` BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y === *** === VI THUẬT THẮNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, HÓA MÔ MIỄN DỊCH VÀ TÌNH TRẠNG METHYL HÓA GEN RASSF1A TRONG UNG THƯ BIỂU MÔ TUYẾN TIỀN LIỆT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y === *** === VI THUẬT THẮNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, HÓA MÔ MIỄN DỊCH VÀ TÌNH TRẠNG METHYL HÓA GEN RASSF1A TRONG UNG THƯ BIỂU MÔ TUYẾN TIỀN LIỆT Chuyên ngành:Khoa học y sinh Mã số:9720101 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Nguyễn Đình Tảo TS Nguyễn Ngọc Hùng HÀ NỘI - 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu luận án trung thực, xác, chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khoa học khác Nghiên cứu sinh Vi Thuật Thắng ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận án này, tơi nhận giúp đỡ động viên nhiều thầy, cô, anh chị em đồng nghiệp bạn bè Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới: Đảng ủy - Ban Giám đốc Học viện Quân y, Đảng ủy - Ban Giám đốc Bệnh viện Quân y 103 tạo điều kiện thuận lợi giúp hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Nguyễn Đình Tảo người thầy tận tâm khơng tiếc sức mình, khơng truyền đạt cho kiến thức khoa học, phương pháp luận nghiên cứu mà gương lòng say mê nghề nghiệp nghiên cứu khoa học Xin trân trọng cảm ơn TS Nguyễn Ngọc Hùng, người thầy tận tình truyền đạt kinh nghiệm đóng góp cho tơi nhiều nhận xét q báu Xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Trần Ngọc Anh thầy, giúp đỡ tơi q trình sửa chữa, bảo vệ luận án với nhiều kinh nghiệm nhận xét quý báu Xin trân trọng cảm ơn TS Trần Ngọc Dũng, BS Nguyễn Mạnh Hùng, ThS Nguyễn Văn Tuyên, toàn thể anh chị em nhân viên Khoa Giải phẫu bệnh – Pháp y, Bệnh viện Quân y 103, người thầy, người đồng nghiệp giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học tập Xin trân trọng cảm ơn Bộ môn Giải phẫu học và Phịng Sau Đại học Học viện Qn y, Phịng thí nghiệm Sinh y – Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Phòng lưu trữ hồ sơ bệnh án - Bệnh viện Quân y 103, thư viện tạo điều kiện thuận lợi, giúp tơi hồn thành luận án Cho tơi xin ghi nhớ công ơn thầy cô, cha mẹ, anh, chị, vợ tôi, đồng nghiệp bạn bè giúp đỡ, động viên tinh thần vật chất, tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận án này! iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH xi DANH MỤC ẢNH xii ĐẶT VẤN ĐỀ vii CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược giải phẫu, phôi thai, mô học sinh lý tuyến tiền liệt 1.1.1 Sơ lược giải phẫu 1.1.2 Sơ lược phôi thai và sinh lý 1.1.3 Sơ lược mô học .5 1.1.4 Phân loại mô bệnh học ung thư tuyến tiền liệt 1.2 Ung thư tuyến tiền liệt, tân sản nội biểu mô tuyến tiền liệt phân độ mô học ung thư tuyến tiền liệt 12 1.2.1 Ung thư tuyến tiền liệt .12 1.2.2 Tân sản nội biểu mô tuyến tiền liệt 18 1.2.3 Phân độ mô học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt .19 1.3 Xâm lấn di ung thư tuyến tiền liệt23 1.3.1 Xâm lấn chỗ 23 1.3.2 Di 23 1.4 Hố mơ miễn dịch ứng dụng ung thư tuyến tiền liệt 23 1.4.1 Khái niệm hóa mơ miễn dịch .23 iv 1.4.2 Ứng dụng kỹ tḥt hóa mơ miễn dịch chẩn đoán mơ bệnh học27 1.5 Methyl hóa gen RASSF1A ung thư 33 1.5.1 Methyl hóa ADN .33 1.5.2 Methyl hóa gen RASSF1A ung thư tuyến tiền liệt 38 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 45 45 2.1.1 Nhóm nghiên cứu xác định típ mơ bệnh học số đặc điểm mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt 45 2.1.2 Nhóm nghiên cứu hóa mơ miễn dịch 46 2.1.3 Nhóm nghiên cứu methyl hóa gen RASSF1A 46 2.2 Phương pháp nghiên cứu 46 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 46 2.2.2 Vật liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu 47 2.2.3 Các kỹ thuật dùng nghiên cứu 52 2.3 Xử lý số liệu 62 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 62 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 64 3.1 Phân bố tỷ lệ bệnh nhân mắc ung thư biểu mô tuyến tiền liệt theo nhóm tuổi 64 3.1.1 Xác định típ mơ bệnh học biến thể ung thư biểu mô tuyến tiền liệt64 3.2 Kết xác định típ mơ bệnh học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt theo phân loại Tổ chức Y tế Thế giới 65 3.2.1 Kết xác định biến thể ung thư biểu mô tuyến nang theo phân loại Tổ chức Y tế Thế giới năm 2004 65 3.3 Kết xác định số đặc điểm mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt 66 3.3.1 Tỷ lệ ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt phối hợp không phối hợp với PIN độ cao .66 v 3.3.2 Phân bố tỷ lệ ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt theo độ biệt hóa/nhóm điểm Gleason .67 3.3.3 Phân bố độ biệt hóa ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt theo mẫu mô học thứ mẫu mô học thứ hai Gleason .68 3.3.4 Phân bố tỷ lệ ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt phối hợp với PIN độ cao theo độ biệt hóa/nhóm điểm Gleason 69 3.3.5 Phân bố tỷ lệ các đặc điểm đặc trưng ác tính của u 69 3.3.6 Phân bố tỷ lệ các đặc điểm đặc trưng ác tính của u theo nhóm điểm Gleason .70 3.3.7 Phân bố tỷ lệ các chất chứa tuyến nang ác tính .71 3.3.8 Phân bố tỷ lệ u chứa tinh thể/chất nhày theo nhóm điểm Gleason72 3.4 Kết nghiên cứu hóa mơ miễn dịch 78 3.4.1 Kết nhuộm hóa mơ miễn dịch ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt78 3.4.2 Các típ mơ bệnh học ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt nhuộm hóa mơ miễn dịch .79 3.4.3 Mức độ bộc lộ PSA tế bào u .79 3.4.4 Phân bố mức độ bộc lộ PSA tế bào u theo độ Gleason 80 3.4.5 Phân bố mức độ bộc lộ PSA tế bào u xâm nhập dây thần kinh80 3.4.6 Tình trạng bộc lộ CK34βE12 p63 tế bào đáy 81 3.4.7 Mức độ bộc lộ CK34βE12 p63 tế bào đáy 82 3.4.8 Tình trạng mức độ bộc lộ CK7 và CK5/6 biểu mơ đường niệu lành tính ác tính 83 3.4.9 Tình trạng mức độ bộc lộ actin các loại tế bào mô đệm 84 3.5 Kết nghiên cứu tình trạng methyl hóa gen RASSF1A 87 3.5.1 Kết tách chiết ADN từ mẫu bệnh phẩm .87 3.5.2 Kết đánh giá hiệu quả của quá trình xử lý bisulfite 87 3.5.3 Kết xác định methyl hóa gen RASSF1A mẫu ung thư89 vi 3.5.4 Kết xác định methyl hóa gen RASSF1A mẫu tăng sản tuyến tiền liệt 90 3.5.5 Mối liên quan giữa methyl hóa gen RASSF1A với một số đặc điểm mô bệnh học ung thư tăng sản lành tính tuyến tiền liệt 91 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 94 4.1 Phân bố tỷ lệ bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến tiền liệt theo nhóm tuổi 94 4.2 Xác định típ biến thể ung thư biểu mô tuyến tiền liệt theo phân loại Tổ chức Y tế Thế giới năm 2004 95 4.3 Xác định số đặc điểm mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt 108 4.3.1 Ung thư biểu mô tuyến phối hợp với tân sản nội biểu mô độ cao108 4.3.2 Độ mô học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt 112 4.3.3 Các đặc điểm đặc trưng ác tính ung thư biểu mô tuyến tuyến tiền liệt .116 4.3.4 Các đặc điểm chất chứa lòng tuyến nang ác tính 119 4.4 Đánh giá bộc lộ số dấu ấn miễn dịch tình trạng methyl hóa gen RASSF1A ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt 121 4.4.1 Sự bộc lộ số dấu ấn miễn dịch ung thư biểu mô tuyến tiền liệt.121 4.4.2 Tình trạng methyl hóa gen RASSF1A ung thư biểu mô tuyến tiền liệt tăng sản tuyến tiền liệt 128 KẾT LUẬN 135 KIẾN NGHỊ137 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 138 vii DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt ADN Acid deoxyribonucleic Tên đầy đủ Alu Arthrobacter luteus AMACR Alpha-methylacyl-CoA racemase AQP1 Aquaporin ARN Acid ribonucleic ATM Ataxia telangectasia mutant (thể đột biến giãn mạch điều hòa vận động) BCL-2 B-cell lymphoma BEX1 Brain-expressed X-linked gene BN Bệnh nhân CEA Carcino embryonic antigen (kháng nguyên ung thư bào thai) CECR1 Cat eye syndrome critical region COBRA Combined bisulfite restriction analysis (phân tích giới hạn bisulfite kết hợp) C1QR1 Complement Component Q Receptor CTAG2 cancer-testis antigens DAG Diacylglycerol DNMT DNA methyltranferase (enzym chuyển methyl hóa ADN) DYNLT3 Dynein Light Chain Tctex-Type EMA Epithelial membrane antigen (kháng nguyên màng biểu mô) GPB Giải phẫu bệnh GSTP1 Glutathion S-transferase Pi gene HMMD Hố mơ miễn dịch KN Kháng nguyên KT Kháng thể viii LINE Long interspersed nuclear elements MBH Mô bệnh học MSP Methylation specific PCR (phản ứng chuỗi đặc hiệu methyl hóa) NKX3.1 NK homeobox (Drosophila), family 3, locus P53AIP1 Tumor Protein P53 Regulated Apoptosis Inducing Protein PCa Prostate cancer (ung thư tuyến tiền liệt) PCR Polymerase chain reaction (phản ứng chuỗi polymerase) PIN Prostatic intraepithelial neoplasia PSA (tân sản nội biểu mô tuyến tiền liệt) Prostate specific antigen (kháng nguyên đặc hiệu tuyến tiền liệt) RASSF1A Ras-association domain family isoform A gene RCC Renal cell carcinoma (ung thư tế bào thận) RLGS Restriction landmark genomic scanning SAM (quét hệ gen đánh dấu mốc giới hạn) S-adenosylmethionine SARAH Sav/RASSF/Hpo SCLC Small cell lung cancer (ung thư phổi tế bào nhỏ) TB Tế bào TDRD12 Tudor domain containing 12 TP53 Tumour protein p53 TSG Tumor suppressor gene (gen ức chế u) TTL Tuyến tiền liệt UT Ung thư UTBM Ung thư biểu mô UTTTL Ung thư tuyến tiền liệt QĐKN Quyết định kháng nguyên WHO World health organization (Tổ chức Y tế Thế giới) (+) Dương tính (có bợc lợ) (-) Âm tính (khơng bợc lợ)