Những người thực hiện: Những người thực hiện: 1. 1. Phạm Lê Ngọc Băng Dương Phạm Lê Ngọc Băng Dương 2. 2. Nguyễn Huỳnh Thảo Yến Nguyễn Huỳnh Thảo Yến 3. 3. Từ Thị Thanh Sơn Từ Thị Thanh Sơn 4. 4. Nguyễn Văn Tiền Nguyễn Văn Tiền 5. 5. Đinh Thj Thắm Đinh Thj Thắm 6. 6. Châu Thị Kim Ngọc Châu Thị Kim Ngọc PHẦN 1: PHẦN 1: KỸ THUẬT TRỒNG CÂY ĐƠN BỘI KỸ THUẬT TRỒNG CÂY ĐƠN BỘI IN VITRO VÀ PHƯƠNG PHÁP IN VITRO VÀ PHƯƠNG PHÁP TẠO GIỐNG CÂY TRỒNG. TẠO GIỐNG CÂY TRỒNG. A. TẠO CÂY ĐƠN BỘI BẰNG NUÔI CẤY A. TẠO CÂY ĐƠN BỘI BẰNG NUÔI CẤY BAO PHẤN, HẠT PHẤN BAO PHẤN, HẠT PHẤN  Nguyên lý: Nguyên lý: Nuôi cấy các hạt phấn đơn nhân trên môi Nuôi cấy các hạt phấn đơn nhân trên môi trường dinh dưỡng nhân tạo phù hợp để trường dinh dưỡng nhân tạo phù hợp để kích thích các hạt phấn này phát triển thành kích thích các hạt phấn này phát triển thành cây đơn bội. cây đơn bội. S đ t o cây đ n b i t nuôi c y ơ ồ ạ ơ ộ ừ ấ S đ t o cây đ n b i t nuôi c y ơ ồ ạ ơ ộ ừ ấ h t ph n in vitroạ ấ h t ph n in vitroạ ấ Khử trùng bề mặt Hoa Tách các bao phấn Loại bỏ chỉ nhị Nuôi cấy trên mt lỏng Nuôi cấy trên mt bán rắn(có agar) Nhuộm acetoarmine để xác định GĐPT của hạt phấn Phát triển phôi Cây đơn bội  3 ph ng th c sinh s n đ n tính đ c khi ươ ứ ả ơ ự 3 ph ng th c sinh s n đ n tính đ c khi ươ ứ ả ơ ự nuôi c y h t ph n đ n nhân in vitroấ ạ ấ ơ nuôi c y h t ph n đ n nhân in vitroấ ạ ấ ơ  Sinh sản đơn tính trực tiếp: Sinh sản đơn tính trực tiếp: Hạt phấn đơn nhân (tiểu bào tử) → Phôi → Cây đơn bội. Hạt phấn đơn nhân (tiểu bào tử) → Phôi → Cây đơn bội.  Sinh sản đơn tính gián tiếp: Sinh sản đơn tính gián tiếp: Hạt phấn đơn nhân (tiểu bào tử) → Mô sẹo → Chồi → Cây đơn bội. Hạt phấn đơn nhân (tiểu bào tử) → Mô sẹo → Chồi → Cây đơn bội.  Sinh sản đơn tính đực hỗn hợp: Sinh sản đơn tính đực hỗn hợp: Giống sinh sản đơn tính đực gián tiếp nhưng sự thành mô sẹo Giống sinh sản đơn tính đực gián tiếp nhưng sự thành mô sẹo ngắn,khó ngắn,khó nhận biết. nhận biết. Mô hình phát sinh đ n tính ơ Mô hình phát sinh đ n tính ơ đ cự đ cự  Chọn bao phấn: Bao phấn thích hợp nhất có chứa hạt phấn Chọn bao phấn: Bao phấn thích hợp nhất có chứa hạt phấn bắt đầu từ thể 4 nhân đến ngay sau lần nguyên phân thứ bắt đầu từ thể 4 nhân đến ngay sau lần nguyên phân thứ nhất. Bao phấn của các hoa đầu tiên cho kết quả tốt hơn bao nhất. Bao phấn của các hoa đầu tiên cho kết quả tốt hơn bao phấn của hoa muộn. phấn của hoa muộn.  Xử lý nụ hoa: Cần xử lý ở nhiệt độ thích hợp các nụ hoa sau Xử lý nụ hoa: Cần xử lý ở nhiệt độ thích hợp các nụ hoa sau khi cắt khỏi cây và trước khi tách bao phấn để nuôi cấy, khi cắt khỏi cây và trước khi tách bao phấn để nuôi cấy, nhằm kích thích sự phân chia của hạt phấn và từ đó tạo cây nhằm kích thích sự phân chia của hạt phấn và từ đó tạo cây đơn bội. đơn bội.  Chọn môi trường tái sinh cây thích hợp: Tùy theo đối tượng Chọn môi trường tái sinh cây thích hợp: Tùy theo đối tượng nuôi cấy bao phấn, hạt phấn mà chúng ta lựa chọn môi nuôi cấy bao phấn, hạt phấn mà chúng ta lựa chọn môi trường thích hợp tương ứng. trường thích hợp tương ứng.  Chọn lọc cây đơn bội: có nhiều cách để xác định cây đơn Chọn lọc cây đơn bội: có nhiều cách để xác định cây đơn bội như: làm tiêu bản để đếm số lượng nhiễm sắc thể, đo bội như: làm tiêu bản để đếm số lượng nhiễm sắc thể, đo hàm lượng DNA trong tế bào, so sánh cây tái sinh từ bao hàm lượng DNA trong tế bào, so sánh cây tái sinh từ bao phấn với cây mẹ về khả năng sinh trưởng, hình thái, kích phấn với cây mẹ về khả năng sinh trưởng, hình thái, kích thước. thước.  Kỹ thuật nuôi cấy bao phấn B. KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG CỦA CÂY ĐƠN BỘI.  Là nguyên liệu lí tưởng cho công tác giống Là nguyên liệu lí tưởng cho công tác giống cây trồng. cây trồng.  Là những vật liệu di truyền quý giá cho Là những vật liệu di truyền quý giá cho công tác chọn tạo giống vì toàn bộ các gen công tác chọn tạo giống vì toàn bộ các gen đều ở trạng thái đồng hợp tử nên kể cả đặc đều ở trạng thái đồng hợp tử nên kể cả đặc tính lặn cũng được thể hiện. tính lặn cũng được thể hiện.  Là nguyên nhân lí tưởng để nghiên cứu di Là nguyên nhân lí tưởng để nghiên cứu di truyền các tính trạng. truyền các tính trạng. Các thành t u c a vi c ự ủ ệ Các thành t u c a vi c ự ủ ệ nuôi c y cây đ n b i.ấ ơ ộ nuôi c y cây đ n b i.ấ ơ ộ [...]... nhân của tế bào đã quyết định mọi đường hướng của quá trình thực hiện tính toàn năng của tế bào Vì thế hoàn toàn có thể nuôi cấy tạo cây hoàn chỉnh từ khối nguyên sinh chất chứa nhân của tế bào Việc nuôi cấy tế bào trần thực vật còn gọi là protoplast Ý nghĩa: Nuôi cấy tế bào trần thành công sẽ cho phép mở ra khả năng biến nạp các gen thuận lợi vào tế bào thực vật mà trước kia thường bị vỏ tế bào ngăn... cũng như tạo ra khả năng dung hợp tế bào Ví dụ: hiện tượng co nguyên sinh và và qua đó con người cũng rất muốn tách lớp vỏ tế bào tiến hành trên chính tế bào Sự ra đời Protoplast đã mở ra cho con người hàng loạt triển vọng mới trong lĩnh vực giống cây trồng kĩ thuật nuôi cấy tế bào trần là một kĩ thuật phức tạp, hiện đại của nuôi cấy mô tế bào thực vật Kĩ thuật này đã được tiến hành thành công trên... thảo B PHƯƠNG PHÁP TÁCH TẾ BÀO TRẦN  Sức trương của tế bào sống luôn cân bằng với áp luật cơ học của thành tế bào Vì vậy, khi tách vỏ tế bào bị vỡ khi không còn lực nén của vỏ.Để khắc phục hiện tượng, dùng dung dịch đường mannitol, sorbitol để gây hiện tượng co nguyên sinh khi tách vỏ tế bào Nồng độ dung dịch từ 0.3 đến 0.7 mol tùy theo đối tượng thực vật  Để phá vỡ thành tế bào ,người ta sử dụng enzim... protoplast các thể đơn bội Gây đột biến, chọn lọc in vitro Tái sinh cây Nguyên liệu khởi đầu cho chọn giống PHẦN 3: KĨ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO TRẦN VÀ ỨNG DỤNG TRONG CÔNG TÁC GIỐNG CÂY TRỒNG A GIỚI THIỆU CHUNG Các tế bào thực vật có tính toàn năng, có thể nuôi cấy điều khiển sự phát triển sinh thái của chúng cho đến khi hình thành 1 cây hoàn chỉnh Cụ thể, bên trong vỏ tế bào trong đó các vật chất chính là... triển của tế bào trần  Nuôi cấy protoplast thường yêu cầu một số thay đổi so với quy trình nuôi cấy mô bình thường do bản chất của protoplast  Các thay đổi thường liên quan đến sự điều chỉnh nồng độ muối vô cơ, thêm vào các hợp chất hữu cơ, vitamin, đường để đảm bảo khả năng thẩm thấu và chất điều tiết sinh trưởng để kích thích sự phân chia tế bào C Ứng dụng công nghệ tế bào trần trong chọn tạo giống. .. ra kết quả của việc tạo đột biến thông qua invitro rất thuận lợi Sử dụng các yếu tố chọn lọc  Chọn dòng chống chịu bệnh: tận dụng hệ thống nuôi cấy tế bào để xử lí và thanh lọc các dòng tế bào chịu đựng được các chất độc của nấm bệnh phytoptorin- chất độc của nấm Phytoptora Các dòng tế bào chọn lọc này khi tái sinh sẽ cho các cá thể mang tính chống chịu với các bệnh nấm trên  Chọn dòng chống chịu... giống  Dung hợp protoplast (lai soma, lai vô tính tế bào thực vật):  Protoplast là những tế bào không vỏ, chúng có thể hòa lẫn vào nhau (dung hợp) và thành một tế bào lai mang trong mình vật chất di truyền của cả hai tế bào  Việc dung hợp protoplast và tái sinh thành cây lai từ protoplast là một trong những thành tựu tuyệt vời của kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào. Phương pháp này cho phép tiến hành lai xa... một xung điện cao (750 – 1000V) trong một thời gian rất ngắn (1-200 mili giây) vùng tiếp xúc giữa 2 màng tế bào sẽ bị vỡ, 2 tế bào trần hòa nhập vào nhau, quá trình dung hợp sẽ xảy ra Lá được cắt từ cây Xử lí enzim để hòa tan màng tế bào Kích thích bằng điện hay hóa chất protoplast Dung hợp tế bào Dung hợp nhân Qúa trình dung hợp protoplast  Ng ười ta cũng phân bi ệt 2 lo ại dung h ợp:  Dung hợp...  Dung hợp đối xứng (sysmetric): khi dung hợp 2 protoplast cùng có nhân ở mức bội thể như nhau  Dung hợp không đối xứng (asyametric): tạo ra các thể lai tế bào chất hay còn gọi là cybrid Ở đây chủ yếu chỉ là trộn tế bào chất để chuyển nạp các vật chất di truyền tế bào chất (AND của ti thể và lạp thể) Một trong hai protoplast sẽ bị diệt nhân trước khi dung hợp Sản phẩm của quá trình dung hợp Ch ọn... cây hoàn chỉnh từ tế bào trần  Sau một thời gian nuôi cấy (1-2 tuần), các protoplast tái tạo vỏ và phân chia tạo nên các microcallus (mô sẹo) Chuyển các microcallus lên môi trường cứng, chúng sẽ tạo thành các microcallus  Từ đó chuyển sang môi trường tái sinh chồi và cây hoàn chỉnh Ở mỗi một giai đoạn, người ta sử dụng các môi trường nuôi cấy đặc hiệu khác nhau Tái sinh cây từ tế bào trần (protoplast) . lợi vào tế bào thực vật mà trước kia thường bị biến nạp các gen thuận lợi vào tế bào thực vật mà trước kia thường bị vỏ tế bào ngăn cản cũng như tạo ra khả năng dung hợp tế bào. vỏ tế bào ngăn. protoplast. của tế bào. Việc nuôi cấy tế bào trần thực vật còn gọi là protoplast. Ý nghĩa: Ý nghĩa: Nuôi cấy tế bào trần thành công sẽ cho phép mở ra khả năng Nuôi cấy tế bào trần thành công sẽ cho. TÁCH TẾ BÀO TRẦN B. PHƯƠNG PHÁP TÁCH TẾ BÀO TRẦN  Sức trương của tế bào sống luôn cân bằng với áp luật cơ học Sức trương của tế bào sống luôn cân bằng với áp luật cơ học của thành tế bào