Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài “Kiểm tra an toàn - hiệu lực và thời gian bảo quản của vacxin xuất huyết thỏ” đã được thực hiện tại phòng nghiên cứu vi trùng - trung tâm nghiên cứu Thú Y và trại chăn nuôi thuộc ban kiểm nghiệm của Công Ty Thuốc Thú y Trung Ương. Thời gian thực hiện từ ngày 10/02/2007 đến ngày 31/10/2007. Vacxin được kiểm tra do Công Ty Thuốc Thú y Trung Ương cung cấp. Với các chỉ tiêu theo dõi: kiểm tra vô trùng, an toàn, hiệu lực và thời gian bảo quản của vacxin sau 3, 6 tháng và tiến hành như sau: - Kiểm tra vô trùng của vacxin trên môi trường thạch máu, thạch nấm, nước thịt dinh dưỡng và môi trường yếm khí. - Kiểm tra an toàn của vacxin trên thỏ với liều tiêm gấp đôi liều quy định. - Kiểm tra hiệu lực của vacxin trên thỏ bằng phương pháp công cường độc. - Kiểm tra vacxin sau 3 tháng, 6 tháng bảo quản ở 2-80C. Kết quả thí nghiệm: - Kiểm tra vô trùng: vacxin đạt tiêu chuẩn về mặt vô trùng vì không có bất cứ loại vi sinh vật nào mọc trên các môi trường trong thời gian theo dõi. - Kiểm tra an toàn: Thỏ thí nghiệm được tiêm vacxin theo dõi trong 7 ngày, thỏ không có biểu hiện bất thường nào, tất cả vẫn khỏe mạnh và phát triển bình thường. - Kiểm tra hiệu lực: Kết quả ghi nhận các thỏ được gây miễn dịch đều sống khỏe mạnh không có biểu hiện bất thường nào với tỉ lệ bảo hộ 100% ở 3 lô vacxin và có hiệu giá kháng thể HI ≥ 1/40. Các thỏ ở 3 lô đối chứng đều chết 100% ở thể cấp tính, thời gian thỏ chết dao động từ 17 - 26 giờ với triệu chứng và bệnh tích điển hình của bệnh xuất huyết thỏ. - Kết quả kiểm tra thời gian bảo quản vacxin sau 3 tháng, 6 tháng. Vacxin xuất huyết thỏ sau khi bảo quản 3 tháng và 6 tháng vẫn có khả năng bảo hộ tốt trên thỏ. Tỷ lệ bảo hộ đạt 80% - 100% ở 3 lô vacxin và các thỏ ở lô vacxin này có hiệu giá kháng thể HI ≥ 1/40.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KIỂM TRA AN TOÀN - HIỆU LỰC VÀ THỜI GIAN BẢO QUẢN CỦA VACXIN XUẤT HUYẾT THỎ Họ tên sinh viên : NGUYỄN LÊ HOÀNG THÀNH Ngành : Thú Y Lớp : Tại chức 19 Niên khóa : 2002-2007 Tháng 11/2007 KIỂM TRA AN TOÀN - HIỆU LỰC VÀ THỜI GIAN BẢO QUẢN CỦA VACXIN XUẤT HUYẾT THỎ Tác giả NGUYỄN LÊ HỒNG THÀNH Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sỹ ngành Thú y Giáo viên hướng dẫn: Th.S TRẦN THỊ BÍCH LIÊN TS TRẦN XUÂN HẠNH BSTY TÔ THỊ PHẤN Tháng 11 năm 2007 i LỜI CẢM TẠ Lòng biết ơn sâu sắc đến Công ơn sinh thành dưỡng dục cha mẹ, hy sinh suốt đời cho có ngày hơm Th.s Trần Thị Bích Liên TS Trần Xn Hạnh BSTY Tơ Thị Phấn BSTY Nguyễn Thị Thu Lan BSTY Ngô Đức Đã tận tình giúp đỡ, hướng dẫn động viên truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho suốt q trình thực hồn tất khóa luận tốt nghiệp Ban Giám Hiệu Trường Đại học Nông Lâm Tp HCM Ban Chủ Nhiệm toàn thể quý thầy cô khoa Chăn Nuôi – Thú Y trường Đại học Nơng Lâm Tp HCM tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho tơi q trình học tập trường Ban Giám Đốc Công Ty Thuốc Thú Y Trung Ương TP Hồ Chí Minh Đã tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian thực tập Cảm ơn bạn bè toàn thể lớp TY 19 chung sức giúp đỡ tơi suốt q trình học tập ii TĨM TẮT LUẬN VĂN Đề tài “Kiểm tra an tồn - hiệu lực thời gian bảo quản vacxin xuất huyết thỏ” thực phòng nghiên cứu vi trùng - trung tâm nghiên cứu Thú Y trại chăn nuôi thuộc ban kiểm nghiệm Công Ty Thuốc Thú y Trung Ương Thời gian thực từ ngày 10/02/2007 đến ngày 31/10/2007 Vacxin kiểm tra Công Ty Thuốc Thú y Trung Ương cung cấp Với tiêu theo dõi: kiểm tra vô trùng, an toàn, hiệu lực thời gian bảo quản vacxin sau 3, tháng tiến hành sau: - Kiểm tra vô trùng vacxin môi trường thạch máu, thạch nấm, nước thịt dinh dưỡng môi trường yếm khí - Kiểm tra an tồn vacxin thỏ với liều tiêm gấp đôi liều quy định - Kiểm tra hiệu lực vacxin thỏ phương pháp công cường độc - Kiểm tra vacxin sau tháng, tháng bảo quản 2-80 C Kết thí nghiệm: - Kiểm tra vơ trùng: vacxin đạt tiêu chuẩn mặt vơ trùng khơng có loại vi sinh vật mọc môi trường thời gian theo dõi - Kiểm tra an tồn: Thỏ thí nghiệm tiêm vacxin theo dõi ngày, thỏ khơng có biểu bất thường nào, tất khỏe mạnh phát triển bình thường - Kiểm tra hiệu lực: Kết ghi nhận thỏ gây miễn dịch sống khỏe mạnh biểu bất thường với tỉ lệ bảo hộ 100% lơ vacxin có hiệu giá kháng thể HI ≥ 1/40 Các thỏ lô đối chứng chết 100% thể cấp tính, thời gian thỏ chết dao động từ 17 - 26 với triệu chứng bệnh tích điển hình bệnh xuất huyết thỏ - Kết kiểm tra thời gian bảo quản vacxin sau tháng, tháng Vacxin xuất huyết thỏ sau bảo quản tháng tháng có khả bảo hộ tốt thỏ Tỷ lệ bảo hộ đạt 80% - 100% lơ vacxin thỏ lơ vacxin có hiệu giá kháng thể HI ≥ 1/40 iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm tạ ii Tóm tắt luận văn iii Mục lục iv Các từ viết tắt vii Danh sách bảng viii Danh sách hình iix Danh sách biểu đồ .x Chương MỞ ĐẦU 1.1.ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Chương TỒNG QUAN .3 2.1 LỊCH SỬ VỀ BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN THỎ 2.1.1 Khái niệm 2.1.2 Lịch sử bệnh 2.2 CÁC ĐẶC ĐIỂM VỀ RHD .3 2.2.1 Nguyên nhân gây bệnh 2.2.2 Tình hình nhiễm bệnh giới .4 2.2.3 Tình hình nhiễm bệnh Việt Nam 2.2.4 Đặc tính ni cấy phân lập .5 2.3 DỊCH TỄ HỌC 2.3.1 Loài mắc bệnh, mùa vụ mắc bệnh 2.3.2 Chất chứa mầm bệnh .5 2.3.3 Cách thức lan truyền 2.3.4 Triệu chứng 2.3.4.1 Thể cấp .6 2.3.4.2 Thể cấp cấp tính iv 2.3.4.3 Thể mãn tính .6 2.3.5 Bệnh tích 2.3.6 Các phương pháp chẩn đoán bệnh xuất huyết thỏ .6 2.3.6.1 Chẩn đoán dịch tễ lâm sàng 2.3.6.2 Chẩn đoán cận lâm sàng .6 2.3.7 Phòng bệnh 2.3.7.1 Phương pháp phòng bệnh 2.3.7.2 Phương pháp ngăn chặn dịch bệnh 2.4 QUÁ TRÌNH ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH 2.4.1 Kháng nguyên 2.4.1.1 Định nghĩa 2.4.1.2 Những đặc tính kháng nguyên .8 2.4.2 Kháng thể .9 2.4.2.1 Định nghĩa 2.4.2.2 Cấu trúc phân loại kháng thể 2.4.3 Miễn dịch thu 11 2.4.3.1 Định nghĩa 11 2.4.3.2 Các giai đoạn miễn dịch thu 11 2.5 VACXIN VÀ NGUYÊN LÝ TÁC DỤNG 12 2.6 PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT VACXIN RHD 14 2.7 TIÊU CHUẨN CỦA VACXIN 14 2.7.1 Những điều cần ý sử dụng vacxin 15 2.8 NHỮNG CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ VACXIN RHD .16 Chương NỘI DUNG,VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 17 3.1.1 Thời gian 17 3.1.2 Địa điểm 17 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 17 3.3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.3.1 Vật liệu thí nghiệm 17 3.3.2 Phương pháp nghiên cứu .18 v 3.3.2.1 Kiểm tra vô trùng, an toàn hiệu lực vacxin xuất huyết thỏ 18 3.3.2.2 Kiểm tra vacxin xuất huyết thỏ sau bảo quản tháng, tháng 20 3.3.2.3 Kỹ thuật HI .21 3.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU 22 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 KẾT QUẢ KIỂM TRA VÔ TRÙNG AN TOÀN VÀ HIỆU LỰC VACXIN .23 4.1.1 Kết kiểm tra vô trùng 23 4.1.2 Kết kiểm tra an toàn vacxin 23 4.1.3 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin .24 4.2 KIỂM TRA VACXIN XUẤT HUYẾT THỎ SAU THỜI GIAN BẢO QUẢN 28 4.2.1 Kết kiểm tra vacxin xuất huyết thỏ bảo quản tháng .28 4.2.2 Kết kiểm tra vacxin xuất huyết thỏ bảo quản tháng .31 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 35 5.1 KẾT LUẬN 35 5.2 ĐỀ NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO .36 vi CÁC TỪ VIẾT TẮT RHD (Rabbit Haemorrhagic Diease): Bệnh xuất huyết thỏ RHDV : Virus gây bệnh xuất huyết thỏ HA (Haemagglutination): Test phản ứng ngưng kết hồng cầu HI (Haemagglutination Inhibition): Test phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu KN : Kháng nguyên KT : Kháng thể HGKT : Hiệu giá kháng thể PBS (Phosphate buffer saline): Muối đệm phosphate ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay): Kỹ thuật miễn dịch liên kết enzyme MD : Miễn dịch ĐC : Đối chứng XHT : Xuất huyết thỏ BSA (bovine serum albumin): Albumin huyết bò OD (Optical densities): Mật độ quang học 100 LD50 (lethal dose): 100 lần liều gây chết 50% vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1: Bố trí thí nghiệm kiểm tra an toàn 19 Bảng 3.2: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau công cường độc 20 Bảng 3.3: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau công cường độc cho đợt kiểm tra 21 Bảng 4.1: Kết kiểm tra an toàn vacxin 23 Bảng 4.2: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau công cường độc 24 Bảng 4.3: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm vacxin 21 ngày 27 Bảng 4.4: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80 C .29 Bảng 4.5: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng 30 Bảng 4.6: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80 C .32 Bảng 4.7: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng 33 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Hình thái RHDV Hình2.2: Cấu trúc kháng thể antibody Hình 4.1: Triệu chứng thỏ chết bệnh RHD 25 Hình 4.2: Xuất huyết mũi 26 Hình 4.3: Bệnh tích xuất huyết phổi 26 Hình 4.4: Bệnh tích xuất gan thỏ 27 ix Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 KẾT QUẢ KIỂM TRA VƠ TRÙNG AN TỒN VÀ HIỆU LỰC VACXIN 4.1.1 Kết kiểm tra vô trùng lô vacxin xuất huyết thỏ (lô 1, lô lô 3) sau sản xuất, tiến hành kiểm tra vô trùng môi trường: nước thịt dinh dưỡng, thạch máu, mơi trường yếm khí, thạch nấm theo dõi thời gian ngày Kết cho thấy tồn mơi trường cấy sau ngày khơng có loại vi sinh vật mọc môi trường cấy Như lô vacxin đạt tiêu chuẩn vô trùng Chúng dùng lô vacxin đạt tiêu chuẩn vơ trùng để tiến hành kiểm tra an tồn 4.1.2 Kết kiểm tra an tồn vacxin Chúng tơi tiến hành kiểm tra an tồn lơ vacxin xuất huyết thỏ sau tiêm vacxin da liều gấp đôi liều sử dụng cho thỏ khỏe mạnh (3 thỏ/1 lơ) có trọng lượng từ 1,8 - kg/con theo dõi thời gian ngày Kết ghi nhận bảng 4.1 Bảng 4.1: Kết kiểm tra an toàn vacxin Động Số lượng vật (con) Lô Thỏ Lô Thỏ Lô Thỏ Lô vacxin Liều tiêm Số sống/ số tiêm Kết 3/3 Đạt 3/3 Đạt 3/3 Đạt (ml) Qua bảng 4.1 nhận thấy: Mặc dù tiêm vacxin với liều gấp đôi liều sử dụng thỏ thí nghiệm lơ vacxin khỏe mạnh phát triển bình thường Như lô vacxin kiểm tra đạt tiêu chuẩn an tồn 23 Trên lơ vacxin đạt tiêu chuẩn an toàn tiến hành kiểm tra hiệu lực 4.1.3 Kết kiểm tra hiệu lực vacxin Để đánh giá hiệu lực vacxin tiến hành tiêm vacxin gây miễn dịch cho thỏ khỏe mạnh thỏ đối chứng không tiêm vacxin (cho lô vacxin) Sau 21 ngày gây miễn dịch tất thỏ thử thách cường độc theo dõi thời gian 10 ngày Kết trình bày qua bảng 4.2 biểu đồ 4.1 Bảng 4.2: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau công cường độc (%) Lô vacxin Lô Lô Lô Động vật Thỏ Thỏ Thỏ Lơ thí nghiệm Số Liều lượng vacxin Số sống Chủng công- /số liều công công Tỷ lệ Thời gian bảo hộ thỏ chết (%) (giờ) (con) (ml) MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 17 - 20 MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 17 - 26 MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 18 - 22 (con) Tỷ lệ (%) 100 80 60 Thỏ ĐC Thỏ MD 40 20 Lô Lô Lô Lô vacxin Biểu đồ 4.1: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau công cường độc (%) Chúng nhận thấy tất thỏ miễn dịch vacxin xuất huyết thỏ lô 1, lô lô bảo hộ, sống khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường sau công cường độc 24 Tất thỏ đối chứng lô vacxin chết 100% với biểu bệnh thể cấp tính, thời gian thỏ chết lô từ 17 - 20 giờ, lô từ 17 - 26 lô từ 18 - 22 Các thỏ chết lơ đối chứng có triệu chứng điển hình bệnh xuất huyết thỏ sốt cao, bỏ ăn, co giật, nhảy không định hướng, máu lẫn bọt trào lỗ mũi (biểu đặc trưng bệnh xuất huyết thỏ ngồi thực địa) Hình 4.1: Triệu chứng thỏ chết bệnh RHD Sau thỏ chết tiến hành mổ khám ghi nhận bệnh tích Bệnh tích phổ biến: Gan sưng, xuất huyết, hoại tử Phổi, khí quản xuất huyết nặng Các bệnh tích khác lách tim xuất huyết 25 Xuất huyết mũi Hình 4.2: Xuất huyết mũi Xuất huyết phổi Hình 4.3: Bệnh tích xuất huyết phổi 26 Gan sưng xuất huyết Hình 4.4: Bệnh tích xuất gan thỏ Như lô vacxin đạt tiêu chuẩn hiệu lực Để đánh giá mức độ kháng thể sau chủng vacxin xuất huyết thỏ, tiến hành lấy máu tất thỏ lơ thí nghiệm trước sau chủng vacxin 21 ngày để kiểm tra hiệu giá kháng thể phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI), kết kiểm tra cho thấy trước tiêm vacxin tất thỏ có kết HI âm tính Sau tiêm vacxin 21 ngày, kết hiệu giá kháng thể trình bày bảng 4.3 biểu đồ 4.2 Bảng 4.3: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm vacxin 21 ngày Lô vacxin Lô vacxin Lô vacxin Tổng cộng Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ Số Tỷ lệ mẫu (%) mẫu (%) mẫu (%) mẫu (%) 1/10 0/5 0/5 0/5 0/5 1/20 0/5 0/5 0/5 0/5 1/40 3/5 60 4/5 80 3/5 60 10/15 66,67 1/80 2/5 40 1/5 20 1/5 20 4/15 26,67 1/160 0/5 0/5 1/5 20 1/15 6,66 Hiệu giá kháng thể 27 + Thỏ có hiệu giá kháng thể HI ≥ 1/10 xem bảo hộ (nguồn: Trần Xuân Hạnh ctv,2003) Tỷ lệ (%) 80 70 60 50 40 30 20 10 80 60 60 40 20 20 20 00 0 1/10 1/20 Lô Lô Lô 0 1/40 1/80 1/160 Hiệu giá kháng thể Biểu đồ 4.2: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm vacxin 21 ngày Qua bảng 4.3 cho thấy tất thỏ sau tiêm vacxin 21 ngày hiệu giá kháng thể cao thỏ lô ghi nhận biến động từ 1/40 - 1/160, mẫu lơ tiêm vacxin có hiệu giá kháng thể HI >1/10, số mẫu có hiệu giá kháng thể HI 1/40 chiếm tỷ lệ 66,67%; 1/80 chiếm tỷ lệ 26,67% 1/160 chiếm tỷ lệ 6,66% Điều chứng tỏ vacxin xuất huyết thỏ Công ty Thuốc Thú Y Trung Ương sản xuất có khả bảo hộ bệnh thỏ 4.2 KIỂM TRA VACXIN XUẤT HUYẾT THỎ SAU THỜI GIAN BẢO QUẢN Bảo quản vacxin có ý nghĩa định đến chất lượng hiệu lực vacxin, bảo quản khơng tốt thời hạn sử dụng vacxin bị rút ngắn nhiều 4.2.1 Kết kiểm tra vacxin xuất huyết thỏ bảo quản tháng lô vacxin xuất huyết thỏ sau kiểm tra đạt tiêu chuẩn vơ trùng, an tồn hiệu lực bảo quản - 80C Sau tháng lô vacxin kiểm tra lại hiệu lực Kết trình bày bảng 4.4 biểu đồ 4.3 28 Bảng 4.4: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80 C (%) Số Lô vacxin Thời Lô Số Liều gian bảo thí lượng vacxin quản nghiệm (con) (ml) Chủng công - liều công sống Tỷ lệ /số bảo hộ công (%) Thời gian thỏ (con) Lô Lô Lô 3 tháng tháng tháng chết (giờ) MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 20 - 25 MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 19 - 25 MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 23 - 24 Tỷ lệ (%) 100 80 60 Thỏ ĐC Thỏ MD 40 20 Lô vacxin Lô Lô Lô Biểu đồ 4.3: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80C (%) Kết cho thấy tất thỏ gây miễn dịch vacxin lô 1, lô lô sau tháng bảo quản - 80C bảo hộ tốt sau công cường độc, thỏ sống khỏe mạnh khơng có biểu bất thường Trong tất thỏ đối chứng lô vacxin chết 100 % với biểu bệnh thể cấp tính Thời gian thỏ chết lô từ 20 - 25 giờ, lô từ 19 - 25 giờ, lô từ 23 - 24 Các biểu thỏ bị chết lơ đối chứng sốt cao, bỏ ăn, co giật, nhảy không định hướng, máu lẫn bọt trào lỗ mũi 29 Sau thỏ chết tiến hành mổ khám ghi nhận bệnh tích Bệnh tích phổ biến: gan sưng, xuất huyết, hoại tử, phổi, khí quản xuất huyết nặng bệnh tích khác lách tim xuất huyết Những bệnh tích tương tự bệnh tích đặc trưng bệnh xuất huyết thỏ ngồi thực địa Như lô vacxin sau bảo quản tháng đạt tiêu chuẩn hiệu lực Để đánh giá mức độ kháng thể sau chủng vacxin xuất huyết thỏ, tiến hành lấy máu tất thỏ lơ thí nghiệm trước sau chủng vacxin 21 ngày để kiểm tra hiệu giá kháng thể phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI), kết kiểm tra cho thấy trước tiêm vacxin tất thỏ có kết HI âm tính Sau tiêm vacxin 21 ngày, kết hiệu giá kháng thể vacxin bảo quản tháng trình bày qua bảng 4.5 biểu đồ 4.4 Bảng 4.5: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng Hiệu giá Lô vacxin kháng thể Số mẫu Tỷ lệ (%) Lô vacxin Số mẫu Tỷ lệ (%) Lô vacxin Số mẫu Tỷ lệ (%) Tổng cộng Số mẫu Tỷ lệ (%) 1/10 0/5 0/5 0/5 0/5 1/20 0/5 0/5 0/5 0/5 1/40 5/5 100 2/5 40 4/5 80 11/15 73,33 1/80 0/5 3/5 60 1/5 20 4/15 26,67 30 100 Tỷ lệ (%) 100 90 80 80 70 60 60 50 Lô Lô Lô 40 40 30 20 20 10 0 0 0 1/10 1/20 0 1/40 1/80 Hiệu giá kháng thể Biểu đồ 4.4: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng Qua bảng 4.5 biểu đồ 4.4 cho thấy tất thỏ tiêm vacxin sau tháng bảo quản cho đáp ứng miễn dịch tốt với tỷ lệ hiệu giá kháng thể HI 1/40 chiếm tỷ lệ 73,33% tỷ lệ hiệu giá kháng thể HI 1/80 chiếm 26,67% Điều chứng tỏ vacxin xuất huyết thỏ Công ty Thuốc Thú y Trung Ương sản xuất sau bảo quản tháng có khả bảo hộ bệnh thỏ 4.2.2 Kết kiểm tra vacxin xuất huyết thỏ bảo quản tháng Để đánh giá vacxin sau tháng bảo quản, tiến hành kiểm tra hiệc lực làm tháng Kết trình bày bảng 4.6 biểu đồ 4.5 31 Bảng 4.6: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80 C (%) Thời Thời Lô Số Liều Số sống Tỷ lệ Lô Chủng công gian thỏ gian bảo thí lượng vacxin /số cơng bảo hộ vacxin - liều công chết quản nghiệm (con) (ml) (con) (%) (giờ) Lô Lô Lô tháng tháng tháng MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 22-25 MD ml Virus XHT- 4/5 80 ĐC - 1ml 10-1 0/3 21-23 MD ml Virus XHT- 5/5 100 ĐC - 1ml 10-1 0/3 23-27 Tỷ lệ (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Thỏ ĐC Thỏ MD Lô Lô Lô Lô vacxin Biểu đồ 4.5: Tỷ lệ bảo hộ vacxin sau tháng bảo quản - 80C (%) Kết cho thấy tất thỏ miễn dịch vacxin xuất huyết thỏ lô 1và lô sau tháng bảo quản - 80C bảo hộ 100% sống khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường sau công cường độc Ở lô tỷ lệ bảo hộ 80% sau cơng cường độc ngày thứ có thỏ gây miễn dịch bị chết khơng có triệu chứng bệnh xuất huyết thỏ chết không rõ nguyên nhân, tiến hành mổ khám để kiểm tra bệnh tích khơng thấy biểu bệnh tích đặc trưng bệnh xuất huyết thỏ Trong tất thỏ đối chứng lô vacxin chết 100% với biểu bệnh thể cấp tính 32 thời gian thỏ chết dao động lô từ 22 - 25 giờ, lô từ 21 - 23 lô từ 23 27 với triệu chứng bệnh tích điển hình bệnh xuất huyết thỏ đợt thí nghiệm trước Như lô vacxin sau bảo quản tháng đạt tiêu chuẩn hiệu lực Để đánh giá mức độ hiệu giá kháng thể sau chủng vacxin bảo quản tháng, tiến hành lấy máu tất thỏ lơ thí nghiệm trước sau chủng vacxin 21 ngày để kiểm tra hiệu giá kháng thể phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI), kết kiểm tra cho thấy trước tiêm vacxin tất thỏ có kết HI âm tính Sau tiêm vacxin 21 ngày, kết hiệu giá kháng thể vacxin bảo quản tháng trình bày qua bảng 4.7 biểu đồ 4.6 Bảng 4.7: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng Lô vacxin Lô vacxin Lô vacxin Tổng cộng Hiệu giá kháng thể Số mẫu Tỷ lệ Tỷ lệ Số mẫu (%) Tỷ lệ Số mẫu (%) Tỷ lệ Số mẫu (%) (%) 1/10 0/5 0/5 0/5 0/5 1/20 0/5 0/5 0/5 0/5 1/40 5/5 100 3/5 60 4/5 80 12/15 80 1/80 0/5 2/5 40 1/5 20 3/15 20 33 Tỷ lệ (%) 100 100 90 80 80 70 60 60 50 40 40 30 20 20 10 Lô Lô Lô 0 0 0 1/10 1/20 1/40 1/80 Hiệu giá kháng thể Biểu đồ 4.6: Tỷ lệ mức hiệu giá kháng thể sau tiêm 21 ngày vacxin bảo quản tháng Qua bảng 4.7 biểu đồ 4.6 cho thấy vacxin sau tháng bảo quản - 80C cho đáp ứng miễn dịch tốt với tỷ lệ hiệu giá kháng thể HI 1/40 chiếm tỷ lệ 80% tỷ lệ hiệu giá kháng thể HI 1/80 chiếm 20% Điều chứng tỏ vacxin xuất huyết thỏ Công ty Thuốc Thú y Trung Ương sản xuất sau tháng bảo quản có khả bảo hộ bệnh 34 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN - Vacxin phòng bệnh xuất huyết thỏ Công ty Thuốc Thú y Trung Ương sản xuất đạt tiêu chuẩn an toàn hiệu lực - Thời gian bảo quản vacxin phòng bệnh xuất huyết thỏ nhiệt độ - 80C tháng (thời điểm kiểm tra) 5.2 ĐỀ NGHỊ - Cần theo dõi độ dài miễn dịch độ dài bảo quản vacxin - Tiếp tục thử nghiệm vacxin diện rộng thực địa 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Vũ Triệu An (1997) Miễn dịch học Nhà xuất Y học Trang 26 – 352 Lý Thanh Cường (2005) Tình hình chăn ni thỏ khả bảo hộ vacxin phòng bệnh xuất huyết virus đàn thỏ xã huyện Chợ Gạo Tỉnh Tiền Giang Luận văn tốt nghiệp Phạm Thành Long Phương Song Liên (2004) Phát virus gây chết cấp tính cho đàn thỏ sinh sản Trung tâm nghiên cứu dê thỏ Sơn Tây.Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y Trang 95 – 96 Trần Xuân Hạnh ctv (2003) Bệnh xuất huyết thỏ (RHD) Kết bước đầu nghiên cứu vacxin vơ hoạt phịng bệnh Báo cáo khoa học Chăn nuôi Thú y 2002 - 2003, phần Thú y Trang 349 – 359 Trần Hữu Ngọc, 2004 Đánh giá an toàn hiệu lực vacxin đa giá tụ huyết trùng phòng bệnh cho heo Luận văn tốt nghiệp Bác sỹ Thú y, Đại học Nông Lâm, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Huỳnh Cơ Tấn (2005) Đánh giá hiệu lực vacxin phòng bệnh xuất huyết thỏ Luận văn tốt nghiệp cử nhân khoa học chuyên ngành Hóa Sinh – Miễn Dịch Trường Đại học Mở - Bán Công Tp HCM Berninger L.M and House C (1995) Serologic comparison of four isolates of rabbit hamrrhagic diseaise virus Veterinary Microbiology, 47, pp 157-165 OIE (2000) Rabbit haemorrhagic disease “Manual of standard for diagnostic test and vaccines, 4th edition” OIE (2004) Rabbit haemorrhagic disease(RHD) Trang – 24 10 Gillespie R.T (2004) Mordern livestock production Delmar Publishers, UAS, pp 846 - 862 11 Song Bao – Yun, Luo Yi – Shan and Lin, Z (2004) Studies on Rabbit Haemorrhagic Disease Virus Wuhan Institute of Virology, Academia Sinica, Wuhan 430071, China 36 12 Smid B, L Valizek, L Rodak, J Stepanek and E Jurak (1991) Rabbit haemorrhagic disease: An investigation of some properties of the virus and evaluation of an inactivated vaccine Veterinary Microbiology, 26, 77 - 85 Tài liệu internet Truy cập ngày 28 tháng 08 năm 2007 http://.pelican.gulild.uwa.edu.au/ /70_5/14.html hhtp://biology.arizona.edu/immunology/tutorial/structure.html 37