BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Việt Hà NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC Hà Nội - 2021 Luận văn thạc sỹ Sinh học BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Việt Hà NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN EcHB1 LÀM TĂNG CHIỀU DÀI SỢI GỖ VÀO BẠCH ĐÀN LAI UP (Eucalyptus urophylla x E pellita) THÔNG QUA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: Hƣớng dẫn 1: TS Trần Hồ Quang Hƣớng dẫn 2: TS Lê Sơn Hà Nội - 2021 Luận văn thạc sỹ Sinh học Lời cam đoan Tôi xin cam đoan nội dung luận văn kết nghiên cứu thân dƣới hƣớng dẫn TS Trần Hồ Quang TS Lê Sơn Mọi kết nghiên cứu nhƣ ý tƣởng tác giả khác (nếu có) đƣợc trích dẫn cụ thể Đề tài luận văn chƣa đƣợc bảo vệ hội đồng bảo vệ luận văn thạc sĩ nhƣ chƣa đƣợc công bố phƣơng tiện Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Ngƣời cam đoan Nguyễn Thị Việt Hà Luận văn thạc sỹ Sinh học Lời cảm ơn Tôi xin cảm ơn Học viện Khoa học Cơng nghệ, phịng Đào tạo, thầy giáo, cô giáo Học Viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn Lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình học tập trƣờng Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, toàn thể cán Bộ môn Sinh học phân tử - Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hƣớng dẫn, TS Trần Hồ Quang (Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) TS Lê Sơn (Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ sinh học Lâm nghiệp - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam) tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Luận văn đƣợc sử dụng phần số liệu kết từ đề tài cấp Nhà nƣớc “Nghiên cứu tạo giống bạch đàn lai biến đổi gen cho chiều dài sợi gỗ (giai đoạn 2)” ThS Trần Đức Vƣợng làm chủ nhiệm, thuộc Chƣơng trình trọng điểm phát triển ứng dụng Công nghệ sinh học Nông nghiệp Phát triển nông thôn đến 2020 mà Viện Nghiên cứu Giống Công nghệ Sinh học Lâm nghiệp đơn vị thực Xin chân thành cám ơn Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc gửi tới gia đình bạn bè giúp đỡ, động viên khích lệ tơi suốt thời gian học tập thực đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Học viên Nguyễn Thị Việt Hà Luận văn thạc sỹ Sinh học Danh mục ký hiệu chữ viết tắt STT Từ viết tắt Viết đầy đủ AS Acetosyringone BAP CNSH ĐC ĐHST Điều hòa sinh trƣởng ADN Acid Deoxyribonucleic IBA Indole-3-Butyric Acid IFTIB Km Kanamycin 10 LB Môi trƣờng nuôi cấy Luria and Betani 11 MS Môi trƣờng nuôi cấy Murashige & Skoog 12 NAA 13 OD Mật độ quang học (Optical Density) 14 PCR Phản ứng trùng hợp chuỗi (Polymerase Chain Reaction) 6-Benzyl Amino Purine Công nghệ sinh học Đối chứng Institute of Forest Tree Improvement and Biotechnology 1-Naphthyl Acetic Acid Luận văn thạc sỹ Sinh học Danh mục bảng Bảng 1.1 Các lồi bạch đàn đƣợc nghiên cứu chuyển gen thơng qua vi khuẩn A tumefaciens 27 Bảng 2.1 Các cặp mồi sử dụng nghiên cứu 40 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 40 Bảng 2.3 Chu trình phản ứng PCR 40 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 42 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ Kanamycin đến khả rễ 44 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến mẫu tạo mô sẹo 45 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 47 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng mật độ vi khuẩn đến tỷ lệ chồi tái sinh 49 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ tạo mô sẹo 50 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 52 Bảng 3.8 Khả sống sót chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 56 Bảng 3.9 Kết kiểm tra khả rễ chồi chuyển gen sau lần chọn lọc 59 Bảng 3.10 So sánh hình thái thân chuyển gen với đối chứng 60 Bảng 3.11 So sánh hình thái chuyển gen đối chứng 61 Bảng 3.12 Đánh giá sinh trƣởng chiều cao vƣờn ƣơm sau 1, tháng 63 Bảng 3.13 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 64 Bảng 3.14 Tổng hợp kết đo kích thƣớc giai đoạn tháng tuổi 65 Luận văn thạc sỹ Sinh học Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1.1 Tỷ lệ trồng biến đổi gen/tổng diện tích loại nƣớc trồng biến đổi gen lớn giới Hình 1.2 Tổng giá trị (USD) thu đƣợc từ trồng biến đổi gen tồn cầu Hình 1.3 Bạch đàn lai UP trồng khảo nghiệm Yên Bình – Yên Bái 21 Hình 1.4 Cây Bạch đàn lai UP phƣơng pháp nhân giống in vitro 23 Hình 2.1 Vật liệu Bạch đàn lai UP sử dụng chuyển gen 31 Hình 2.2 Cấu trúc vector pGWB2/35S/EcHB1 32 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tái sinh thơng qua phôi soma cho Bạch đàn lai UP 34 Hình 2.4 Vị trí đƣợc chọn để đánh giá hình thái 38 Hình 3.1 Ảnh hƣởng ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Km đến chồi chƣa chuyển gen 43 Hình 3.2 Bạch đàn lai UP 15 ngày tuổi tạo mô sẹo môi trƣờng chọn lọc 45 Hình 3.3 Mẫu bật chồi sau chuyển gen tiền ni cấy 48 48 Hình 3.4 Mẫu nhiễm khuẩn với thời gian lần lƣợt sau 10 phút, 15 phút, 20 phút 51 Hình 3.5 Sơ đồ quy trình chuyển gen EcHB1 vào Bạch đàn lai UP 54 Hình 3.6 Mẫu chuyển gen tái sinh môi trƣờng chọn lọc 55 Hình 3.7 Bình nhân chồi dịng Bạch đàn lai UP chuyển gen EcHB1 55 Hình 3.8 Chồi chuyển gen EcHB1 môi trƣờng chọn lọc 58 Hình 3.9 Hình thái thân dòng bạch đàn chuyển gen đối chứng 62 Hình 3.10 Cây bạch đàn chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 63 Hình 3.11 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 64 Luận văn thạc sỹ Sinh học Hình 3.12 Hình thái kích thƣớc chuyển gen đối chứng giai đoạn tháng tuổi 66 Hình 3.13 Bạch đàn chuyển gen rễ môi trƣờng chọn lọc vƣờn ƣơm 67 Hình 3.14 Cây chuyển gen EcHB1 trồng vƣờn ƣơm 67 Hình 3.15 Kết chạy điện di kiểm tra ADN số dòng Bạch đàn lai UP 68 Hình 3.16 Kết PCR 40 dịng bạch đàn chuyển gen EcHB1 69 Hình 3.17 Kết kiểm tra có mặt gen EcHB1 PCR 70 Luận văn thạc sỹ Sinh học MỤC LỤC MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 1.1.1 Hiện trạng vai trò trồng biến đổi gen 1.1.1.1 Hiện trạng trồng biến đổi gen 1.1.1.2 Vai trò trồng biến đổi gen 1.1.1.3 Tình hình trồng biến đổi gen nước ta 1.1.2 Các phƣơng pháp chuyển gen 11 1.1.2.1 Chuyển gen trực tiếp 11 1.1.2.2 Chuyển gen gián tiếp 12 1.1.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen lâm nghiệp 13 1.1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 1.1.3.2 Các nghiên cứu nước 15 1.2 TỔNG QUAN VỀ CÂY BẠCH ĐÀN LAI UP 17 1.2.1 Tổng quan bạch đàn Bạch đàn lai UP 17 1.2.1.1 Tổng quan bạch đàn 17 1.2.1.2 Nghiên cứu phát triển giống Bạch đàn lai UP Việt Nam 20 1.2.3 Các hƣớng cải thiện giống bạch đàn ứng dụng Công nghệ sinh học 22 1.2.3.1 Nhân giống vơ tính in vitro bạch đàn 22 1.2.3.2 Tái sinh in vitro thơng qua hình thành callus phơi soma 24 1.2.3.3 Nghiên cứu phát triển sử dụng thị phân tử chọn tạo lai giống 25 Luận văn thạc sỹ Sinh học 1.2.3.4 Chuyển gen cho loài bạch đàn 26 1.2.4 Gen EcHB1 ứng dụng cải thiện chiều dài sợi gỗ 28 1.2.4.1 Vai trò nhân tố phiên mã sinh trưởng thực vật 28 1.2.4.2 Nhân tố phiên mã gen EcHB1 30 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 31 2.1.1 Vật liệu thực vật 31 2.1.2 Vật liệu di truyền chủng vi khuẩn 31 2.1.3 Trang thiết bị hóa chất 32 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.2.1 Nghiên cứu tái sinh in vitro dòng Bạch đàn UP 33 2.2.2 Xác định ngƣỡng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin 35 2.2.3 Xác định tuổi vật liệu đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 35 2.2.4 Xác định thời gian tiền nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 2.2.5 Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens 36 2.2.6 Xác định thời gian nhiễm khuẩn đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 36 2.2.7 Xác định thời gian đồng nuôi cấy đến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo 37 2.2.8 Tái sinh từ mẫu biến nạp gen, nhân dòng biến nạp gen, rễ trồng chăm sóc bên ngồi vƣờn ƣơm 37 2.2.9 Phƣơng pháp đánh giá hình thái chuyển gen 37 2.2.10 Phƣơng pháp tách chiết ADN tổng số 38 2.2.11 Xác định có có mặt gen chuyển gen PCR 39 2.2.12 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm xử lý số liệu 41 Luận văn thạc sỹ Sinh học Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy vi khuẩn LB (Bertani, 1951) Môi trƣờng Thành phần Hàm lƣợng (g/l) Môi trƣờng LB lỏng Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Tryptone 10 Yeast Extract NaCl 10 Agar Môi trƣờng LB đặc Dịch lỏng tạo dịch huyền phù vi khuẩn Mơi trƣờng ½ MS Luận văn thạc sỹ Sinh học Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy Thành phần Loại môi trƣờng Tạo chồi in vitro Nhân nhanh & tạo đa chồi MS + 30g/l sucrose + 7g/l Agar MS + 30g/l sucrose + 15mg/l Riboflavin + 0,5mg/l BAP + 0,2mg/l NAA+ 6,5g/l Agar MS* + 20g/l Sucrose + 100ml Nƣớc dừa + 3mg/l Tạo vật liệu nhận gen BAP + 0,5mg/l NAA +100 µM AS + 2,4g/l Gelrite Nuôi cấy vi khuẩn A tumefaciens tạo khuẩn lạc Tạo dịch huyền phù vi mg/l Rifamycin 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l Đồng ni cấy NAA + 100 µM AS + 2,4g/l Gelrite Diệt khuẩn tái sinh chồi Tái sinh chọn lọc phát Ra rễ chọn lọc + 7g/l Bactor Agar + 50 mg/l Kanamycin + 50 + 50 mg/l Kanamycin + 50 mg/l Rifamycin khuẩn sinh chồi 10g/l Tryptone + 5g/l Yeast Extract + 10g/l NaCl MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA + 400 mg/l Cefotaxim + 2,4g/l Gelrite MS* + 20g/l Sucrose + 0,5 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA + 15 mg/l Riboflavin + 400 mg/l Cefotaxim + 150 mg/l Kanamycin + 2,4g/l Gelrite ½ MS + 15 g/l Sucrose + mg/l IBA + mg/l NAA + g/l Agar + 50 mg/l Kanamycin Luận văn thạc sỹ Sinh học Bảng Danh mục trang thiết bị cần thiết TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ TT Máy móc, trang thiết bị, vật tƣ Máy lọc nƣớc 17 Đèn tia cực tím treo tƣờng Máy sản xuất nƣớc cất lần 18 Máy điều hòa nhiệt độ Nồi hấp vô trùng 19 Máy hút ẩm Tủ sấy vô trùng 20 Máy lắc gia nhiệt Cân phân tích 21 Quạt thơng gió gắn tƣờng Bình tam giác 250 ml, 350 ml Cân kỹ thuật 22 500 ml; bình trụ thủy tinh rễ; đĩa petri vô trùng Máy khuấy từ gia nhiệt 23 Tủ đựng hóa chất dự trữ bảo quản Bếp gas, nồi đun, loại cốc Máy đo pH để bàn 24 đong, ống đong, bình định mức, pipet, bình chứa, thìa đong, ống hút, … Tủ lạnh sâu -80 oC, Tủ lạnh sâu 20 oC; Tủ mát oC, Tủ ổn nhiệt 25 Máy nghiền mẫu 26 Máy đo nồng độ quang phổ 27 Bộ chạy điện di 12 Ghế ngồi + Xe đẩy 28 Máy ảnh 13 Giàn ni phịng ni 29 Máy ly tâm 14 Giá xếp môi trƣờng 30 Tủ hút khí độc 15 Giá úp chai lọ 31 Máy bơm, hệ thống tƣới, che sáng 16 Thiết bị kiểm tra nhiệt độ, độ ẩm 32 Các loại vật tƣ mau hỏng khác có gắn máy lắc 10 Tủ an toàn sinh học cấp 11 Bộ panh, kéo, dao cấy, que cấy khuẩn, đèn cồn Luận văn thạc sỹ Sinh học PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU Ảnh hƣởng nồng độ chất chọn lọc Kanamycin Trong chọn lọc chồi Sau tuần: Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) SUMMARY Groups Count 10 50 75 100 150 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 152848.3 Within Groups 543.2 Total 153391.5 Sum 1250 1222 1084 903 667 229 Average 250 244.4 216.8 180.6 133.4 45.8 Variance 5.3 17.2 60.3 38.8 14.2 df MS F 30569.66 24 22.63333333 P-value F crit 1.40366E1350.647717 28 2.620654148 29 Luận văn thạc sỹ Sinh học Sau tuần Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1250 250 10 1084 216.8 29.7 50 806 161.2 72.7 75 348 69.6 127.3 100 209 41.8 15.7 150 0 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between 3.68069EGroups 254801.77 50960.35333 1245.974409 28 2.620654148 Within Groups 981.6 24 40.9 Total 255783.37 29 Sau tuần Anova: Single Factor (Số mẫu sống sau tuần SUMMARY Groups Count 10 50 75 100 150 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Sum 1250 945 555 166 111 Average 250 189 111 33.2 22.2 Variance 87.5 37.5 3.7 7.7 SS df MS F 255261.1 51052.22 545.6 24 22.73333333 255806.7 29 P-value 3.2045E2245.698827 31 Luận văn thạc sỹ Sinh học F crit 2.620654148 Trong chọn lọc rễ Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 Sum 141 0 Average 28.2 0 Variance 14.7 0 df MS F 994.05 270.4897959 16 3.675 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2982.15 Within Groups 58.8 Total 3040.95 P-value 6.46736E14 F crit 3.238871517 19 Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 5 5 Sum 876 0 Average 175.2 0 Variance 41.7 0 SS df MS F 115106.4 38368.8 3680.460432 166.8 16 10.425 115273.2 19 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value F crit 6.41224E23 3.238871517 Anova: Single Factor (Số chồi rễ sau tuần) SUMMARY Groups 10 50 75 Count 5 5 Sum 1191 0 Average 238.2 0 Variance 31.7 0 SS df MS F 212772.15 126.8 16 212898.95 19 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total 70924.05 8949.40694 7.925 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value F crit 5.28E-26 3.238872 Ảnh hƣởng tuổi vật liệu đến khả biến nạp gen Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày Count 5 5 Sum 230 336 286 202 Average 46 67.2 57.2 40.4 Variance 34 51.2 99.2 6.8 MS F ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df 2133.4 764.8 16 Total 2898.2 19 P-value F crit 6.87E711.1333 14.87727 05 9.005937 47.8 Mảnh Anova: Single Factor SUMMARY Groups 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày Count 5 5 Sum 196 312 260 188 Average 39.2 62.4 52 37.6 Variance 9.2 20.8 34 4.8 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df MS F 2044 275.2 16 681.3333 17.2 39.6124 Total 2319.2 19 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value F crit 1.24E07 9.005937 Ảnh hƣởng thời gian tiền nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor SUMMARY Groups 24 48 72 Count 5 5 Sum 207.3 263.3 323.3 223.3 Average 41.46 52.66 64.66 44.66 Variance 9.503 63.268 48.023 25.578 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df MS F 1602.4 585.488 16 534.1333 36.593 14.5966 Total 2187.888 19 P-value F crit 7.66E05 9.005937 Mảnh Anova: Single Factor SUMMARY Groups 24 48 72 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 5 5 Sum 183.3 233.3 293.3 186.6 Average 36.66 46.66 58.66 37.32 Variance 27.723 16.668 19.868 18.912 SS df MS F 1588.834 529.6112 332.684 16 20.79275 1921.518 19 P-value 25.47095 2.48E-06 Luận văn thạc sỹ Sinh học F crit 9.005937 Xác định mật độ tế bào vi khuẩn A tumefaciens Anova: Single Factor SUMMARY Groups 0,1 0,3 0,5 0,7 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 5 5 Sum 50 66 101 50 Average 10 13.2 20.2 10 Variance 2.5 0.7 1.7 SS df MS F P-value F crit 346.95 115.65 42.44036697 7.64E-08 3.238872 43.6 16 2.725 390.55 19 Luận văn thạc sỹ Sinh học Ảnh hƣởng thời gian nhiễm khuẩn Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count 10 15 20 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Sum Average Variance 0 250 83.33333 25.33333 400 133.3333 20.33333 350 116.6667 20.33333 300 100 SS df MS F P-value F crit 32333.33 8083.333 577.381 8.9E-12 3.47805 140 10 14 32473.33 14 Mảnh Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups 10 15 20 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 3 3 Sum Average Variance 0 210 70 43 420 140 73 290 96.66667 32.33333 260 86.66667 49.33333 SS df MS 31240 7810 395.3333 10 39.53333 31635.33 14 F P-value F crit 197.5548 1.81E-09 3.47805 Luận văn thạc sỹ Sinh học Ảnh hƣởng thời gian đồng nuôi cấy Đoạn thân Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 24 213 71 48 415 138.3333 24.33333 72 437 145.6667 20.33333 96 411 137 28 120 303 101 16 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS df 12108.27 Pval MS F ue F crit 4.37E3027.067 165.1127 09 3.47805 183.3333 10 18.33333 12291.6 14 Mảnh Anova: Single Factor (Số mẫu tạo mô sẹo) SUMMARY Groups 24 48 72 96 120 Count 3 3 Sum 228 427 446 417 306 Average 76 142.3333 148.6667 139 102 Variance 16.33333 26.33333 21 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS df MS F 11786.27 2946.567 199.9932 147.3333 11933.6 10 14 14.73333 Luận văn thạc sỹ Sinh học Pval ue 1.7E09 F crit 3.47805 Hình thái thân giai đoạn in vitro Số lóng trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row Sum 10.13 11.13 9.7 10.94 Average 3.376667 3.71 3.233333 3.646667 Variance 0.004633 0.0012 0.004233 0.004633 MS F ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS df 0.454967 0.0294 Total 0.484367 11 P-value F crit 3.26E0.151656 41.26682 05 4.066181 0.003675 Chiều dài lóng trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Row Row Row Count 3 Sum 2.67 3.18 2.55 Row 3.1 ANOVA Source of Variation Between Groups SS df 0.0971 0.06326 0.16036 Within Groups Total Average 0.89 1.06 0.85 1.03333 MS 0.03236 0.00790 Varianc e 0.0039 0.0028 0.0052 0.019733 F 4.092729 11 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value 0.04926 F crit 4.06618 Chiều cao chồi Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Sum 8.53 9.55 8.76 9.35 Average 2.843333 3.183333 2.92 3.116667 Variance 0.000933 0.002633 0.0063 0.001033 SS df MS F 0.231492 0.077164 28.31702 0.0218 0.002725 0.253292 11 P-value F crit 0.00013 4.066181 Chiều dài trung bình Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row ANOVA Source of SS Variation Between 31.634625 Groups Within 1.3948 Groups Total 33.029425 Sum Average Variance 15.86 5.286666667 0.487033333 23.57 7.856666667 0.046433333 20.54 6.846666667 0.021033333 29.28 9.76 0.1429 df MS F 10.544875 60.48107256 0.17435 11 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value F crit 7.6927E4.066181 06 Chiều rộng Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Row Row Row 3 Row ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Sum Average Variance 9.53 3.176666667 0.003033333 11.59 3.863333333 0.009633333 13.49 4.496666667 0.007233333 14.64 4.88 0.0487 SS df 5.022691667 0.1372 5.159891667 11 MS F 1.674230556 97.62277292 P-value F crit 1.21698E4.066181 06 0.01715 Chỉ số Anova: Single Factor SUMMARY Groups Row Row Row Row ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 3 3 Sum Average Variance 1.82 0.606666667 0.006533333 1.48 0.493333333 0.000233333 1.97 0.656666667 0.000433333 1.5 0.5 0.0013 SS df 0.058491667 0.017 0.075491667 11 MS F 0.019497222 9.175163399 0.002125 Luận văn thạc sỹ Sinh học P-value F crit 0.00572875 4.066181