Báo cáo khoa học: Xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn th-ờng gặp trong các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn độ (Labeo rohita) khoẻ Tạp chí KHKT Nông nghiệp 2007: Tập V, Số 2: 49-52 Đại học Nông nghiệp I xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn thờng gặp trong các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn độ ( Labeo rohita) khoẻ Prevalence of several common bacteria in selected tissues of healthy major carps (Labeo rohita) Chu Đức Thắng 1 SUMMARY Several common aerobic bacteria were isolated from selected tissues of healthy major carps (Labeo rohita) kept in ponds, lakes and lagoons in the Red River Delta. Ten samples each of muscle, liver, spleen, kidneys, gills, and intestine of healthy major carp were investigated for common bacteria. Seven kinds of bacteria, viz. Salmonella sp., Aeromonas sp., Pseudomonas sp., Bacillus subtilis, Staphylococcus sp., Streptococcus sp., and Proteus vulgaris were found. All of the found bacteria were detected in the intestine, whereas only two to five kinds were found in the other tissues. Aeromonas sp. was found in all of the six selected tissues; Salmonella sp. and Proteus vulgaris were detected only in the intestine; Streptococcus sp. was found in all the tissues, except muscle. The total number of colony forming units (CFU) per gram was highest in the intestine and lowest in muscle, being 142,800*10 2 and 0.6*10 2 , respectively. Key words: Bacteria, major carp, labeo rohita, tissue. 1. ĐặT VấN Đề 1 ở nớc ta nghề nuôi cá nớc ngọt có từ lâu đời và cá trôi ấn Độ (Labeo rohita) là một đối tợng nuôi truyền thống đợc nhiều ngời dân a chuộng, nuôi ở hầu hết các ao, hồ, đầm ở vùng đồng bằng Bắc Bộ. Một trong những nguyên nhân ảnh hởng đến năng suất của đàn cá là tình hình dịch bệnh, đã gây thiệt hại về kinh tế cho các hộ nuôi cá (Bùi Quang Tề, 1997). Xuất phát từ tình hình thực tế đó chúng tôi tiến hành nghiên cứu tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn hiếu khí thờng gặp ở các cơ quan tổ chức của cá trôi ấn Độ khoẻ, nuôi tại các ao, hồ, đầm vùng đồng bằng Bắc Bộ. Từ đó có cơ sở để đề ra biện pháp phòng, trừ hữu hiệu làm giảm thấp thiệt hại do bệnh gây ra cho đàn cá. 2. PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 1 Khoa Thú y, Đại học Nông nghiệp I. Sử dụng các phơng pháp nghiên cứu thờng quy về vi sinh vật (Kiều Hữu ánh, Nguyễn Tự Thành, 1985; Nguyễn Lân Dũng & cs; 1981; Nguyễn Đức Hội, 2001; Carter et al, 1995) và thực hiện tại phòng nghiên cứu Vi sinh vật của bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Bệnh lý, Khoa CNTY, Trờng ĐHNN I - Hà Nội. Việc phân lập và giám định các loài vi sinh vật đợc áp dụng theo phơng pháp mô tả hình thái của J.A.Plumb và P.R.Bowser (1992) (trích theo Bùi Quang Tề, 1997; Nguyễn Ngọc Nhiên, 1992; Eldar and Bercovier, 1994; Ferichs Millar, 1993). Thí nghiệm đợc tiến hành trên cá trôi ấn Độ, số lợng mẫu là 10. Mẫu cá đợc bắt từ ao nuôi ở các khu vực Gia Lâm - Hà Nội, Mỹ Văn - Hng Yên, Thuận Thành - Bắc Ninh. Cá khi mang về phòng thí nghiệm phải đảm bảo còn sống và không biểu hiện bệnh. Sau đó đem tiến hành thử mẫu của các bộ phận cơ, gan, lách, thận, mang, ruột theo các Chu Đức Thắng phơng pháp của Austin B. and Austin D.A (1999); Indrani (1994) và Ronal (1998). Các mẫu đợc pha loãng ở các nồng độ thích hợp rồi cấy vào môi trờng phù hợp để xác định số lợng vi khuẩn theo phơng pháp của R.Koch (Hà Ký &cs, 1992). Sau khi nuôi cấy 24 giờ ở 37 0 C lấy ra đếm số lợng khuẩn lạc (CFU). Từ đó xác định số lợng vi khuẩn có trong 1 gam mẫu. 3. KếT QUả Và THảO LUậN Kết quả ở Bảng 1 cho biết số khuẩn lạc và số lợng vi khuẩn có trong cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn Độ thu đợc cao nhất là ở ruột (142800 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc (kl) trung bình là 6.10 (kl), dao động 4-7 (kl) sau đó là mang (1250 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc trung bình là 5.28 (kl), dao động 3-6 (kl); gan (7.75 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc trung bình là 3.33 (kl), dao động từ 2- 4 (kl); thận (4.72 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc trung bình là 3.33 (kl) dao động từ 1-3 (kl); lách (3.75 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc trung bình là 1.75 (kl), dao động từ 1-3 (kl) và thấp nhất là ở cơ (0.6 ì 10 2 vk/gam) với số khuẩn lạc trung bình là 1.75 (kl) dao động 1-3 (kl). Bảng 1. Số loại và số lợng vi khuẩn ở các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn Độ Chỉ tiêu Cơ quan Số mẫu kiểm tra (n) Biến động số loại khuẩn lạc Số loại khuẩn lạc trung bình Số lợng vi khuẩn trung bình (vk/gam) Số lợng vi khuẩn tổng số (vk/gam) Cơ 10 1 - 3 1.75 1.20 0.6 ì 10 2 Gan 10 2 - 4 2.55 15.5 7.75 ì 10 2 Lách 10 1 - 3 1.75 7.50 3.75 ì 10 2 Thận 10 1 - 3 3.33 9.45 4.72 ì 10 2 Mang 10 3 - 6 5.28 25.00 1250 ì 10 2 Ruột 10 4 - 7 6.10 28.56 142800 ì 10 2 Nghiên cứu đã xác định đợc 7 loại vi khuẩn thờng xuyên có mặt trong cá, đó là: Salmonella sp, Aeromonas sp, Pseudomonas sp, Bacillus subtilis, Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Proteus vulgalis. ở các cơ quan khác nhau thì số lợng và tỷ lệ xuất hiện của 7 loài vi khuẩn trên là khác nhau (Bảng 2). ở cơ thờng xuất hiện với số lợng, thành phần và tỉ lệ thấp nhất, chỉ tìm thấy hai loài vi khuẩn: Staphylococcus sp có 20% số mẫu nghiên cứu dơng tính với số lợng vi khuẩn là 0.25 ì 10 2 vk/gam. Aeromonas sp có tỉ lệ dơng tính là 10% số lợng vi khuẩn là 0.30 ì 10 2 vk/gam. ở lách thấy 2 loài vi khuẩn là: Aeromonas sp với tỉ lệ dơng tính là 20% số lợng vi khuẩn này trong 1 gam tổ chức là 1.75 ì 10 2 vk/gam. Streptococcus sp có tỉ lệ số mẫu dơng tính là 10%, số vi khuẩn có trong một gam tổ chức là 1.30 ì 10 2 vk/gam. ở gan thấy 3 loài vi khuẩn: Aeromonas sp xuất hiện với số mẫu dơng tính là 20%, số lợng vi khuẩn là 0.30 ì 10 2 vk/gam; Streptococcus sp với 10% số mẫu dơng tính số lợng vi khuẩn là 1.30 ì 10 2 vk/gam và Pseudomonas sp có 10% số mẫu dơng tính số lợng vi khuẩn là 1.50 ì 10 2 vk/gam. ở thận thấy 2 loài vi khuẩn: Aeromonas sp với tỉ lệ dơng tính là 20% số lợng vi khuẩn này trong 1 gam tổ chức là 2.55 ì 10 2 vk/gam. Streptococcus sp có tỉ lệ số mẫu dơng tính là 10%, số vi khuẩn có trong một gam tổ chức là 1.75 ì 10 2 vk/gam. ở mang của cá trôi ấn Độ, cũng đã tìm thấy 5 loài vi khuẩn hiếu khí nh đã tìm thấy ở cá trắm cỏ. Vi khuẩn có số lợng và thành phần cao nhất là Staphylococcus sp có tới 70% số mẫu dơng tính có số lợng là 375 ì 10 2 vk/gam, tiếp theo là Bacillus subtilis có tỉ lệ số mẫu dơng tính là 50% với số lợng là 275 ì T¹p chÝ KHKT N«ng nghiÖp 2007: TËp V, Sè 2: 49-52 §¹i häc N«ng nghiÖp I 10 2 vk/gam. Streptococcus sp víi 20% sè mÉu d−¬ng tÝnh sè l−îng lµ 355 × 10 2 vk/gam. Aeromonas sp xuÊt hiÖn víi tØ lÖ 10%, sè l−îng lµ 2.25 × 10 2 vk/gam. Pseudomonas sp cã 10% sè mÉu d−¬ng tÝnh sè l−îng lµ 135 × 10 2 vk/gam. Chu Đức Thắng Bảng 2. Số lợng và tỉ lệ xuất hiện các loại vi khuẩn hiếu khí thờng gặp ở các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn Độ Salmonella sp Aeromonas sp Pseudomonas sp Bacillus subtilis Staphylococcus sp Streptococcus sp Proteus vulgalis Chỉ tiêu Cơ quan Số mẫu kiểm tra Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Tỉ lệ dơng tính (%) Số lợng vk/g mẫu Cơ 10 0 0 10 0,30.10 2 0 0 0 0 20 0,25.10 2 0 0 0 0 Gan 10 0 0 20 0,30.10 2 10 1,50.10 2 0 0 0 0 10 1,30.10 2 0 0 Lách 10 0 0 20 1,75.10 2 0 0 0 0 0 0 10 1,30.10 2 0 0 Thận 10 0 0 20 2,55.10 2 10 1,15.10 2 0 0 0 0 10 1,75.10 2 0 0 Mang 10 0 0 10 2,25.10 2 10 135.10 2 50 275.10 2 70 375.10 2 20 355.10 2 0 0 Ruột 10 50 15500.10 2 50 3500.10 2 30 17500.10 2 80 25500.10 2 80 22500.10 2 70 18500.10 2 30 15500.10 2 Với chất chứa trong ruột cá, sau khi phân tích chúng tôi nhận thấy ở đây tồn tại một hệ vi sinh vật khá phong phú cả về thành phần và chủng loại. Có 7 loài vi khuẩn hiếu khí có mặt ở đây, đó là: Salmonella sp, Aeromonas sp, Pseudomonas sp, Bacillus subtilis, Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Proteus vulgalis. Trực khuẩn cỏ khô Bacillus subtilis xuất hiện với tỉ lệ số lợng cao nhất, có 80% số mẫu xét nghiêm tìm thấy vi khuẩn này với số lợng là 25500 ì 10 2 vk/gam. Salmonella sp có tỉ lệ dơng tính là 50%,số lợng vi khuẩn là 15500 ì 10 2 vk/gam. Staphylococcus sp với tỉ lệ dơng tính là 80% số lợng vi khuẩn là 22500 ì 10 2 vk/gam. Streptococcus sp với tỉ lệ dơng tính là 70% số lợng vi khuẩn là 18500 ì 10 2 vk/gam. Proteus vulgalis tỉ lệ dơng tính là 30%, số lợng là 15500 ì 10 2 vk/gam. Pseudomonas sp tỉ lệ dơng tính là 30% số lợng vi khuẩn là 17500 ì 10 2 vk/gam. Aeromonas sp tỉ lệ dơng tính là 50%, số lợng vi khuẩn là 3500 ì 10 2 vk/gam. Có thể thấy rõ đợc sự khác nhau về số lợng vi khuẩn ở các cơ quan, tổ chức của cá trôi qua Hình 1. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Cơ Gan Lách Thận Mang Ruột Cơ quan Salmonella spp Aeromonas spp Pseudomonas spp Bacillus subtilis Staphylococcus spp Streptococcus spp Proteus vulgalis Tỷ lệ (%) Hình 1. Tỉ lệ xuất hiện các loại vi khuẩn hiếu khí trong các cơ quan, tổ chức của cá Trôi Xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn thờng gặp 4. KếT LUậN Khảo sát trên cá trôi ấn Độ nuôi tại một số thủy vực các tỉnh đồng bằng sông Hồng, có 7 loài vi khuẩn thờng gặp trong các cơ quan, tổ chức của cá đó là: Salmonella sp, Aeromonas sp, Pseudomonas sp, Bacillus subtilis, Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Proteus vulgalis. Sự phân bố các loài vi khuẩn trên ở những cơ quan, tổ chức khác nhau của cá là khác nhau. Theo thứ tự: nhiều nhất là ruột rồi đến mang, thận, gan, lách và ít nhất là cơ. Các loài vi khuẩn: Staphylococcus sp, Streptococcus sp, Aeromonas sp, Pseudomonas sp thờng có tần số xuất hiện và số lợng nhiều trong các cơ quan và tổ chức của cá. Số lợng vi khuẩn xét nghiệm đợc ở ruột có số lợng vi khuẩn tổng số là: 142800 ì 10 2 vk/gram, trong đó nhiều nhất là Bacillus subtilis: 25500 ì 10 2 vk/gram và ít nhất là Aeromonas sp: 3500 ì 10 2 vk/gram; ở mang có số lợng vi khuẩn tổng số là 1250 ì 10 2 vk/gram, trong đó nhiều nhất là Streptococcus sp: 375 ì 10 2 vk/gram và ít nhất Pseudomonas sp: 135 ì 10 2 vk/gram. Thận có số lợng vi khuẩn tổng số là: 472 ì 10 2 vk/gram trong đó Aeromonas sp có số lợng nhiều nhất: 2,25 ì 10 2 vk/gram và ít nhất là Pseudomonas sp: 1,15 ì 10 2 vk/gram. Gan có số lợng vi khuẩn tổng số: 7,75 ì 10 2 vk/gram trong đó Aeromonas sp: 0,3 ì 10 2 vk/gram, Streptococcus sp: 1,3 ì 10 2 vk/gram. Lách có số lợng vi khuẩn tổng số là: 3,75 ì 10 2 vk/gram trong đó Aeromonas sp: 1,75 ì 10 2 vk/gram, Streptococcus sp: 1,3 ì 10 2 vk/gram. Cơ có số lợng vi khuẩn tổng số ít nhất là 0,60 ì 10 2 vk/gram trong đó Aeromonas sp: 0,3 ì 10 2 vk/gram và Staphylococcus sp: 0,25 ì 10 2 vk/gram. Tài liệu tham khảo Austin D. and Austin D.A (1999). Bacterial fish pathogens: disease of farmed and wild. Spinger-Praxis publishing, Bùi Quang Tề, Bệnh của động vật thủy sản. NXB LĐXH,1997. Carter G.R, Chengappa M.M, Roberts A.W (1995). Essential of veterinary microbiology. Copyright 1995 Wiliams and Winkins, Rose Tree Corporate center Building 2 1400 North Providence Rd, Suite 5025 Media PA, 1963. Eldar,A.Bejerano,Y.and Bercovier,H (1994). Streptococcus sp shiloi and Streptococcus sp difficiele: Two new Streptococcus species causing a meningoencephalitis in fish. Frerichs G.N. and Millar S.D. (1993). Insonation& Identification of fish bacterial pathogen, Institute of Aquaculture, University of Stirling, Scottland. 2043. A Waverly Company. Indrani Karunasagar and I Karunasagar (1994). Bacterial study of Epizootic. Ulcerative Syndrome in Indian. Hà Ký, Bùi Quang Tề, Nguyễn Văn Thành (1992). Chẩn đoán và phòng trị một số bệnh tôm cá. NXB Nông nghiệp, Hà Nội. Kiều Hữu ánh, Nguyễn Tự Thành (1985). Vi sinh vật học của các nguồn nớc, NXB Khoa học và Kỹ thuật. Ngời soạn G.Rheinheimer. Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Dơng Đức Tiến (1981). Vi sinh vật học (tập 1 và 2), NXB Đại học và Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội. Nguyễn Đức Hội (2001). Quản lý chất lợng nớc trong môi trờng thủy sản. Bộ Thủy sản. Nguyễn Ngọc Nhiên (1992). Sổ tay thí nghiệm bệnh cá vi sinh. Bộ Thủy sản. Ngời soạn J.A. Plumb và P.R. Bowser. Ronald J.Roberts (1998). Epizzotic Ulcerative Syndrome, Fish Health section, Thailand. T¹p chÝ KHKT N«ng nghiÖp 2007: TËp V, Sè 2: 104 §¹i häc N«ng nghiÖp I . Báo cáo khoa học: Xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn th-ờng gặp trong các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn độ (Labeo rohita) khoẻ Tạp chí KHKT Nông nghiệp 2007: Tập V, Số 2: 49-52 . vulgalis Tỷ lệ (%) Hình 1. Tỉ lệ xuất hiện các loại vi khuẩn hiếu khí trong các cơ quan, tổ chức của cá Trôi Xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn thờng gặp 4. KếT LUậN Khảo sát trên cá trôi. Số 2: 49-52 Đại học Nông nghiệp I xác định tỷ lệ nhiễm một số loài vi khuẩn thờng gặp trong các cơ quan, tổ chức của cá trôi ấn độ ( Labeo rohita) khoẻ Prevalence of several common bacteria