KHÁNG THỂ TÁI TỔ HỢP, PHƯƠNG THỨC SẢN XUẤT VÀ ỨNG DỤNG GV hướng dẫn: PGS.TS Trương Quốc Phong THÀNH VIÊN Trần Thị Thảo Anh Lê Hoàng Hưng Nguyễn Xuân Lương Phạm Thị Minh Phương Nguyễn Ngọc Tân Trần Minh Thao Trương Phúc Thịnh 20190306 20190340 20190351 20190373 20190380 20190382 20190386 01 02 GIỚI THIỆU CHUNG ƯU ĐIỂM 03 04 PHƯƠNG THỨC SẢN XUẤT ỨNG DỤNG GIỚI THIỆU CHUNG KHÁI NIỆM Kháng thể tái tổ hợp (Ricombinant Antibodies) loại kháng thể tạo phòng thí nghiệm, sử dụng cơng nghệ ADN tái tổ hợp, tách biệt hồn tồn với kiểm sốt hệ miễn dịch ĐẶC ĐIỂM Các kháng thể tái tổ hợp có định dạng khác nhau, bao gồm: globulin miễn dịch có chiều dài đầy đủ (Ig), đoạn kháng thể đơn hóa trị biến đoạn chuỗi đơn (scFv) liên kết kháng nguyên đoạn (Fab), định dạng đa phân tử thể tiểu đường (dimeric scFv) triabodies (scFvs trimeric) CẤU TRÚC KHÁNG THỂ ● Vùng bám bổ thể ● Hai chuỗi nặng giống ● Hai chuỗi nhẹ giống ● Mỗi chuỗi có vùng biến đổi vùng không biến đổi ● Vùng siêu biến ● Vùng lề ● Khi cắt mảnh Papain tạo ra mảnh: mảnh bám kháng nguyên (Fab) mảnh không biến đổi ● Cầu disulfide ● Carbonhydrate ƯU ĐIỂM 01 Cần lượng kháng nguyên tinh để sản xuất so với mAbs 02 Hạn chế khả đặc hiệu kháng thể đơn dịng 03 Có thể tổng hợp dựa vào kháng nguyên nào, bao gồm: kháng nguyên người có độ bảo tồn cao, tác nhân không gây đáp ứng miễn dịch, kể phân tử độc tố 04 Các thông số liên kết sinh học lựa chọn cho điều kiện liên kết kháng thể kháng nguyên mong muốn 05 Nồng độ phối tử kháng nguyên lắp ráp oligomeric kiểm sốt dễ dàng 06 Những tiến việc tự động hóa quy trình sinh học tạo kháng thể tái tổ hợp làm giảm đáng kể công sức, thời gian chi phí cần thiết 07 Nhờ thư viện kháng thể tái tổ hợp chất kết dính từ trình tạo dịng sinh học đặc trưng dễ dàng thơng qua giải trình tự DNA • Các bước sản xuất kháng thể tái tổ hợp: o Bước 1: Tạo thư viện kháng thể chứa số lượng lớn phage o Bước 2: Kháng nguyên quan tâm cố định bề mặt rắn thư viện kháng thể áp dụng o Bước 3: Các dịng vơ tính đích cụ thể khuếch đại sàng lọc KỸ THUẬT TẠO KHÁNG THỂ TÁI TỔ HỢP TRONG VI KHUẨN ECOLI o Tạo Protein dung hợp: Protein dung hợp (protein lai) mã hóa gen lai dung hợp in vitro hai đoạn gen khác Vì vậy, protein dung hợp mang trình tự amino acid hai protein khác biệt Sự dung hợp gen thực cách gắn phần mã hóa gen tạo dòng gần đầu cuối 3’ gen vi khuẩn (ví dụ: gen lacZ) Protein dung hợp Bao gồm gen tạo dòng (gen A) gen khác vi khuẩn (gen B), protein dung hợp có chứa phần protein vi khuẩn SD: đoạn Shine-Dalgarno o Các hệ thống vector biểu gen dung hợp với gen lacZ 01 Một số hệ thống vector phát triển để biểu gen dung hợp với gen lacZ 02 Một hệ thống vector tương tự khác phát triển để sản xuất protein dung hợp o Xây dựng plasmid biểu phát protein dung hợp Gắn plasmid vector (pUR pEX) thích hợp với đoạn DNA ngoại lai để tạo dung hợp khung đọc Biến nạp vector vào E.coli (chủng K12 71/18 JM 103 cho vector pUR, chủng M5219 cho vector pEX) o Tách chiết protein dung hợp để sản xuất kháng thể Protein dung hợp tách chiết theo số cách: dùng dịch chiết urea, sắc ký lực aminophenyl thiogalactoside, điện di SDS polyacrylamide gel phối hợp cách Nhuộm gel phát băng protein mới, sau cắt băng khỏi gel, đơng khơ khoảng ngày nghiền thành bột mịn Bột dùng tiêm vào thỏ để sản xuất kháng thể