HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CHUỐI TIÊU NAM MỸ ’’ Hà Nội – 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “ NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CHUỐI TIÊU NAM MỸ ’’ Ngƣời thực : Nguyễn Thị Hoa Lớp : K63CNSHA Mã sinh viên : 637028 Ngƣời hƣớng dẫn : TS Đặng Thị Thanh Tâm Hà Nội – 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc chân thành tới cô TS Đặng Thị Thanh Tâm, Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật, Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện nơng nghiệp Việt Nam tận tình hƣớng dẫn bảo em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cô không ngƣời truyền đạt kiến thức vơ bổ ích mà cịn bảo ban cho em kỹ sống nhƣ phong cách làm việc chu đáo nhiệt tình Nhờ đó, em có học q báu vơ sâu sắc suốt q trình hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam thuận lợi cho em đƣợc học tập trƣờng suốt thời gian học tập Em xin chân thành cảm ơn tập thể anh chị bạn bè môn Công nghệ Sinh học Thực vật Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ bảo để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình, ngƣời thân, bạn bè giúp đỡ ủng hộ em suốt q trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày… tháng… năm 2022 Sinh Viên Nguyễn Thị Hoa i LỜI CAM ĐOAN Em xin đoan cơng trình nghiên cứu riêng em Mọi số liệu kết khóa luận trung thực không trùng lặp hay chép từ đề tài khác Em xin cam đoan thông tin khóa luận đƣợc trích dẫn có nguồn gốc Nếu sai, em hoàn toàn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày… tháng… năm 2022 Sinh viên Nguyễn Thị Hoa ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi TÓM TẮT viii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chuối tiêu Nam Mỹ 2.2 Vị trí phân loại 2.3 Lịch sử đời chuối tiêu Nam Mỹ 2.4 Đặc điểm chuối tiêu Nam Mỹ 2.5 Giá trị sử dụng, tình hình sản xuất tiêu thụ chuối tiêu Nam Mỹ 2.5.1 Giá trị sử dụng 2.5.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ chuối tiêu Nam Mỹ 2.6 Nghiên cứu nhân giống in vitro chuối nƣớc 14 2.7 Vai trò dịch chiết hữu nuôi cấy mô tế bào thực vật 16 2.7.1 Nƣớc dừa 17 2.7.2 Khoai tây 18 2.7.3 Chuối 19 2.7.4 Neem oil 19 PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.1 Vật liệu nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 iii 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị hoá chất 21 3.2 Địa điểm nghiên cứu 22 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 3.4 Chỉ tiêu theo dõi 23 3.5 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro chồi chuối tiêu Nam Mỹ 23 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC 43 iv DANH MỤC BẢNG Bảng Ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi 26 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ nƣớc dừa đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 28 Bảng Ảnh hƣởng lƣợng chuối đến khả nhân nhanh chồi chuối già Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 30 Bảng 4 Ảnh hƣởng lƣợng khoai tây đến nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 32 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ nƣớc dừa, lƣợng chuối lƣợng khoai tây đến nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 34 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ Neem oil đến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 37 Bảng Ảnh hƣởng nồng độ Than hoạt tínhđến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 39 v DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần ni cấy) 27 Hình 4.2 Ảnh hƣởng nồng độ nƣớc dừa đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần ni cấy) 29 Hình Ảnh hƣởng nồng độ nƣớc dừa đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 29 Hình 4.4 Ảnh hƣởng lƣợng khoai tây đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 33 Hình 4.5 Ảnh hƣởng nồng độ nƣớc dừa, lƣợng chuối lƣợng khoai tây đến nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 36 Hình 4.6 Ảnh hƣởng nồng độ Neem oil đến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần ni cấy) 38 Hình 4.7 Ảnh hƣởng lƣợng Than hoạt tính đến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ (theo dõi sau tuần nuôi cấy) 40 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT THÍ NGHIỆM : Thí nghiệm BA : 6- Benzyladenin BAP : Benzylaminopurine IAA : 1H- indole-3-acetic acid α - NAA : α-naphthaleneacetic acid ND : Nƣớc Dừa KT : Khoai tây C : Lƣợng chuối THT : Than hoạt tính NO : Neem oil ĐC : Đối chứng CT : Công thức CV% : Sai số thí nghiệm LSD0.05 : Độ lệch chuẩn mức ý nghĩa 5% MS : Môi trƣờng Murashige & Skoog cs : cộng cm : centimet mg/l : miligram/lít Ppm : mg/l g/l : gram/lít : hecta m : mét pH : Power of hydrogen TB : Trung bình Faostat : Food and Agriculture Organization of the United Nations vii TÓM TẮT Nghiên cứu đƣợc tiến hành với mục đích xác định yếu tố ảnh hƣởng đến trình nhân nhanh in vitro chuối tiêu Nam Mỹ Các nội dung nghiên cứu bao gồm xác định ảnh hƣởng nồng độ BA, than hoạt tính số hợp chất hữu mơi trƣờng nhân nhanh tạo hoàn chỉnh Các chất hữu đƣợc khảo sát ảnh hƣởng trình nhân nuôi in vitro nƣớc dừa, chuối, khoai tây, neem oil Kết cho thấy mơi trƣờng MS có bổ sung thêm 2mg/l BA mơi trƣờng thích hợp cho trình phát sinh chồi in vitro chuối Nam Mỹ Chiều cao chồi, hình thái chồi chiều dài rễ hình thái rễ đƣợc thu nhận sử dụng để đánh giá hiệu dịch nghiền hữu sau tuần nuôi cấy Kết cho thấy nƣớc dừa, lƣợng chuối, khoai tây, neem oil than hoạt tính có tác động tích cực đến phát triển chồi in vitro chuối tiêu Nam Mỹ Qua nghiên cứu cho rằng: bổ sung 40 ml/l nƣớc dừa vào môi trƣờng nuôi cấy phù hợp để nhân nhanh tạo chồi giống chuối tiêu Nam Mỹ, với hệ số nhân chồi TB 7,9 chồi chiều cao chồi TB 2,5 cm; bổ sung 0,5 g/l Than hoạt tính vào mơi trƣờng tạo rễ phù hợp nhất, chiều cao chồi TB đạt 3,13 cm, chiều dài rễ TB đạt 7,55 cm với trọng lƣợng tƣơi TB đạt 3,55 g Đây nghiên cứu ảnh hƣởng dịch chiết chuối, khoai tây neem oil đến phát triển chồi in vitro chuối tiêu Nam Mỹ Kết nghiên cứu đƣợc sử dụng sản xuất nhân giống in vitro chuối tiêu Nam Mỹ giúp cung cấp đủ số lƣợng thị trƣờng viii TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Cúc N T., Kết N V., Nhựt D T., Lý N T K & (2014) Nghiên cứu ảnh hƣởng số hợp chất hữu lên trình sinh trƣởng phát triển lan hài hồng (paphiopedilum delenatii) in vitro TẠP CHÍ SINH HỌC 36 (1se): 250-256 Đƣợm N T (2011) Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân in vitro giống chuối Tây Khoa Công nghệ SInh Học-Trƣờng Đại học Nông Lâm Bắc Giang Duyên T T & Tuyết N T (2022) Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất bột chuối tiêu lùn Cavendish banana phƣơng pháp sấy phun Dwivany F M., Aprilyandi A N., Suendo V & Sukriandi N (2020) Carrageenan edible coating application prolongs Cavendish Banana shelf lif Int J Food Sc 10.1155/2020/8861610 Giáp Đ Đ., Vinh P N., Tuấn T T., Trang N T H., Thƣ P N Á & Du T X (2012) Tăng hệ số nhân nhanh chồi chuối laba (musa sp.) nuôi cấy in vitro cách sử dụng ánh sáng, myo-inositol adenin sulphate TẠP CHÍ SINH HỌC 34(3SE): 180-187 Hƣơng B T T., G Đ H., Lich P T H & Linh T H (2020) Nghiên cứu vi nhân giống chuối ngự đại hồng (musa spp.) TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ LÂM NGHIỆP SỐ 1-2020 Hwan, Sc, Chen, Cl, Lin, Jc, Lin & Hl (1976) Trồng chuối cách sử dụng từ nuôi cấy mô phân sinh HortScience J Van Staden and J Stewart (1975) Cytokinins chuối Z Pßanzenphysiol 76: 280-283 Lan H (2021) Cách chăm sóc chuối Nam Mỹ đạt suất cao 10 Nhƣ C T (2019) Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro chuối xiêm lùn (Musa sp.) Khoa Nông Nghiệp Thủy sản – Trƣờng Đại học Trà Vinh 11 Phạm H (2020) Giống chuối già Nam Mỹ 12 Quý N P., Maitouy K I., Dettaphone I., Kiên T T., Quyên V T X & Lan N T M (2021) Ảnh hƣởng chất hữu bổ sung đến trình nhân nhanh chồi, đặc điểm hình thái, giải phẫu hàm lƣợng sắc tố quang hợp lồi lan hài chó đốm (paphiopedilum bellatulum) ni cấy in vitro TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG Tập 26, Số (2022): 44-50 42 13 Tâm Đ T T., Hƣơng T T T., Hải N T L., Hải N T & Sơn Đ T (2020) Ảnh hƣởng số dịch nghiền hữu đến kéo dài chồi in vitro lan hồng thảo kèn (dendrobium lituiflorum lindl.) Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 19(3): 331-338 14 Thảo N T M (2008) Điều tra tình hình sản xuất khoai tây khảo nghiệm số giống khoai tây điều kiện sản xuất vụ động 2005, 2006 huyện Đồng Hỷ tỉnh Thái Nguyên Đại học Thái Nguyên, Trƣờng Đại học Nông Lâm 60.62.01 15 Thủy C T & Sáng V Q (2011) Nghiên cứu nhân nhanh in vitro xuyên khung (Ligusticum wallichii Frach) Tạp chí Khoa học Phát triển Tập 9, số 6: 920 – 927 16 Thủy N T B (2018) Ảnh hƣởng nhiệt độ đến biến đổi sinh lý, hóa sinh chuối tiêu (musa aaa) thời gian bảo quản Khoa Công nghệ Thực phẩm, Đại học Nông nghiệp I 17 Trần Ngọc Hùng Đ T V H & N Đ H (2020) BỆNH HÉO VÀNG (Fusarium oxysporum f.sp cubense) HẠI CHUỐI TIÊU TẠI VIỆT NAM Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 2020, 18(5): 315-322 18 Trang H T H & Ngọc P T H (2021) Nghiên cứu nhân giống chuối sáp (Musa balbasiana) phƣơng pháp nuôi cấy mơ Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam 19 Việt N V (2017) Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro nhân giống Lan Hồng Thảo Vơi (Dendrobium cretaceum Lindley) Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam Số 6(79)/2017 20 Vinh T T., Bing H Y N., Thắm Đ T., Hằng N T T., Công V K & Duy N V (2021) Nhân giống vơ tính lan hài đà lạt (paphiopedilum x dalatense) Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 19(1): 155-163 Tài liệu nƣớc 43 PHỤ LỤC Kết chạy INFOSTAT THÍ NGHIỆM Ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ Analysis of variance He so nhan choi TB (choi/mau) Variable N R² Adj R² CV He so nhan choi TB (choi/m 30 0.56 0.49 9.50 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 4.46 1.11 8.06 0.0003 CT 4.46 1.11 8.06 0.0003 Error 3.46 25 0.14 Total 7.92 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.44225 Error: 0.1383 df: 25 CT Means n S.E DC 3.42 0.15 A 1BA 3.71 0.15 A B 4BA 3.79 0.15 A B 3BA 4.13 0.15 B C 2BA 4.54 0.15 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Chieu cao choi TB (cm) Variable N R² Adj R² CV 44 Chieu cao choi TB (cm) 30 0.81 0.78 10.73 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 4.95 1.24 26.90 0.05) Chieu cao choi TB (cm) Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 34 0.35 0.28 14.47 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 1.40 0.47 5.34 0.0046 CT 1.40 0.47 5.34 0.0046 Error 2.62 30 0.09 Total 4.02 33 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.30503 Error: 0.0873 df: 30 CT Means n S.E 46 2BA + 60 ND 1.89 0.10 A DC 1.92 10 0.09 A 2BA + 20 ND 2.07 10 0.09 A 2BA + 40 ND 2.50 0.13 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) THÍ NGHIỆM Ảnh hƣởng lƣợng chuối đến khả nhân nhanh chồi chuối tiêu Nam Mỹ Analysis of variance He so nhan choi TB (choi/mau) Variable N R² Adj R² CV He so nhan choi TB (choi/m 24 0.50 0.43 13.39 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 12.95 4.32 6.71 0.0026 CT 12.95 4.32 6.71 0.0026 Error 12.86 20 0.64 Total 25.81 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.96589 Error: 0.6432 df: 20 CT 2BA Means n S.E 5.29 0.33 A 47 2BA + 30 C 5.46 0.33 A 2BA + 10 C 6.04 0.33 A 2BA + 20 C 7.17 0.33 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Chieu cao choi TB (cm) Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 24 0.83 0.80 11.56 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 12.81 4.27 31.94 0.05) Chieu cao choi TB (cm) Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 24 0.91 0.89 10.93 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 23.79 7.93 64.70 0.05) Chieu cao choi TB (cm) Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 52 0.27 0.19 14.57 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 2.82 0.56 3.42 0.0103 CT 2.82 0.56 3.42 0.0103 Error 7.58 46 0.16 Total 10.40 51 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.39588 Error: 0.1648 df: 46 CT Means n S.E 40 ND + 20C 2.41 0.14 A 40 ND + 10C 2.65 10 0.13 A B 51 40 ND + 30KT + 20C 2.72 0.15 A B C 40 ND + 30 KT 2.82 0.14 B C 40 ND + 30 KT + 10C 3.01 0.14 B C 40 ND 3.10 10 0.13 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) THÍ NGHIỆM6.Ảnh hƣởng nồng độ Neem oil đến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ Analysis of variance Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 24 0.57 0.51 9.62 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 2.61 0.87 9.00 0.0006 CT 2.61 0.87 9.00 0.0006 Error 1.93 20 0.10 Total 4.54 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.37439 Error: 0.0966 df: 20 CT Means n S.E DC 2.85 0.13 A NO 3.06 0.13 A B 0.25 NO 3.28 0.13 B 0.5 NO 3.74 0.13 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Variable N R² Adj R² CV 52 Chieu dai re TB (cm) 24 0.75 0.71 12.48 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 26.25 8.75 20.08 0.05) THÍ NGHIỆM Ảnh hƣởng nồng độ Than hoạt tính đến khả rễ chuối tiêu Nam Mỹ Analysis of variance Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi TB (cm) 24 0.53 0.46 12.35 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 3.19 1.06 7.57 0.0014 CT 3.19 1.06 7.57 0.0014 Error 2.81 20 0.14 Total 6.00 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.45150 Error: 0.1405 df: 20 CT Means n S.E DC 2.67 0.15 A 1.5 THT 2.75 0.15 A B 0.5 THT 3.13 0.15 B THT 3.59 0.15 C 54 Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Analysis of variance Variable N R² Adj R² CV Chieu dai re TB (cm) 24 0.65 0.60 11.82 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 20.53 6.84 12.39 0.0001 CT 20.53 6.84 12.39 0.0001 Error 11.05 20 0.55 Total 31.57 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.89501 Error: 0.5523 df: 20 CT Means n S.E DC 4.96 0.30 A 1.5 THT 6.16 0.30 B THT 6.48 0.30 B 0.5 THT 7.55 0.30 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Analysis of variance Variable N R² Adj R² CV Trong luong tuoi TB (g) 36 0.61 0.58 16.92 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 11.24 3.75 16.87