BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Lê Trọng Nghĩa NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI THEO THÁNG CỦA HÀM LƯỢNG, CHẤT LƯỢNG CARRAGEENAN VÀ HOẠT TÍNH LECTIN TỪ RONG ĐỎ BETAPHYCUS GELATINUS LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2021 Vietnam Academy of Science and Technology BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Lê Trọng Nghĩa NGHIÊN CỨU SỰ THAY ĐỔI THEO THÁNG CỦA HÀM LƯỢNG, CHẤT LƯỢNG CARRAGEENAN VÀ HOẠT TÍNH LECTIN TỪ RONG ĐỎ BETAPHYCUS GELATINUS Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Lê Đình Hùng Hà Nội – 2021 Vietnam Academy of Science and Technology LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân hướng dẫn TS Lê Đình Hùng tham khảo thêm tài liệu cơng bố trước có nguồn gốc rõ ràng Các số liệu nêu luận văn kết làm việc tơi suốt q trình thực nghiệm Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Nha Trang, ngày tháng năm 2021 Tác giả Lê Trọng Nghĩa Vietnam Academy of Science and Technology LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo TS Lê Đình Hùng – Trưởng phịng Cơng nghệ Sinh học biển, Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang dành trọn tâm huyết, tận tình hướng dẫn, dạy tơi suốt trình học tập, nghiên cứu Viện hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Học viện Khoa học Cơng nghệ, ban lãnh đạo Phịng ban thuộc Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang tạo điều kiện thuận lợi để hồn thành khóa học Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm khóa 2019 - 2021 Tơi xin cảm ơn thầy, cô giáo giảng dạy anh, chị lớp cao học BIO19 tận tình giảng dạy giúp đỡ bổ sung, nâng cao thêm kiến thức suốt khóa học Tơi xin cảm ơn anh chị Phòng Vật liệu Hữu từ Tài nguyên biển, Phòng Công nghệ Sinh học biển thuộc Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang tạo điều kiện giúp đỡ thiếu sót kiến thức chuyên ngành q trình làm thực nghiệm Tơi chân thành cảm ơn Phòng Vật liệu Hữu từ Tài nguyên biển cho phép sử dụng đề tài sở phòng đề tài Ninh Thuận để hỗ trợ thực luận văn Cuối xin dành lời cảm ơn gia đình bạn bè tôi, bên cạnh ủng hộ động viên, hỗ trợ mặt để cố gắng vươn lên, tiếp tục đường học tập Nha Trang, ngày tháng năm 2021 Học viên Lê Trọng Nghĩa Vietnam Academy of Science and Technology DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc chung carrageenan 12 Hình 1.2 Cấu trúc dạng carrageenan 13 Hình 1.3 Rong đỏ B gelatinus 27 Hình 1.4 Vịng đời B gelatinus 29 Hình 2.1 Rong đỏ B gelatinus thu Ninh Thuận, Việt Nam 33 Hình 2.2 Bản đồ khu vị trí thu mẫu rong (tỉ lệ 1: 25.000) 38 Hình 2.3 Sơ đồ thu phân tích mẫu nước 38 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình chiết carrageenan tự nhiên 40 Hình 2.5 Sơ đồ quy trình chiết lectin 41 Hình 2.6 Sơ đồ xác định tỉ lệ rong tươi/bột rong khô chuẩn bị mẫu rong chiết carrageenan 42 Hình 3.1 Bột rong khô từ rong đỏ B gelatinus 52 Hình 3.2 Carrageenan chiết tự nhiên 58 Hình 3.3 Phổ hồng ngoại mẫu carrageenan chiết tự nhiên từ rong B gelatinus thu tháng 3/2021 56 Hình 3.4 Phổ hồng ngoại mẫu carrageenan chiết tự nhiên từ rong B gelatinus thu tháng 5/2021 56 Hình 3.5 Cấu trúc beta- kappa-carrageenan từ rong đỏ B gelatinus 60 Vietnam Academy of Science and Technology DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 34 Bảng 2.2 Các hóa chất sử dụng nghiên cứu 35 Bảng 3.1 Tỉ lệ rong tươi/bột rong khô 51 Bảng 3.2 Hàm lượng carrageenan chiết tự nhiên từ rong B gelatinus thu từ tháng đến tháng 5/2021 53 Bảng 3.3 Hàm lượng carbohydrate, 3,6-anhydrogalactose sulfate carrageenan chiết tự nhiên 54 Bảng 3.4 Kết phổ hồng ngoại (FT-IR) mẫu carrageenan chiết tự nhiên với dải hấp thụ nhóm chức tương ứng 57 Bảng 3.5 Hàm lượng protein dịch chiết lectin từ rong đỏ B gelatinus thu tháng đến tháng 5/2021 61 Bảng 3.6 Hoạt tính ngưng kết hồng cầu dịch chiết lectin từ rong đỏ B gelatinus thu tháng đến tháng 5/2021 62 Bảng 3.7 Hàm lượng nitơ tổng nước biển vị trí thu mẫu rong đỏ B gelatinus từ tháng đến tháng 5/2021 63 Bảng 3.8 Hàm lượng phosphate nước biển vị trí thu mẫu rong đỏ B gelatinus từ tháng đến tháng 5/2021 64 Bảng 3.9 Nhiệt độ nước biển vị trí thu mẫu rong đỏ B gelatinus từ tháng đến tháng 5/2021 65 Bảng 3.10 Độ mặn pH nước biển vị trí thu mẫu rong đỏ B gelatinus từ tháng đến tháng 5/2021 66 Bảng 3.11 Mối quan hệ yếu tố môi trường với hàm lượng carrageenan chiết tự nhiên từ rong đỏ B gelatinus thu tháng đến tháng 5/2021 67 Bảng 3.12 Mối quan hệ yếu tố môi trường với hàm lượng protein hoạt tính lectin từ rong đỏ B gelatinus thu tháng đến tháng 5/2021 68 Vietnam Academy of Science and Technology MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CARRAGEENAN TỪ RONG BIỂN TRÊN THẾ GIỚI 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu carrageenan 1.1.2 Nguồn rong đỏ để sản xuất carrageenan 10 1.1.3 Cấu trúc tính chất hóa lý carrageenan 12 1.1.4 Các phương pháp chiết carrageenan 18 1.1.5 Các phương pháp xác định tính chất hóa-lý để đánh giá chất lượng carrageenan 19 1.1.6 Các phương pháp phân tích cấu trúc carrageenan 20 1.2 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU LECTIN TỪ RONG BIỂN TRÊN THẾ GIỚI 21 1.2.1 Giới thiệu chung tính chất lectin từ rong biển 21 1.2.2 Khả ứng dụng lectin 22 1.3 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CARRAGEENAN VÀ LECTIN TỪ RONG BIỂN TRONG NƯỚC 23 Vietnam Academy of Science and Technology 1.3.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu carrageenan từ rong biển nước 23 1.3.2 Tổng quan tình hình nghiên cứu lectin từ rong biển nước 24 1.4 TỔNG QUAN CÁC YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN TỐC ĐỘ TĂNG TRƯỞNG, HÀM LƯỢNG, CHẤT LƯỢNG CARRAGEENAN VÀ HOẠT TÍNH CỦA LECTIN TỪ RONG ĐỎ CARRAGEENOPHYTE 25 1.4.1 Yếu tố nhiệt độ nước biển 25 1.4.2 Yếu tố nitơ tổng nước biển 25 1.4.3 Yếu tố phosphate nước biển 26 1.4.4 Yếu tố độ mặn nước biển 26 1.5 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU RONG ĐỎ B GELATINUS TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 26 1.5.1 Vị trí phân loại rong đỏ B gelatinus 26 1.5.2 Phân bố rong đỏ B gelatinus 27 1.5.3 Đặc điểm sinh trưởng 28 1.5.4 Đặc điểm sinh sản 28 1.5.5 Mô tả carrageenan lectin từ rong đỏ B gelatinus 29 1.5.6 Khả sử dụng carrageenan lectin từ rong đỏ B gelatinus 30 1.5.7 Lý mục đích chọn nghiên cứu đối tượng rong đỏ B gelatinus 31 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 33 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 33 2.1.2 Thiết bị hóa chất 34 Vietnam Academy of Science and Technology 2.2 PHƯƠNG PHÁP THU MẪU 37 2.2.1 Thu mẫu rong 37 2.2.2 Thu mẫu nước 38 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT 39 2.3.1 Phương pháp chiết carrageenan tự nhiên 39 2.3.2 Phương pháp chiết lectin 40 2.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH, XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VÀ CHẤT LƯỢNG CARRAGEENAN 42 2.4.1 Xác định tỉ lệ rong tươi/bột rong khô 42 2.4.2 Xác định hàm lượng carrageenan 43 2.4.3 Xác định hàm lượng carbohydrate carrageenan 43 2.4.4 Xác định hàm lượng 3,6-anhydrogalactose carrageenan 43 2.4.5 Xác định hàm lượng sulfate carrageenan 44 2.4.6 Xác định nhóm chức carrageenan phổ hồng ngoại 45 2.5 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN VÀ HOẠT TÍNH CỦA DỊCH CHIẾT LECTIN 46 2.5.1 Xác định hàm lượng protein 46 2.5.2 Xác định hoạt tính ngưng kết hồng cầu 47 2.6 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG 48 2.6.1 Phương pháp xác định nitơ tổng 48 2.6.2 Phương pháp xác định phosphate 49 2.6.3 Phương pháp xác định độ mặn pH nước biển 49 2.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP THỐNG KÊ VÀ ĐÁNH GIÁ MỐI TƯƠNG QUAN 49 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 Vietnam Academy of Science and Technology 3.1 TỈ LỆ RONG TƯƠI/BỘT RONG KHÔ TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 51 3.2 HÀM LƯỢNG VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CARRAGEENAN CHIẾT TỰ NHIÊN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 52 3.2.1 Hàm lượng carrageenan chiết tự nhiên 52 3.2.2 Hàm lượng carbohydrate, 3,6-anhydrogalactose sulfate carrageenan chiết tự nhiên 54 3.4 CÁC NHÓM CHỨC ĐẶC TRƯNG TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 56 3.4.1 So sánh nhóm chức đặc trưng carrageenan chiết tự nhiên (mẫu thu tháng tháng 5/2021) 56 3.4.2 Đánh giá sơ cấu trúc hỗn hợp carrageenan từ rong đỏ B gelatinus 60 3.5 HÀM LƯỢNG PROTEIN VÀ HOẠT TÍNH NGƯNG KẾT HỒNG CẦU CỦA DỊCH CHIẾT LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 61 3.5.1 Hàm lượng protein dịch chiết lectin 61 3.5.2 Hoạt tính ngưng kết hồng cầu dịch chiết lectin 62 3.6 CÁC YẾU TỐ MƠI TRƯỜNG Ở VỊ TRÍ THU MẪU 63 3.6.1 Hàm lượng nitơ tổng 63 3.6.2 Hàm lượng phosphate 64 3.6.3 Nhiệt độ 65 3.6.4 Độ mặn pH 66 3.7 ĐÁNH GIÁ MỐI QUAN HỆ GIỮA CÁC YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG ĐẶC TRƯNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN HÀM LƯỢNG, CHẤT LƯỢNG CỦA CARRAGEENAN CHIẾT TỰ NHIÊN VÀ HÀM LƯỢNG PROTEIN, HOẠT TÍNH NGƯNG KẾT HỒNG CẦU CỦA DỊCH CHIẾT LECTIN TỪ RONG ĐỎ B GELATINUS 67 Vietnam Academy of Science and Technology 74 Hydrobiologia, 260(1), pp 589–593 43 Chang C.F., 2012, Carbohydrates - Comprehensive Studies on Glycobiology and Glycotechnologynull, IntechOpen, pp 1–570 44 Mori T., O’Keefe B.R., Boyd M.R., 2005, Isolation and characterization of Griffithsin, a novel HIV-inactivating protein, from the red alga Griffithsia sp., Journal of Biological Chemistry, 280(10), pp 9345– 9353 45 Sato Y., Morimoto K., Hori K., 2011, High mannose-specific lectin (KAA-2) from the red alga Kappaphycus alvarezii potently inhibits influenza virus infection in a strain-independent manner, Biochemical and biophysical research communications, 405(2), pp 291–296 46 Hirayama M., Shibata H., Hori K., 2016, High-Mannose specific lectin and its recombinants from a carrageenophyta Kappaphycus alvarezii represent a potent anti-HIV activity through high-affinity binding to the viral envelope glycoprotein gp120, Marine Biotechnology, 18(1), pp 144–160 47 Sugahara T., Ohama Y., Kato K., 2001, The cytotoxic effect of Eucheuma serra agglutinin (ESA) on cancer cells and its application to molecular probe for drug delivery system using lipid vesicles, Cytotechnology, 36, pp 93–99 48 Chaves R.P., Silva S.R.D, Nagano C.S., 2018, Structural characterization of two isolectins from the marine red alga Solieria filiformis (Kützing) P.W Gabrielson and their anticancer effect on MCF-7 breast cancer cells, International Journal of Biological Macromolecules, 107(PartA), pp 1320–1329 49 Francavilla M., Franchi M., Caroppo C., 2013, The red seaweed Gracilaria gracilis as a multi products source, Marine drugs, 11(10), pp 3754–3776 50 Fleurence J., 1999, Seaweed proteins: biochemical, nutritional aspects Vietnam Academy of Science and Technology 75 and potential uses, Trends in Food Science & Technology, 10(1), pp 2528 51 Denis C., Moranỗais M., Fleurence J., 2010, Study of the chemical composition of edible red macroalgae Grateloupia turuturu from Brittany (France), Food Chemistry, 119(3), pp 913–917 52 Afonso C., Correia A.P., Mouga T., 2021, Seasonal changes in the nutritional composition of Agarophyton vermiculophyllum (Rhodophyta, gracilariales) from the center of Portugal, Foods, 10(5), pp 1045 53 Le Dinh Hung, Hori K., Le Thi Hoa, 2009, Seasonal changes in growth rate, carrageenan yield and lectin content in the red alga Kappaphycus alvarezii cultivated in Camranh Bay, Vietnam, Journal of Applied Phycology, 21(3), pp 265–272 54 Le Dinh Hung, Le Thi Hoa, Le Nhu Hau, Dinh Thanh Trung, 2019, The lectin accumulation, growth rate, carrageenan yield, and quality from the red alga Kappaphycus striatus cultivated at Camranh Bay, Vietnam, Journal of Applied Phycology, 31(3), pp 1991–1998 55 Lê Như Hậu, 2010, Nghiên cứu trạng phân bố giải pháp bảo tồn nguồn lợi rong Đỏ Việt Nam, Viện Hàn Lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam 56 Singh R.S., Walia A.K., 2018, Lectins from red algae and their biomedical potential, Journal of Applied Phycology, 30, pp 1833–1858 57 Le Dinh Hung, Sato Y., Hori K., 2011, High-mannose N-glycanspecific lectin from the red alga Kappaphycus striatum (Carrageenophyte), Phytochemistry, 72(9), pp 855–861 58 Le Dinh Hung, Hirayama M., Hori K., 2015, Purification, primary structure, and biological activity of the high-mannose N-glycan-specific lectin from cultivated Eucheuma denticulatum, Journal of Applied Phycology, 27(4), pp 1657–1669 Vietnam Academy of Science and Technology 76 59 Le Dinh Hung, Sato T., Hori K., 2009, Biochemical comparison of lectins among three different color strains of the red alga Kappaphycus alvarezii, Fisheries Science, 75, pp 723–730 60 Le Dinh Hung, Ngo Thi Duy Ngoc, 2013, Isolation and characterization of novel lectins from the red alga Gracilaria salicornia, Vietnam Journal of Biotechnology, 11(4), pp 743–753 61 Le Dinh Hung, Truong Thi Hai Yeu, Dinh Thanh Trung, 2020, Characterization of O-glycan binding lectin from the red alga Hydropuntia eucheumatoides, Vietnam Journal of Biotechnology, 16(4), pp 687–696 62 Le Dinh Hung, Bui Minh Ly, 2018, Purification, characterization and biological effect of lectin from the marine sponge Stylissa flexibilis (Lévi, 1961), Comparative biochemistry and physiology Part B, Biochemistry & molecular biology, 216, pp 32–38 63 Le Dinh Hung, Hirayama M., Hori K., 2015, Biological activity, cDNA cloning and primary structure of lectin KSA-2 from the cultivated red alga Kappaphycus striatum (Schmitz) Doty ex Silva, Phytochemistry Letters, 14, pp 99–105 64 Le Dinh Hung, Hirayama M., Hori K., 2016, Cloning and characterizing cDNA sequences coding high-mannose n-glycan binding lectins from cultivated red algae Eucheuma denticulatum and Kappaphycus striatum, Vietnam Journal of Biotechnology, 14(2), pp 327–336 65 Glenn E.P., Doty M.S., 1992, Water motion affects the growth rates of Kappaphycus alvarezii and related red seaweeds, Aquaculture, 108(3), pp 233–246 66 Moz J., Freile-Pelegrín Y., Robledo D., 2004, Mariculture of Kappaphycus alvarezii (Rhodophyta, Solieriaceae) color strains in tropical waters of Yucatán, México, Aquaculture, 239(1), pp 161–177 67 Zhu J., Fang Z., Bao S., 2014, Effects of temperature, salinity and light Vietnam Academy of Science and Technology 77 intensity on the growth, pigment and carrageenan of Betaphycus gelatinum, Algological Studies, 145, pp 135–144 68 Nishihara G., Noro T., 2011, In vitro growth and photosynthesis of three edible seaweeds, Betaphycus gelatinus, Eucheuma serra and Meristotheca papulosa (Solieriaceae, Rhodophyta), Aquaculture Science, 59(4), pp 563–571 69 Trần Văn Huynh, 2019, Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ, độ mặn dinh dưỡng lên sinh trưởng rong hồng vân Betaphycus gelatinus phịng thí nghiệm, Luận văn thạc sỹ kỹ thuật, Trường ĐH Nha Trang 70 Zuldin W.H., Yassir S., Shapawi R., 2016, Growth and biochemical composition of Kappaphycus (Rhodophyta) in customized tank culture system, Journal of Applied Phycology, 28(4), pp 2453–2458 71 Hurtado A., Agbayani R., Castro-Mallare M.T., 2001, The seasonality and economic feasibility of cultivating Kappaphycus alvarezii in Panagatan Cays, Caluya, Antique, Philippines, Aquaculture, 199, pp 295–310 72 Ohno M., Largo D.B., Ikumoto T., 1994, Growth rate, carrageenan yield and gel properties of culturedkappa-carrageenan producing red alga Kappaphycus alvarezzi (Doty) Doty in the subtropical waters of Shikoku, Japan, Journal of Applied Phycology, 6(1), pp 1–5 73 Silva P.C., Basson P.W., Moe R.L., 1996, Catalogue of the benthic marine algae of the Indian Ocean, University of California Publications in Botany, California, 79, pp 325-326 74 Bộ Khoa học Công nghệ Việt Nam, 2007, Sách đỏ Việt Nam, Nhà xuất Khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội 75 Lê Như Hậu, 2000, Thành phần loài phân bố rong biển tỉnh Ninh Thuận, Tài nguyên môi trường biển, 7, pp 222–234 76 Huỳnh Quang Năng, 1999, Hiện trạng nguồn lợi nhóm rong biển Vietnam Academy of Science and Technology 78 kinh tế ven biển phía nam Việt Nam 77 Bast F., 2014, An illustrated review on cultivation and life history of agronomically important seaplants, In Seaweed: Mineral composition, nutritional and antioxidant benefits and agricultural uses, Eds Vitor Hugo Pomin, Nova Publishers, New York, pp 39–70 78 Greer C.W., Yaphe W., 1984, Characterization of hybrid (beta-kappagamma) carrageenan from Eucheuma gelatinae J Agardh (Rhodophyta, Solieriaceae) Using carrageenases, infrared and 13C-Nuclear magnetic resonance spectroscopy, Botanica Marina, 27, pp 473–478 79 Hayashi L., Paula E.J.D., Chow F., 2007, Growth rate and carrageenan analyses in four strains of Kappaphycus alvarezii (Rhodophyta, Gigartinales) farmed in the subtropical waters of São Paulo State, Brazil, Journal of Applied Phycology, 19(5), pp 393–399 80 Aslan L.O.M., Patadjai R.S., Armin, 2019, Seasonal variation in growth and carrageenan yield of Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty farmed using mass selection in Bungin Permai Coastal Waters, South Konawe District, Southeast (SE) Sulawesi, Indonesia, IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 370(1) 81 Kawakubo A., Makino H., Hori K., 1997, The marine red alga Eucheuma serra J Agardh, a high yielding source of two isolectins, Journal of Applied Phycology, 9(4), pp 331–338 82 Tseng C.K., 2001, Algal biotechnology industries and research activities in China, Journal of Applied Phycology, 13, pp 375–380 83 Lowry O.H., Rosebrough N.J., Randall R.J., 1951, Protein measurement with the Folin phenol reagent, The Journal of biological chemistry, 193(1), pp 265–275 84 Parsons T.R., Maita Y., Lalli C.M., 1984, A Manual of Chemical & Biological Methods for Seawater Analysis, Pergamon Press, London, pp 1–188 Vietnam Academy of Science and Technology 79 85 Kirch W., 2008, Pearson’s Correlation Coefficient BT - Encyclopedia of Public Health, Springer Netherlands, Springer, Dordrecht, pp 1090– 1091 86 Therkelsen G.H., 1993, Chapter - Carrageenan, Industrial Gums: Polysaccharides and Their Derivatives, Academic Press, London, pp 145–180 87 Trono G.C., Lluisma A.O., 1992, Differences in biomass production and carrageenan yields among four strains of farmed carrageenophytes in Northern Bohol, Philippines BT - The Ecology of Mangrove and Related Ecosystems, Dordrecht, Springer Netherlands, pp 223–227 88 Subba Rao P V, Kumar K., Thakur M., 2008, Feasibility of cultivation of Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty at different localities on the Northwest coast of India, Aquaculture Research, 39, pp 1107–1114 89 Periyasamy C., Subba Rao P V, Anantharaman P., 2015, Spatial and temporal variation in carrageenan yield and gel strength of cultivated Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty in relation to environmental parameters in Palk Bay waters, Tamil Nadu, Southeast coast of India, Journal of Applied Phycology, 28(1), pp 525–532 90 Nanaki S., Karavas E., Bikiaris D., 2010, Miscibility study of carrageenan blends and evaluation of their effectiveness as sustained release carriers, Carbohydrate Polymers, 79, pp 1157–1167 91 Zia K.M., Tabasum S., Zuber M., 2017, A review on synthesis, properties and applications of natural polymer based carrageenan blends and composites, International Journal of Biological Macromolecules, 96, pp 282–301 92 Santos G.A., 1989, Carrageenans of species of Eucheuma J Agardh and Kappaphycus Doty (Solieriaceae, Rhodophyta), Aquatic Botany, 36(1), pp 55–67 93 Arman M., Qader S.A.U., 2012, Structural analysis of kappa- Vietnam Academy of Science and Technology 80 carrageenan isolated from Hypnea musciformis (red algae) and evaluation as an elicitor of plant defense mechanism, Carbohydrate Polymers, 88, pp 1264–1271 94 Pereira L., Sousa A., Ribeiro-Claro P.J.A., 2003, Use of FTIR, FTRaman and 13C-NMR spectroscopy for identification of some seaweed phycocolloids, Biomolecular engineering, 20(4–6), pp 223–228 95 Queiroz M.F., Melo K.R.T., Rocha H.A.O., 2014, Does the use of chitosan contribute to oxalate kidney stone formation?, Marine drugs, 13(1), pp 141–158 96 Kačuráková M., Wilson R.H., 2001, Developments in mid-infrared FTIR spectroscopy of selected carbohydrates, Carbohydrate Polymers, 44(4), pp 291–303 97 Chen X.G., Park H.-J., 2003, Chemical characteristics of Ocarboxymethyl chitosan related to its preparation conditions, Carbohydrate Polymers, 53, pp 355–359 Vietnam Academy of Science and Technology PHỤ LỤC CÁC PHÂN TÍCH ANOVA Hàm lượng nitơ tổng Anova: Single Factor SUMMARY Groups Tháng Tháng Tháng Count Sum Average Variance 96,68 32,22667 3,374033 100,57 33,52333 4,610133 94,97 31,65667 2,840633 3 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 5,490689 21,6496 Total 27,14029 df MS F P-value F crit 2,745344 0,760849 0,507582 5,143253 3,608267 Hàm lượng Phosphate Anova: Single Factor SUMMARY Groups Tháng Tháng Tháng Count Sum Average Variance 29,7 9,9 0,52 32,3 10,76667 1,043333 32,6 10,86667 0,973333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 1,695556 5,073333 Total 6,768889 df MS F P-value F crit 0,847778 1,002628 0,421045 5,143253 0,845556 Vietnam Academy of Science and Technology Nhiệt độ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Tháng Tháng Tháng Count Sum Average Variance 77,6 25,86667 0,103333 80,9 26,96667 0,043333 85,2 28,4 0,07 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 9,682222 0,433333 Total 10,11556 df MS F 4,841111 67,03077 0,072222 P-value F crit 7,86E-05 5,143253 Hàm lượng carrageenan chiết tự nhiên Anova: Single Factor SUMMARY Groups Tháng Tháng Tháng Count Sum Average Variance 205,2 68,4 3,49 205,1 68,36667 3,943333 219,5 73,16667 5,493333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 45,7622 25,8533 Total 71,6155 df MS F P-value F crit 22,88111 5,310211 0,047047 5,143253 4,308889 Vietnam Academy of Science and Technology Hàm lượng 3,6-anhydrogalactose Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Tháng Tháng Tháng Sum Average Variance 69,3 23,1 0,43 74,5 24,83333 0,503333 68,8 22,93333 0,573333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 6,642222 3,013333 Total 9,655556 df MS F P-value F crit 3,321111 6,612832 0,030396 5,143253 0,502222 Hàm lượng sulfate Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Column Count Sum Average Variance 54,2 18,06667 0,563333 61 20,33333 0,723333 61,9 20,63333 0,563333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 11,81556 3,7 Total 15,51556 df MS 5,907778 0,616667 F P-value F crit 9,58018 0,013561 5,143253 Vietnam Academy of Science and Technology Hàm lượng protein Anova: Single Factor SUMMARY Groups Tháng Tháng Tháng Count 3 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0,252822 0,0492 Total 0,302022 Sum Average Variance 5,47 1,823333 0,016633 4,91 1,636667 0,003733 4,24 1,413333 0,004233 df MS F P-value F crit 0,126411 15,41599 0,004323 5,143253 0,0082 CÁC PHÂN TÍCH HỆ SỐ PEARSON VÀ HỒI QUY ĐA BIẾN Hệ số Pearson Nhiệt độ N Nhiệt độ Nitơ tổng -0,33499 Carrageenan 0,898513 -0,71458 Protein -0,99761 0,269061 Hoạt tính -0,96657 0,082199 Car Protein -0,86603 -0,75593 0,981981 Hoạt tính Hồi quy đa biến nhiệt độ hàm lượng carrageenan SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,898513 R Square 0,807325 Adjusted R Square 0,61465 Vietnam Academy of Science and Technology Standard Error Observations 0,777817 ANOVA df Regression Residual Total 1 SS 2,535 0,605 3,14 MS F 2,535 4,190083 0,605 Standard Coefficients Error t Stat P-value -1,92872 14,18843 -0,13594 0,913987 0,414894 0,202687 2,046969 0,289297 Intercept X Variable Significance F 0,289297 Lower 95% -182,21 -2,16049 Hồi quy đa biến hàm lượng nitơ tổng hàm lượng carrageenan SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,714575 R Square 0,510618 Adjusted R Square 0,021236 Standard Error 0,919239 Observations ANOVA df Regression Residual Total Intercept X Variable SS MS F 0,881667 0,881667 1,043393 0,845 0,845 1,726667 Standard Coefficients Error t Stat P-value 49,58617 16,76814 2,957165 0,207595 -0,24468 0,239539 -1,02147 0,49324 Significance F 0,49324 Lower 95% -163,473 -3,28831 Vietnam Academy of Science and Technology Hồi quy đa biến nhiệt độ hàm lượng protein SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,997609 R Square 0,995223 Adjusted R Square 0,990446 Standard Error 0,122474 Observations ANOVA df Regression Residual Total 1 SS 3,125 0,015 3,14 Standard Coefficients Error 37,1 0,696419 Intercept X Variable -6,25 0,433013 MS F 3,125 208,3333 0,015 t Stat P-value 53,2725 0,011949 14,4338 0,044036 Significance F 0,044036 Lower 95% 28,25115 -11,7519 Hồi quy đa biến hàm lượng nitơ tổng hàm lượng protein SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,269061 R Square 0,072394 Adjusted R Square -0,85521 Standard Error 1,26557 Observations ANOVA df Regression Residual Total Significance SS MS F F 0,125 0,125 0,078044 0,826573 1,601667 1,601667 1,726667 Vietnam Academy of Science and Technology Standard Coefficients Error t Stat P-value 30,46667 7,196334 4,233637 0,147665 1,25 4,474465 0,279363 0,826573 Intercept X Variable Lower 95% -60,9714 -55,6035 Hồi quy đa biến nhiệt độ hoạt tính lectin SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,96657 R Square 0,934258 Adjusted R Square 0,868517 Standard Error 0,454344 Observations ANOVA df Regression Residual Total SS MS F 2,933571 2,933571 14,21107 0,206429 0,206429 3,14 Standard Coefficients Error t Stat P-value 28,95 0,556456 52,02571 0,012235 -0,0031 0,000822 -3,76976 0,165074 Intercept X Variable Significance F 0,165074 Lower 95% 21,87956 -0,01354 Hồi quy đa biến hàm lượng nitơ tổng hoạt tính lectin SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,082199 R Square 0,006757 Adjusted R Square -0,98649 Standard Error 1,30958 Observations ANOVA df SS MS F Significance Vietnam Academy of Science and Technology F Regression Residual Total Intercept X Variable 1 0,011667 0,011667 0,006803 1,715 1,715 1,726667 Standard Coefficients Error t Stat P-value 32,35 1,603901 20,16957 0,031538 0,000195 0,002368 0,082479 0,947611 0,947611 Lower 95% 11,9705 -0,02989 Vietnam Academy of Science and Technology