HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “XÂY DỰNG QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG CÂY LAN HUỆ (Hippeastrum sp.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY LÁT MỎNG TẾ BÀO” Sinh viên thực : Nguyễn Thị Yến MSV : 637194 Lớp : K63CNSHB Giảng viên hướng dẫn : PGS.TS.Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI – 03/2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan khóa luận tốt nghiệp “Xây dựng quy trình vi nhân giống Lan Huệ phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào” kết trình nghiên cứu thân hướng dẫn PGS.TS.Nguyễn Thanh Hải Các số liệu nghiên cứu trung thực, không chép kết khóa luận trước Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng 03 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Yến i LỜI CẢM ƠN Khóa luận tốt nghiệp “Xây dựng quy trình nhân giống Lan Huệ phương pháp ni cấy lát mỏng tế bào” cột mốc quan trọng tháng năm sinh viên Để bắt đầu thực hồn thành khóa luận, nhận nhiều giúp đỡ Trước hết, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám đốc Học viện, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học tồn thể thầy giáo tận tình dạy bảo, truyền đạt kiến thức quan trọng quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu thực đề tài Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS.Nguyễn Thanh Hải dành nhiều thời gian, công sức để trực tiếp hướng dẫn chia sẻ kinh nghiệm để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến gia đình, người thân người bạn ln sát cánh, động viên, ủng hộ tơi q trình thực đề tài Trong q trình nghiên cứu khơng tránh khỏi thiếu sót hạn chế, kính mong nhận góp ý q thầy (cơ) để đề tài hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng 03 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Yến ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC VIẾT TẮT vii TÓM TẮT viii I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung Lan Huệ 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Hệ thống phân loại thực vật 2.1.3 Đặc điểm thực vật Lan Huệ 2.1.4 Điều kiện ngoại cảnh 2.1.5 Một số nghiên cứu nhân giống vơ tính Lan Huệ 2.2 Khái quát vi nhân giống 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô 2.2.3 Các bước nhân giống in vitro 2.2.4 Các nghiên cứu nuôi cấy mô Lan Huệ 10 2.2.5 Kỹ thuật nuôi cấy lát mỏng tế bào 13 III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Đối tượng, địa điểm, vật liệu phương pháp nghiên cứu 18 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 18 iii 3.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 3.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Nội dung nghiên cứu 18 3.2.2 Các phương pháp nghiên cứu 20 3.3 Các tiêu theo dõi 21 IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Nội dung 1: Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu 22 4.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nồng độ presept tới hiệu khử trùng mẫu củ Lan Huệ 22 4.1.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng thời gian khử trùng tới hiệu khử trùng củ Lan Huệ 23 4.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan huệ 24 4.2.1 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ 25 4.2.2 Thí nghiệm Ảnh hưởng BAP đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ lan huệ 28 4.2.3 Ảnh hưởng TDZ đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ lan huệ 31 4.3 Nội dung 3: Nghiên cứu tạo hoàn chỉnh 34 4.3.1 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng IBA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hồn chỉnh 34 4.3.2 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng α- NAA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh 35 4.3.3 Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng than hoạt tính tới q trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh 37 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 5.1 Kết luân 39 5.2 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng nồng độ presept tới hiệu khử trùng mẫu củ Lan Huệ sau tuần theo dõi 22 Bảng 4.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng tới hiệu khử trùng Lan Huệ 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ sau tuần 25 Bảng 4.4 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ sau tuần 29 Bảng 4.5 Ảnh hưởng TDZ đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ sau tuần 31 Bảng 4.6 Ảnh hưởng IBA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh sau tuần 34 Bảng 4.7 Ảnh hưởng α- NAA tới q trình tạo Lan Huệ in vitro hồn chỉnh sau tuần 35 Hình 4.6 Cây Lan Huệ hồn chỉnh sau tuần mơi trường bổ sung αNAA 36 Bảng 4.8 Ảnh hưởng than hoạt tính tới q trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh sau tuần 37 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 4.1 Mẫu lan huệ in vitro phát triển tốt chuẩn bị cho nghiệm 24 Hình 4.2 Hình ảnh mẫu lát mỏng tế bào Lan Huệ bổ sung 2,4 D sau tuần 27 Hình 4.3 Hình ảnh mẫu ni cấy lát mỏng tế bào bổ sung BAP sau tuần 30 Hình 4.4 Hình ảnh mẫu ni cấy lát mỏng tế bào bổ sung TDZ sau tuần 33 Hình 4.5 Cây Lan Huệ hồn chỉnh sau tuần môi trường bổ sung IBA 35 Hình 4.7 Cây Lan Huệ hồn chỉnh sau tuần môi trường bổ sung than hoạt tính 38 vi DANH MỤC VIẾT TẮT BAP : Benzyl-amino-purine CT : Công thức CV (%) : Sai số thí ngiệm ĐC : Đối chứng MS : Môi trường Murashige and Sknoog α- NAA : α-naphtalene acetic acid IBA : Indole-3 butyric acid TDZ : Thidiaruzon NL : Nhắc lại TN : Thí nghiệm vii TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu “Xây dựng quy trình vi nhân giống Lan Huệ (Hippeastrum sp.) phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào” với mục đích bước đầu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro Lan Huệ, sử dụng phương pháp nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào thực vật để tiến hành Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên, tối thiểu 30 mẫu/cơng thức, tiêu quan sát đo đếm hàng tuần Sau trình nghiên cứu thu kết sau: Nồng độ chất khử trùng Presept tốt cho bước khử trùng mẫu 0,75% Bên cạnh đó, thời gian khử trùng tốt 15 phút Môi trường MS bổ sung TDZ với nồng độ 1,5 mg/l có tác động tốt đến khả nhân nhanh chồi Môi trường bổ sung than hoạt tính với nồng độ mg/l môi trường tối ưu cho việc rễ viii I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây hoa Lan huệ (Hippeastrum sp.) có nguồn gốc từ Nam Mỹ nên có khả thích ứng với nhiều vùng sinh thái Việt Nam (Nguyễn Thị Đỏ, 2007; Phạm Hoàng Hộ, 2000) Kết nghiên cứu Phạm Thị Minh Phượng cộng (2014), Trịnh Thị Mai Dung cộng (2015) cho thấy chủng loại giống Lan huệ phổ biến trồng làm cảnh tỉnh/thành phố nước 11 loại với nhiều màu sắc, hình dáng khác thuộc nhóm hoa cánh đơn Những năm gần đây, hoa Lan huệ nhận nhiều quan tâm người chơi hoa nhà nghiên cứu nước Màu sắc, hình dạng chủng loại Lan huệ thị trường ngày đa dạng, nhiên nguồn cung cấp giống hạn chế, giá giống ngoại nhập cao nên thị trường hoa Lan huệ chưa phát triển mong đợi chưa đáp ứng nhu cầu người chơi hoa Để làm phong phú tập đoàn Lan huệ Việt Nam, số nghiên cứu lai tạo giống công bố kết nghiên cứu Phạm Thị Minh Phượng cộng (2014), Nguyễn Hạnh Hoa cộng (2014), Phạm Thị Minh Phượng (2016) Tuy nhiên, nghiên cứu chủ yếu tạo dòng lai Lan huệ cánh đơn (hoa cánh) đó, thị trường dạng hoa bán kép cánh kép với số cánh >6 người chơi hoa ưa chuộng, giá bán củ giống hoa Lan huệ cánh kép thường cao so với giống hoa cánh đơn Trên giới, Lan huệ cánh kép thương mại hóa từ đầu năm 1990 Đến đầu kỷ XXI có khoảng 30 giống Lan huệ cánh kép thương mại số quốc gia Úc, Hà Lan, Nhật Bản, Mỹ Nam Mỹ (Read, 2005) Xu hướng lai tạo hoa Lan huệ cánh kép khu vực khác Tại Hà Lan Úc, hoa cánh kép lai tạo có kích thước hoa lớn, ngồng hoa cao, cánh hoa dày Nhật Bản hoa thường nhỏ thấp (Read, 2005) Gần đây, Ming-Chung Liu Der-Ming Yeh (2015) tạo giống hoa Lan huệ cánh kép có hương thơm đặt tên “T.S.S No.1- Pink Pearl” 4.2.3 Ảnh hưởng TDZ đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ lan huệ Bảng 4.5 Ảnh hưởng TDZ đến phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ sau tuần Nồng độ TDZ (mg/l) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2.5 Tỷ lệ phát sinh chồi (%) 0,00 36,67 43,33 86,67 73,33 56,67 Số chồi Tỷ lệ phát trung sinh callus Cơng thức bình/mẫu (%) CT1 (ĐC) 0,00 0,00 CT2 4,86 6,67 CT3 6,57 23,33 CT4 8,39 30,00 CT5 7,17 30,00 CT6 6,25 36,67 CV% 3,5 LSD 0.05 0,76 Môi trường nền: MS +30g/L đường + 6g/L agar, pH 5.8 Chất lượng callus + ++ +++ +++ ++ Chỉ tiêu chất lượng callus: + Callus tối màu, phát triển ++ Callus xốp, phát triển bình thường +++ Callus xốp, trắng, phát triển tốt, bắt đầu có phát sinh hình thái Kết từ bảng 4.5 cho thấy, TDZ có tác động tốt tới phát sinh hình thái lát mỏng đế củ Lan Huệ Trong đó, nồng độ TDZ bổ sung 1,5mg/l công thức cho kết tốt với tỷ lệ phát sinh chồi cao đạt 86,67%, với số chồi trung bình mẫu cấy lớn 8,39 chồi/mẫu Đồng thời, công thức khác thu kết tốt so với việc sử dụng 2,4-D BAP phát sinh hình thái chồi, số lượng chồi phát sinh mẫu cấy Cụ thể, công thức tỷ lệ phát sinh chồi đạt 36,67%; số chồi mẫu 4,86 chồi; công thức tỷ lệ phát sinh chồi 43,33% với số chồi trung bình mẫu 6,57; công thức tiêu đạt 73,33%; 7,17 chồi/mẫu 56,67%; 6,25 chồi/ mẫu Về tiêu phát sinh callus, thấy việc sử TDZ có tỷ lệ phát sinh callus không cao sử dụng 2,4-D BAP, cao đạt 36,67% bổ sung 2,5mg/l TDZ công thức Tuy nhiên, 31 chất lượng callus thu sử dụng TDZ tốt so với việc sử dụng 2,4D BAP với callus phát triển tốt, xốp trắng; bắt đầu có phát sinh hình thái chồi số mẫu Từ kết thí nghiệm 3, thí nghiệm thí nghiệm 5; ta đánh giá TDZ chất điều tiết sinh trưởng phù hợp nuôi cấy lát mỏng đế củ Lan Huệ Nồng độ TDZ bổ sung tối ưu 1,5mg/l để thu tỷ lệ tái sinh chồi cao 86,67% số chồi phát sinh mẫu cao đạt 8,39 chồi mẫu Khi so sánh kết với nghiên cứu Ninh Thị Thảo cộng năm 2010 Lan Huệ Mạng Heppeastrum Reticulatum Herb.var Striatiforlium sử dụng môi trường bổ sung 5mg/l BAP nhân nhanh đạt 7,17 chồi/mẫu Ta thấy kết có phần khả quan Đồng thời, với cách nhân giống sử dụng lát mỏng đế củ-mỗi đế củ thu tới lát mỏngnày ta trì củ mẹ để tiếp tục nhân giống, nghiên cứu Ninh Thị Thảo cộng nhân giống bổ củ thành miếng nhỏ khơng trì củ mẹ nhiều thời gian để tiếp tục nhân Những kết thu này, cho thấy tiềm ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy lát mỏng để nâng cao hiệu vi nhân giống đối tượng Lan Huệ Cây thu từ thí nghiệm 4, chuyển qua môi trường MS bổ sung 1mg/l BAP + 30g/l đường + 6g/l agar để tiếp tục phát triển có đồng mẫu, làm vật liệu cho thí nghiệm 6, để nghiên cứu tạo hoàn chỉnh đối tượng 32 CT1: CT2: 0,5 mg/l CT3: mg/l CT4: 1,5 mg/l CT5: mg/l CT6: 2,5 mg/l Hình 4.4 Hình ảnh mẫu ni cấy lát mỏng tế bào bổ sung TDZ sau tuần 33 4.3 Nội dung 3: Nghiên cứu tạo hồn chỉnh 4.3.1 Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng IBA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh IBA loại auxin sử dụng phổ biến giai đoạn tạo hồn chỉnh vi nhân giống Thí nghiệm sử dụng IBA để đánh giá hiệu chất tới giai đoạn tạo hoàn chỉnh Lan Huệ Kết trình bày bảng 4.6 Bảng 4.6 Ảnh hưởng IBA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh sau tuần Số rễ trung bình CT1 (ĐC) 0,83 CT2 2,67 CT3 2,87 CT4 3,43 CT5 3,80 CT6 4,37 CV% 6,6 LSD 0.05 0,5 Môi trường nền: MS +30g/L đường + 6g/L agar, pH 5.8 Công thức Nồng độ IBA (mg/l) 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Tỷ lệ rễ (%) 53,33 86,67 100,00 100,00 100,00 100,00 Chiều dài rễ (cm) 0,21 0,40 0,55 0,96 1,61 1,40 7,8 0,03 Nồng độ IBA sử dụng thí nghiệm từ 0,2 mg/l đến mg/l cho hiệu rễ Lan Huệ tốt Từ nồng độ IBA 0,4 mg/l tỷ lệ rễ sau tuần đạt 100% Nồng độ IBA bổ sung tăng lên làm tăng số lượng rễ chiều dài rễ trung bình Lan Huệ in vitro Tương ứng với nồng độ 0,2 mg/l; 0,4mg/l; 0,6 mg/l; 0,8 mg/l mg/l tiêu số rễ trung bình đạt: 2,67 rễ; 2,87 rễ; 3,43 rễ; 3,80 rễ 4,37 rễ Trong tiêu chiều dài rễ đạt tương ứng: 0,4cm; 0,55cm; 0,96cm; 1,61cm 1,40cm Các kết tốt so với đối chứng đạt tỷ lệ rễ 53,33%; số lượng rễ trung bình 0,83 rễ với chiều dài đạt 0,21 cm Điều cho thấy IBA có tác dụng tốt đến việc hình thành rễ lan huệ Tuy nhiên, rễ Lan huệ sử dụng IBA cịn ngắn mảnh Vì vậy, cần đánh giá thêm để xác định cơng thức hiệu để tạo Lan Huệ hoàn chỉnh 34 Hình 4.5 Cây Lan Huệ hồn chỉnh sau tuần mơi trường bổ sung IBA 4.3.2 Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng α- NAA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh Bảng 4.7 Ảnh hưởng α- NAA tới trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh sau tuần CT1( ĐC) Nồng độ α- NAA (mg/l) 0,0 Tỷ lệ rễ (%) 53,33 Số rễ trung bình 1,47 Chiều dài rễ (cm) 0,20 CT2 0,2 100% 3,00 0,67 CT3 0,4 100% 3,30 1,41 CT4 0,6 100% 3,83 1,82 CT5 0,8 100% 4,30 2,29 CT6 1,0 100% 4,83 2,51 CV% 6,1 4,3 LSD 0.05 0,51 0,09 Công thức 35 Môi trường nền: MS +30g/L đường + 6g/L agar, pH 5.8 Kết bảng 4.6, cho thấy α- NAA hiệu để tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh Với tất cơng thức có bổ sung α- NAA, tỷ lệ rễ Lan Huệ 100% Khi tăng nồng độ α- NAA tiêu số rễ chiều dài rễ tăng Kết tốt thu công thức bổ sung α- NAA nồng độ 1mg/l với số rễ trung bình đạt 4,83 rễ, chiều dài rễ trung bình 2,51cm Tuy nhiên, rễ công thức bị xốp, giòn khiến rễ dễ bị dập gãy đưa vườn ươm Vì vậy, cần thêm thử nghiệm để rễ phát triển tốt giúp cho việc đưa vườn ươm đạt tỷ lệ sống tốt Thí nghiệm bố trí bổ sung thê than hoạt tính vào mơi trường rễ để hướng đến điều Hình 4.6 Cây Lan Huệ hồn chỉnh sau tuần môi trường bổ sung α- NAA 36 4.3.3 Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng than hoạt tính tới q trình tạo Lan Huệ in vitro hoàn chỉnh Bảng 4.8 Ảnh hưởng than hoạt tính tới q trình tạo Lan Huệ in vitro hồn chỉnh sau tuần Cơng thức Than hoạt tính Tỷ lệ rễ Số rễ trung Chiều dài (g/l) (%) bình rễ (cm) CT1 (ĐC) 0,0 100% 2,30 1,04 CT2 0,3 100% 2,60 1,63 CT3 0,5 100% 4,70 2,61 CT4 1,0 100% 5,43 2,93 CV% 3,8 4,4 LSD 0.05 0,59 0,15 Môi trường nền: MS +30g/L đường + 6g/L agar, pH 5.8 Lan Huệ loại tiết nhiều phenol Than hoạt tính có khả hấp phụ tốt, đồng thời tạo cản phần ánh sáng vào mơi trường ni cấy, góp phần giúp rễ phát triển tốt Kết thí nghiệm trình bày bảng 4.7 cho thấy rễ lan huệ phát triển tốt Với tất cơng thức có bổ sung than hoạt tính , tỷ lệ rễ Lan Huệ 100% Khi tăng than hoạt tính tiêu số rễ chiều dài rễ tăng Kết tốt thu cơng thức bổ sung than hoạt tính nồng độ 1mg/l với số rễ trung bình đạt 5,43 rễ, chiều dài rễ trung bình 2,93cm 37 Hình 4.7 Cây Lan Huệ hoàn chỉnh sau tuần mơi trường bổ sung than hoạt tính 38 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luân Từ kết nghiên cứu thí nghiệm tiến hành, rút kết luận sau:  Nồng độ Preset khử trùng tốt cho củ lan huệ 0.75%  Thời gian khử trùng tốt 15 phút  Môi trường bổ sung chất điều tiết sinh trưởng 2,4 D cho chất lượng callus tốt thí nghiệm cơng thức với nồng độ 2,4-D 1,5mg/l cho tỷ lệ phát sinh callus 74,33%  Môi trường bổ sung chất điều tiết sinh trưởng BAP nồng độ mg/l cho tỷ lệ tỷ lệ phát sinh chồi cao 83,33%, số chồi trung bình 5,36 mẫu, tỷ lệ phát sinh callus 43,33%  Môi trường bổ sung chất điều tiết sinh trưởng TDZ chất điều tiết sinh trưởng phù hợp nuôi cấy lát mỏng đế củ Lan Huệ Nồng độ TDZ bổ sung tối ưu 1,5mg/l để thu tỷ lệ tái sinh chồi cao 86,67% số chồi phát sinh mẫu cao đạt 8,39 chồi mẫu  Bên cạnh đó, mơi trường bổ sung NAA nồng độ 1,0 mg/l cho ta số rễ trùng bình/ mẫu 4,37 rễ với chiều dài trung bình rễ 1,40 cm  Mơi trường bổ sung α- NAA có tác dụng tốt đến việc hình thành rễ lan huệ với nồng độ 1mg/l IBA thu số rễ trung bình đạt 4,83 rễ, chiều dài rễ trung bình 2,51cm  Mơi trường bổ sung than hoạt tính kết tốt thu cơng thức nồng độ 1mg/l với số rễ trung bình đạt 5,43 rễ, chiều dài rễ trung bình 2,93cm 5.2 Kiến nghị  Nghiên cứu thêm chất điều tiết sinh trường phù hợp với trình nhân nhanh chồi, tái sinh rễ Lan Huệ  Nghiên cứu hồn thiện nhân nhanh quy trình nhân nhanh in vitro Lan Huệ phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Nguyễn Thị Lý Anh, Đinh Thị Phòng (2007), Công nghệ nuôi cấy mô, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Như Khanh (2002), Sinh học phát triển thực vật, NXB Gi|o Dục Hà Nội Phượng, P T M., & Liết, V V CHỌN TẠO GIỐNG HOA LAN HUỆ (Hippeastrum sp.) CÁNH KÉP THÍCH NGHI TRONG ĐIỀU KIỆN MIỀN BẮC VIỆT NAM Trọng, P Đ., Hoa, N H., & Miện, P T C (2014) NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO J Sci, 12(3), 392403 Thảo, N T (2010) Nghiên cứu quy trình nhân nhanh In Vitro lan huệ mạng Hippeastrum reticulatum Herb var striatifolium Herb Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2002), Công nghệ tế bào, NXB Đại học Quốc Gia Th{nh phố Hồ Chí Minh Áp dụng phương pháp nuôi lát mỏng tế bào nhân giống in vitro lan Hoàng thảo Thân gãy (Dendrobium aduncum) Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 8(3), 361-367.elica acutiloba Kitagawa Tạp chí Sinh học Academia , 35 (3se), 165-173 Chất, T N., Trí, B M., & Toàn, P Đ (2017) Ảnh hưởng 2, 4D kiểu cắt lớp mỏng tế bào đến hình thành phát triển mô sẹo gấc (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng) Bản B Tạp chí Khoa học Công nghệ Việt Nam, 59(5) Ly, P T T (2014) KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA GIỐNG LAN DENDROBIUM MINI LAI TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY IN VITRO 40 Tài liệu nước 1Seabrook, J E., & Cumming, B G (1977) The in vitro propagation of Amaryllis (Hippeastrum spp hybrids) In vitro, 13(12), 831-836 Zayed, R., El-Shamy, H., Berkov, S., Bastida, J., & Codina, C (2011) In vitro micropropagation and alkaloids of Hippeastrum vittatum In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, 47(6), 695-701 De Bruyn, M H., Ferreira, D I., Slabbert, M M., & Pretorius, J (1992) In vitro propagation of Amaryllis belladonna Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 31(3), 179-184 Aslam, F., Habib, S., & Naz, S (2012) Effect of different phytohormones on plant regeneration of Amaryllis hippeastrum Pakistan Journal of Science, 64(1) Quynh, N T., Nhung, H N., & Thu, N L A (2013) Formation and growth of adventitious roots from in vitro Angelica acutiloba Kitagawa tissue culture Academia Journal of Biology, 35(3se), 165-173 41 PHỤ LỤC KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ THÍ NGHIỆM SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TN4 17/ 3/22 15: :PAGE tn4 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SOCHOI 15.464 0.86785 74 17.82 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 17/ 3/22 15: :PAGE tn4 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 11 25 22 14 SOCHOI 2.71429 3.45455 5.36000 4.63636 3.64286 SE(N= 16) 0.232896 5%LSD 74DF 0.656213 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 17/ 3/22 15: :PAGE tn4 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI GRAND MEAN (N= 79) NO OBS 79 4.3544 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2714 0.93159 2.4 0.0000 | | | | THÍ NGHIỆM SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TN5 17/ 3/22 15:14 :PAGE tn5 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SOCHOI 118.44 1.3380 104 88.52 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 17/ 3/22 15:14 :PAGE tn5 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 12 14 27 23 18 SOCHOI 0.000000 6.57143 6.48148 8.39130 7.16667 42 16 6.25000 SE(N= 18) 0.272637 5%LSD 104DF 0.764514 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 17/ 3/22 15:14 :PAGE tn5 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOCHOI GRAND MEAN (N= 110) NO OBS 110 6.2636 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.5903 1.1567 3.5 0.0000 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN6 17/ 3/22 14:46 :PAGE thi nghiem VARIATE V003 SORE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 225.561 45.1122 37.48 0.000 * RESIDUAL 174 209.433 1.20364 * TOTAL (CORRECTED) 179 434.994 2.43014 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE TN6 17/ 3/22 14:46 :PAGE thi nghiem VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 47.8259 9.56517 ****** 0.000 * RESIDUAL 174 779631 448064E-02 * TOTAL (CORRECTED) 179 48.6055 271539 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 17/ 3/22 14:46 :PAGE thi nghiem MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 NOS 30 30 30 30 30 30 SORE 0.833333 2.66667 2.86667 3.43333 3.80000 4.36667 CDR 0.214667 0.401667 0.547000 0.961000 1.61100 1.40367 SE(N= 30) 0.200303 0.122211E-01 5%LSD 174DF 0.559026 0.341078E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 17/ 3/22 14:46 :PAGE thi nghiem 43 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SORE CDR GRAND MEAN (N= 180) NO OBS 180 2.9944 180 0.85650 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.5589 1.0971 6.6 0.0000 0.52109 0.66938E-01 7.8 0.0000 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN7 17/ 3/22 14:51 :PAGE tn7 VARIATE V003 SORE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 208.244 41.6489 41.08 0.000 * RESIDUAL 174 176.400 1.01379 * TOTAL (CORRECTED) 179 384.644 2.14885 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE TN7 17/ 3/22 14:51 :PAGE tn7 VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 124.042 24.8084 881.00 0.000 * RESIDUAL 174 4.89970 281592E-01 * TOTAL (CORRECTED) 179 128.941 720343 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN7 17/ 3/22 14:51 :PAGE tn7 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 30 30 30 30 30 30 SORE 1.46667 3.00000 3.30000 3.83333 4.30000 4.83333 CDR 0.200667 0.665667 1.40733 1.82233 2.28633 2.51067 SE(N= 30) 0.183829 0.306372E-01 5%LSD 174DF 0.513048 0.855053E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN7 17/ 3/22 14:51 :PAGE tn7 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SORE CDR GRAND MEAN (N= 180) NO OBS 180 3.4556 180 1.4822 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.4659 1.0069 6.1 0.0000 0.84873 0.16781 4.3 0.0000 44 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORE FILE TN8 17/ 3/22 14:57 :PAGE tn8 VARIATE V003 SORE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 208.425 69.4750 51.80 0.000 * RESIDUAL 116 155.567 1.34109 * TOTAL (CORRECTED) 119 363.992 3.05875 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE TN8 17/ 3/22 14:57 :PAGE tn8 VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 70.3592 23.4531 266.60 0.000 * RESIDUAL 116 10.2048 879725E-01 * TOTAL (CORRECTED) 119 80.5640 677008 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN8 17/ 3/22 14:57 :PAGE tn8 MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 30 30 30 30 SORE 2.30000 2.60000 4.90000 5.23333 CDR 1.04200 1.63033 2.64367 2.94533 SE(N= 30) 0.211431 0.541518E-01 5%LSD 116DF 0.592160 0.151664 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN8 17/ 3/22 14:57 :PAGE tn8 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SORE CDR GRAND MEAN (N= 120) NO OBS 120 3.7583 120 2.0653 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.7489 1.1581 3.8 0.0000 0.82281 0.29660 4.4 0.0000 45 | | | |