VI N HÀN LÂM KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM C VI N KHOA H C VÀ CƠNG NGH NGƠ QU C LN Cơng trình c hồn thành t i: Vi n Cơng ngh Hóa h c, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam Ng i h ng d n khoa h c: PGS.TS Nguy n Ng c H nh GS.TS Nguy n Kim Phi Ph ng Ph n bi n 1: Ph n bi n 2: Ph n bi n 3: KH O SÁT THÀNH PH N HÓA H C CÂY Ô MÔI (CASSIA GRANDIS L.F), H U (FABACEAE) NG B NG SÔNG C U LONG Chuyên ngành: Hóa h c h p ch t thiên nhiên Mã s : 62.44.01.17 Lu n án s c b o v tr c H i ng ánh giá lu n án ti n s c p H c vi n p t i Vi n Cơng ngh Hóa h c, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam, 01 M c nh Chi, Ph ng B n Nghé, Qu n 1, TP H Chí Minh Vào h i gi phút ngày tháng n m 2017 TÓM T T LU N ÁN TI N S HĨA H C Tai Lieu Chat Luong TP H Chí Minh - n m 2017 Có th tìm lu n án t i: - Th vi n Qu c Gia Vi t Nam - Th vi n H c vi n Khoa h c Công ngh DANH M C CƠNG TRÌNH KHOA H C Ã CƠNG B T QU NGHIÊN C U TRONG PH M VI LU N ÁN Ngô Qu c Luân, Huy Phong, Tr ng Th Thu Th y, Mai ình Tr , Lê Ti n D ng, Ph m Th Nh t Trinh, Nguy n Ng c H nh (2012), “H p ch t flavonoid t mơi-Cassia grandis L.f”, p chí Khoa h c Công ngh , T p 50(3A), tr 296–301 Ngơ Qu c Ln, Lê Huy, Hồng Vinh, Ngô Kh c Không Minh Nguy n Ng c H nh (2013), “Phân l p nh n danh hai h p ch t t d ch chi t ethyl acetate c a trái ô môi Cassia grandis L.f”, p chí Khoa h c Tr ng i h c C n Th , S 26, tr 30–34 Ngô Qu c Luân, Ngô Kh c Không Minh, Nguy n Th Thùy Trang, Tr ng Cao Thu n, Mai ình Tr , Lê Ti n D ng, Nguy n Ng c H nh (2013), “Kh o sát thành ph n hóa h c cao etyl axetat v mơi (Cassia grandis L.f)”, p chí Hóa h c, T p 51(6ABC), tr 135–140 Ngô Qu c Luân, V Duy Khánh, Ngô Kh c Không Minh, Lê Ti n D ng Nguy n Ng c nh (2013), “Phân l p m t s h p ch t t v ô môi (Cassia grandis L.f)”, p chí phân tích Hóa, Lý Sinh h c, T p 18(4), tr 101–108 Ngô Qu c Luân, Hu nh Minh Ti n, V Duy Khánh, Lê Ti n D ng Nguy n Ng c H nh (2013), “Ba h p ch t flavonoid t ô môi (Cassia grandis L.f)”, p chí khoa h c Tr ng i h c C n Th , S 29a, tr 111–116 Ngô Qu c Luân, Lê V n Ril, Hồng Vinh, Ngơ Kh c Khơng Minh Nguy n Ng c H nh (2014), “Ba h p ch t t cao ethyl acetate c a trái ô môi (Cassia grandis L.f)”, p chí khoa c Tr ng i h c C n Th , S 30a, tr 15–19 Ngô Qu c Luân, Hu nh Th Phi Y n, Nguy n Thanh Hồi Nhân, Ngơ Kh c Khơng Minh Nguy n Ng c H nh (2014), “D n xu t xanthone m i t r ô môi (Cassia grandis L.f)”, p chí khoa h c Tr ng i h c C n Th , S 31a, tr 72–75 Ngô Qu c Luân, Nguy n V n Ki t, Ngô Kh c Không Minh, Nguy n T n Phát, Phùng V n Trung, Lê Ti n D ng, Nguy n Ng c H nh (2014), “M t s h p ch t t trái ô môi (Cassia grandis L.f)”, p chí Khoa h c Cơng ngh , T p 52(5A), tr 174–179 Ngo Quoc Luan, Huynh Thi Phi Yen, Ngo Khac Khong Minh, Phung Van Trung, Phan Nhat Minh, Nguyen Tan Phat, Mai Dinh Tri, Le Tien Dung, Nguyen Ngoc Hanh (2014), “Natural compounds from the root of Cassia grandis L.f”, Vietnam Journal of Chemistry, Vol 52(5), pp 646–650 10 Ngo Quoc Luan, Vu Duy Khanh, Le Tien Dung, Mai Dinh Tri, Phan Nhat Minh, Nguyen Tan Phat, Nguyen Ngoc Hanh, Nguyen Kim Phi Phung (2015), “New benzophenone derivative from leaves of Cassia grandis L.f”, Vietnam Journal of Chemistry, Vol 53(6e), pp 338–341 11 Ngo Quoc Luan, Vu Duy Khanh, Le Tien Dung, Mai Dinh Tri, Phan Nhat Minh, Nguyen Tan Phat, Nguyen Ngoc Hanh, Nguyen Kim Phi Phung (2015), “Novel naphthalene glycoside derivative from leaves of Cassia grandis L.f”, Can Tho University Journal of Science, Vol 1, pp 10–13 12 Ngo Quoc Luan, Nguyen Thi Thuy Trang, Le Tien Dung, Mai Dinh Tri, Phan Nhat Minh, Nguyen Tan Phat, Nguyen Ngoc Hanh, Nguyen Kim Phi Phung (2016), “Isolation and characterization of three natural compounds from the stem bark of Cassia grandis L.f”, Can Tho University Journal of Science, Vol 3, pp 57–60 13 Ngo Quoc Luan, Ngo Khac Khong Minh, Nguyen Ngoc Hanh (2016), “Flavonoids from the fruit of Cassia grandis L.f”, Journal of Science and Technology, Vol 54(2B), pp 26–31 14 Ngo Quoc Luan, Nguyen Cong Tao, Vu Thi Hoai Tien, Nguyen Ba Nghia, Le Tien Dung, Mai Dinh Tri, Nguyen Ngoc Hanh, Nguyen Kim Phi Phung (2016), “Natural compounds from seeds of Cassia grandis L.f”, Vietnam Journal of Chemistry, Vol 54(2), pp 257–262 15 Lê Ti n D ng, Mai ình Tr , Ph m Th Nh t Trinh, Ngô Qu c Luân (2013), “ nh l ng h p ch t epicatechin ô môi (Cassia grandis L.f)”, y u H i ngh hóa h c tồn qu c l n th (21-22/11/2013), tr 284–290 -1- -24- I GI I THI U LU N ÁN tv n Cây ô môi (Cassia grandis L.f) loài th c v t i ng b ng sông C u Long Theo t Hồng H , có d n v thu c (Ph m Huy Bích) kinh nghi m dân gian c tính m t s cơng d ng nh : t ki t l , qu chín ch a au x trình nghiên c u hi n ts n c bi t t n t i lâu Vi t Nam mơi i tr h c lào, qu xanh ch a ng, nh c m i Trong ó, ch a có cơng i c công b it ng c th gi i c ng có mơi nh t Nam M , n i c cho ngu n g c c a lồi mơi Ngồi cơng d ng dân gian nh Vi t Nam, ng i v i ng i ta cho bi t c m qu mơi chín có tác d ng r t t t i b b nh thi u máu Các nghiên c u hi n i ph c v y h c nhi u nh t xoay quanh m t s ho t tính sinh h c nh kh n ng kháng vi sinh v t tôm n c m n, kháng tháo ng, kháng oxi hóa, b o v gan, kháng viêm, gi m au… Bên c nh ó, nghiên c u hóa h c c ng ch m i phân l p nghiên c u, ch a Vì v y c kho ng 20 h p ch t Nh v y, ô mơi cịn c s gi i thích tác d ng d c lý c a loài tài “Kh o sát thành ph n hóa h c ô môi (Cassia grandis L.f), h u (Fabaceae) ng b ng sông C u Long” th c hi n nh m góp ph n gi i quy t v n Ý ngh a khoa h c th c ti n c a c nêu tài - K t qu nghiên c u thành ph n hóa h c nh m góp thêm nh ng hi u bi t hóa th c v t c a lồi mơi tác d ng d gi i thích c lý làm c s cho nghiên c u ti p theo -Trên c s thành ph n hóa h c nh m h Vi t Nam, làm c s lý lu n c bi t, th nghi m ho t tính sinh h c ng g n h n t i nh ng ng d ng ph c v i s ng xã h i M c tiêu nhi m v nghiên c u c a lu n án 3.1 c tiêu - Phân l p, tìm hi u c u trúc hóa h c c a h p ch t tinh t t mơi, tìm ki m h p ch t t nhiên có c u trúc m i, góp ph n b sung d -23- -2li u hóa th c v t c a loài H p ch t l p l i so v i công b tr c ây lồi mơi g m - Th nghi m ho t tính sinh h c c a m t s cao chi t, m t s h p ch t quercitrin (8), nicotiflorin (10), rutin (11), (-)-epiafzelechin (15), (-)- tinh t tùy theo c u trúc hóa h c epicatechin (16), aloe-emodin (17), chrysophanol (19) -sitosterol (27) góp ph n gi i thích tác d ng d c lý c a lồi mơi 3.2 Nhi m v nghiên c u c a lu n án aloe-emodin có ho t tính gây -Phân l p nh t 20 h p ch t tinh t t cao chi t, ó có G2, Lu, RD dịng t bào th nh t h p ch t m i 9,29; 9,81 9,92 µg/mL Phân -Xác nh c u trúc h p ch t phân l p mơi có ho t tính kháng c -Th m t s ho t tính sinh h c c a phân ã th nghi m m t s ho t tính sinh h c, k t qu cho th y h p ch t n chi t h p ch t tinh i v i dòng t bào ung th Hep- ng Vero v i giá tr IC50 t ng ng 6,20; n chi t H:E 1:1 h p ch t quercitrin c vi khu n P acnes gây m n tr ng cá t nh t m u th v i giá tr MIC l n l t 0,3 0,2 mg/mL KI N NGH t Trên c s phân tích t ng quan k t qu có Nh ng óng góp m i c a lu n án Lu n án cơng trình u tiên c a Vi t Nam nghiên c u v thành ph n hóa h c b ph n: lá, v thân, r , trái h t c a ô môi ng sông C u Long; phân l p K t qu phân l p xác ng nh c u trúc óng góp c 34 h p ch t vào a chi Cassia h p ch t vào kho c u trúc phân t h u c th gi i (xem ph n k t lu n) c, ngh : Ti p t c phân l p thêm h p ch t t t t c b ph n c a ô môi, p c 42 h p ch t t nhiên li u hóa th c v t c a lồi mơi, 19 h p ch t vào d li u hóa th c v t L n c c bi t cao ch a c kh o sát ho c cịn s h p ch t phân c nh cao n-BuOH, cao n c c a r , v h t mơi có k t qu tồn di n h n v thành ph n hóa h c c a loài Cassia grandis L.f, nh m xem xét kh n ng khai thác s d ng làm d c li u Ti p t c có nh ng nghiên c u phát tri n ánh kh n ng c ch vi khu n P acnes vi khu n gây m n khác nh ng ch ph m làm t u tiên m t s phân n chi t ô môi c th ho t tính kháng cao LE phân n H:E (1:1) t ô môi, ti n nb c u th nghi m vi khu n Propionibacterium acnes (P Acnes) gây m n tr ng cá K t qu lâm sàng cho th y phân sinh v t, kháng oxy hóa ho t tính sinh h c khác c a s n ph m n chi t H:E 1:1 h p ch t quercitrin th hi n ho t tính kháng virus P acnes m nh v i giá tr MIC l n l t 0,3 0,2 mg/mL Lu n án g m 129 trang v i 10 s tài li u tham kh o B c c c a lu n án: M Ch chi t phân l p t ô môi nh m tìm ki m thêm kh n ng ng ng khác t ô môi B c c c a lu n án quan (24 trang), Ch u tr m n tr ng cá Ti p t c kh o sát ho t tính kháng vi ng 2: Ph , 55 b ng s li u, 19 hình, 277 u (2 trang), Ch ng 1: T ng ng pháp th c nghi m (25 trang), ng 3: K t qu bàn lu n (76 trang), K t lu n ki n ngh (2 trang) Các trang th t c tài li u tham kh o (42 trang), ph l c (214 trang) -3- -22- II N I DUNG LU N ÁN T LU N VÀ KI N NGH u: Ph n m T LU N y n i dung nghiên c u, ó i dung tr ng tâm kh o sát thành ph n hóa h c ô môi (Cassia grandis L.f) thu hái ã kh o sát ng b ng sơng C u Long: nh tính thành ph n hóa h c b ph n lá, v thân, r , trái h t; k t qu cho th y có s hi n di n c a h u h t nhóm h p ch t nhiên l n: flavonoid, anthranoid, alkaloid, steroid, terpenoid, glycoside, tannin, saponin, coumarine ã phân l p xác n ý ngh a khoa h c, tính th c ti n, casgranone C 30 H p ch t ã bi t CH NG 1: T NG QUAN Ph n t ng quan t p h p nghiên c u n 1.1 GI I THI U V CHI CASSIA 1.1.1 c c th gi i, g m: m th c v t c a chi Cassia 1.1.2 Các nghiên c u v thành ph n hóa h c 1.1.3 Các nghiên c u v ho t tính sinh h c kh n ng ng d ng 1.2.1 Phân lo i khoa h c (41) 2,3-dihydroxypropyl 25- 1.2.2 c m th c v t c a lồi Cassia grandis 1.2.3 Cơng d ng theo y h c dân gian 1.2.4 Tình hình nghiên c u hydroxypentacosanoate (22) loài khác nh ng m i phát hi n lồi mơi m apigenin (1), apigetrin (2), kaempferol (3), astragalin (4), afzelin (5), quercetin (6), isoquercetin (7), ombuin (9), luteolin (12), cynaroside (13), 1.2.5 Nh n xét t ng quan CH octacosanoate (21), di-(2,3-dihydroxypropyl) tetracosandioate (23), - adenosine (24), D-mannitol (25), (+)-lyoresinol (26), daucosterol (28), brassicasterol-3-O- -D-glucopyranoside (29), lupeol (30), axit betulinic NG 2: PH 2.1 IT it vitexin (14), axit parietinic (18), pulmatin (20), 2,3-dihydroxypropyl NG PHÁP VÀ TH C NGHI M NG NGHIÊN C U ng nghiên c u ô môi (Cassia grandis L.f.) t nh Tr ng, Cà Mau) t n m 2011 n 2014 M u th c v t Minh Quân, i h c C n Th giám 2.2 PH NG PHÁP NGHIÊN C U 2.2.1 Ph ng pháp (35), axit cinnamic (36), -L-rhamnopyranoside (38), casgranone A (39) Ph moracin B (42) tr ng Trong 30 h p ch t có 15 h p ch t l n u tiên c phân l p t chi ng pháp kinh 2.2.2 Ph c thu hái ng b ng sông C u Long (An Giang, V nh Long, C n Th , Sóc (31), axit oleanolic (32), axit gallic (33), axit vanillic (34), axit o-anisic Cassia i 1.2 GI I THI U CÂY Ô MÔI nh c u trúc c a 42 h p ch t tinh t t b ph n ô môi Trong ó có: p ch t t nhiên m i g m casgrandxanthone A (37), casgranone B (40), c p ng, m c tiêu nhi m v nghiên c u c a lu n án tài ã th c hi n áp ng u c TS ng nh tên khoa h c nh tính nhóm h p ch t t nhiên n, dùng ph n ng hóa h c cho hi n t ng ng pháp chi t xu t Chi t r n-l ng (ngâm d m), l ng-l ng v i dung môi h u c theo th t ng d n phân c c Cô lo i dung môi d i áp su t c -21- -42.2.3 Ph ng pháp phân l p h p ch t Ph i h p ph ng pháp s c ký bao g m: s c ký l p m ng (TLC), c ký c t (SKC) pha th 2.2.4 Ph Ph o 3.3.1 Ho t tính gây ng pháp xác nh c u trúc ng pháp chung p gi a Ph kh i l ng pha c xác nh c u trúc hóa h c c a h p ch t k t m lý-hóa v i ph ng pháp ph hi n ng phân gi i cao (HR-MS), ph c ng h i bao g m: ng t nhân (NMR), quay c c ([ ]D) dòng HepG2, Lu, RD Vero theo ph ng pháp c a Skehan ng s (1991) Likhiwitayawuid c ng s (1993) n chi t ng pháp khuy ch tán gi ng th ch c a c a Saranraj P et al (2010) -Các h p ch t chrysophanol, pulmatin cho k t qu âm tính v i dịng t Các phân th y phân c t bào n H:E 1:1 h p ch t quercitrin th hi n ho t tính kháng t t i giá tr MIC l n l t 0,3 0,2 mg/mL c tóm t t 10 s 2.1-2.10 c ti n hành t i Vi n Hóa h c p ch t thiên nhiên, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam t i Hà N i Ho t tính kháng vi khu n P acnes Nghiên c u Phát tri n công ngh sinh h c, Tr nh c u trúc c 42 p ch t (không k h p ch t trùng l i gi a b ph n) Các h p ch t NGHI M HO T TÍNH SINH H C Th nghi m ho t tính gây kháng v i clindamycin erythromycin), k t qu cho b ph n c a ô môi ã phân l p xác Ph n mô t chi ti t vi c phân l p h p ch t t b ph n c a cây, 2.5 QUÁ TRÌNH TH u c th dịng vi khu n P 3.3 NH N XÉT CHUNG V CÁC K T QU NGHIÊN C U 2.4 QUÁ TRÌNH PHÂN L P CÁC H P CH T n chi t n chi t n-hexane, EtOAc, MeOH h p ch t aloe- emodin, rutin, quercitrin t ô môi NH TÍNH CÁC NHĨM H P CH T i b ph n g m phân ng ng 6,20; 9,29; 9,81 9,92 g/mL t qu phù h p v i công b c a A Yordanova [19] Acnes (t t c -Th ho t tính kháng vi khu n P Acnes c a m t s phân 2.3 QUÁ TRÌNH RD Vero v i giá tr IC50 t 3.3.2 Ho t tính kháng vi khu n P Acnes c t bào c a h p ch t nhóm anthraquinone p ch t quercetin t môi b ng ph c t bào bào HepG2 Lu ng pháp th ho t tính sinh h c -Kh o sát kh n ng gây HO T TÍNH SINH H C -H p ch t aloe-emodin cho k t qu kháng t t dòng t bào HepG2, Lu, ph t ngo i (UV), ph h ng ngo i (IR), 2.2.5 Ph 3.3 K T QU TH c ti n hành t i Vi n ng i h c C n Th phân l p có th x p vào nhóm: flavonoid (16 h p ch t); anthraquinone (6 h p ch t); polyalcol glyceryl ester m ch dài bão hòa (4 h p ch t); n xu t m t vòng benzene (4 h p ch t); triterpene (3 h p ch t); sterol (3 p ch t); xanthone (1 h p ch t); lignan (1 h p ch t); alkaloid (1 h p ch t); benzophenone (1 h p ch t); ng (1 h p ch t); benzofuran (1 h p ch t) Do v y h p ch t phát hi n t lồi mơi a d ng, ng phù h p v i k t qu u nh tính s b thành ph n hóa h c Cao chi t EtOAc quercitrin t ô môi th hi n ho t tính m i phát hi n kháng vi khu n gây m n tr ng cá t t h n m t s thu c kháng sinh hi n dùng K t qu c ng m t minh ch ng t tác d ng y h c dân gian c a ô môi dùng da ng t cho ch a h c lào, b nh ngồi -20trí c a khung s nhóm OH H 5,09 t -5- n naphthalene có mang nhóm OH, ó v trí liên k t v i nhóm ng rutinose b i proton anomer ng quan v i carbon t c p vòng th m mang oxygen Ph HMBC xác nh n proton không ghép c p methyl H 2,30 135,3 carbon methine n naphthalene C-3 ( ng quan v i C-2; ng quan v i carbon t c p vòng th m C C -Ngâm d m, chi t nóng (50 C) v i EtOH 96% -L c, cô c n d i áp su t th p C 157,4 6,93 m t nhóm H u thu c vịng A chúng có t nhóm methyl c ng có t T NGUYÊN LI U Bã chi t Cao EtOH C -Phân tán n c m, chi t v i n-hexane -Cô c n d i áp su t th p 119,7 ch ng t nhóm g n vào khung 135,3) Vì v y, H-4 ( H 6,93), hai Ph n khơng tan n-hexane Cao n-hexane proton vịng th m l i thu c vòng B Trên vòng B có m t carbon t p vịng th m mang oxygen meta H C 6,94 6,73 ch ng t hai proton ph i nh v y nhóm OH g n vào C-6 ( C v trí 7; c ngh nh Hình 3.16, c u ng t c u trúc h p ch t 5-hydroxydianellin (B ng 3.2.7.2), nh ng khác p ch t 41 nhóm OH g n -Chi t v i n-BuOH bão hịa n -Cơ c n d i áp su t th p tài li u [57] h p ch t t i C-5 g n nhóm OH cịn C-6 Ph n khơng tan EtOAc Cao EtOAc 158,2) Nh v y, c u trúc c a h p ch t 41 trúc t -Chi t v i EtOAc -Cô c n d i áp su t th p 158,2 hai proton methine ghép c p ây h p ch t có c u trúc m i c ki m tra b ng ph n m m SciFinder ngày 07-04-2014 45) Cao n-BuOH ho c Cao acetone c ho c acetone Ph n không tan n-BuOH ho c acetone -Cô c n d i áp su t th p c t tên casgranone C Cao n 2.1 Quy trình chung c u ch cao chi t t b ph n ô môi Cao BuOH r ô môi (RB, 35 gam) C:M 95:5 RB1 RB2 RB3 RB4 1,0 g 4,0 g 4,0 g 23,0 g C:M 9:1 Hình 3.16 T ng quan HMBC c u trúc h p ch t 41 Ghi chú: C:M 95:5 RB14 RB23 0,13 g 0,08 g 9:1 CGRB01 (18) CGRB02 (37) 12 mg 10 mg -Các trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân n ch a dùng phân l p ch t không t vào s ; giai n cu i k t tinh l i 2.6 Phân l p h p ch t t cao n-BuOH r ô môi -6- -19u trúc Cao n c ô môi (LM, 290 g) E:M:W 20:1:1 2014 t i c ki m tra b ng ph n m m SciFinder ngày 07-04- i h c Reims Champagne-Ardenne (Pháp) cho bi t ây c u 10:1:1 trúc m i Do ó, h p ch t 40 h p ch t m i t nhiên LM1 29 g LM2 27,6 g LM3 34 g E:M 50:1 LM4 30 g LM5 28,7 g 10:1 LM25 821 mg 3:1 LM223 300 mg C:M 8:1 LM2243 489 mg LM266 1,3 g 3:1 C:M 10:1 LM2533 114 mg C:M 12:1 C:M 9:1 C:M 10:1 3:1 LM253 300 mg C:M 9:1 C:M 9:1 LM26 7,0 g C:M 10:1 LM224 1,3 g LM2232 120 mg LM2662 776 mg 3:1 C:M 10:1 C:M 9:1 LM22322 36 mg LM22432 319 mg LM25332 20 mg LM25334 16 mg Ghi chú: CGLM07 (40) 13 mg CGLM04 (8) 49 mg LM25336 18 mg CGLM09 (41) mg CGLM08 (10) 12 mg LM26622 260 mg CGLM01 (11) 45 mg -Các trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân n ch a dùng phân l p ch t không t vào s ; giai n cu i k t tinh l i 2.3 Phân l p h p ch t t cao n c ô môi Cao EtOAc r ô môi (RE, 300 gam) H:E 10:0 Các c tính lý hóa d li u ph UV, IR (m c 3.2.1) Ph UV cho bi t c u trúc có h liên h p, ph IR cho th y m t s dao RE2 19,8 g RE3 21,4 g RE4 26,4g H:E 95:5 H:E 9:1 H:E 8:2 RE23 4,5 g RE33 1,8 g RE42 2,0 g H:E 95:5 RE233 34 mg H:E 9:1 RE334 54 mg H:E 8:2 RE423 100 mg RE5 67,0 g H:E 7:3 0:10 RE54 5,0 g H:E 7:3 5:5 ng c tr ng c a n i O-H, C=O, C-O, C-C H p ch t 41 cho ph n ng d ng tính v i thu c th FeCl3/EtOH, ch ng t thu c nhóm phenolic Ph HR-MS cho m i ion phân t gi m/z 563,1747 [M+Na]+ (tính tốn lý thuy t: [C25H32O13+Na]+ = 563,17406), phù h p v i công th c phân t C25H32O13 (540,18 vC) H-NMR (CD3OD, 500 MHz) xu t hi n tín hi u c a proton vịng th m ó g m proton ghép meta H 2,30 Ngồi tín hi u proton c a nv 13 C:M 9:1 RE62 2,7 g C:M 8:2 RE7 13,8 g RE8,9 57,8 g C:M:W 8,5:1,5:0,1 RE72 1,5 g 8:2:0,1 C:M:W 8:2:0,1 RE542 67 mg RE622 65 mg RE722 90 mg RE725 60 mg CGRE01 (26) 7,2 mg CGRE05 (15) 15 mg CGRE04 (25) 15 mg CGRE06 (34) 10 mg C CGRE02 (31) 32 mg CGRE03 (32) 20 mg Ghi chú: -Các trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân n ch a dùng phân l p ch t không t vào s ; giai n cu i k t tinh l i 2.5 Phân l p h p ch t t cao EtOAc r ô môi nv 20,3) carbon c a nhóm acetyl ( ng C 32,6 208,3); cịn l i 10 carbon vịng th m ó có carbon methine, carbon t c p mang oxygen carbon t c p không mang oxygen t h p v i CTPT d chi m C:M:W 8:2:0,1 H C-NMR (CD3OD, 125 MHz) k t h p v i ph DEPT ph HMBC cho th y có t ng s 25 carbon g m 12 carbon c a RE6 30,1 g 2,61 5,08 (8,0 Hz) 4,77 (1,5 Hz) proton anomer Ph 0:10 H ng rutinose v i oán (10 b t bão hòa), rutinose acetyl b t bão hòa, v y 10 carbon vòng th m (5 b t bão hòa) ph i ghép thành vòng thành phân t naphthalene Ph HMBC (Hình 3.16) cho th y nhóm methyl CGRE07 (30) 9,1 mg 6,94 6,73 (2,0 Hz) m t proton khơng ghép spin 6,93 (s); nhóm methyl rutinose, nhóm methyl ( RE1 12,1 g t tên casgranone B (Hình 3.8) Ph CGLM03 (5) 12 mg c 3.2.2.4 H p ch t 41 (casgranone C) LM22 4,5 g C:M 10:1 LM6 109,7 g quan v i carbon carbonyl vòng A c a khung s 2,61 c ng t C H 2,61 có t ng 208,3 h p thành nhóm acetyl g n vào n naphthalene v trí b i protron nhóm methyl ng quan v i carbon t c p vòng th m C 123,3 (C-2) H v nhóm OH Ph HMBC cho th y proton anomer c a ng tác v i C-1 ( C dihydroxybenzoyl) benzoate nv y c u trúc c a h p ch t 40 ch khác h p ch t (39) Methyl 3-O-glucopyranosyl-5-hydroxymethylene-2-(2,6ng -D-glucoside 155,0) c a khung c u trúc h p ch t (39) (Hình 3.8) ch thay th C-1 b ng nhóm O-glucosyl (xem d li u ph NMR B ng 3.2.2.3), có th xem ch t chuy n hóa ti p theo sau h p ch t (39) s thay th nhóm OH b ng nhóm O-glucosyl H p ch t 40 có tên IUPAC là: 2.2 Phân l p h p ch t t cao EtOAc ô môi CGLE20 (39) 29 mg LE8223 80 mg C:M 85:15 LE822 140 mg C:M 85:15 LE82 2,0 g C:M 85:15 LE8 8,7 g CGLE05 (5) 31 mg LE1012 82 mg C:M 7:3 LE101 1,0 g C:M 7:3 LE102 2,0 g LE10 3,8 g CGLE04 (7) 8,3 mg LE114344 60 mg C:M 7:3 LE11434 153 mg C:M 7:3 LE1143 200 mg C:M 7:3 LE114 0,4 g phân c c; : gi m d n CGLE11 (4) 12 mg LE10232 35 mg C:M 7:3 LE1023 111 mg C:M 7:3 LE9 10,1 g u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n t vào s ; giai o n cu i k t tinh l i CGLE03 (6) 20 mg CGLE08 (8) 6,7 mg CGLE10 (16) mg CGLE02 (3) 20 mg CGLE01 (17) 660 mg LE6322 45 mg C:M 9:1 0:1 LE5323 40 mg C:M 85:15 LE632 70 mg C:M 9:1 C:M 95:5 LE572 90 mg LE63 1,3 g C:M 9:1 LE7 12,4 g H:E 1:0 LE57 2,9 g LE6 16,4 g Ghi chú: -Các q trình phân l p khơng ghi sephadex ho c RP18 -Các phân o n ch a dùng phân l p ch t khơng có ch CGLE09 (15) 10 mg LE563 30 mg C:M 98:2 LE56 1,9 g ng LE5722 33 mg C:M 95:5 LE532 180 mg LE523 195 mg LE554 800 mg C:M 95:5 C:M 95:5 C:M 98:2 1–2 ppm ghi ph dung môi khác v i h p ch t (39) LE55 2,1 g 103,2 carbon anomer Các s li u có l ch kho ng C:M 98:2 nv LE53 2,3 g C m c 3.2.1) carbon c a LE52 1,1 g glucose ó ng t h p ch t LE5 15,8 g tín hi u c a t ng s 22 carbon Trong ó g m 16 carbon t LE4 12,4 g C-NMR (CD3OD, 125 MHz) k t h p v i ph DEPT cho LE3 14,3 g ã bi t (39) (s li u ph ng quan HMBC c u trúc h p ch t 40 LE2 15,6 g Hình 3.8 T LE1 11,2 g Ph 13 Cao EtOAc ô môi (LE, 155 g) phân c c; CGLE07 (10) 28 mg Sephadex E:M:W 15:1:1 LE1152 90 mg E:M:W 20:1:1 LE115 1,3 g C:M 7:3 LE11 2,6 g CGLE06 (11) 11 mg LE1163 103 mg RP18, M:W 1:5 1:1 LE116 0,8 g -18-7- CGBE15 (42) mg BE7323 25 mg C:M 97:3 BE732 90 mg C:M 97:3 BE73 1,2 g oán carbon carbonyl carboxyl Còn l i carbon t c p C-3 nh CGBE13 (23) 10 mg C C vòng B, 169,0 165,3 thu c nhóm 135,4 137,0 so sánh v i d CGBE06 (28) 1200 mg CGBE03 (32) 660 mg BE433 1800 mg BE422 790 mg C:M 95:5 C:M 98:2 BE223 309 mg CGBE02 (31) 650 mg CGBE01 (27) 130 mg BE342 980 mg 5:5 H:E 8:2 H:E 8:2 2.4 Phân l p h p ch t t cao EtOAc v ô môi c tính c xác nh C- li u NMR c a h p ch t d i hóa h c ph n m m Chemdraw 12.0 N u nhóm carboxyl v trí th y khơng phù h p carbon vịng A s thay Ghi chú: -Các trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân o n ch a dùng phân l p ch t khơng có ch t vào s ; giai o n cu i k t tinh l i CGBE12 (30) 26 mg CGBE09 (18) 410 mg CGBE10 (29) 440 mg BE5332 530 mg C:M 98:2 BE541 89 mg BE533 870 mg BE442 670 mg 93:7 C:M 99:1 C:M 95:5 BE53 3,5 g BE44 3,3 g BE43 3,9 g BE42 2,7 g BE34 2,8 g BE22 1,5 g kh o CGBE05 (21) 18 mg BE5434 29 mg BE5423 45 mg C:M 97:3 C:M 98:2 BE543 67 mg BE542 113 mg C:M 98:2 BE54 4,2 g C:M 98:2 95:5 95:5 C:M 99:1 4:6 H:E 9:1 H:E 8:2 BE4 26,4 g BE3 22,8 g BE2 13,6 g u không th y tín hi u methylene methyl k oxygen khác nhóm methoxyl g n CGBE07 (22) 220 mg BE544 480 mg C:M 98:2 95:5 BE6 30,1 g BE5 24,7 g 3:7 BE1 2,1 g C-4; C-1 C-3 Ngoài ra, ph monodictyxanthone [37], griseoxanthone C [104] (B ng 3.2.7.1) tham H:E 9:1 Cao EtOAc v ô môi (BE, 145 g) -17- cho phép d BE7 3,8 g BE8 3,6 g BE9 4,2 g -8- c i nh v y H-1 s có t i l i, c a C ng quan v i C-9 m lý, hóa ph nghi m ã phân tích nh k t h p so sánh v i tài li u tham kh o cho phép xây d ng c u trúc h p ch t 37 nh Hình 3.14, tên IUPAC 8-hydroxy-6-methoxy-9-oxo-9H-xanthene1,3-dicarboxylic C u trúc hóa h c c ki m tra b ng ph n m m SciFinder ngày 04-11-2013 45) cho bi t ây h p ch t t nhiên m i, t tên casgrandxanthone A, (Hình 3.15) 3.2.2.3 H p ch t 40 (casgranone B) Các c tính lý hóa d li u ph UV, IR (m c 3.2.1) Ph UV cho bi t c u trúc có h liên h p, ph IR cho th y m t s dao ng c tr ng c a n i O-H, C=O, C-O, C-C H p ch t 40 cho ph n ng d ng tính v i thu c th FeCl3/EtOH, ch ng t thu c nhóm phenolic Ph HR-MS cho m i ion phân t gi toán lý thuy t: [C22H25O12]+ = 481,1346), t m/z 481,1245 [M+H]+ (tính ng ng v i CTPT C22H24O12 (480,13 vC) Ph H-NMR (CD3OD, 500 MHz), xu t hi n tín hi u c a n m proton nhân th m H kho ng H 6,3–7,8 (trong ó có m t c p t 6,32 Hz); hai proton nhóm oxymethylene methoxy H hexose d ng 7,5 Hz) H H ng 4,69 ba proton nhóm 3,73 Ngồi cịn có tín hi u proton c a t i vùng ng 3,2–5,0 ó proton anomer có nv H ng 4,92 (d; i carbon C C 118,8 T ng t , proton 165,3 122,0 cịn có t 118,8 154,3 cho phép xác carbon C 154,3 C-4a, t nhóm carboxyl C 8,05 t C ây carbon c xác vùng t tr C C ng th p h n CGFE11 (8) 10 mg CGFE09 (13) 11 mg CGFE05 (14) mg CGFE03 (2) 10 mg FE1243 0,45 g FE1152 0,25 g FE1143 0,90 g FE1022 0,65 g C:M 85:15 C:M 9:1 C:M 9:1 C:M 85:15 FE114 3,6 g FE102 2,5 g C:M 85:15 CGFE10 (9) 15 mg FE093 1,1 g C:M 95:5 ng ng C-9a; C-2; CGFE07 (12) 16 mg CGFE02 (28) 26 mg CGFE01 (27) 16 mg CGFE06 (1) mg FE0823 0,75 g C:M 9:1 C:M 95:5 FE0632 0,65 g FE082 2,6 g FE063 2,3 g nh 118,8; 122,0; 119,3 nh t C:M 95:5 v trí 154,3 118,8 Trên khung g n oxygen h n Do v y có th xác 169,0; 165,3 FE08 14,0 g ng quan ng quan v i carbon t c p xanthone carbon t c p t i v trí 4a có giá tr v trí 9a H nh proton g n v i carbon ortho ho c meta so v i carbon so v i carbon v trí ortho ho c meta FE0522 0,70 g 7,75 g n v i carbon v trí 2.7 Phân l p h p ch t t cao EtOAc trái mơi Ghi chú: -Các q trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân o n ch a dùng phân l p ch t khơng có ch t vào s ; giai o n cu i k t tinh l i so v i carbon H nh nhóm carbonyl c ng FE0432 0,75 g meta v i proton ng quan v i CGFE04 (36) 50 mg 118,8 cho phép xác 119,3, v a có t 8,05, v a C:M 95:5 C C H C:M 95:5 ng quan v i carbon methine carbon t c p C 7,75 ghép c p meta v i proton FE052 1,8 g có t H FE022 1,2 g vịng A, proton FE043 2,1 g ng hồn tồn phù h p (Hình 3.15) C:M 95:5 6,46 6,71 C:M 95:5 H 157,2 C- 3:7 ng quan c a hai proton C C:M 98:2 nh C-6 Nh v y 93,1 C-5 carbon t c p 4b Ph HMBC cho th y t 167,1 ch ng H:E 7:3 C c xác FE115 1,5 g C:M 9:1 C:M 95:5 FE12 4,5 g FE11 12,4 g l i carbon methine FE09 8,0 g FE10 11,6 g nhóm methoxyl g n v i carbon C FE07 6,3 g ng quan nh t v i carbon FE06 9,3 g 3,91) có t 103,6 C-8a Proton nhóm FE05 10,7 g H C 162,4); v y FE04 12,5 g methoxyl ( 97,7 C-7 carbon C FE03 4,8 g C nh nhóm hydroxyl g n vào v trí C-8 ( 162,4 103,6 FE02 14,7 g carbon C FE01 8,5 g cho phép xác ng quan v i hai carbon t c p 0:10 97,7, v a có t H:E 10:0 C ng quan HMBC c u trúc h p ch t 37 Cao EtOAc trái ô mơi (FE; 168,5 g) Hình 3.15 T FE124 1,2 g -9- -16- -15- -10Cao n-BuOH trái ô môi (FB, 150 g) C:M 9:1 FB1 1,5 g proton vòng benzene chia làm c p C:M 8:2 H:E E:M FB43 5g H 9:1 CGFB05 (33) mg C:M 95:5 6,46; J=2,0; 6,71; H 3,91 proton nhóm hydroxyl ki m n i 12,29 5:5 FB54 0,6 g FB433 0,2 g FB4333 10 mg tr c ti p vòng benzene FB5 19,2 g E:M 98:2 H J=2,0; 8,16; J=1,5 8,05; J=1,5 Hz), proton c a nhóm methoxyl g n 5:5 FB4 30 g CGFB01 (38) 4,3 mg u ghép meta ( 13 Ph C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) k t h p v i ph DEPT cho th y 16 tín hi u c a 16 carbon Trong ó có b n carbon methine mang n i c a vòng benzene kho ng nh t C C 93,1–122,0; m t carbon methoxyl 56,4 phù h p v i tín hi u ph H-NMR Ngồi cịn có tám carbon t c p mang n i ôi ba carbon carbonyl 5:5 C 178,7; 169,0 165,3 FB4334 20 mg t khác, ph HMBC cho th y carbon carbonyl có carbon C:M 9:1 thu c nhóm carboxyl, v y h p ch t 37 có th có nhóm th (1 CGFB02 (24) mg FB43342 10 mg FB43343 mg CGFB03 (6) mg CGFB04 (7) mg methoxyl, hydroxyl carboxyl) g n tr c ti p vào vòng benzene V y khung s Ph HSQC cho phép xác Cao EtOAc h t ô môi (SE, 70 g) SE2 2,64 g SE3 3,14 g C:M 10:0 SE41 0,056 g SE42 0,323 g SE43-45 0,607 g c nh phù h p v i c c u khung vịng A B (Hình 3.15) 2.8 Phân l p h p ch t t cao n-BuOH trái ô môi SE1 0,98 g p mang n i ghép vịng xanthone V i c p proton ghép c p meta suy nhóm th phân b Ghi chú: -Các q trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th ng; : T ng d n phân c c; -Các phân n ch a dùng phân l p ch t không t vào s ; giai n cu i k t tinh l i H:E 10:0 n h p ch t 37 có 13 carbon v i nhóm carbonyl carbon t 3,91 t nh proton ng ng g n tr c ti p v i carbon SE4 3,01 g SE5 8,12 g 7:3 C:M 8:2 SE51 0,049 g SE52 0,458 g SE6 40,07 g 5:5 SE53-57 0,953 g Ph HMBC cho th y proton carbon carbonyl C H C 119,3; 122,0; 93,1; 7,75 có t CGSE02 (19) 19 mg ng; 2.9 Phân l p h p ch t t cao EtOAc h t ô môi ng quan v i 169,0 165,3 (Hình 3.15) ch ng t nhóm carbonyl g n vào m t vịng (cho vịng A), v y hai nhóm hydroxyl methoxyl l i ph i g n vòng B, proton H vòng i di n (vòng B) 6,46 ghép c p meta v i proton nhóm hydroxyl methoxyl c ng ph i -Các trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th - : T ng d n phân c c; giai n cu i k t tinh l i 8,05; 7,75; 6,71; 6,46 97,7 56,4 0:10 CGSE01 (35) 109 mg Ghi chú: H nhóm hydroxyl ki m n i (g n C-9) v a có t H 6,71 ch ng v trí meta v i Proton ng quan v i carbon methine -11- -141 ph H-NMR; m t carbon carbonyl methylene k nhóm carbonyl oxygen 62,6 t C oxygen ph ng C C Cao acetone h t ô môi (SA, 27 g) 174,5; m t carbon 34,1 m t carbon methylene mang E:M 10:0 ng phù h p v i pronton methylene k SA1 0,47 g H-NMR; m t carbon methylene cách nhóm carbonyl b i t carbon C 0:10 SA2 2,67 g 24,8 m t carbon methylene cách nhóm hydroxymethylene b i m t carbon, proton methylene ph 25,7 c ng t C C:M 10:0 ng ng phù h p v i SA21 0,051 g H-NMR Ngồi cịn có tín hi u c a nhi u nhóm methylene m ch bão hịa kho ng C 29,1-29,6 t SA22 0,521 g SA3 2,83 g SA4 3,42 g 5:5 C:M 95:5 SA23-26 1,575 g SA5 4,96 g SA6-7 10,01 g SA33 0,682 g SA34-36 1,568 g 5:5 SA31-32 0,132 g ng CGSA01 (20) 302 mg ng v i proton methylene m ch carbon bão hòa xu t hi n CGSA02 (15) 218 mg ph H-NMR Ghi chú: So v i h p ch t (21) (d li u ph m t m c 3.2.1) h p ch t 22 khác d ki n có th xác CH nh h p ch t 22 m t ester c a glycerol v i m t dây axit-alcol bão hịa g m 25 carbon [s nhóm CH2 ng; 2.10 Phân l p h p ch t t cao acetone h t ô môi dài m ch carbon bão hịa ng n h n nhóm methylene u m ch thay nhóm methyl nhóm hydroxymethylene -Các q trình phân l p u dùng s c ký c t silica gel pha th - : T ng d n phân c c; giai n cu i k t tinh l i NG K T QU VÀ BI N LU N 3.1 K T QU t qu NH TÍNH THÀNH PH N HĨA H C nh tính cho th y ô môi hi n di n h u h t nhóm h p dây axit=(M-C3H7O3-CO-OH):14=(472-91-28-17):14=24] có c u trúc nh ch t kh o sát: flavonoid, steroid, terpenoid, anthranoid, coumarine Hình 3.2 K T QU PHÂN L P, XÁC 3.10 tên theo IUPAC hydroxypentacosanoate C u trúc SciFinder t i 2,3-dihydroxypropyl 25- c ki m tra b ng ph n m m i h c Reims Champagne-Ardenne (Pháp) ngày 17-12- NH C U TRÚC VÀ NH N DANH Ph n trình bày k t qu phân tích ph bi n lu n chi ti t xác trúc c a h p ch t m i (d li u ph 38 h p ch t ã bi t chi m 15 trang) 2013 cho bi t ây h p ch t t nhiên m i 3.2.1 3.2.2.2 H p ch t 37 (casgrandxanthone A) (22) 2,3-dihydroxypropyl-25-hydroxypentacosanoate: Các c tính v t lý d li u ph (m c 3.2.1) Ph UV cho bi t c u trúc có liên h p, ph IR cho th y m t s dao ng C-O, C-C H p ch t 37 cho ph n c tr ng c a n i O-H, C=O, ng d ng tính v i thu c th Ph HR-MS cho m i ion phân t gi m/z 331,04536 [M+H]+ (tính + tốn lý thuy t: [C16H10O8+H] = 331,04539), phù h p v i công th c phân Ph m v t lý d li u ph c a h p ch t m i 25 D +10,5 -1 mp 132-135 °C, [ ] t màu tr ng, (0,01M/CHCl3) FT-IR (KBr), : 3422, 2848, 1735, 1467, 1178 cm HRMS: m/z 473,42061 [C28H57O5]+ HNMR (CDCl3 & MeOD, 500MHz, H ppm, J Hz): 1,26-1,29 (40H; m; H- (2H; m; H-2); 3,54-3,61 (2H; m; H-25); 3,63-3,66 (2H; m; H-3 ); 3,8613 3,89 (1H; m; H-2 ); 4,09-4,14 (2H; m; H-1 ) C-NMR (CDCl3 & MeOD, 125MHz, b t bão hòa) H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) cho tín hi u c 4, , 23); 1,54-1,57 (2H; m; H-24); 1,58-1,65 (2H; m; H-3); 2,33-2,36 FeCl3/EtOH, ch ng t thu c nhóm phenolic C16H10O8 (330,04 vC, 12 nh c u c tr ng c a C ppm): 24,83 (C-3); 25,70 (C-23); 29,08-29,60 (C-4, , 22); 32,54 (C-24); 34,12 (C-2); 62,61 (C-25); 63,22 (C-3 ); 65,07 (C-1 ); 69,98 (C-2 ); 174,48 (C-1) -13- -12o (37) Casgrandxanthone A: Hình kim màu vàng s m, mp 330 C UV 8); 154,0 (C-1); 139,4 (C-10); 135,3 (C-3); 123,3 (C-2); 119,7 (C-4); (MeOH), 109,7 (C-9); 105,4 (C-7); 104,7 (C-5); 104,2 (C-1'); 102,3 (C-1"); 78,1 (C- max: 377, 402 nm FT-IR (KBr), : 3391, 2919, 1656, 1490, -1 + 1157 cm HRMS: m/z 331,04536 [C16H11O8] H-NMR (DMSO-d6, 3'); 77,5 (C-5'); 74,9 (C-2'); 74,1 (C-4"); 72,4 (C-3"); 72,1 (C-2"); 71,3 500MHz, (C-4'); 69,9 (C-5"); 67,7 (C-6'); 32,6 (C-12); 20,3 (C-13); 17,9 (C-6") H ppm, J Hz): 7,75 (1H; d; 1,5; H-2); 8,05 (1H; d; 1,5; H-4); 6,71 (1H; d; 2,0; H-5); 6,46 (1H; d; 2,0; H-7); 3,91 (3H, s, H-6 ); 12,29 (1H, s, -OH) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125MHz, C ppm): 135,4 (C-1); 3.2.2 Bi n lu n chi ti t xác nh c u trúc h p ch t m i 3.2.2.1 H p ch t 22 (2,3-dihydroxypropyl-25-hydroxypentacosanoate) 122,0 (C-2); 137,0 (C-3); 119,3 (C-4); 155,3 (C-4a); 157,2 (C-4b); 93,1 c tính v t lý d li u ph (m c 3.2.1) Ph IR cho th y m t s (C-5); 167,1 (C-6); 97,7 (C-7); 162,4 (C-8); 103,6 (C-8a); 178,7 (C-9); dao 118,8 (C-9a); 169,0 (C-1 ); 165,3 (C-3 ); 56,4 (C-6 ) UV ch ng t c u trúc khơng có h liên h p, âm tính v i thu c th (40) Casgranone B: Hình kim màu vàng, mp 229-230 °C UV (MeOH), FeCl3/EtOH ch ng t khơng thu c nhóm phenolic max: 226, 258, 261, 302 nm FT-IR (KBr), : 3379, 2923, 1628, 1461, 1276 cm-1 HR-MS: m/z 481,1245 [C22H25O12]+ 500MHz, H H-NMR (MeOD, ppm, J Hz): 7,72 (1H; d; 1,0; H-4); 7,51 (1H; d; 1,0; H-2); 7,25 (1H; t; 8,0; H-6); 6,32 (2H; d; 8,0; H-5; H-7); 4,69 (1H; s; H-11a,b); ng c tr ng c a n i O-H, C-O, C-C; không hi n v t d i èn Ph HR-MS cho m i ion phân t gi m/z 473,42061 [M+H]+ (tính tốn lý thuy t: [C28H56O5+H]+ = 473,42060), t ng ng v i công th c phân t C28H56O5 (472,41 vC) Các ph H-NMR (CDCl3-CD3OD, 500 MHz) k t h p v i HSQC, 3,73 (1H; s; H-12); 4,92 (1H; d; 7,5; H-1'); 3,87 (1H; m; H-6'a); 3,67 (1H; HMBC cho th y h p ch t 22 có tín hi u c a proton oxymethylene m; H-6'b); 3,42 (1H; m; H-5'); 3,40 (1H; m; H-3'); 3,33 (1H; m; H-4'); 3,26 kho ng 13 (1H; m; H-2') C-NMR (MeOD, 125MHz, C ppm): 202,7 (C-9); 167,6 3,86–3,89 H 3,63–4,14; m t tín hi u proton oxymethine kho ng H c tr ng cho nhóm glyceryl; m t tín hi u c a proton (C-10); 163,2 (C-8; C-5a); 155,0 (C-1); 144,7 (C-3); 137,7 (C-6); 136,0 methylene k nhóm carbonyl (C-1a); 129,4 (C-4a); 120,0 (C-2); 122,8 (C-4); 112,9 (C-8a); 108,2 (C-5; proton methylene k oxygen C-7); 64,4 (C-11); 52,6 (C-12); 103,2 (C-1'); 78,2 (C-5'); 77,9 (C-3'); 74,9 methylene cách nhóm carbonyl oxygen b i m t carbon, (C-2'); 71,1 (C-4'); 62,6 (C-6') 1,54–1,65 Ngoài cịn có tín hi u proton c a nhi u nhóm methylene (41) Casgranone C: t màu nâu, mp 165-166 °C UV (MeOH), max: m ch carbon bão hòa 211, 325 nm FT-IR (KBr), : 3442, 3083, 2920, 1703, 1630 cm HR1 H-NMR (MeOD, 500MHz, H ppm, J Hz): 6,94 (1H; d; 2,0; H-5); 6,93 (1H; d; 2,0; H-4); 6,73 (1H; d; 3.86 - 3.89 2' HO 63.2 70.0 3' kho ng 65.1 O 2.34 174.5 H H 2,28–2,36; m t tín hi u c a 3,54–3,61 tín hi u proton 3.58 - 3.66 1.64 4.09 - 4.14 29.0 1.29 22 1.26 29.1 1.26 29.6 15 29.6 21 1.29 29.6 1.55 24 25.7 H 62.6 OH 25 3.50 O Hình 3.10 T Ph ng quan HMBC c u trúc h p ch t 22 13 C-NMR (CDCl3-CD3OD, 125 MHz) k t h p v i ph DEPT HSQC, HMBC cho th y: m t carbon oxymethine nh t NMR (MeOD, 125MHz, hai carbon oxymethylene ppm): 208,3 (C-11); 158,2 (C-6); 157,4 (C- 32.5 23 1.43 groups); 2,61 (1H; s; H-12); 2,30 (1H; s; H-13); 1,23 (1H; d; H-6") 13CC kho ng 1,26–1,29 1.29 24.8 34.2 1' 2,0; H-7); 5,08 (1H; d; 8,0; H-1'); 4,77 (1H; d; 1,5; H-1"); 4,10 (1H; dd; 1,5; 11,0; H-6'a); 3,95 (1H; dd; 1,5; 3,5; H-2"); 3,36-3,75 (8H; m; CH kho ng H OH -1 MS: m/z 563,1747 [C25H32O13Na]+ kho ng C C 70,0 65,1 63,2 phù h p v i nhóm glyceryl