Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đoán bệnh Hemophilia A trước làm tổ.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN MINH TÂM NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH DI TRUYỀN HEMOPHILIA A TRƯỚC LÀM TỔ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN MINH TÂM NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH DI TRUYỀN HEMOPHILIA A TRƯỚC LÀM TỔ Ngành: Khoa học Y sinh Mã số: 72 01 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Nguyễn Duy Bắc TS Nguyễn Thanh Tùng HÀ NỘI - 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu đề tài luận án toàn số liệu đề tài nghiên cứu có tên “Ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR phân tích trình tự lặp ngắn chẩn đốn bệnh Hemophilia A trước chuyển phơi Hà Nội” Mã số 01C-08/11-2017-3, Sở KH CN thành phố Hà Nội Kết đề tài thành nghiên cứu tập thể mà thành viên Tơi Chủ nhiệm đề tài tồn thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng đề tài vào luận án để bảo vệ lấy tiến sỹ Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nguyễn Minh Tâm LỜI CẢM ƠN Tơi hồn thành luận án với nỗ lực cố gắng thân Trong trình học tập nghiên cứu, nhận giúp đỡ động viên thầy, cô, đồng nghiệp người thân Tôi xin chân thành cảm ơn: Đảng ủy, Ban giám đốc Học viện Quân y, Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương, Bệnh viện Nam học muộn Hà Nội, Phòng sau Đại học - Học viện Quân y, Bộ môn Giải phẫu - Học viện Quân Y cho phép, tạo điều kiện giúp đỡ q trình học tập hồn thành luận án Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: GS.TS Nguyễn Duy Bắc - Trưởng phòng đào tạo, Học viện Quân Y TS Nguyễn Thanh Tùng - Phó giám đốc viện Mơ phơi lâm sàng Quân đội người Thầy tận tình, hết lịng học trị, trực tiếp hướng dẫn, bảo, cung cấp cho kiến thức phương pháp luận quý báu suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Trần Ngọc Anh - chủ nhiệm Bộ mơn, TS Đặng Tiến Trường - phó Chủ nhiệm Bộ môn thầy cô Bộ môn Giải phẫu Học viện Quân Y giúp đỡ q trình học tập nghiên cứu Tơi xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Thị Mai - Giám đốc Trung tâm Hemophilia - Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương, ThS Lê Thị Thu Hiền - Giám đốc Bệnh viện nam học muộn Hà Nội đồng nghiệp giúp đỡ tơi q trình thu thập số liệu nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cô Hội đồng Chấm luận án đóng góp nhiều ý kiến quý báu giúp tơi hồn thành luận án Cuối tơi xin gửi lịng biết ơn tới gia đình, bạn bè, đồng nghiệp bên cạnh, động viên, chia sẻ khó khăn để tơi n tâm học tập hoàn thành luận án! Nghiên cứu sinh Nguyễn Minh Tâm MỤC LỤCC LỤC LỤCC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀT VẤN ĐỀN ĐỀ CHƯƠNG 1:NG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆUNG QUAN TÀI LIỆUU 1.1 Bệnh Hemophilia Anh Hemophilia A 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh Hemophilia A 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh, chẩn đoán, nguyên tắc điều trị bệnh Hemophilia A 1.1.3 Di truyền tỷ lệ mắc bệnh Hemophilia A .7 1.1.4 Bệnh học phân tử bệnh Hemophilia A 1.2 Quy trình thụ tinh ống nghiệm tinh ống nghiệmng nghiệnh Hemophilia Am 13 1.2.1 Kích thích buồng trứng 13 1.2.2 Chọc hút noãn .14 1.2.3 Kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm cổ điển tiêm tinh trùng vào bào tương noãn 15 1.2.4 Sinh thiết phôi .16 1.2.5 Đông lạnh rã đông phôi .18 1.2.6 Chuyển phôi 19 1.3 Một số kỹ thuật di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổt sống nghiệm kỹ thuật di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổt di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổn sử dụng chẩn đoán trước làm tổ dụ tinh ống nghiệmng chẩn đoán trước làm tổn đoán trước làm tổc làm tổ bệnh Hemophilia Anh Hemophilia A 20 1.3.1 Lựa chọn phơi có nhiễm sắc thể giới tính XX .20 1.3.2 Kỹ thuật chẩn đoán trực tiếp đột biến gen F8 21 1.3.3 Kỹ thuật chẩn đoán gián tiếp thơng qua phân tích liên kết gen F8 25 1.4 Tình hình chẩn đốn trước làm tổn đốn di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổn trước làm tổc làm tổ bệnh Hemophilia Anh Hemophilia A giới Việt Nam giớc làm tổi Việnh Hemophilia At Nam 31 1.4.1 Trên giới 31 1.4.2 Tại Việt Nam 33 CHƯƠNG 1:NG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUNG VÀ PHƯƠNG 1:NG PHÁP NGHIÊN CỨUU 35 2.1 Đống nghiệmi tượng, địa điểm, thời gian nghiên cứung, địa điểm, thời gian nghiên cứua điểm, thời gian nghiên cứum, thời gian nghiên cứui gian nghiên cứuu 35 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .35 2.1.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 35 2.2 Phương pháp nghiên cứung pháp nghiên cứuu 36 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .36 2.2.2 Phương pháp chọn mẫu cách tính cỡ mẫu 36 2.2.3 Phương tiện vật liệu nghiên cứu 37 2.2.4 Các kỹ thuật sử dụng 38 2.3 Các tiêu nghiên cứu tiêu nghiên cứuu 55 2.4 Xử dụng chẩn đoán trước làm tổ lý sống nghiệm liệnh Hemophilia Au 58 2.5 Sơng pháp nghiên cứu đồ nghiên cứu nghiên cứuu 59 2.6 Đạo đức nghiên cứuo đứuc nghiên cứuu 60 CHƯƠNG 1:NG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨUT QUẢ NGHIÊN CỨU NGHIÊN CỨUU 61 3.1 Đánh giá tính đa hình thị STR liên kết với gen F8 phục vụa bột số kỹ thuật di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổ tiêu nghiên cứu thịa điểm, thời gian nghiên cứu STR liên kế giới Việt Namt vớc làm tổi gen F8 phụ tinh ống nghiệmc v ụ tinh ống nghiệm chẩn đoán trước làm tổn đoán trước làm tổc làm tổ mẫu phôi bào phụ nữ mang gen bệnhu phôi bào phụ nữ mang gen bệnh phụ tinh ống nghiệm nữ mang gen bệnh mang gen bệnh Hemophilia Anh Hemophilia A 61 3.1.1 Kết STR lựa chọn công cụ Tin sinh học 61 3.1.2 Kết tối ưu hóa quy trình multiplex PCR khuếch đại STR mẫu máu 62 3.1.3 Chỉ số dị hợp tử STR 68 3.1.4 Chuẩn hóa quy trình PGT - M mẫu tế bào phôi 73 3.2 Đánh giá kế giới Việt Namt chẩn đoán trước làm tổ bệnh Hemophilia A cho chẩn đoán trước làm tổn đoán trước làm tổc làm tổ bệnh Hemophilia Anh Hemophilia A cho số kỹ thuật di truyền sử dụng chẩn đoán trước làm tổt sống nghiệm cặp vợ chồng mang gen bệnhp vợng, địa điểm, thời gian nghiên cứu chồ nghiên cứung mang gen bệnh Hemophilia Anh 77 3.2.1 Một số đặc điểm gia đình tham gia nghiên cứu 77 3.2.2 Kết điều trị IVF/ICSI 79 3.2.3 Kết chẩn đoán trước làm tổ cho gia đình mang gen bệnh .81 CHƯƠNG 1:NG 4: BÀN LUẬNN 90 4.1 Đánh giá tính đa hình thị STR liên kết với gen F8 phục vụ chẩn đoán trước làm tổ mẫu phôi bào phụ nữ mang gen bệnh Hemophilia A .90 4.1.1 Lựa chọn marker công cụ tin Sinh học ngân hàng gen 90 4.1.2 Kết tối ưu hóa quy trình multiplex PCR khuếch đại STR mẫu máu 93 4.1.3 Chỉ số dị hợp tử STR 95 4.1.4 Chuẩn hóa quy trình PGT - M mẫu tế bào phôi 97 4.2 Đánh giá kết chẩn đoán trước làm tổ bệnh Hemophilia A cho số cặp vợ chồng mang gen bệnh .102 4.2.1 Một số đặc điểm gia đình tham gia nghiên cứu 102 4.2.2 Kết điều trị IVF/ICSI .105 4.2.3 Kết chẩn đoán trước làm tổ gia đình mang gen bệnh 108 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨUT LUẬNN 115 KIẾT QUẢ NGHIÊN CỨUN NGHỊ 117 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊNC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊNC CÔNG BỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ NGHIÊN CỨUT QUẢ NGHIÊN CỨU NGHIÊN CỨUU CỦA LUẬN ÁNA LUẬNN ÁN TÀI LIỆUU THAM KHẢ NGHIÊN CỨUO PHỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN LỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊNC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Phần viết tắt ADO AF AFC AMH : : : : ASRM : DNA DOP PCR ESHRE : FISH : 10 FSH : 11 hCG 12 13 Ho He 13 hMG 14 ICSI 15 IVF 16 LH xuất từ nước tiểu thai phụ) : Observed Heterozygosity (tần số dị hợp tử quan sát) : Expected Heterozygosity (tần số dị hợp tử lý thuyết) Human Menopausal Gonadotropin (Gonadotropin : chiết xuất từ nước tiểu phụ nữ mãn kinh) Intracytoplasmic Sperm Injection (tiêm tinh trùng : vào bào tương noãn) : In vitro fertilization (thụ tinh ống nghiệm) : Luteinizing Hormone 17 MDA : 18 19 Multiplex PCR NST : Phần viết đầy đủ Allele dropout (mất alen) Amplification failure (khuếch đại thất bại) Antral Follicle Count (số lượng nang thứ cấp) Anti Mullerian Hormone American Society for Reproductive Medicine (Hiệp hội y học sinh sản Hoa Kỳ) Deoxyribonucleic acid : Degenerate Oligonucleotide Primed PCR (PCR mồi thối hóa) European Society for Human Reproduction and Embryology (Hiệp hội phôi sinh sản người Châu Âu) Fluorescence in situ hybridization (kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ) Follicle Stimulating Hormone (hormone kích thích nang trứng) : Human Chorionic Gonadotropin (Gonadotropin chiết Multiple Displacement Amplification (khuếch đại thay đa điểm) : Multiplex PCR (PCR đa mồi) : Nhiễm sắc thể TT Phần viết tắt 20 PCR : 21 PGD : 22 PGDIS 23 PGT 24 PGT-A Phần viết đầy đủ Polymerase Chain Reaction (phản ứng chuỗi polymerase) Preimplantation Genetic Diagnosis (chẩn đoán di truyền trước chuyển phôi) : PGD International Society (hiệp hội Quốc tế PGD) Preimplantation Genetic Testing (xét nghiệm di : truyền trước chuyển phôi) Preimplantation genetic testing for aneuploidy (xét : nghiệm di truyền phát bất thường lệch bội nhiễm sắc thể) Preimplantation genetic testing for monogenic 25 PGT-M 26 RNA 27 SNP 28 29 STR Single PCR 30 WGA : disorders (xét nghiệm di truyền trước chuyển phôi cho bệnh di truyền đơn gen) : Ribonucleic acid Single nucleotide polymorphism (đa hình đơn : nucleotide) : Short Tandem Repeat (trình tự lặp ngắn) : Single PCR (PCR đơn mồi) Whole Genome Amplification (khuếch đại toàn : hệ gen)