Đang tải... (xem toàn văn)
KHOA SINH HỌC TIỂU LUẬN SẢN XUẤT PROTEIN TRỊ LIỆU TÁI TỔ HỢP CÔNG NGHỆ PROTEIN THÁNG 06 NĂM 2020 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 NỘI DUNG 2 I TỔNG QUAN VỀ PROTEIN TRỊ LIỆU 2 1 Định nghĩa 2 2 Phân loại và chức năng 2[.]
KHOA SINH HỌC TIỂU LUẬN SẢN XUẤT PROTEIN TRỊ LIỆU TÁI TỔ HỢP CÔNG NGHỆ PROTEIN THÁNG 06 NĂM 2020 MỤC LỤC MỞ ĐẦU NỘI DUNG I TỔNG QUAN VỀ PROTEIN TRỊ LIỆU Định nghĩa 2 Phân loại chức II SẢN XUẤT PROTEIN TRỊ LIỆU TÁI TỔ HỢP Hệ thống biểu protein trị liệu tái tổ hợp .5 1.1 Hệ thống vi sinh vật để sản xuất protein trị liệu 1.2 Sản xuất protein tái tổ hợp tế bào côn trùng 10 1.3 Sản xuất protein tái tổ hợp tế bào động vật có vú 11 1.4 Sản xuất protein tái tổ hợp chuyển gen 12 Quy trình ngược dịng .16 Xử lý xi dịng 19 III ỨNG DỤNG 21 Theo Tạp chí nghiên cứu y học, có báo “TINH SẠCH PEPTID NGƯỜI TÁI TỔ HỢP CÓ KHẢ NĂNG THẤM QUA MÀNG, KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG TRONG PROTEIN TRỊ LIỆU” 22 Mục tiêu 22 Chuẩn bị protein Tái tổ hợp 22 Đánh giá khả vận chuyển tế bào 23 Kết 24 Kết luận 25 KẾT LUẬN .26 MỞ ĐẦU Protein trị liệu sản xuất công nghệ/kỹ thuật sinh học, dược phẩm quan trọng có tiềm lớn để cải thiện sức khỏe người Những phân tử protein phiên tối ưu protein người nội sinh Chúng phân lập chất xuất tự nhiên từ động, thực vật, vi sinh vật, tạo cơng nghệ DNA tái tổ hợp Có nhiều loại thuốc protein khác nhau, bao gồm kháng thể đơn dòng, vắc-xin, hormon peptide, yếu tố máu, cytokine, kháng sinh peptide, loại enzyme trị liệu Nhiều loại protein tái tổ hợp phê duyệt gần phát triển sử dụng để điều trị rộng rãi lâm sàng, bao gồm bệnh nan giải ung thư, bệnh tự miễn/viêm nhiễm, hay rối loạn di truyền Trong tổng quan này, tác giả nhấn mạnh xu hướng phương pháp tiếp cận nghiên cứu phát triển thuốc protein, chủ yếu sở công nghệ/công nghiệp protein Qua tiểu luận “Sản xuất protein trị liệu tái tổ hợp” để làm rõ hiểu vấn đề NỘI DUNG I TỔNG QUAN VỀ PROTEIN TRỊ LIỆU Định nghĩa Protein thiết kế để sử dụng dược phẩm/ thuốc gọi protein trị liệu, hay thuốc protein sinh học (biologics) Protein sở/nền tảng sống việc sử dụng thuốc protein/protein trị liệu có lịch sử lâu dài Protein trị liệu truyền thống phân lập hợp chất xuất tự nhiên từ động vật, thực vật, vi sinh vật Hiện nay, nhiều dạng thuốc protein sinh học tạo công nghệ DNA tái tổ hợp Hiện có khoảng 239 protein trị liệu 380 biến thể thuốc Cơ quan Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA) phê chuẩn.[5] Hình: Biểu đồ số lượng thuốc hóa học thuốc sinh học FDA phê duyệt hai thập kỷ qua Phân loại chức Protein trị liệu khác nhiều khía cạnh so với loại thuốc phân tử nhỏ/hóa học truyền thống Chúng khác khơng kích thước, thành phần, phương thức sản xuất, độ tinh sạch, tác dụng phụ, ổn định, cơng thức, mà cịn khía cạnh pháp lý Những khác biệt lý giải cho việc thuốc protein sinh học xem xét nhóm thuốc/dược phẩm đặc biệt, với nhiều đặc tính chung khác với thuốc phân tử nhỏ Protein trị liệu phân loại dựa thể loại phân tử như: − Các protein từ máu sản phẩm liên quan − Hormone nhân tố tăng trưởng − Các cytokine interferon − Các vaccine kháng thể Dựa vai trò phương thức hoạt động, protein trị liệu phân thành nhóm khác − Nhóm I bao gồm protein có hoạt tính enzym điều hịa − Nhóm II gồm protein có khả gắn đích đặc hiệu/cụ thể − Nhóm III protein sử dụng tạo vắc xin − Nhóm IV bao gồm protein sử dụng chẩn đốn (hình 2) Dựa hoạt động / hoạt tính dược lý, protein trị liệu chia thành nhóm: − Thay loại protein bị thiếu bất thường; − Gia tăng q trình chuyển hóa có; − Cung cấp chức hoạt động − Can thiệp vào phân tử thể; − Vận chuyển/cung cấp hợp chất protein khác, chẳng hạn hạt nhân phóng xạ, thuốc gây độc tế bào Ngoài ra, protein trị liệu chia nhóm dựa cấu trúc phân tử chúng, bao gồm thuốc thiết kế dựa kháng thể, protein dung hợp với Fc, thuốc chống đơng máu, protein hình thái xương, protein thiết kế hình dàn (scaffold), enzym, hormon, interleukin Chúng phân loại dựa chế hoạt động mức phân tử là: − Liên kết không cộng hóa trị với đích gắn (mAbs); − Tác động đến liên kết cộng hóa trị (enzym); − Tác động mà khơng có tương tác cụ thể (Albumin huyết thanh) Hầu hết protein trị liệu có thị trường tái tổ hợp hàng trăm số chúng trình thử nghiệm lâm sàng để điều trị ung thư, rối loạn miễn dịch, nhiễm trùng Các protein thiết kế mới, bao gồm BisAbs (bispecific mAbs), protein dung hợp đa yếu tố, mAbs liên kết với loại thuốc phân tử nhỏ protein với dược động học tối ưu hóa phát triển Ngoài protein trị liệu dựa sinh vật nhân chuẩn, số protein/enzym trị liệu dựa sinh vật nhân sơ phát triển, sản xuất ứng dụng lâm sàng Ví dụ, L-asparaginase (một loại enzym hóa trị liệu), methionine gamma-lyase (một tác nhân chống ung thư tiềm năng), Lglutaminase (một loại enzym chống thiếu máu) L-methionase (tham gia xây dựng phân tử protein khác tổng hợp axit amin L-cysteine) protein sử dụng phổ biến điều trị bệnh khác nhau.[5] Ưu điểm protein trị liệu tái tổ hợp[1]: − Thay thuốc tổng hợp hóa học. − Có chức trị liệu đặc hiệu cao. − Ít làm ảnh hưởng đến q trình sinh học bình thường. − Nhanh chóng phát triển mức độ lâm sàng nhanh chóng FDA chấp thuận. − Có khả tạo phản ứng miễn dịch II SẢN XUẤT PROTEIN TRỊ LIỆU TÁI TỔ HỢP Hệ thống biểu protein trị liệu tái tổ hợp 1.1 Hệ thống vi sinh vật để sản xuất protein trị liệu Mặc dù có nhiều hệ thống vật chủ khác để sản xuất protein tái tổ hợp, vật chủ vi sinh vật cung cấp số lợi so với hệ thống khác, sản xuất nhanh, rẻ kinh tế: − Sinh học phân tử sinh lý học đặc trưng ghi lại đầy đủ − Dễ dàng bảo trì thao tác − Sử dụng nguồn dinh dưỡng rẻ tiền − Tăng trưởng nhanh chóng tích lũy sinh khối để đạt mật độ tế bào cao − Mở rộng quy mô dễ dàng thuận tiện − Máy móc biểu chúng có nhiều chất xúc tiến cảm ứng mạnh Promoter cảm ứng yêu cầu chất cảm ứng, cạn kiệt bổ sung chất dinh dưỡng cụ thể, thay đổi pH thay đổi yếu tố hóa lý để bắt đầu trình biểu gen Các hệ thống cảm ứng có nhược điểm chất cảm ứng hóa học đắt tiền độc hại cần phải loại bỏ trình xử lý sau sản phẩm sử dụng cho người Do đó, việc sử dụng hệ thống điều nhiệt sử dụng để sản xuất protein dược phẩm tái tổ hợp biểu phụ thuộc vào chất xúc tiến mạnh điều chỉnh nhiệt giúp giảm thiểu rủi ro bổ sung tác nhân hóa học Cũng cấu trúc tế bào vi khuẩn, nhanh chóng thích nghi với điều kiện ni cấy với thời gian chép ngắn (20 phút) Yêu cầu môi trường tế bào vi khuẩn đơn giản bao gồm nguồn cacbon nitơ đơn giản Do đó, đầu vào tổng thể vi khuẩn thấp 90% so với tế bào động vật có vú Một số phương pháp điều trị có nguồn gốc từ vi khuẩn phê duyệt (bởi Liên minh Châu Âu FDA, Hoa Kỳ) bao gồm hormone (insulin người chất tương tự insulin, calcitonin, hormone tăng trưởng người, glucagons, hormone tuyến cận giáp, somatropin yếu tố tăng trưởng giống insulin 1), interferon (alfa-1, alfa-2a, alfa-2b gamma-1b), interleukin 11 2, chuỗi nhẹ nặng tăng lên chống lại yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu-A, yếu tố hoại tử khối u alpha, protein tiểu đơn vị tả B, khuẩn lạc bạch cầu hạt - yếu tố kích thích chất kích hoạt plasminogen Vi khuẩn lựa chọn để sản xuất protein tái tổ hợp vi khuẩn enterobacterium E coli Hệ thống cung cấp sửa đổi nhanh chóng dễ dàng, dễ dàng phát triển điều kiện mơi trường quản lý vòng đời ngắn Tế bào vi khuẩn chịu đựng thích ứng với thay đổi mơi trường cách nhanh chóng, việc mở rộng quy mô dễ dàng Tuy nhiên, hệ thống có số nhược điểm − Các gen người động vật có vú nhân vi khuẩn trải qua trình ghép nối thiếu máy móc nối, đó, phiên gen khơng có intron nhân để có kết tối ưu − Các tín hiệu liên quan đến phiên mã gen khác nhau; đó, gen quan tâm thường hợp với gen vi khuẩn kiểm sốt trình tự khởi đầu nó, protein thu sản phẩm dung hợp, sau phân cắt, tinh sử dụng − Chất xúc tiến Lac chất xúc tiến vi khuẩn phổ biến Tuy nhiên, biểu cấp cao, T7 promoris ưu tiên (hiện diện vectơ pET) Nó thúc đẩy biểu protein mục tiêu lên gần 50% tổng số protein tế bào Gen quan tâm đặt kiểm soát thực khuẩn thể xúc tiến điều chỉnh − Đối với trình dịch mã, phong phú t-RNA có liên quan đến tần suất xuất codon khác (xu hướng codon) Do đó, codon E coli gây kết hợp sai axit amin kết thúc sớm ảnh hưởng đến sản lượng protein điều trị Điều giải cách thay theo hướng vị trí codon thành codon (cho axit amin) ưa thích E coli Một cách tiếp cận khác đồng biểu t-RNA E coli (các chủng E coli, BL21 codon cộng, Rosetta thiết kế cho mục đích này) Để bổ sung axit amin trình dịch mã, có nhiều codon cho số axit amin, đó, xu hướng codon xảy ưu tiên codon cụ thể axit amin lồi cụ thể − Tính phức tạp: Tế bào nhân thực có ưu điểm tạo protein có đầy đủ chức gấp nếp cách Các kháng thể có bốn tiểu đơn vị tiết tế bào nhân thực dạng đầy đủ chức Mặt khác, khó có protein đa miền từ E coli Ngay thu protein, việc biến tính gấp nếp điều kiện phịng thí nghiệm tốn protein thiếu hoạt tính − Thiếu biến đổi sau vận động (PTM) vấn đề, giải điều bắt buộc hoạt động nhiều protein điều trị Q trình glycosyl hóa dạng biến đổi phổ biến nhất, dạng khác trình phosphoryl hóa hình thành liên kết disulfide, cần thiết cho khả hoạt động đầy đủ nhiều protein người PTM đóng vai trò quan trọng việc gấp protein, xử lý, ổn định, nhắm mục tiêu mô, hoạt động, phản ứng miễn dịch thời gian bán hủy protein Thiếu chất dẫn đến sản phẩm khơng hịa tan, khơng ổn định không hoạt động − Tuy nhiên, hệ thống glycosyl hóa liên kết N Campylobacter jejuni chuyển thành cơng sang E coli , mở khả sản xuất protein glycosyl hóa Một số vi khuẩn E coli đột biến định phát triển để thúc đẩy hình thành liên kết disulfide (AD494, Origami, Rosetta-gami) với hoạt tính protease giảm (BLZ1) − Sản xuất mức protein tái tổ hợp vi khuẩn dẫn đến khả hòa tan lắng đọng nhiều loại protein dạng tập hợp protein thể bao gồm Sự thay đổi điều kiện tăng trưởng làm cho sản phẩm dạng khơng hịa tan Nhiều protein sinh vật nhân thực tìm thấy thể bao gồm khả chống lại trình xử lý Thành cơng đạt việc tinh chế insulin betaferon từ quan đưa vào thể Việc lấy lại protein cách sử dụng điều kiện biến tính với tái cấu trúc biến tính lúc dễ dàng chứng minh tốn − Với vật chủ E coli , khó thu protein lớn 60 kDa dạng hòa tan − Do hạn chế định việc sản xuất protein E coli , hệ thống vật chủ khác thảo luận để sản xuất protein Glycosyl hóa: + Sự gắn kết cộng hóa trị nhóm carbohydrate với protein để tạo thành glycoprotein gọi q trình glycosyl hóa Trong glycoprotein, protein chiếm phần Những chất đóng vai trị quan trọng trình sinh lý khác thành phần màng tế bào + Các carbohydrate thường gắn vào protein fucose (Fuc), galactose (Gal), N-acetylgalactosamine (GalNAc), glucose (Glc), Nacetylglucosamine (GlcNAc), mannose (Man) axit sialic (Sia) + Các chất đường liên kết thông qua nguyên tử nitơ amide chuỗi bên asparagin (Asn) gọi glycosyl hóa liên kết N với nguyên tử oxy chuỗi bên serine (Ser) threonine (Thr) gọi glycosyl hóa liên kết O + Không phải tất asparagin (Asn) có polypeptit chấp nhận gốc cacbohydrat Các gốc có trình tự Asn-X-Ser Asn-X-Thr, X axit amin ngoại trừ proline, mục tiêu cho q trình glycosyl hóa Khơng trình tự cịn lại mà khía cạnh khác cấu trúc protein loại tế bào xác định vị trí glycosyl hóa + Tất gốc đường liên kết N có lõi chung pentasaccharid Các pentasaccharide bao gồm ba mannose hai gốc N- Man8GlcNAc2, Glycoform Man9GlcNAc2 (Man7 / 8/9) thao tác di truyền glycosyl hóa [4] Bảng 1: Ưu điểm nhược điểm hệ thống biểu protein trị liệu tái tổ hợp Hệ Ưu điểm Nhược điểm thống biểu Vi − khuẩn − − Các dòng tế bào đặc trưng − Hồ sơ glycosyl tốt không người Điều kiện tăng trưởng đơn giản − Các vấn đề xuất và rẻ gấp Quy trình tăng trưởng tối 30kDa) protein lớn hóa (> ưu hóa − Có thể mở rộng − Thích hợp với kỹ thuật di truyền − Khoảng thời gian sản xuất ngắn Côn − − Phê duyệt quy định Mức độ biểu protein cao trùng − Có thể mở rộng người có chứa đường − Khả tạo protein gây miễn dịch phức tạp sinh vật nhân − Các sửa đổi sau giao dịch chuẩn với khả gấp / hịa khơng mong muốn − Khơng glycosyl hóa tan / sửa đổi sau chuyển dịch xác Tế − bào − Phê duyệt quy định Các sửa đổi sau giao dịch − Yêu cầu tăng trưởng động vật − Năng suất cao phức tạp làm tăng chi phí có vú Nhiều sản phẩm tạo tiền − Các tế bào phức tạp cản lệ cho quan quản lý trở kỹ thuật hiểu biết Nghiên cứu tích cực tài trợ − Sản phẩm dị loại − − 14 cho ngành − − Phê duyệt quy định Nguy ô nhiễm mầm bệnh người cao − Dịng không ổn định − Thời gian sản xuất dài − Khả mở rộng quy mơ tối − Khó mở rộng quy mơ Glycosyl hóa khơng phải đa người có chứa − Chi phí tăng trưởng thấp đường gây miễn dịch − Có thể tạo protein phức − -Thiếu chấp thuận tạp quan quản lý Thực vật − − Nguy ô nhiễm mầm bệnh người thấp − Quy trình tăng trưởng tối Động − ưu hóa Khả mở rộng quy mô lớn vật − Các sửa đổi sau giao dịch sức để tạo sinh vật − Thu hoạch dễ dàng chuyển gen − Kỹ thuật canh tác tối ưu − Thời gian sản xuất dài − Dòng tế bào ổn định − Các vấn đề quy định − Chi phí sản xuất thấp − Phê duyệt quy định − Khó tốn nhiều cơng đạo đức − Hệ thống sản xuất protein tái tổ hợp đặc trưng Nấm − men − − Điều kiện tăng trưởng đơn giản − Kiểm soát thấp Khơng glycosyl hóa rẻ người có chứa đường Tăng trưởng nhanh với mật độ gây miễn dịch cao − Các dòng tế bào đặc trưng tốt − Quy trình tăng trưởng tối ưu hóa 15 − Có thể mở rộng − Vừa phải thích ứng với kỹ thuật di truyền − Quy trình gấp xử lý protein − Thời gian sản xuất ngắn − Dòng sản xuất ổn định − Phê duyệt quy định Quy trình ngược dịng Trong q trình phát triển tế bào, việc lựa chọn tế bào chủ vectơ biểu phương pháp chuyển nạp chọn lọc quan trọng để có suất cao chất lượng sản phẩm xác định Quá trình phát triển bắt đầu với việc xác định tế bào biểu protein mong muốn tế bào xác định sử dụng cho quy mơ nhỏ (ống nghiệm, bình lắc) ni cấy lò phản ứng sinh học để đánh giá mức độ tăng trưởng sản xuất protein tế bào Các phương thức nuôi cấy theo lô, theo mẻ liên tục tưới máu sử dụng để sản xuất dược phẩm sinh học dựa protein tái tổ hợp Trong quy trình cho ăn theo mẻ, chất dinh dưỡng cung cấp trình canh tác Trong nuôi cấy truyền dịch, môi trường luân chuyển qua môi trường nuôi cấy phát triển phép đồng thời loại bỏ chất thải cung cấp chất dinh dưỡng Trong môi trường nuôi cấy phản ứng sinh học liên tục chemostat, thức ăn có chứa chất dinh dưỡng thiết yếu đưa vào sản phẩm chứa sản phẩm nuôi cấy thu hồi liên tục Nếu tốc độ pha loãng mong muốn nhỏ tốc độ phát triển tế bào, tăng trưởng cần kiểm sốt cách sử dụng nuôi cấy turbidostat chemostat Tuy nhiên, tốc độ pha loãng nhiều tốc độ phát triển tế bào, tế bào cần đưa trở lại lò phản ứng sinh học Trong nghiên cứu Hou et al (2019) , người ta báo cáo mức độ phosphoryl hóa hydroxyl hóa protein dung hợp Fc giảm 16 thiểu cách tối ưu hóa chất dinh dưỡng quy trình cho ăn theo mẻ CHO Việc áp dụng MTP theo lơ ni để sàng lọc HTP dịng E coli (32 chủng) thiết lập Nuôi cấy theo lô nuôi theo lô theo cấp số nhân thiết kế để đánh giá ảnh hưởng tốc độ tăng trưởng cụ thể (μ) và) dẫn đến q trình glycosyl hóa glycoprotein AcrA tái tổ hợp tốc độ tổng hợp cụ thể tối đa μ) max Một nghiên cứu khác đánh giá phương thức nuôi trồng liên tục theo mẻ protein tái tổ hợp P pastoristiết lộ mức μ) cao hiệu suất thể tích cụ thể chế độ liên tục lớn khoảng 1,5 lần so với chế độ hàng loạt Việc sử dụng công nghệ lò phản ứng sinh học để sản xuất bền vững sản phẩm có nguồn gốc từ tế bào thực vật mô tả nơi khác Để sản xuất mAbs trị liệu cách sử dụng tế bào động vật có vú, phương pháp ni cấy truyền dịch lựa chọn ưu tiên, chế độ làm giảm thời gian cư trú mAbs lị phản ứng sinh học Trong ni cấy truyền dịch, thiết bị lưu giữ tế bào (lọc dòng tiếp tuyến, lọc spin hệ thống lọc dòng tiếp tuyến xen kẽ) quan trọng để thu hồi mơi trường ni cấy có chứa sản phẩm mong muốn từ lò phản ứng sinh học Việc phát triển tối ưu hóa quy trình truyền dịch tập trung vào quy trình truyền dịch, chiến lược cho ăn, thời gian nuôi cấy tốc độ truyền dịch Trong nghiên cứu gần đây, quy trình tưới máu ni cấy tế bào tăng cường mới, thay dẫn đến việc nâng cao suất thể tích gấp lần so với quy trình ni theo lơ tối ưu hóa, sẵn sàng thương mại Trong nghiên cứu khác, hệ thống phản ứng sinh học tưới máu dựa thành phần chất lỏng sử dụng lần phát triển cho phép thực kiểm sốt mơi trường tích cực Trong nghiên cứu Bertrand et al (2019) , tác động nuôi cấy truyền dịch trạng thái sinh lý nội bào dòng tế bào CHO nghiên cứu, cho thấy suất mAb giảm giai đoạn chuyển tiếp chất chuyển hóa chất lượng sản phẩm trước đạt điều kiện trạng thái ổn định Đối với sản xuất vắc xin vi rút cách sử dụng tế bào phụ thuộc vào neo (ví dụ, tế bào Vero), chất mang vi mơ cần thiết lị phản ứng sinh học Các sóng mang vi mơ cung cấp bảo vệ cho tế bào khỏi bị cắt mức 17 Loại lò phản ứng sinh học kiểm sốt quy trình yếu tố quan trọng cần xem xét để tối ưu hóa quy trình thành cơng phát triển quy trình hiệu Các lò phản ứng sinh học sử dụng để sản xuất dược phẩm sinh học bao gồm lò phản ứng sinh học thùng khuấy, lò phản ứng sinh học khơng vận, lị phản ứng sinh học cột bong bóng, lị phản ứng sinh học sợi rỗng lị phản ứng sinh học tầng sôi cố định Lị phản ứng sinh học dạng màng có sẵn thị trường (lò phản ứng sinh học miniPERM Vivascience CELLine Integra Biosciences) sử dụng để sản xuất mAbs quy mô nhỏ Các thông số vận hành khác [nhiệt độ, pH, kích động, sục khí, oxy hịa tan (DO), CO lực cắt thủy động lực học] sử dụng để nuôi cấy lò phản ứng sinh học cần tối ưu hóa để đạt suất nâng cao cho dược phẩm sinh học tái tổ hợp sử dụng hệ thống ký chủ biểu protein khác Việc phát triển thành cơng tối ưu hóa quy trình sinh học tính đến thay đổi nhiệt độ trao đổi khí q trình canh tác Việc tối ưu hóa tất thơng số mơ tả dẫn đến mật độ tế bào cao tăng cường suất thể tích cụ thể với chất lượng sản phẩm tốt Các chiến lược tối ưu hóa quy trình thành cơng dẫn đến việc tăng suất sản phẩm từ 50 mg / l lên 5–20 g / l mAbs Trong nghiên cứu gần đây, người ta xác định thơng khí căng thẳng cắt thơng số q trình quan trọng để sản xuất vi rút sởi oncolytic cách sử dụng tế bào Vero Phát triển quy trình thượng nguồn bao gồm việc mở rộng quy mơ quy trình lên men để đảm bảo sản phẩm có chất lượng tương tự quy mô lớn sản xuất quy mô nhỏ Kiến thức kỹ lưỡng thông số lị phản ứng sinh học quy mơ khác giúp mở rộng quy mô thành công quy trình sản xuất mạnh mẽ Các thơng số quan trọng để mở rộng quy mô, quan trọng phát triển tế bào, khả tồn sản xuất protein hiệu quả, bao gồm trộn, truyền oxy, đặc điểm truyền nhiệt lực cắt Tiêu chí sử dụng phổ biến để mở rộng quy mô giữ cho nhiều tham số giống thang đo khác Các thông số bao 18