TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA KHOA HỌC SINH HỌC NHÓM 10 XÁC ĐỊNH NẤM MALASSEZIA GÂY BỆNH LANG BEN Ở NGƯỜI BẰNG KỸ THUẬT PCR SEQUENCING MÔN HỌC: THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC GVHD: TS HUỲNH VĂN BIẾT TP Thủ Đức, ngày 25 tháng 10 năm 2023 THÀNH VIÊN NHĨM VÕ HỒNG PHONG 21126464 NGUYỄN ĐỨC LỢI 21126398 VÕ HỒNG PHẨM 21126154 NỘI DUNG BÁO CÁO CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ NẤM MALASSEZIA CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN VỀ BỆNH LANG BEN CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ NẤM MALASSEZIA CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ NẤM MALASSEZIA 1.1 Vài nét lịch sử 1.2 Đặc điểm 1.3 Tác động đến bệnh da 1.4 Một số bệnh lý 1.1 Vài nét lịch sử 1853 1874 1951 1995 - 1996 2004 Robin phát hình thái sợi nấm Malassez mô tả tác nhân gây bệnh Gordon nuôi cấy thành công nấm P thương tổn bệnh nhân lang ben, đặt tên Microsporum furfur lang ben tế bào hình trịn bầu dục, vỏ dày, xung quanh có viền kép, tập trung thành đám ,đặt tên orbiculare P ovale tên chung M furfur Ứng dụng thành công công nghệ sinh hoc phân tử giải mã trình tự gen loài nấm phụ thuộc lipid, đặt tên chung Các nhà khoa học Nhật Bản công bố số loài mới: M dermatis; M japonica; M yamatoensis; Malassezia spp Malassezia furfur => Và tổng số lồi Malassezia y văn cơng nhận lên tới 14 loài 1.2 Đặc điểm nấm Malassezia Đặc điểm Phân loại khoa khọc Cấu trúc Nội dung Thuộc ngành Basidomycota, phân Malasseziales, họ Malasseziacae ngành Ustilaginomycotina, lớp Exobasidomycetes, Đơn bào, có nhân chuẩn Hình dạng Hình trịn hình bầu dục, vách ngăn rộng, khơng màu, đơi gặp dạng sợi vơ định hình Kích thước Dao động từ 3-10 mm, thông thường lớn gấp 10 lần so với vi khuẩn Khả thích nghi + Thích nghi mơi trường đường cao + Tồn thiên nhiên, môi trường chứa đường hoa quả, rau dưa, mật mía Sinh sản Sinh sản vơ tính theo phương thức nảy chịi Khi bào tử chịi sinh theo dạng tuyến tính khơng phân cắt hình thành nên cấu trúc goi giả sợi nấm Các lồi Có 14 lồi Malassezia da người động vật, lồi gặp nhiều M globosa, M sympodialis, M Furfur 1.3 Tác động Malassezia bệnh da • Có thể tồn vi hệ da • Tác động chức tế bào sắc tố dẫn đến thay đổi màu sắc dát da • Kích thích q trình viêm qua đáp ứng miễn dịch dịch thể • Gây đáp ứng miễn dịch dịch thể • Kích thích tế bào viêm phá hủy nang lơng 1.4 Một số bệnh lý nấm Malassezia Hình 1.1 Bệnh viêm da đầu Hình 1.3 Bệnh viêm nang lơng Hình 1.2 Bệnh viêm da địa Hình 1.4 Bệnh nấm móng CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN VỀ BỆNH LANG BEN 10 2.3.1 Soi trực tiếp tìm nấm • Ưu điểm: đơn giản, dễ thực hiện, kết nhanh giúp bác sĩ lâm sàng chẩn đoán sơ vi nấm gây bệnh • Nhược điểm: kết cịn phụ thuộc vào kinh nghiệm kỹ thuật xét nghiệm tìm nấm • bước quan trọng nhất: bộc lộ lớp vỏ dày bao quanh tế bào nấm nhận định hình thái vi nấm kính hiển vi • Dung dịch kiềm: KOH 10%, KOH 20%, NaOH 10% • Thuốc nhuộm: ParkerTM blue black ink, ParkerTM black ink, Chicago sky blue 6B, Calcofluor white Hình 2.3 ”Spaghettie and meatball” soi trực tiếp KOH + ParkerTM Ink 17 2.3.2 Nuôi cấy, định danh Là “tiêu chuẩn vàng” xác định nguyên vi sinh vật, đặc biệt xác định xác lồi Malassezia gây bệnh Bệnh phẩm: vảy da bệnh nhân lang ben Môi trường nuôi cấy: thạch Sabouraud, thạch m-Dixon, thạch LeemingNotman THẠCH SABOURAUD THẠCH M-DIXON THẠCH LEEMING - NOTMAN 18 2.3.3 Phân tích phân tử PCR Các phương pháp So sánh PCR từ vảy da PCR từ khuẩn lạc Phương pháp: “dấu vân So với nuôi cấy định Ưu điểm: đơn giản hơn, Ưu điểm: xác định tay” DNA; RAPD; AFLP; danh, phương pháp dễ bệnh phẩm đươc lấy vào xác loài Malassezia với DGGE; PFGE; kỹ thuật thực hơn, giúp xác dung dịch đặc biệt, sau độ nhạy độ đặc hiệu sử dụng kỹ thuật PCR cao thị PCR chuỗi đặc trưng; RFLP; PCR-SSCP; PCR-Realtime; Sequencing PCR định Malassezia xác lồi khác để xác định lồi Nhược thời gian, tính thực tiễn điểm: độ nhạy không cao, phụ thuộc vào môi trường bảo quản bệnh phẩm Nhược điểm: cần nhiều khơng cao, áp dụng sở có tính nghiên cứu 19 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20