HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT NGUỒN GEN KHOAI TÂY IN VITRO NHẬP NỘI KHÁNG BỆNH SƯƠNG MAI Sinh viên thực : Phạm Đình Kiêm Lớp : K62CNSHA MSV : 620395 Bộ môn : Sinh học phân tử & CNSH ứng dụng Giảng viên hướng dẫn : GS.TS Phan Hữu Tôn HÀ NỘI - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan khóa luận hồn tồn thực tìm tịi nghiên cứu khoa học thân hướng dẫn GS.TS.PHAN HỮU TƠN, khoa Cơng nghệ Sinh học – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Tất số liệu hình ảnh luận văn hồn tồn trung thực, khơng chép tài liệu, cơng trình nghiên cứu người khác mà không ghi rõ nguồn tham khảo Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan trước hội đồng nhà trường Hà Nội , Ngày 19 tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Đình Kiêm i LỜI CẢM ƠN Đ ể hồn thành khóa luận tốt nghiệp, nỗ lực cố gắng thân, nhận quan tâm, giúp đỡ tận tình thầy cơ, bạn bè người thân gia đình Trước hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS.Phan Hữu Tơn, người tận tình hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ tơi chun mơn suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn KS Phan Hữu Hiển, KS.Phan Thanh Tùng tồn thể cán bộ, nhân viên Bộ mơn Sinh học phân tử công nghệ sinh học ứng dụng, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực tập môn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giảng viên Học viện Nông nghiệp Việt Nam trang bị cho kiến thức cần thiết để thực hồn thành khóa luận Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, anh em, bạn bè động viên, giúp đỡ tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn Hà Nội, Ngày 19 tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Đình Kiêm ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC VIẾT TẮT vi PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Mục tiêu nghiên cứu yêu cầu đề tài 1.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 1.1.2 Yêu cầu đề tài PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung khoai tây 2.2 Nguồn gốc phân loại khoai tây 2.3 Đặc tính thực vật học khoai tây 2.4 Đặc điểm sinh học khoai tây 2.5 Một số yêu tố ảnh hưởng tới sinh trưởng phát triển khoai tây 2.6 Nhu cầu dinh dưỡng khoai tây 2.7 Tình hình sản xuất khoai tây giới 2.8 Tình hình sản suất khoai tây Việt Nam 2.9 Thời vụ trồng khoai tây Việt Nam 2.10 Một số nghiên cứu khoai tây 10 2.10.1 Một số nghiên cứu sâu bệnh hại khoai tây 10 2.10.2 Nghiên cứu tạo giống khoai tây kháng bệnh sương mai 12 2.11 Bệnh sương mai khoai tây 13 2.12 Ứng dụng thị phân tử nghiên cứu gen kháng bệnh sương mai 20 iii PHẦN III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Vật liệu nghiên cứu 23 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 3.3 Nội dung nghiên cứu 24 3.4 Phương pháp nghiên cứu 24 3.4.1 Phương pháp bố trí ngoái đồng ruộng 24 3.4.2 Phương pháp đánh giá số đặc điểm nông sinh học 24 3.5 Phương pháp PCR phát gen kháng R1, R3a 28 3.5.1 Tách DNA khoai tây 28 3.5.2 Phương pháp sử dụng PCR xác đinh gen kháng R1, R3a 30 IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 Khảo sát đặc điểm nông sinh học số mẫu khoai tây vụ đông 2022 32 4.1.1 Thời gian sinh trưởng 32 4.1.2 Đặc điểm thân củ 34 4.1.3 Đặc điểm sinh trưởng phát triển 36 4.1.4 Đánh giá suất 39 4.2 Kết PCR phát gen sương mai 40 4.2.1 Kết PCR phát gen R1 40 4.2.2 Kết PCR phát gen R3a 41 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 iv DANH MỤC BẢNG Bảng Danh sách mẫu giống khoai tây cần theo dõi 23 Bảng Một số tiêu theo dõi sinh trưởng 25 Bảng Một số tiêu theo dõi độ nhiễm bệnh 26 Bảng Một số tiêu theo dõi suất chất lượng củ 28 Bảng Thành phần dung dịch tách chiết DNA 30 Bảng Nồng độ dung dịch TE 30 Bảng Các thị phân tử DNA sử dụng để phát gen R1 R3a kháng sương mai 30 Bảng Chu kỳ nhiệt 31 Bảng Bảng thời gian qua giai đoạn sinh trưởng 33 Bảng 10 Đặc điểm thân củ mẫu giống khoai tây 35 Bảng 11 Đặc điểm sinh trưởng 37 Bảng 12: Đánh giá suất 39 v DANH MỤC HÌNH Hình 1: Ảnh khoai tây Trung tâm Bảo tồn Phát triển Nguồn gen Cây trồng - Học viện Nông nghiệp Việt Nam Hình 2: Triệu chứng sương mai: a) Triệu chứng lá, 15 Hình a) Bào tử phân sinh nấm Phytophthora infestant, 16 Hình Chu kì phát triển nấm Phytophthora infestans 18 Hình Các thị phân tử liên kết với gen kháng sương mai 22 Hình Hình ảnh điện di phát gen R1 40 Hình Hình ảnh điện di phát gen R1 41 Hình Hình ảnh điện di phát gen R3a 42 Hình Hình ảnh điện di phát gen R3a 42 Hình 10 Mẫu giống khoai tây KTNN03 45 vi DANH MỤC VIẾT TẮT C: CĨ K: KHƠNG T: TỐT TB: TRUNG BÌNH Y: YÊU CIP: Trung tâm Khoai tây Quốc tế RAPD: Đa hình đoạn ADN nhân ngẫu nhiên Ctv: Cộng tác viên Cs: Cộng CTAB: Cetytrimethylammonium Bromide vii PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỀ Khoai tây có tên khoa học Solanum tuberosum, thuộc họ Solanaceae, có nguồn gốc từ vùng núi Andes Bolivia Peru, trồng ngắn ngày, chiếm vị trí quan trọng lương thực, thực phẩm phục vụ cho người Hiện nay, khoai tây loài trồng lấy củ rộng rãi giới, trồng phổ biến thứ tư mặt sản lượng lương thực sau lúa, lúa mì ngơ Chúng có đặc điểm dễ trồng, cho thu hoạch nhanh thích ứng với điều kiện môi trường khác (International Year of the Potato 2008; Jeff Chapman cộng sự, 2011) Tuy nhiên, khoai tây bị số bệnh ảnh hưởng đến suất chất lượng củ Bệnh hại khoai tây đa dạng thành phần nguyên nhân gây bệnh bệnh sương mai, bệnh héo vàng, bệnh đốm lá, bệnh héo rũ vi khuẩn, bệnh xoăn virus….Trong bệnh sương mai nấm Phytophthora infestans gây bệnh hại nghiêm trọng bậc nhất, gây thiệt hại 16% suất toàn giới (Haverkort A cộng sự, 2009) Bệnh lây nhiễm toàn cây, bao gồm thân, củ (Fry W, 2008) Đ ể đối phó với dịch bệnh, tạo phát triển bền vững giảm lượng thuốc bảo vệ thực vật việc tạo giống khoai tây với mức kháng cao với Phytophthora infestans coi chiến lược bền vững cho việc trồng khoai tây tương lai Nhờ phát triển mạnh mẽ sinh học phân tử, công nghệ chọn tạo giống nhờ thị phân tử đời rút ngắn thời gian chọn tạo giống, đảm bảo độ xác quy tụ nhiều gen mục tiêu vào giống mà phương pháp chọn giống truyền thống khó khơng thể thực đ ể tạo giống khoai tây việc phải có nguồn gen kháng thị phân tử liên kết với gen kháng đó, sau đánh giá xác định khả kháng bệnh sương mai giống để sử dụng công tác lai tạo giống sau Gen kháng bệnh sương mai lai tạo từ loài dại S demissum,S stoloniferum S tuberosum andigena, S phureja loài khoai tây trồng phổ biến khắp nơi giới (Bradshaw cộng sự, 2006) Loài S.demissum Mexico mang gen kháng bệnh sương mai nguồn cung cấp 11 gen trội R (R1-R11) lai với S tuberosum năm 1950 1960 để tạo giống kháng (Bradshaw Ramsay, 2005) Gen R1, R3a gen kháng chủng đặc hiệu với Phytophthora infestans lai tạo vào giống khoai tây truyền thống (Umaerus Umaerous, 1994) Bên cạnh đó, người ta xác định hệ thống marker phân tử DNA liên kết với gen kháng phát triển hỗ trợ đắc lực cho chương trình chọn tạo giống khoai tây kháng bệnh sương mai Các thị phân tử DNA dựa PCR cho gen R1 R1F/R(76-2sf2/76-2SR)), gen R3a R3-1380 nhiều nhà chọn giống giới sử dụng để chọn tạo giống khoai tây kháng bệnh sương mai Hiện Trung tâm bảo tồn phát triển nguồn gen trồng thu thập tập đoàn giống khoai tây đâ y nguồn gen đa dạng cho việc lai tạo giống khoai tây kháng bệnh sương mai Vì để có định hướng sử dụng, hướng dẫn GS.TS Phan Hữu Tôn, tiến hành đề tài: “Khảo sát nguồn gen khoai tây in vitro nhập nội kháng bệnh sương mai” 1.1 Mục tiêu nghiên cứu yêu cầu đề tài 1.1.1 Mục tiêu nghiên cứu Theo dõi đánh giá đặc điểm nông sinh học khoai tây nhập nội in vitro Xác định gen kháng bệnh sương mai khoai tây nhập nội in vitro thị phân tử DNA ( R1, R3a ) Từ xác định mẫu giống khoai tây có đặc điểm sinh trưởng tốt kháng bệnh sương mai Xác định mẫu giống khoai tây có mang gen kháng sương mai thị phân tử phục vụ lai tạo giống kháng 1.1.2 Yêu cầu đề tài Khảo sát đặc điểm nông sinh học giống khoai tây nhập nội in vitro Đánh giá đặc điểm nông sinh học khả kháng sâu bệnh đánh giá khả kháng nhiễm mẫu giống khoai tây đồng ruộng Dùng thị phân tử DNA phát gen kháng bệnh sương mai giống khoai tây nhập nột in vitro ( R1, R3a ) Bảng 10 Đặc điểm thân củ mẫu giống khoai tây Dạng thân Số nhánh thân Chiều dài thân ( cm ) Dạng củ Màu sắc thịt củ KTNN01 Thân tròn 33.5 Ovan Vàng KTNN02 72.4 Ovan Vàng KTNN03 88.8 Ovan Vàng KTNN04 68.5 Ovan Vàng KTNN05 60.5 Trịn Vàng KTNN06 Thân trịn Thân vng Thân trịn Thân vng Thân trịn 83.3 Trịn Vàng KTNN07 Thân tròn 81.5 Ovan KTNN08 Thân tròn 76 Ovan KTNN09 Thân tròn 57.2 Ovan Vàng Trắng vàng Vàng 10 KTNN10 Thân tròn 33.5 Ovan Vàng 11 KTNN11 Thân tròn 72.2 Dài Vàng 12 KTNN12 Thân tròn 46.5 Ovan Vàng 13 KTNN13 Thân tròn 35 Ovan Trắng 14 KTNN14 Thân tròn 55 Ovan Trắng 15 KTNN15 Thân tròn 34.3 Tròn Vàng 16 KTNN16 Thân tròn 37.5 Ovan Vàng 17 KTNN17 Thân tròn 23.3 Ovan Vàng 18 KTNN18 Thân tròn 28.8 Ovan Vàng 19 KTNN19 15.3 Ovan Vàng 20 KTNN20 12.5 Ovan Vàng 21 KTNN21 Thân trịn Thân vng Thân trịn 30 Ovan 22 KTNN22 Thân tròn 67.5 Ovan 23 KTNN23 64.8 Ovan 24 KTNN24 28 Ovan Vàng 25 KTNN25 62.1 Ovan Vàng 26 KTNN26 Thân trịn Thân vng Thân vng Thân tròn Vàng Trắng vàng Vàng 29.3 Ovan Vàng 27 KTNN27 Thân tròn 33.4 Ovan Vàng STT Tên mẫu giống 35 Đặc điểm hình thái củ tiêu quan trọng công tác nghiên cứu chọn tạo giống liên quan trực tiếp đến chất lượng củ thương phẩm Từ bảng cho thấy: Hình dạng củ mẫu giống khảo sát khác Các mẫu giống có dạng củ trịn gồm mẫu giống, dạng củ ovan gồm 23 mẫu giống, có mẫu giống có dạng củ dài Các mẫu giống có dạng thân trịn gồm 68 mẫu giống - chiếm nhiều nhất, 45 mẫu giống có dạng thân vng Chiều cao thân tính từ gốc đến đỉnh sinh trưởng Màu sắc thịt củ đa dạng Các mẫu giống khoai tây có màu thịt củ chủ yếu màu vàng, vàng trắng trắng Màu sắc thịt củ đặc trưng di truyền giống, tất yếu có khác biệt Nhánh thân lồi khoai tây trồng thường phát triển, dẫn đến khả quang hợp giống khoai tây dại dinh dưỡng tập trung để nuôi củ, không phát triển rậm rạp nên bị lây lan bệnh Những giống có số lượng nhánh lớn dẫn đến phát triển rậm rạp dễ bị lây lan bệnh khơng có tính kháng, khả quang hợp tốt dinh dưỡng sử dụng để nuôi nhánh lớn, dinh dưỡng để nuôi củ giảm Tất mẫu giống có số nhánh thân hứa hẹn đem đến lượng suất củ lớn 4.1.3 Đặc điểm sinh trưởng phát triển Theo dõi đồng khóm để biết ổn định mẫu khoai tây Sự sinh trưởng ảnh hưởng nhiều đến hình thành suất, sinh trưởng phát triển tốt dẫn đến khả quang hợp tốt, suất cao Tuy nhiên giống phát triển thân mạnh ảnh hưởng tới suất dinh dưỡng để ni thân nhiều, dinh dưỡng nuôi củ bị hạn chế Đặc điểm hoa giống có ý nghĩa quan trọng Số lượng hoa đặc trưng cho di truyền giống, ảnh hưởng đến tạo thành giống Các nhà chọn tạo giống quan tâm đến vấn đề Do đặc điểm khoai tây nhân giống vơ tính nên trì tính trạng tốt ban đầu Ngồi cịn tiến hành lai giống với nhau, tạo lai vừa có suất cao vừa có khả kháng bệnh mong muốn, từ tạo giống trồng 36 Bảng 11 Đặc điểm sinh trưởng Số hoa nhánh Khả sinh trưởng K Y Y KTNN02 C T T KTNN03 C 10 T T KTNN04 C T T KTNN05 K T T KTNN06 K T T KTNN07 K T T KTNN08 K T T KTNN09 K T T 10 KTNN10 K TB TB 11 KTNN11 K T T 12 KTNN12 K TB T 13 KTNN13 K TB T 14 KTNN14 K TB TB 15 KTNN15 K TB T 16 KTNN16 K Y TB 17 KTNN17 K Y TB 18 KTNN18 K TB T 19 KTNN19 K Y Y 20 KTNN20 K Y TB 21 KTNN21 K TB T 22 KTNN22 K T T 23 KTNN23 K T T 24 KTNN24 K T T 25 KTNN25 K TB TB 26 KTNN26 K TB TB 27 KTNN27 K TB TB Tên mẫu giống Khả hoa KTNN01 STT Khả thích ứng (Chú thích: “T” – tốt; “TB”- trung bình; “Y”- yếu;“K” – khơng; “C” – có) Qua Bảng ta thấy 27 mẫu có mẫu có khả khóa KTNN02, KTNN03, KTNN04 37 Khả sinh trưởng thể khác biệt mẫu giống Các mẫu giống khoai tây có tỷ lệ sinh trưởng tốt đạt xấp xỉ 40%, tỷ lệ sinh trưởng xấp xỉ 15% Khả thích ứng với điều kiện bất lợi môi trường tiêu nhằm đánh giá khả thích nghi trồng với môi trường 63% số mẫu giống khảo nghiệm cho kết tốt khả thích ứng, 30% cho kết trung bình, 7% số mẫu giống cịn lại có khả thích ứng Đ ộ đồng khóm lơ xem tiêu chí đánh giá mặt cảm quan Từ kết theo dõi nhận thấy đa số mẫu giống có độ đồng ổn định khóm Qua kết khảo sát bảng ta nhận thấy có số mẫu giống vừa có khả hoa, số hoa cao, đồng thời có khả sinh trưởng, thích nghi tốt KTNN02, KTNN03, KTNN04 38 4.1.4 Đánh giá suất Bảng 12: Đánh giá suất Trọng lượng trung bình củ (g) Năng suất (kg/ha) STT Tên mẫu giống Số lượng củ trung bình khóm Trọng lượng trung bình củ khóm (g) KTNN01 2.8 33 11.79 2750 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 KTNN02 KTNN03 KTNN04 KTNN05 KTNN06 KTNN07 KTNN08 KTNN09 KTNN10 KTNN11 KTNN12 KTNN13 KTNN14 KTNN15 KTNN16 KTNN17 KTNN18 KTNN19 KTNN20 KTNN21 KTNN22 KTNN23 KTNN24 KTNN25 KTNN26 KTNN27 30.2 5.75 5.5 4.5 9.5 4.5 3.5 5.8 3.75 5.3 3.67 2.5 7.3 4.25 7.5 3.3 2.5 335 120.6 302.1 102.3 100 300.6 252.8 150.3 155.9 209.4 100.8 105.6 90.6 25 157 155.6 89 0.3 14.4 87.7 258.9 221.3 56 72.5 63.4 102.3 47.86 3.99 52.54 18.6 22.22 31.64 56.18 25.05 44.54 36.1 26.88 26.4 30.2 12.5 29.62 38.9 24.25 0.15 5.76 12.01 60.92 36.88 7.47 18.13 19.21 40.92 27916.67 10050 25175 8525 8333.333 25050 21066.67 12525 12991.67 17450 8400 8800 7550 2083.333 13083.33 12966.67 7416.667 25 1200 7308.333 21575 18441.67 4666.667 6041.667 5283.333 8525 39 Từ kết khảo sát cho thấy: Mẫu giống có số lượng củ trung bình khóm lớn KTNN03 với 30.2 củ/khóm Mẫu giống KTNN16 có số trung bình khóm thấp củ/khóm đ a phần mẫu giống có số củ trung bình dao động khoảng – 10 củ, có mẫu giống có số củ 30.2 Dựa vào kết khảo sát cho thấy có số mẫu giống cho suất 10000kg/ha như: KTNN02 với 28 /1ha, KTNN03 với 10 tấn/ha, KTNN04 với 25tấn/ha, KTNN07 với 25tấn/ha, KTNN08 với 21 tấn/ha, KTNN09 với 12.5 tấn/ha, KTNN10 với 13 tấn/ha, KTNN11 với17 tấn/ha, KTNN16 với 13 tấn/ha, KTNN17 với 13 tấn/ha, KTNN22 với 21 tấn/ha, KTNN23 với 18 tấn/ha lại mẫu có suất 10 tấn/ha đặc biệt mẫu KTNN 19 suất thấp với 25kg/ha 4.2 Kết PCR phát gen sương mai 4.2.1 Kết PCR phát gen R1 Chúng sử dụng maker R1F/R(76-2sf2/76-2SR) để phát gen kháng R1 131 giống khoai tây Theo Ballvora cộng sự, 2002, sản phẩm PCR thu với maker cho vạch băng vị trí 1400bp Kết thu có vạch băng giống PI283109 PI189219 cho kích thước 1400bp mơ tả Ballvora Qua phân tích hình ảnh điện di sản phẩm PCR 27 mẫu giống khoai tây nhận thấy có 13 giếng cho vạch băng vị trí 1400bp, kích thước mơ tả Như kết luận sơ có 13 mẫu giống khoai tây có chứa gen R1 gồm mẫu giống: KTNN01, KTNN02, KTNN03, KTNN05, KTNN06, KTNN08, KTNN11, KTNN15, KTNN16, KTNN20, KTNN21, KTNN22, KTNN23, KTNN25 10 11 12 13 14 15 16 1400pb Hình Hình ảnh điện di phát gen R1 40 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 1400pb Hình Hình ảnh điện di phát gen R1 (Chú thích: “1”-KTNN01, “2”-KTNN02, “3”-KTNN03, “4”-KTNN04, “5”KTNN05, “6”-KTNN06, “7”-KTNN07, “8”-KTNN08, “9”-KTNN09, “10”-KTNN10, “11”-KTNN11, “12”-KTNN12, “13”-KTNN13, “14”-KTNN14, “15”-KTNN15, “16”-KTNN16, “17”-KTNN17, “18”-KTNN19, “20”-KTNN20, “21”-KTNN21, “22”-KTNN22, “23”-KTNN23, “24”-KTNN24, “25”-KTNN25, “26”-KTNN26, “27”-KTNN2) 4.2.2 Kết PCR phát gen R3a Sử dụng maker R3-1380 để phát gen kháng R3a 27 giống khoai tây Theo Sokolova cộng 2011, sản phẩm PCR thu với mồi cho vạch băng vị trí 1380bp Kết thu có 13 vạch băng giống cho kích thước 1380bp mơ tả Sokolova Qua phân tích hình ảnh điện di sản phẩm PCR 27 mẫu giống khoai tây nhận thấy có 13 giếng cho vạch băng vị trí 1380bp, kích thước mơ tả Như kết luận sơ có 13 mẫu giống khoai tây có chứa gen R3a gồm mẫu giống:KTNN001, KTNN03, KTNN06, KTNN10, KTNN11, KTNN16, KTNN17, KTNN18, KTNN19, KTNN21 KTNN22, KTNN23, KTNN24 41 10 11 12 13 14 15 16 1380P B Hình Hình ảnh điện di phát gen R3a 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 1380PB Hình Hình ảnh điện di phát gen R3a (Chú thích: “1”-KTNN01, “2”-KTNN02, “3”-KTNN03, “4”-KTNN04, “5”KTNN05, “6”-KTNN06, “7”-KTNN07, “8”-KTNN08, “9”-KTNN09, “10”-KTNN10, “11”-KTNN11, “12”-KTNN12, “13”-KTNN13, “14”-KTNN14, “15”-KTNN15, “16”-KTNN16, “17”-KTNN17, “18”-KTNN19, “20”-KTNN20, “21”-KTNN21, 42 “22”-KTNN22, “23”-KTNN23, “24”-KTNN24, “25”-KTNN25, “26”-KTNN26, “27”-KTNN2)  Qua tìm thấy số giống có hai gen R1 R3a bao gồm : KTNN001, KTNN03, KTNN06, KTNN11, KTNN16, KTNN21 KTNN22, KTNN23 43 V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu, đánh giá đặc điểm nông sinh học khả kháng bệnh sương mai 27 mẫu giống khoai tây nhập nội kể trên, có số kết luận sau: Kết khảo sát đặc điểm nông sinh học mẫu giống cho thấy: 27 mẫu giống khảo sát cho kết khác đặc điểm sinh trưởng phát triển, đặc điểm thân củ cho kết khác suất Kết PCR cho thấy có 13 mẫu có chứa gen R1 gồm mẫu giống:KTNN01, KTNN02, KTNN03, KTNN05, KTNN06, KTNN08, KTNN11, KTNN15, KTNN16, KTNN20, KTNN21, KTNN22, KTNN23, KTNN24 13 mẫu có chứa gen R3a gồm mẫu giống: KTNN001, KTNN03, KTNN06, KTNN10, KTNN11, KTNN16, KTNN17, KTNN18, KTNN19, KTNN21 KTNN22, KTNN23, KTNN25 mẫu gen R1 R3a bao gồm : KTNN001, KTNN03, KTNN06, KTNN11, KTNN16, KTNN21 KTNN22, KTNN23 Một số mẫu có chứa gen R1 R3a suất sản lượng lại chưa cao mẫu KTNN01, KTNN06, KTNN21 Bên cạnh có số mẫu giống có chứa gen suất cao gồm mẫu giống KTNN03, KTNN11, KTNN16, KTNN22, KTNN23 Đặc biệt mẫu giống KTNN03 có khả thích nghi tốt, có khả hoa, chứa gen kháng R1 R3a , có suất cao Chọn mẫu giống khoai tây triển vọng để tiến hành đem lai tạo 44 Hình 10 Mẫu giống khoai tây KTNN03 5.2 Kiến nghị Tiếp tục theo dõi tiêu nông sinh học khác mẫu khoai tây Ứng dụng thị phân tử DNA để phát gen kháng bệnh sương mai mẫu giống khác Có thể sử dụng mẫu có gen R1 R3a để làm đối chứng 45 nghiên cứu Các mẫu giống trồng nhà lưới nên chưa có biểu nhiễm bệnh cần tiếp túc nghiên cứu đưa đồng ruộng thực tế Các mẫu giống khơng có gen kháng khơng có biểu bệnh cần nghiên cứu thêm Tiến hành lây nhiễm nhân tạo với mẫu giống theo dõi để khẳng định khả kháng bệnh sương mai mẫu giống 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng việt Bộ NN PTNT (2011) Tiêu chuẩn ngành QCVN 01-59 : 2011/BNNPTNT Đào Mạnh Hùng (1996) Đánh giá khả sử dụng giống khoai tây nhập nội từ đứ c vào số tỉnh phía Bắc Việt Nam Luận án phó tiến sỹ khoa học Nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội Hà Viết Cường (2008) Bài giảng Miễn dịch học thực vật Gs.Ts.Vũ Triệu Mân (2007) Giáo trình bệnh chuyên khoa Nhà xuất Nông Nghiệp: 2007,99 Nguyễn Quang Thạch (1993) Một số biện pháp khắc phục thối hóa giống khoai tây (Solanum tuberosum L.) vùng đồng Bắc Bộ Luận án PTS khoa học nông nghiệp Nguyễn Thị Thuận (2010) Khảo sát đặc tính nơng sinh học đặc trưng kháng bệnh mốc sương, bệnh virus (PVX, PVY) số dòng khoai tây nhị bội phục vụ cho công tác tạo giống dung hợp tế bào trần Luận văn thạc sĩ nông nghiệp năm 2010 Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Trần Yến Chi (2009) Nghiên cứu nấm Phytophthora infestans gây bệnh mốc sương mai cà chua, khoai tây vụ đông xuân năm 2008-2009 số tỉnh phía bắc Việt Nam Luận văn thạc sĩ nông nghiệp năm 2009 Trường đại học Nơng Nghiệp Hà Nội Vũ Thị Bích Dẫn cộng (1995) Kết khảo nghiệm giống biện pháp kỹ thuật trồng khoai tây vụ sớm đồng Bắc Bộ từ 1991 –1995 Kết nghiên cứu khoa học có củ (1991-1995) N h b ả n x u ấ t Nông nghiệp, Hà Nội, trang 93-102 Ngô Thị Xuyên, Lê Hồng Vĩnh, Burger Hermansen (2005) Nghiên cứu đặc điểm nấm Phytophthora infestans Việt Nam 10 Ngô Văn Hải (1997) Tác động sách kinh tế- xã hội đến sản xuất khoai tây nước ta biện pháp thúc đẩy sản xuất khoai tây Tạp chí khoa học công nghệ quản lý kinh tế, Viện kinh tế Nông nghiệp, trang 157 - 159 11 Vũ Hoan (1973) Nghiên cứu hình thái nấm Phytophthora infestans 47 gây bệnh mốc sương cà chua Tạp chí KHKTNN số 129, tr 178-183 12 Vũ Hoan (1967) Bệnh sương mai hại cà chua Tạp chí KHKTNN số 29, tr.339-340 Tài liệu tham khảo tiếng anh Autin et al (1985) Transfer of resistance to potato lesf virus from Solana brevidens into Solanum tuberosum by somatic fusion Plant Scienna 89 75 -82 Ballvora A., Ercolano M.R., Weiß J., Meksem K., Bormann C.,Oberhagemann P., Salamini F., Gebhardt C ( 2002) The R1 gen for potato resistance to late blight (Phytophthora infestans) belongs to the leucine zipper/NBS/LRR class of plant resistance gens The Plant Journal 30: 361–371 Binding h and Nehls R (1977) Regenration of isolated protoplasts to plant in Solanum dulcalara L Z pflenzenphysiol 85.279 – 280 Bokelmenn G S and Roest (1983) Plant regenation from protoplasts of potato Sonalum tuberosum cv Bintje Z Pflanzenphysiol 109 256- 265 Butenko R G., and kuckko (1980) Somatic hybridization of Solanum tuberosum and Solanum chacoense Bitt by protoplast fusion In: Ferenczy L and Farkas G L (eds): Advance in protoplasts research Pergamon press,Oxford.293 - 300 Champouret N (2010) Functional genomics of Phytophthora infestans effectors and Solanum resistance gens PhD thesis Wageningen Univ 154 pp Crosier W (1934) Studies in the biology of Phytophthora infestans(Mont) De Bary., Cornell University Agricutural Experiment sation, Ithaca, NY Dr Fry’s, Dr Shaw’s (1997) Laboratory manual for Phtophthora infestans work at CIP-QUITO 7/1997 E A Sokolovaa, M P Beketova, and E E Khavkin (2010) DNA Markers of the R1and R3 Gens as Predictors of Potato Late Blight Resistance Russian Agricultural Sciences, 2010, Vol 36, No 5, pp 334–337 10 El Kharbotly A, Leonards-Schippers C, Huigen DJ, Jacobsen E, Pereira A, et al ( 1994) Segregation analysis and RFLP mapping of the R1 and R3 alleles conferring race-specific resistance to Phytophthora infestans in 48 progeny of dihaploid potato parents.Mol Gen Gent.242:749–54 11 Hartman, G.L and Huang, Y.H (1995) Characterization of Phytophthora infestans isolates and development of late blight on tomato in Tawain, Plant disease, vol 79, P 849-852 12 Kim, HH; Kyung; J; Ohkawa, K; Pak, CH and Kwack, BH (1999) Flower Industry in Korea In: Proceeding International Symposium on Cut Flower in the Tropics; Bogota, Colombia 14- 17 Oct 1997, Ed G Fischer &A Angarita.Acta Hort 482, pp.407- 413 13 Jagesh K Tiwari, Sundaresha Siddappa, Bir Pal Surinder K Kaushik, Swarup K Chakrabarti, Vinay Bhardwaj and Poonam (2013) Molecular markers for late blight resistance breeding of potato: an update Plant Breeding 132, 237–245 14 Leonards-Schippers C., Gieffers W., Salamini F., Gebhardt C (1992) The R1 gen conferring race-specific resistance to 101 Phytophthora infestans in potato is located on potato chromosome V Mol Gen Gent 233: 278–283 15 Sokolova, E., A Pankin, M Beketova, M Kuznetsova, S Spiglazova, E.Rogozina, I Yashina, and E Khavkin (2011) SCAR markers of the R-gens and germplasm of wild Solanum species for breeding late blight-resistant potato cultivars Plant Gent Resour.9, 309— 312 16 Stewart, H.E., Bradshaw, J.E., and Pande, B (2003) The Effect of the Presence of R-Gens for Resistance to Late Blight (Phytophthora infestans) of Potato (Solanum tuberosum) on the Underlying Level of Field Resistance Plant Pathol., 2003, vol 52, pp 193–198 49