báo cáo tiểu luận nhóm 6

ĐẶT VẤN ĐỀCác vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm gây ranhững thiệt hại nghiêm trọng như bệnh tật và tửvong, dẫn đến các vấn đề sức khỏe cộng đồngcó thể gây ra dịch bệnh bằng cách là

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌC

TP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023

Môn: Thiết bị và KT CNSH

PHÁT HIỆN VI KHUẨN Bacillus cereusSINH ĐỘC TỐ GÂY NGỘ ĐỘC Ở SỮA

BẰNG KĨ THUẬT PCR

ĐẶT VẤN ĐỀ

Các vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm gây ranhững thiệt hại nghiêm trọng như bệnh tật và tử

vong, dẫn đến các vấn đề sức khỏe cộng đồngcó thể gây ra dịch bệnh bằng cách làm ô nhiễmthực phẩm ở bất kỳ giai đoạn nào của quá trình

từ sản xuất thực phẩm đến tiêu dùng.

Vì sữa là thực phẩm giàu chất dinh dưỡng nên nó có mộtvị trí rất lớn trong dinh dưỡng của con người Mặc dù sữa

trong các tế bào vú khỏe mạnh được báo cáo là vô trùngnhưng hoạt độ nước cao và điều kiện pH trung tính có thể

gây ô nhiễm sữa bởi vi sinh vật nếu quy trình sản xuất vàđiều kiện bảo quản không đảm bảo điều kiện vệ sinh.

4

GIỚI THIỆU VI KHUẨN

BACILLUS CEREUS

Bacillus cereus là vi khuẩn hình que, có vỏ bọc gram dươngTùy thuộc vào chủng, nó có thể kỵ khí, kỵ khí tùy ý

Hầu hết các chủng đều ưa nhiệt độ trung bình , có nhiệt độtối ưu từ 25 °C đến 37 °C, và ưa trung tính, thích độ pH trung

tính, nhưng một số đã được phát hiện phát triển trong môitrường có điều kiện khắc nghiệt hơn nhiều

Bacillus cereus thuộc giới Bacteria, ngành (phylum)

Firmicutes, lớp (Class) Bacilli, bộ (Order) Bacillales, họ (Family)Bacillaceaem, chi (Genius) Bacillus, loài (Species) Cereus.

5

Tăng sinh và phương pháp nuôi

Để kiểm soát dương tính, Bacillus cereus (chủng ATCC

11778) có xuất hiện Phương pháp trải đĩa được áp dụng bằng cách sử dụng thạch MYP (Mannitol Egg Yolk

Polymyxin) để nuôi cấy vi khuẩn Bacillus cereus Nuôi

cấy vi khuẩn được đặt trong tủ ấm ở 37 ° C và để trong hai ngày ủ.

Các khuẩn lạc vi khuẩn được chọn lọc về mặt hình thái được đưa vào

môi trường môi trường LB và ủ ở 37°C trong 150 vòng/phút qua

đêm Việc phân lập DNA được thực hiện từ các khuẩn lạc nhân

lên sau một đêm 7

Mẫu chứa khuẩn lạc vi khuẩn được ủ vào đêm

trước khi thu thập bằng cách ly tâm DNeasy Blood & Tissue được áp dụng theo hướng dẫn của nhà sản xuất để phân lập DNA của khuẩn lạc vi khuẩn.

Sau khi phân lập DNA, mẫu DNA tinh sạch được bảo quản ở -20°C trong dung dịch đệm rửa giải để tái

sử dụng

8

Quy trình Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) được thực hiện bằng Máy quay vòng nhiệt cảm ứng BIO-RAD C1000 PCR được thực hiện bằng

cách tối ưu hóa các điều kiện phản ứng cho từng mồi và phản ứng PCR được thực hiện

trong tổng thể tích 25 µl

Các phản ứng trong chu trình PCR như sau: 10 phút ở lần biến tính đầu tiên ở 95°C, sau đó là 94°C trong 60 giây, 50-60°C trong 60 giây (nhiệt độ ủ thay đổi đối với từng

mồi),72°C trong 60 giây và 72°C, bước kéo dài cuối cùng là 10 phút sau 9

Hệ thống điện di cung cấp năng lượng Thermo Scientific EC 1000 XL được sử

dụng để thực hiện các mẫu DNA

Hệ thống hình ảnh BIO-RAD ChemiDOC MP (máy phát tia UV) đã được sử dụng để

chụp ảnh các gel nơi các sản phẩm DNA và PCR được vận hành

Các đoạn PCR được chạy trong 30 phút ở điệ áp 100 volt trong dung dịch đệm 0,5 x TBE vớ

điện di trên gel agarose 2% được bổ sung ethidium bromide và hiển thị dưới ánh sáng

tia cực tím 10

KẾT LUẬN

11

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Fusco, V., et al., Microbial quality and safety of milk and milk products in the 21st century.Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2020 19(4): p 2013-2049

2.Aadil, R.M., et al., Influence of different pulsed electric field strengths on the quality of thegrapefruit juice International Journal of Food Science & Technology, 2015 50(10): p 2290-2296

3 Shabbir, M.A., Effect of non-thermal processing techniques on pathogenic and spoilage

microorganisms of milk and milk products Food Science and Technology, 2021.41(2): p 279- 294

4 Addis, M.F., et al., The bovine milk microbiota: Insights and perspectives from‐omicsstudies Molecular Biosystems, 2016 12: p 2359-2372

5 Liu, Z., et al., Evaluation of machine learning models for predicting antimicrobial resistanceof Actinobacillus pleuropneumoniae from whole genome sequences Frontiers in

microbiology, 2020 11: p 48

6 Burdova, O., et al., Hygiene of pasteurized milk depending on psychrotrophic microorganisms Bulletin-Veterinary Institute In Pulawy, 2002 46(2): p 325-330

12

13