Đang tải... (xem toàn văn)
Tài liệu công nghệ sinh học phân tử, nguyên lí và ứng dụng của ADN tái tổ hợp
Các quy trình chu n đoán mi n d chẩ ễ ị • Phép th h p ph mi n d ch liên k t v i enzymử ấ ụ ễ ị ế ớ Đ c dùng r t nhi u trong chu n đoán g m các b cượ ấ ề ẩ ồ ướ Các ph ng pháp ươ chu n đoán phân tẩ ử G n m u đang c n xét nghi m ắ ẩ ầ ệ vào phi n r nế ắ B sung kháng th đ c hi u ch t ổ ể ặ ệ ấ ch thỉ ị Cho các cho các c ch t không ơ ấ màu Quan sát và đo các s n ph m có ả ẩ màu Kháng th đ n dòngể ơ T o và ch n l c t bào laiạ ọ ọ ế Tiêm cho chu t kháng nguyênộ Ki m traể Gi t chu tế ộ L y lách r a s chấ ử ạ Nghi n và tách t ng t bào riêng ề ừ ế lẽ Tr n huy n d ch t bào t y ộ ề ị ế ủ (thi u enzym hypoxanthin – ế guamin phosphoribosyltransferasa) Tr n v i 35% polyethylen glycol ộ ớ trong vài phút Nuôi trong môi tr ng có ườ hypoxanthin, amino pterin, thymidin Xác đ nh dòng t bào lai ị ế sinh kháng th đ c hi uể ặ ệ Dùng môi tr ng nuôi c y ườ ấ ch a kháng th ti t raứ ể ế Kháng th th 2 đ c ti p ể ứ ượ ế h pợ khi s d ng kháng th đ n ử ụ ể ơ dòng thay cho đa dòng thì tính đ c hi u c a quy ặ ệ ủ trình tăng Các h th ng chu n đoán ADNệ ố ẩ * Trình t nucleotit quy đ nh m t đ c đi m sinh h c c th s ự ị ộ ặ ể ọ ụ ể ẽ là m t d u hi u phân đ nhộ ấ ệ ị * N u có th phát hi n đ c có th đ c dùng nh m t quy t ế ể ệ ượ ể ượ ư ộ ế đ nh chu n đoán xác đ nhị ẩ ị * Lai nucleotit là c s c a các th nghi m nhanh và kh thiơ ở ủ ử ệ ả * S đ nh sau:ơ ồ ư G n ADN s i đ n lên màng đắ ợ ơ ở Thêm ADN s i đ n đã đánh d uợ ơ ấ R a giá đử ỡ Xác đ nh trình t lai t o thành gi a m u dò và AND đíchị ự ạ ữ ẫ • M u dò laiẫ M u dò lai ph i có tính ẫ ả đ c hi u caoặ ệ M u dò có th là AND ẫ ể hay ARN dài (h n 100 ơ nucleotit) hay ng n (nh ắ ỏ h n 50 nucleotit)ơ Trình t làm m u dò hi u ự ẫ ệ qu có th đ c phân ả ể ượ l p b ng nhi u cáchậ ằ ề Th c hi n tr c ti p trên ự ệ ự ế m u có s nẫ ẳ Chu n đoán b nh s t rétẩ ệ ố * ELISA không phân bi t đ c vi c nhi m đó là ệ ượ ệ ễ cũ hay m iớ * Quy trình chu n đoán ADN ch tính đ n s ẩ ỉ ế ự nhi m hi n t iễ ệ ạ * H n 100 m u dò ADN chu n đoán khác nhau đã ơ ẫ ẩ đ c phân l p và xác đ nh tính ch t đ phát ượ ậ ị ấ ể hi n các ch ng gây b nh khác nhauệ ủ ệ phát hi n Trypanosoma cruziệ * Kí sinh trùng thu c đ ng v t nguyên sinh Trypanosoma cruzi ộ ộ ậ là nhân t gây b nh trùng mũi khoanố ệ * Th nghi m PRC b nh trùng mũi khoan đ c dùng b tr cho ử ệ ệ ượ ổ ợ các xét nghi m truy n th ngệ ề ố * Trong m t quy trình xét nhi m d a trên PCR đo n ADN 18 bp ộ ệ ự ạ có m t trong nhi u b gen T. cruzi nh ng không có m t trong ặ ề ộ ư ặ ADN b gen c a kí sinh trùng liên quan khác là trình t đíchộ ủ ự quy trình lai không phóng xạ * Lai axit nucleotit đ c phát hi n b ng đánh d u m u dò ượ ệ ằ ấ ẫ b ng đ ng v phóng x , th ng là phospho 32ằ ồ ị ạ ườ * Nh ng có th i gian s ng ng n, nguy hi m và đòi h i có phòng ư ờ ố ắ ễ ỏ thí nghi m thi t k đ c bi tệ ế ế ặ ệ * Tín hi u đ c phát hi n h u h t trong các h th ng b ng ệ ượ ệ ầ ế ệ ố ằ liên k t các nucleotit đánh d u biotin vào m u dò ADn theo ế ấ ẫ quy trình [...]... nhiệt độ phòng Nhanh Nhạy đèn hiệu phân tử • Đèn hiệu phân tử không dùng phóng xạ để phát hiện trình tự đặc hiệu • Các quy trình thí nghiệm dựa trên đèn hiệu phân tử đã được phát triển xác định dấu vân tay ADN • Kẻ tình nghi • Phổ ADN tiểu vệ tinh biểu diển tập hợp độ dài của một số chuổi trong một số cá thể Nhân bội ngẫu nhiên các AND đa hình Phân biệt các giống cây trồng khác nhau Ưu điểm:... hiện tự động thể cảm biến sinh học vi khuẩn • Cần có phương pháp xác định dễ dàng, nhanh chóng với lượng lớn hợp chất có tiềm năng độc gây nhiễm độc môi trường • Khi vị trí nhiễm bẩn được xác định, chúng sẽ được khoanh vùng • Một số kỹ thuật phân tích có độ tinh vi cao được sử dụng để phát hiện và đánh giá số lượng chất ôi nhiễm Chuẩn đoán phân tử các bệnh di truyền * giúp phát hiện nguy cơ bị bệnh... enđonucleaza giới hạn CvnI Sau khi hai trình tự mồi oligonucleotit * Quy trình PCR/OLA * Không phải mọi biết đổi di truyền đều sinh ra các gen khiếm khuyết ảnh hưởng đến sự tồn tại của vị trí nhận biết enđonucleaza giới hạn=> Cần có phương pháp khác để phát hiện ra các biến đổi nucleotit * Để xác định liệu sự gắn nối có xuất hiện giữa hai mẫu chỉ thị, mẫu dò X được đánh dấu ở 5’ bằng biotin và mẫu... hiện nguy cơ bị bệnh bản thân, con cháu Sàng lọc bệnh xơ nang Bệnh gây ra do một trong số lớn các thay đổi di truyền trong ADN bình thường của gen đó Thường sàng lọc bệnh di truyền khá phức tạp Thiếu máu tế bào hình liềm Bệnh gay ra do thay đổi nucleoeti trong cođon của axit amin thứ sáu ở chuỗi β của phân tử hemoglobin Thay đổi nucleotit trong gen β-globin gây ra bệnh thiếu máu tế bào hình liềm... với sự trợ giúp của các robot ở các bước của quy trình thử nghiệm Trong điều kiện như vậy có thể thực hiện được 1.200 phản ứng gắn nối mỗi ngày * Mẫu dò khóa * Là một oligonucleotit bổ sung với trình tự đích ở đầu 5’ và 3’ nhưng không bổ sung ở vùng giữa Khi mẫu dò khóa lại với trình tự đích, đầu 5’ và 3’ của mẫu dò đi gần đến nhau và phần giữa tạo thành vòng Xác định kiểu gen bằng các mồi PCR đánh... khóa lại với trình tự đích, đầu 5’ và 3’ của mẫu dò đi gần đến nhau và phần giữa tạo thành vòng Xác định kiểu gen bằng các mồi PCR đánh dấu huỳnh quang • Các mối PCR đánh dấu bằng các thuốc nhuộm huỳnh quang khác nhau có thể được dùng để phát triển các hệ thống phát hiện dựa trên màu không phóng xạ . Các quy trình chu n đoán mi n d chẩ ễ ị • Phép th h p ph mi n d ch liên k t v i enzymử ấ ụ ễ ị ế ớ Đ c dùng r t nhi u trong chu n đoán g m các b cượ ấ ề ẩ ồ ướ Các ph ng pháp ươ chu n đoán. ươ chu n đoán phân tẩ ử G n m u đang c n xét nghi m ắ ẩ ầ ệ vào phi n r nế ắ B sung kháng th đ c hi u ch t ổ ể ặ ệ ấ ch thỉ ị Cho các cho các c ch t không ơ ấ màu Quan sát và đo các s n ph. m u dò hi u ự ẫ ệ qu có th đ c phân ả ể ượ l p b ng nhi u cáchậ ằ ề Th c hi n tr c ti p trên ự ệ ự ế m u có s nẫ ẳ Chu n đoán b nh s t rétẩ ệ ố * ELISA không phân bi t đ c vi c nhi m đó là