Đang tải... (xem toàn văn)
Vật liệu và phương pháp... Vật liệu và phương phápPhản ứng LAMP... Vật liệu và phương phápPhản ứng LAMP... Loop-mediated isothermal amplification for the rapid detection
Trang 1BÁO CÁO TIỂU LUẬN MÔN HỌC
Đề tài: PHÁT HIỆN Salmonella spp TRONG THỊT GÀ
BẰNG PHƯƠNG PHÁP IC-LAMP
(MAGNETIC IMMUNOCAPTURED LOOP MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION)
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH
KHOA KHOA HỌC SINH HỌC
Sinh viên thực hiện
Võ Thị Bích Đào - 21126298
Nguyễn Thị Hồng Hạnh - 21126330 Nguyễn Thị Minh Hạnh - 21126331
Giảng viên: TS Huỳnh Văn Biết Trương Quang Toản
Thủ Đức, ngày 24 tháng 10 năm 2023
Môn thiết bị và kỹ thuật Công nghệ sinh học
Trang 2Nội dung
1 Đặt vấn đề
2 Nội dung nghiên cứu
3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu4 Kết quả dự kiến
2
Trang 31 Đặt vấn đề
• Là nguồn lây truyền Salmonella spp.
→ gây viêm dạy dày-ruột, nhiễm trùng huyết, sốt thương hàn,…
• Thịt gà có giá trị dinh dưỡng đối với sức khỏe con người, đồng thời mang lại nguồn thu nhập đáng kể cho người nông dân
Chẩn đoán nhanh, đáng tin cậy, ít tốn kém
Trang 42 Nội dung nghiên cứu
➢Thiết kế hạt từ tính
Trang 53 Vật liệu và phương pháp
Thu mẫu
▪Mẫu thịt gà tươi được lấy ở chợ đầu mối và các địa điểm giết mổ trong chợ Thủ Đức trong điều kiện vô trùng.
▪Bảo quản mẫu ở nhiệt độ 1ºC đến 5ºC.
Hình 1 Mẫu thịt gà thu ở chợ.
5
Trang 6Chuẩn bị magnetic IC
Hạt từ tính + protein A/G + dung dịch
Sự tương tác giữa hạttừ tính và mẫu thịt gà
Hình 3 Mẫu xuất hiện Salmonella spp.
3 Vật liệu và phương pháp
Trang 710 𝜇𝑙 dung dịch A (125 mM NaOH,
1 mM EDTA 0,1% Tween 20) ủ ở 65°C trong 10 phút ly giải tế bào vi khuẩn.
Trang 8PrimerTrình tự
FIPGCGCGGCATCCGCATCAATA-TGCCCGGTAAACAGATGAGT BIPGCGAACGGCGAAGCGTACTG-TCGCACCGTCAAAGGAAC
Bảng 1 Trình tự đoạn primer của LAMP(Nguyen Pham Truc Phuongvà ctv, 2022).
3 Vật liệu và phương phápPhản ứng LAMP
Trang 9Bảng 2 Thành phần của phản ứng LAMP (Nguyen Pham Truc Phuong và ctv, 2022).
3 Vật liệu và phương pháp
TênNơi sản xuấtNồng độ ban đầuNồng độ cuối cùng
Primer FIP BIPIDT, Mỹ40 μM1,6 μM Primer F3 B3IDT, Mỹ5 μM0,2 μM
H2O
Trang 10•Cho cácchất vào ủ ở 65°C trong 60 phút →Tăng nhiệt độ lên 80°C trong 10 phút để kết thúc phản ứng LAMP.
3 Vật liệu và phương pháp
Phản ứng LAMP
Trang 114 Kết quả dự kiến
Hình 4 Kết quả của mẫu sau khi quan sát dưới tia UV (Zhang, L và cộng sự, 2020) (1),(2) Dương tính; (3),(4),(5),(6),(7),(8) Âm tính.
11
Trang 12TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Nguyen Pham Truc Phuong, Doan Thi Quynh Huong, Nguyen Van Luong (2022) DETECTION OF Salmonella spp IN FOOD BY LAMP (LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION) METHOD TNU Journal of Science and Technology 227(01), 92-101.
2 Abd El-Aziz NK, Tartor YH, Gharieb RMA, et al (2021) Extensive Drug-Resistant Salmonella enterica Isolated From Poultry and Humans: Prevalence and Molecular Determinants Behind the Co-resistance to Ciprofloxacin and Tigecycline Front
Microbiol 12: 738784.
3 Andreoletti O, Budka H, Buncic S, et al (2008) Microbiological risk assessment in feeding stuffs for food-producing animals
Scientific Opinion of the Panel on Biological Hazards European Food Safety Authority 720, 1-84.
4 Hara-Kudo, Y., Yoshino, M., Kojima, T., Ikedo, M (2005) Loop-mediated isothermal amplification for the rapid detection of
Salmonella FEMS Microbiol Lett 253(1), 155-161.
5 Jiang, K., Lv, Q., Zhang, D., et al (2012) A novel, sensitive, accurate multiplex loop-mediated isothermal amplification
method for detection of Salmonella spp., Shigella spp and Staphylococcus aureus in food J Food Agric Environ
6 Kirk MD, Pires SM, Black RE, et al (2015) World Health Organization estimates of the global and regional disease burden of 22
foodborne bacterial, protozoal, and viral diseases, 2010: a data synthesis PLoS Med 12(12): e1001921 12
Trang 13TÀI LIỆU THAM KHẢO
7 Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., et al (2000) Loop-mediated isothermal
amplification of DNA Nucleic Acids Reseach vol 28 (12): 63 doi: 10.1093/nar/28.12.e63.
8 Savan, R., Igarashi, A., Matsuoka, S., and Sakai, M (2004) Sensitive and rapid detection of edwardsiellosis in fish by a
loop-mediated isothermal amplification method Appl Environ Microbiol 70: 621-624 doi: 10.1128/aem.70.1.621-624.2004.
9 Zhang, L., Du, X., Chen, C., Han, Q., Chen, Q., Zhang, M., Xia, X., Song, Y., & Zhang, J (2020) Development of a rapid,
one-step-visual method to detect Salmonella based on IC-LAMP method Iranian journal of veterinary research 21(1), 20-25.
10 Zhang, L., Wei, Q., Han, Q., Chen, Q., Tai, W., Zhang, J., Song, Y., Xia, X (2018) Detection of Shigella in Milk and Clinical Samples by Magnetic Immunocaptured-Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay Original Research vol 9: 94.
11 Zahraei Salehi, T., Mahzounieh, M., and Saeedzadeh, A (2005) Detection of InvA Gene in Isolated Salmonella from Broilers
by PCR Method International Journal of Poultry Science 4 (8): 557-559.
12 Malmarugan, S., Thenmozhi, V., Johnson, R (2011) Inv A gene specific PCR for detection of Salmonella from broilers.
Research vol 4(12): 562-564.
13 Rahn, K., De Grandis, S A., Clarke, R C., McE en, S A., Galan, J E., Ginocchio, C., Curtiss, R., 3rd, and Gyles, C L (1992)
Amplification of an invA gene sequence of Salmonella typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of detection of Salmonella Molecular and cellular probes 6(4): 271–279 https://doi.org/10.1016/0890-8508(92)90002-f.
13