NHÓM 2 NHÓM 2 1 1 BÁO CÁO BÁO CÁO Chuyên đề: Chuyên đề: NUÔI CẤY VÀ PHÂN LẬP NUÔI CẤY VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN SALMONELLA VI KHUẨN SALMONELLA 2 2 Hình ảnh vi khuẩn Salmonella Hình ảnh vi khuẩn Salmonella 3 3 1. Đặc điểm vi khuẩn 1. Đặc điểm vi khuẩn 2. Đặc tính sinh lý 2. Đặc tính sinh lý 3. Đặc tính sinh hóa 3. Đặc tính sinh hóa 4. Phương pháp phân lập 4. Phương pháp phân lập 5. Thử nghiệm và cách nhận 5. Thử nghiệm và cách nhận biết biết 4 4 1. Đặc điểm vi khuẩn 1. Đặc điểm vi khuẩn Giống Giống Salmonella Salmonella có khoảng 2300 serotype và có khoảng 2300 serotype và thuộc họ thuộc họ Enterobacteriacaea Enterobacteriacaea . . Salmonella Salmonella spp. có spp. có những đặc điểm sau: Gram âm, hình que, kỵ khí những đặc điểm sau: Gram âm, hình que, kỵ khí tùy nghi, với đường kính khoảng 0,7-1,5 tùy nghi, với đường kính khoảng 0,7-1,5 micromet micromet , dài 2-5 micromet, và , dài 2-5 micromet, và roi roi mà cấp theo mà cấp theo mọi hướng. Di động bằng tiên mao nhưng những mọi hướng. Di động bằng tiên mao nhưng những dạng đột biến có thể không di động và có một dạng đột biến có thể không di động và có một serotype (Gallinarum) là không di động. serotype (Gallinarum) là không di động. 5 5 1. Đặc điểm vi khuẩn 1. Đặc điểm vi khuẩn Các chủng Các chủng Salmonella Salmonella tạo acid từ glucose và tạo acid từ glucose và mannitol nhưng không tạo acid từ saccharose mannitol nhưng không tạo acid từ saccharose và lactose. Chúng không tạo indol và không và lactose. Chúng không tạo indol và không phân cắt urea. Phần lớn các chủng sinh H phân cắt urea. Phần lớn các chủng sinh H 2 2 S và S và có enzyme Lysine decarboxylase và Ornithine có enzyme Lysine decarboxylase và Ornithine decarboxylase. decarboxylase. 6 6 1. Đặc điểm vi khuẩn 1. Đặc điểm vi khuẩn Giống Giống Salmonella Salmonella được chia thành nhiều được chia thành nhiều serotype theo xếp loại của Kauffmann-White, serotype theo xếp loại của Kauffmann-White, dựa theo kháng nguyên thân (somatic) O và dựa theo kháng nguyên thân (somatic) O và kháng nguyên H (flagella). Một số serotype như kháng nguyên H (flagella). Một số serotype như Enteritidis, Typhi, Paratyphi và Typhimurium Enteritidis, Typhi, Paratyphi và Typhimurium được xếp loại theo phage. được xếp loại theo phage. 7 7 2. Đặc tính sinh lý 2. Đặc tính sinh lý - Kém đề kháng với điều kiện bên ngoài, bị phá - Kém đề kháng với điều kiện bên ngoài, bị phá huỷ bởi quá trình tiệt trùng bằng phương pháp huỷ bởi quá trình tiệt trùng bằng phương pháp Pasteur & đun nấu kỹ. Pasteur & đun nấu kỹ. - Tuy nhiên Samonella có thể sống sót trong thời - Tuy nhiên Samonella có thể sống sót trong thời gian dài ở các thực phẩm khô & ướp lạnh, do đó gian dài ở các thực phẩm khô & ướp lạnh, do đó khi làm tan thực phẩm đông lạnh vi khuẩn này khi làm tan thực phẩm đông lạnh vi khuẩn này dễ phát triển lại. dễ phát triển lại. 8 8 - Sức đề kháng yếu: sống sót kém ở pH < 5, và - Sức đề kháng yếu: sống sót kém ở pH < 5, và chết ở 60OC trong vòng 20 phút, 700C trong 2 chết ở 60OC trong vòng 20 phút, 700C trong 2 phút và 850C trong 1 giây, dưới ánh sáng 5h phút và 850C trong 1 giây, dưới ánh sáng 5h chết. Sự đóng băng có thể làm giảm số lượng vi chết. Sự đóng băng có thể làm giảm số lượng vi khuẩn nhưng Salmonella có thể còn tồn tại trong khuẩn nhưng Salmonella có thể còn tồn tại trong thời gian rất dài ở các thực phẩm đã đóng băng thời gian rất dài ở các thực phẩm đã đóng băng như thịt, cá. như thịt, cá. - Salmonella nhạy cảm với nồng độ muối, nồng - Salmonella nhạy cảm với nồng độ muối, nồng độ tối đa cho sự phát triển là 5,3%, ở nồng độ 6- độ tối đa cho sự phát triển là 5,3%, ở nồng độ 6- 8% vi khuẩn phát triển chậm, ở nồng độ 8-19% vi 8% vi khuẩn phát triển chậm, ở nồng độ 8-19% vi khuẩn ngừng phát triển khuẩn ngừng phát triển . . 9 9 Salmonella nhạy cảm với nồng độ muối, Salmonella nhạy cảm với nồng độ muối, nồng độ tối đa cho sự phát triển là 5,3%, ở nồng độ tối đa cho sự phát triển là 5,3%, ở nồng độ 6-8% vi khuẩn phát triển chậm, ở nồng độ 6-8% vi khuẩn phát triển chậm, ở nồng độ 8-19% vi khuẩn ngừng phát triển. nồng độ 8-19% vi khuẩn ngừng phát triển. 10 10 [...]... que cấy vòng lấy sinh khối từ ống RV, cấy ria sang hai môi trường thạch XLD và BPLS Lật ngược các đĩa và ủ trong tủ ủ ở 37.0±1.00C trong 24 + 3 giờ Sau khi ủ 24 + 3 giờ xem xét sự hiện diện khuẩn lạc điển hình 14 4 Phương pháp phân lập Trên môi trường XLD: Khuẩn lạc Salmonella spp điển hình có vùng trong, hơi nhuốm đỏ do chất chỉ thị màu thay đổi trong môi trường, và có tâm đen Trên môi trường BPLS: Khuẩn. .. kết quả đỏ/ đỏ sai do vi khuẩn sử dụng peptone làm môi trường có tính kiềm 20 5 Thử nghiệm và cách nhận biết Chú ý 2 Một vi khuẩn sinh H2S có thể tạo ra nhiều kết tủa đen (FeS) che khuất màu vàng ở đáy ống Tuy nhiên, nếu đáy ống không có màu vàng dù là không thể quan sát được và nên ghi nhận kết quả như thế 21 5 Thử nghiệm và cách nhận biết 5.2 Urea broth a) Thực hiện: Dùng que cấy vòng, lấy lượng nhỏ... thành H2S Có bọt khí hoặc nứt mặt thạch do sinh khí từ glucose 18 5 Thử nghiệm và cách nhận biết Mặt nghiêng Vàng ……… Lactose hoặc Sucrose dương tính Đỏ ………… Lactose và Sucrose âm tính Ống TSI cấy Salmonella điển hình có mặt nghiêng kiềm (màu đỏ), đáy ống acid (vàng), có khí và 90% có màu đen(H2S được hình thành) 19 5 Thử nghiệm và cách nhận biết Chú ý 1 Khi đọc kết quả ống TSI, không được đọc sớm (ví dụ... trường BPLS: Khuẩn lạc Salmonella spp điển hình hơi trong có màu hơi đỏ trong môi trường 15 4 Phương pháp phân lập Chú ý Một số lòai Salmonella không có khả năng sinh H2S như Salmonella Paratyphi A phát triển trên môi trường XLD có màu hồng với tâm hồng đậm, Salmonella có lactose dương tính phát triển trên môi trường XLD có màu vàng có tâm đen hoặc không đen 16 5 Thử nghiệm và cách nhận biết PHƯƠNG... sinh hóa Bảng một số đặc tính sinh hóa của Salmonella Stt Thử nghiệm hoặc cơ chất Phản ứng của Salmonella spp 1 Glucose (TSI) + 2 H2S (TSI) + 3 Ure 4 Lysin decarboxylase 5 Ornithine decarboxylase 6 Indole 7 Mannitol + + + 13 4 Phương pháp phân lập Giai đoạn phân lập này được thực hiện đồng thời trên hai môi trường thạch XLD (Xylose lysine desoxycholate agar) và BPLS (Brilliant green phenol red lactose... để loại trừ trường hợp NH3 do thủy phân protein mà ra 23 5 Thử nghiệm và cách nhận biết Chú ý 2 Proteus vulgaris và Proteus mirabilis cho phản ứng dương tính sau khoảng 8 giờ Chú ý 3 Phản ứng âm tính giả có thể xảy ra nếu lượng NH3 quá ít không thể thay đổi nồng độ ion H+ của hệ đệm, do đó không làm chất chỉ thị pH thay đổi màu hoặc một vi khuẩn nào đó có thể thủy phân Ure nhưng không thể sử dụng NH3... 5 Thử nghiệm và cách nhận biết 5.3 Lysin decarboxylation và Ornithin decarboxylase a) Thực hiện: Dùng que cấy vòng, lấy lượng nhỏ sinh khối trên TSA ống nghiệm chứa khoảng 5 ml môi trường Lysin decarboxylation và ống nghiệm chứa khoảng 5 môi trường Ornithine decarboxylation Sau khi cấy, phủ lên trên một lớp mỏng dầu khóang Ủ các ống trong tủ ủ 37.0 ± 1.00C /24 + 3 giờ 25 5 Thử nghiệm và cách nhận biết... nghiệm và cách nhận biết 5.4 Indole Chuyển sinh khối từ TSA vào ống nghiệm chứa 5ml môi trường tryptone (Pepton from casein) ủ ở 37,0 ± 1OC Sau khi ủ thêm 1ml thuốc thử Kovacs Phản ứng dương tính xuất hiện vòng màu đỏ trên bề mặt ống nghiệm, màu nâu vàng là âm tính 28 5 Thử nghiệm và cách nhận biết 5.6 Thử nghiệm sử dụng đường a) Thực hiện: Dùng que cấy vòng, lấy sinh khối từ môi trường TSA sau khi ủ, cấy. .. dùng que cấy vòng lấy một lượng sinh khối vừa đủ trên môi trường TSA, trộn đều nhẹ nhàng trong vòng 30-60 giây thành huyền dịch, quan sát kết quả trên nền tối, tốt nhất là sử dụng kính lúp 31 5 Thử nghiệm và cách nhận biết b) Kết quả: nếu có những hạt ngưng kết thì ngừng phản ứng, nếu huyền dịch vẫn đục đều thì tiến hành thực hiện phản ứng kháng huyết thanh với kháng nguyên O và H 32 5 Thử nghiệm và cách... iron agar (TSI agar) a) Thực hiện: Dùng que cấy vòng, lấy lượng nhỏ sinh khối trên NA, cấy ria trên mặt nghiêng ống thạch TSI Sau đó dùng que cấy nhọn, lấy sinh khối đâm sâu xuống đáy ống (tránh chạm đáy) Ủ các ống trong tủ ủ 37,0 ± 10C /24 + 3 giờ 17 5 Thử nghiệm và cách nhận biết b) Kết quả: Sự chuyển màu trên TSI sau 24 giờ ủ được mô tả như sau Đáy ống Vàng … ……… Glucose dương tính Đỏ ………… Glucose . CÁO Chuyên đề: Chuyên đề: NUÔI CẤY VÀ PHÂN LẬP NUÔI CẤY VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN SALMONELLA VI KHUẨN SALMONELLA 2 2 Hình ảnh vi khuẩn Salmonella Hình ảnh vi khuẩn Salmonella 3 3 1. Đặc điểm vi khuẩn 1 điểm vi khuẩn 1. Đặc điểm vi khuẩn Giống Giống Salmonella Salmonella có khoảng 2300 serotype và có khoảng 2300 serotype và thuộc họ thuộc họ Enterobacteriacaea Enterobacteriacaea . . Salmonella. xem xét sự hiện diện khuẩn lạc điển hình 14 14 4. Phương pháp phân lập 4. Phương pháp phân lập Trên môi trường XLD: Khuẩn lạc Trên môi trường XLD: Khuẩn lạc Salmonella Salmonella spp. điển