LOGO Viện Nghiên Cứu Nuôi Trồng Thủy Sản I Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội BÁO CÁO THỰC TẬP NGHỀ NGHIỆP Nội dung Tổng quan tôm chân trắng Kiểm tra độ bệnh virus YHV1/GAV Kiểm tra độ bệnh virus WSSV Một số kỹ thuật khác LOGO Tổng quan tôm chân trắng Giới (regnum) Animalia Ngành (phylum) Arthropoda Lớp (class) Malacostraca Họ (familia) Penaeidae Chi (genus) Litopenaeus Loài (species) Litopenaeus vannamei LOGO Tổng quan tôm chân trắng      Độ mặn: 0,5-45‰ Nhiệt độ: 23-300C Nhu cầu đạm: 20 - 35% Tốc độ sinh trưởng: 3g/tuần Bệnh virus: 30 loài virus gây bệnh WSSV, YHV, TSV… LOGO Kiểm tra độ bệnh virus YHV1/GAV Thu mẫu PCR Tách chiết RNA Tạo cDNA Điện di LOGO YHV1/GAV geneome RT (cDNA synthesis) GAV G6 GY2 YHV1 Y3 GY2 PCR 406bps PCR 277bps LOGO Kiểm tra độ bệnh virus YHV1/GAV  Thu mẫu: Lấy mẫu mắt, chân bò, chân bơi phần mang Cố định cồn 95 độ  Tách chiết RNA: + R1RNAPREP : Guanidine, Urea, Phenol, chất tẩy + R2RNAPREP : Chloroform + R3RNAPREP : Isopropanol + R4RNAPREP : Ethanol 75% v/v + R5RNAPREP : Nước tinh xử lý DEPC LOGO Tổng hợp cDNA RNA 25oC RNAse H 42oC RNAse H 42oC RNAse H 85oC cDNA cDNA cDNA LOGO Kiểm tra độ bệnh virus YHV1/GAV  Chu trình PCR  Điện di : sử dụng đệm TBE 0,5X gel agarose 2% U = 125V, thời gian 30 phút Nhiệt độ (oC) Thời gian Số chu kỳ 40 oC 10’ 95 oC 3’ 94 oC 30’’ 66oC 30’’ 72 oC 45’’ 94 oC 30’’ 56 oC 30’’ 72 oC 45’’ 35 LOGO Kết điện di kiểm tra đàn tôm post ngày 9/8/2012 Deca YHV1/GAV 277 bps (+) (-) Leader 406 bps 10 LOGO Kiểm tra độ bệnh virus WSSV Tách chiết DNA PCR Điện di 11 LOGO Kiểm tra độ bệnh virus WSSV Chạy PCR máy theo chu trình sau: + 950C phút + 940C 30 giây + 500C 30 giây 40 chu kỳ + 720C 20 giây + 720C phút + 40C hold 12 LOGO Kiểm tra độ bệnh virus WSSV Điện di sản phẩm PCR gel agarose 1.5% đệm TAE 0,5X Chạy điện di 80V, 400mA 30 phút (+) Leader (-) 13 LOGO Các kỹ thuật khác Đo kích thước nhân tế bào máu cá  Lấy máu cá cách dùng bơm kim tiêm hút máu cuối vây đuôi dọc đường bên  Dàn máu lam kính  Để khơ khoảng phút sau nhuộm Giemsa 60 phút  Đem rửa thuốc nhuộm nước để khô  Soi kính hiển vi độ phóng đại 100, đo kích thước nhân tế bào hồng (chiều dài chiều rộng) cầu chụp ảnh 14 LOGO Các kỹ thuật khác Xác định giới tính ngao Tách bỏ vỏ  Dùng dao mổ rạch đường tuyến sinh dục cá thể  Dùng đầu dao lấy tuyến sinh dục cá thể di lên lam kính, nhỏ giọt nước, di Nếu thấy hạt liti, Nếu hịa tan vào nước thành màu trắng đục, đực 15 LOGO Xin chân thành cảm ơn lắng nghe quý Thầy Cô Các Bạn ! 16 LOGO