Đang tải... (xem toàn văn)
Phương pháp đếm khuẩn lạc- Khuẩn lạc của một loại vi khuẩn được định nghĩa là một cụm Colony, cóthể nhìn thấy được bằng mắt thường, sinh khối của vi khuẩn đó khi chúngphát triển trên bề
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM -☯ - MƠN HỌC: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI Định Lượng E.Coli Bằng Phương Pháp Màng Lọc TP.Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2022 BỘ CƠNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM -☯ - BÁO CÁO TIỂU LUẬN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI Định Lượng E.Coli Bằng Phương Pháp Màng Lọc TP.Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên cho nhóm đề tài xin gửi lời cám ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu toàn thể quý thầy cô Trường Đại học Công Nghiệp Thực Phẩm TP.HCM Quý thầy cô Khoa Công Nghệ Thực Phẩm với tri thức tâm huyết truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập trường Và học kỳ Khoa tổ chức cho chúng em tiếp cận với mơn học hữu ích sinh viên Đó mơn học “Phân tích vi sinh thực phẩm” Nhóm đề tài chúng em gửi lời cám ơn chân thành đến GV Cô Đinh Thị Hải Thuận tận tâm hướng dẫn chúng em qua buổi học, buổi thảo luận bổ ích kiến thức cần thiết mà Cô mang đến cho mơn học Nhóm đề tài xin cảm ơn bạn bè, anh chị tận tình bảo, giúp đỡ q trình hồn thành tiểu luận, tạo cho chúng em hiểu thêm kiến thức Đề tài tiểu luận nhóm chúng em tìm hiểu “Định lượng E.coli phương pháp màng lọc” Do kiến thức cịn hạn chế cịn nhiều bỡ ngỡ, khơng tránh khỏi thiếu xót điều chắn Vì thế, có thiếu xót mong q Thầy Cơ bạn bỏ qua Nhóm đề tài mong nhận ý kiến đóng góp q báu Cơ bạn để tiểu luận hồn thiện Lời cuối cùng, chúng em xin kính chúc Cơ có thật nhiều sức khỏe, thành cơng việc ln hạnh phúc Nhóm chúng em xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC MỞ ĐẦU GIỚI THIỆU 1.1 Đặc điểm E.Coli 1.2 Tính chất sinh hóa ĐỘC TỐ VÀ CƠ CHẾ SINH ĐỘC TỐ CỦA E.COLI 1.1 Giới thiệu chung độc tố E.Coli 1.2 Tình hình ngộ độc thực phẩm CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 2.1 Phương pháp phân tích truyền thống 2.2 Phương pháp đại 8 12 2.2.1 Kỹ thuật RPLA 12 2.2.2 Phương pháp Elisa 13 2.2.3 Phương pháp PCR ( Polymerase Chain Reaction ) 14 ĐỊNH LƯỢNG E.COLI BẰNG PHƯƠNG PHÁP MÀNG LỌC 15 3.1 Định nghĩa nguyên tắc 15 3.2 Mơi trường hố chất 16 3.3 Quy trình tiến hành 17 3.3.1 QĐ/TCVN/ISO 17 3.3.2 Quy trình 18 3.3.2.1 Chuẩn bị mẫu 18 3.3.2.2 Lọc 19 3.3.2.3 Ủ phân biệt 19 3.3.2.4 Biểu thị kết 20 3.3.2.5 Màu khuẩn lạc 20 3.4 Định lượng 20 3.4.1 Nguyên tắc 20 3.4.2 Tiến hành 21 3.4.3 Trường hợp chung 21 KẾT LUẬN 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 TỔNG HỢP CÂU HỎI TRẮC NGHIỆM 25 PHÂN CÔNG VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG 35 MỞ ĐẦU Ngày nay, sống người tiếp tục cải thiện, vệ sinh ăn uống điều quan trọng họ Hàng năm có hàng trăm vụ ngộ độc thực phẩm xảy ra, để lại hậu nặng nề cho sức khỏe người dân Điều không phổ biến Việt Nam mà nước khác giới Một nguyên nhân gây tình trạng diện mức cho phép vi sinh vật gây hại thực phẩm, tùy theo mức độ mà hậu chúng để lại khác Vi khuẩn sinh sôi, phát triển với sức sống mạnh mẽ, ruột người, số động vật Theo nghiên cứu, hầu hết dạng vi khuẩn E.coli không vô hại sức khỏe mà cịn góp phần giúp sức khỏe ổn định Những vi khuẩn coi vi khuẩn có lợi, cơng việc chúng giúp hệ tiêu hóa hoạt động hiệu hơn, trường hợp này, nhà khoa học nói đến mối quan hệ cộng sinh Tuy nhiên, có số dạng E.coli có khả gây bệnh cho Vì vậy, khơng có kiến thức cần thiết cách phòng tránh biểu triệu chứng cách điều trị, người gặp nhiều khó khăn Vì lý mà suốt năm qua người cố gắng nghiên cứu, sử dụng nhiều biện pháp khác để định lượng E.coli, có phương pháp sử dụng phổ biến “Định lượng E.Coli phương pháp màng lọc” Để có biện pháp phịng tránh, ngăn chặn làm giảm bớt số ca ngộ độc thực phẩm, chúng em tiến hành tìm hiểu sâu phương pháp định lượng GIỚI THIỆU 1.1 Đặc điểm E.Coli - Là trực khuẩn nhỏ uốn cong gram âm, không sinh bào tử di động, kỵ khí khơng bắt buộc, có mặt môi trường bị ô nhiễm phân hay chất thải hữu cơ, phát triển tồn lâu môi trường, loại thực phẩm cá hồi, phơ mai, thịt, sữa Chúng có khả tạo enterotoxin có khả gây bệnh nặng người Độc tố chúng nhạy cảm với nhiệt Ngoài độc tố nhạy cảm với nhiệt chúng cịn có khả tạo loại độc tố bền nhiệt Chúng có nguy lớn trẻ em đặc biệt bệnh liên quan đến hội chứng dung huyết phân có máu Một nghiên cứu Việt Nam cho thấy 80% số mẫu dụng cụ bát đũa thường dùng không vệ sinh cách bị bẩn Trên 85% số mẫu tay người bán hàng bị nhiễm khuẩn E.coli Liều gây khoảng 106-9 tế bào người trưởng thành sau ăn phải thực phẩm bị nhiễm khuẩn 1.2 Tính chất sinh hóa - E.Coli có khả lên men nhiều loại đường có sinh Hầu hết E.Coli lên men lactose sinh hơi, trừ E.Coli trơ (inactive) (trong có EIEC) không lên men chậm Một số chi khác họ vi khuẩn đường ruột có khả lên men nhanh lactose (như Kiebsiella, Enterobacter, Serratia cà Citrobacter) gộp vào nhóm vi khuẩn có tên chung Coliform - E.Coli có khả sinh indole Không sinh H 2S Không sử dụng nguồn carbon cua citrate mơi trường Simmons Có decarboxylase, có khả khử carboxyl lysin, ornithin, arginin acid glutamic Betagalactosidase dương tính Thử nghiệm VP (Voges Proskauer) sau 24h âm tính, sau 48 dương tính ĐỘC TỐ VÀ CƠ CHẾ SINH ĐỘC TỐ CỦA E.COLI 1.1 Giới thiệu chung độc tố E.Coli - Nhóm khơng sinh độc tố ruột nhóm sinh độc tố ruột Nhưng chúng xâm nhập nhân lên tế bào biểu mô ruột, chúng lan sang tế bào bên cạnh theo cách giống ngộ độc lỵ trực khuẩn gây tiêu chảy nặng khơng có máu có máu giống lỵ, viêm ruột tan huyết, dẫn đến tử vong Nhóm hay gây bệnh trẻ em người già 1.2 Tình hình ngộ độc thực phẩm - Trên giới, vụ ngộ độc thực phẩm vi khuẩn chiếm tới 70% Tại nước châu Á, vi khuẩn Salmonella, E.coli, Listeria Monocytogenes S aureus nguyên nhân hàng đầu gây vụ ngộ độc thực phẩm Tại Việt Nam, ngộ độc thực phẩm vấn đề nóng bỏng xã hội trở thành mối lo cho sức khỏe cộng đồng ngày diễn biến phức tạp Hơn nữa, theo thơng báo Bộ Y tế, tình trạng ngộ độc thực phẩm có xu hướng gia tăng ảnh hưởng không nhỏ tới sức khỏe cộng đồng Trong năm 2021, toàn quốc ghi nhận 81 vụ ngộ độc thực phẩm làm 1942 người mắc 18 trường hợp tử vong So với năm 2020, số vụ giảm 58 vụ (41,7%), số mắc giảm 1152 người (37,2%), số tử vong giảm 12 người (40,0%) Tính chung tháng năm 2022, nước xảy 27 vụ ngộ độc thực phẩm với 357 người bị ngộ độc, có người tử vong - Trong đó, nhiều người bị ngộ độc E.coli sử dụng đồ uống thực phẩm có chứa loại vi khuẩn Khi xâm nhập vào thể, chúng bám vào lớp tế bào niêm mạc thành ruột bắt đầu sinh trưởng Do vi khuẩn tăng sinh nhanh nên chúng giải phóng độc tố đủ mạnh để gây tổn thương niêm mạc ruột gây tiêu chảy, đau quặn bụng Cụ thể: ● Năm 2020: Giám đốc sở y tế tỉnh Bình Phước cho biết xác định nguyên nhân vụ ngộ độc thực phẩm xảy tiệc cưới vào ngày 7.6 khiến 150 người nhập viện (tại thôn Hưng Lập, xã Phước Tín, TX Phước Long) vi sinh vật, vi khuẩn E.coli có thực phẩm ● Năm 2021: Trung tâm Y tế huyện Pác Nặm gửi 11 mẫu phẩm để xét nghiệm, gồm: năm mẫu thực phẩm, mẫu nước năm mẫu bệnh phẩm Đến cuối chiều 3-3 có kết xét nghiệm Chi cục An toàn vệ sinh thực phẩm tỉnh Theo đó, mẫu thực phẩm có vi khuẩn E.coli, Coliform S.aureus (tụ cầu) CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 2.1 Phương pháp phân tích truyền thống 2.1.1 Phương pháp đếm khuẩn lạc - Khuẩn lạc loại vi khuẩn định nghĩa cụm (Colony), nhìn thấy mắt thường, sinh khối vi khuẩn chúng phát triển bề mặt giá thể cứng - Đơn vị hình thành khuẩn lạc CFU (viết tắt từ chữ Colony form units) đơn vị dùng để ước tính số lượng vi khuẩn tế bào nấm mẫu thử nghiệm định Khi kiểm tra vi sinh vật mẫu thử nghiệm cách đếm khuẩn lạc có đĩa petri đĩa mơi trường chuẩn bị sẵn (ví dụ đĩa Compact Dry), đơn vị thể khuẩn lạc thường CFU/mL, CFU/g, CFU/25g - Đơn vị CFU/g, CFU/25g thường dùng cho mẫu thử nghiệm dạng rắn (thực phẩm, nguyên liệu thực phẩm…) - Đơn vị CFU/mL dùng cho mẫu thử nghiệm dạng dung dịch mẫu nước nuôi trồng thủy sản, nước trái cây… - Đếm khuẩn lạc đếm tất khuẩn lạc đơn lẻ mọc môi trường, thường chọn đĩa có số khuẩn lạc khoảng 30 – 300, dùng bút để đếm