng có màu sắc rõ rệt 86 Thuốc dễ sử dụng dế phân biệt với mầu khác 1.1 Phản ứng miễn dịch huỳnh quang trực tiếp Trong phản ứng thường dùng kháng thể đặc hiệu nhuộm màu để phát kháng nguyên chưa biết Nguyên lý: Làm tiêu với bệnh phẩm cần chẩn đoán, cố định để kháng nguyên gắn chặt lên phiến kính, sau cho giọt kháng thể đặc hiệu nhuộm huỳnh quang lên tiêu bản, để tác động thời gian, sau rửa nước, để khơ quan sát kính hiển vi huỳnh quang Nếu có kết hợp kháng nguyên kháng thể thấy phát sáng Nếu kháng thể khơng tương ứng với kháng ngun khơng có kết hợp kháng ngun-kháng thể, rửa nước kháng thể bị trơi đi, khơng thấy phát sáng 1.2 Phản ứng miễn dịch huỳnh quang gián tiếp Có thành phần tham gia phản ứng: kháng thể đặc hiệu, kháng-kháng thể đặc hiệu nhuộm huỳnh quang kháng nguyên cần chẩn đoán Như kháng thể đăc hiệu có chức năng: chức kháng thể kháng nguyên cần chẩn đoán chức kháng nguyên kháng kháng thể nhuộm màu Phương pháp: Làm tiêu với bệnh phẩm cần chẩn đoán, cố định để kháng nguyên gắn chặt tiêu Nhỏ giọt kháng thể đặc hiệu lên bệnh phẩm cần chẩn đoán, để tác động 10-15 phút, rửa nước Nhỏ tiếp giọt kháng kháng thể nhuộm huỳnh quang, để tác động thời gian, rửa nước để khô, quan sát đánh giá kết kính hiển vi huỳnh quang Nếu có phát sáng tức có phức hợp kháng nguyên-kháng thể-kháng kháng thể, phản ứng dương tính, gia súc có mang mầm bệnh 87 Nếu khơng có phát sáng, tức khơng có phức hợp kháng ngun-kháng thể-kháng kháng thể Phản ứng âm tính, gia súc khơng mang mầm bệnh Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzym (ELISA - Enzym - Linking Immunosorbent Assay) Đây nhữnng phương pháp quan trọng ứng dụng rộng rãi chẩn đốn thú y 2.1 Phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể Hình 27 ELISA sandwich Kháng nguyên gắn vào khay nhựa kháng thể Sự có mặt kháng nguyên xác định kháng thể thứ kháng - kháng thể gắn enzyme (Theo Ian R Tizard 2004) Nguyên lý: Các giếng khay nhựa phủ sẵn kháng nguyên Kháng nguyên phải gắn chặt vào khay nhựa cho sau rửa phải lớp kháng nguyên phủ giếng Nhỏ huyết (cần kiểm tra) vào giếng, huyếtt có kháng thể đặc hiệu 88 kháng thể kết hợp với kháng nguyên pha sẵn giếng Sau ủ rửa để loạii bỏ kháng thể không gắn với kháng nguyên, kháng thể kết hợp với kháng nguyên phát kháng kháng thể gắn enzyme, nhỏ chất enzyme làm đổi màu thành phần phản ứng Độ đậm màu sắc tỷ lệ với lượng kháng thể gắn enzyme gắn với kháng thể có giếng, tức tỷ lệ thuận với lượng kháng thể có huyết Kết phản ứng xác định mắt thường máy đo quang phổ 2.2 Phản ứng ELISA trực tiếp tìm kháng nguyên Cố định kháng thể đặc hiệu vào giếng khay nhựa, rửa nước để loại bỏ kháng thể không gắn Cho huyết huyễn dịch bệnh phẩm (nghi có chứa kháng nguyên) chiết xuất thành dung dịch vào Nếu có kháng nguyên tương ứng chúng gắn với kháng thể đặc hiệu Rửa nước để loại bỏ thành phần thừa Cho kháng kháng thể gắn enzym vào Kháng kháng thể gắn với kháng nguyên phức hợp kháng nguyên-kháng thể bước Rửa nước để loại bỏ thành phần thừa phản ứng Sau cho chất enzym vào, có xuất màu tức có kháng nguyên tương ứng vớii kháng thể đặc hiệu, phản ứng dương tính Nếu khơng xuất màu, tức khơng có kháng ngun tương ứng với kháng thể nên khơng có kết hợp kháng nguyên-kháng thể kháng nguyên kháng kháng thể bị rửa trơi Phản ứng âm tính Phản ứng tạo tập hợp kháng thể-kháng nguyên-kháng thể nên gọi phản ứng ELISA sandwich Phản ứng sử dụng rộng rãi, đặc biệt trường hợp lượng kháng ngun q khơng đủ để phát phương pháp trực tiếp 89 Hình 28 ELISA gián tiếp Kháng nguyên gắn trực tiếp vào khay Sự có mặt kháng thể xác định kháng kháng thể gắn enzyme Sau thêm chất phản ứng màu xuất tỷ lệ thuận với lượng kháng thể có huyết (Theo Ian R Tizard 2004) Hình 29 ELSA đánh dấu kháng nguyên Huyết phản ứng cho vào khay phủ kháng nguyên Sau phát triển kháng huyết đánh dấu có gắn enzyme (Theo Ian R Tizard 2004) 90 Phương pháp Immunoperoxidase Enzyme gắn vào kháng thể kháng kháng thể sử dụng để phát kháng ngun có mơ bào Horseradish peroxidase enzyme sử dụng rộng rãi Có phương pháp trực tiếp gián tiếp Phương pháp trực tiếp: Tiêu mô bào xử lý kháng thể gắn enzyme Sau rửa, tiêu ủ với chất enzyme thích hợp Kháng thể phát nhờ có xuất màu có kết hợp kháng nguyên-kháng thể Phương pháp gián tiếp: Trong phản ứng kháng thể phát nhờ kháng kháng thể gắn enzyme Phương pháp Western Blotting Đây phương pháp để xác định kháng nguyên hỗn hợp nhiều loại kháng nguyên Phương pháp gồm bước chính: Bước bước điện di gel để tách loại protein riêng biệtt Bước 2: Chuyển protein lên giấy thấm Bước phát kháng nguyên phản ứng miễn dịch enzyme: Màng ủ huyết có chưa kháng thể nguyên Sau rửa, kháng kháng thể gắn enzyme bổ sung vào màu xuất (tại dải có chứa kháng nguyên tương ứng với kháng thể) sau gặp chất enzyme thích hợp  ... kháng huyết liệu pháp (huyết miễn dịch có chứa kháng thể đặc hiệu) để can thiệp vào ổ dịch virus g? ?y Lúc trung hòa virus x? ?y sau tiêm huyết miễn dịch vào thể vật không cịn bị virus g? ?y bệnh Với... ứng miễn dịch đánh dấu enzym (ELISA - Enzym - Linking Immunosorbent Assay) Đ? ?y nhữnng phương pháp quan trọng ứng dụng rộng rãi chẩn đoán thú y 2.1 Phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể Hình 27. .. Định loại kháng nguyên II Định loại kháng thể - Kháng thể biết 1- Kháng nguyên biết 2, 3, 4, - kháng nguyên chưa biết 2, 3, 4, - kháng thể chưa biết - kháng nguyên tương ứng - kháng thể tương