BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC    KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI : “BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN QUÁ TRÌNH RA RỄ CỦA DềNG BẠCH ĐÀN PN108 VÀ PN116 BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY Mễ TẾ BÀO VÀ ĐIỀU KIỆN HUẤN LUYỆN CÂY CON NGỒI MƠI TRƯỜNG TỰ NHIÊN” Giáo viên hướng dẫn : THS PHẠM ĐỨC HUY Sinh viên thực : PHẠM THẾ PHÚC Lớp : 0801 Hà Nội – 2012 Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 LỜI CẢM ƠN Trước hết xin chân thành cảm ơn ThS Phạm Đức Huy – Viện nghiên cứu nguyên liệu giấy Người tận tình bảo, hướng dẫn mặt q trình nghiên cứu để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn tới cán bộ, kỹ sư Viện Nghiên Cứu Cây Nguyên Liệu Giấy tạo điều kiện tốt cho chúng tơi q trình nghiên cứu thực nghiệm Qua đõy tụi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy cô, cán Khoa Công Nghệ Sinh Học - Viện Đại Học Mở Hà Nội tận tình bảo, tạo điều kiện thuận lợi cho học tập suốt năm học vừa qua, trình thực khóa luận tốt nghiệp Xin cảm ơn nhiệt tình giúp đỡ, trao đổi động viên bạn thực tập phịng nghiên cứu ni cấy mô, Viện nghiên cứu nguyên liệu giấy – Phù Ninh – Phú Thọ Một lần xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2012 Sinh viên Phạm Thế Phúc Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .2 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC Kí HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 12 TLRR : Tỷ lệ rễ .12 ĐẶT VẤN ĐỀ Mục đích yêu cầu Mục đích: CHƯƠNG .4 TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung bạch đàn: a Bạch đàn urụ (Eucalyptus urophylla ) 1.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống trồng .7 1.2.1 Khái niệm chung 1.2.2 Cơ sở lý thuyết công nghệ nuôi cấy mô, tế bào thực vật 1.3 Các nhân tố ảnh hưởng tới q trình nhân giống ni cấy mô tế bào .10 1.3.1 Môi trường nuôi cấy: .10 1.3.2 Các chất điều hòa sinh trưởng: 12 1.3.3 Môi trường vật lý 13 1.3.4 Vật liệu nuôi cấy 14 1.3.5 Điều kiện vô trùng 14 1.4 Mục đích giai đoạn q trình nhân giống invitro .15 1.4.1 Mục đích: .15 1.4.2 Các giai đoạn q trình nhân giống in vitro .16 1.4.2.1 Giai đoạn chuẩn bị 16 1.4.2.2 Giai đoạn cấy khởi động .16 1.4.2.3 Giai đoạn nhân nhanh 16 1.4.2.4 Tạo hoàn chỉnh (ra rễ) 17 1.4.2.5 Đưa môi trường tự nhiên 17 1.5 Tình hình nghiên cứu thành tựu nhân giống invitro bạch đàn cõy thõn gỗ giới Việt Nam .18 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 1.5.1 Trên giới .18 1.5.2 Nhân giống bạch đàn gỗ phương pháp nuôi cấy mô Việt Nam .20 CHƯƠNG .23 MỤC TIÊU, ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2.2 Đối tượng nghiên cứu .23 2.2.1 Một số đặc điểm dòng PN108 .23 2.2.2 Một số đặc điểm dịng PN47 23 2.2.3 Vật liệu nuôi cấy 24 2.3 Nội dung nghiên cứu 24 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.4.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng tổng hợp chất điều hòa sinh trưởng IBA (Indol Butyric Acid) ABT1 lên q trình tạo rễ dịng bạch đàn .26 2.4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chiều cao vườn ươm 27 2.4.4 Địa điểm, điều kiện bố trí thí nghiệm 28 2.4.5 Thời gian thực tập 29 2.4.6 Bố trí thí nghiệm 29 2.4.7 Phương pháp thống kê xử lí số liệu 29 CHƯƠNG .33 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .33 3.1 Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bỡnh/cõy chiều dài rễ 33 a Dòng PN108: .34 b Dòng PN116: .37 a Dòng PN108: 40 b Dòng PN116: .43 3.4 So sánh kết nghiên cứu dòng bạch đàn PN108 PN116 với dũng nghiên cứu 49 3.5 Thảo luận chung 50 CHƯƠNG .52 KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ .52 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 4.1 Kết luận .52 4.2 Tồn .52 4.3 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO .54 I Tài liệu tiếng Việt 54 II Tài liệu tiếng nước .56 PHỤ LỤC 57 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ rễ ống nghiệm Error: Reference source not found Bảng 2.2: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến tỷ lệ rễ ống nghiệm Error: Reference source not found Bảng 3.1: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bình chiều dài rễ dịng PN108 PN116 Error: Reference source not found Bảng 3.2: Ảnh hưởng IBA+ ABT1 đến tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bình chiều dài rễ dòng PN108 PN116 Error: Reference source not found Bảng 3.3: Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chiều cao giai đoạn vườn ươm dòng PN108 PN116 Bảng 3.4: Error: Reference source not found Các tiêu so sánh dòng Error: Reference source not found Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1a: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ dòng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.1b: Ảnh hưởng IBA đến số rễ trung bình dịng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.1c: Ảnh hưởng IBA đến chiều dài trung bình rễ dòng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.1d: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ dòng PN116 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.1e: Ảnh hưởng IBA đến số rễ trung bình dịng PN116 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.1f: Ảnh hưởng IBA đến chiều dài trung bình rễ dòng PN116 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2a: Ảnh hưởng IBA+ ABT1 đến tỷ lệ chồi rễ dòng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2b: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến số rễ trung bình dịng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2c: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến chiều dài trung bình rễ dòng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2d: Ảnh hưởng IBA+ ABT1 đến tỷ lệ chồi rễ dòng PN108 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2e: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến số rễ trung bình dịng PN116 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.2f: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến chiều dài trung bình dịng PN116 Error: Reference source not found Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp Biểu đồ 3.3a: SV Phạm Thế Phúc_0801 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm dòng PN108 PN116 Error: Reference source not found Biểu đồ 3.3b: Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến chiều cao giai đoạn vườn ươm dòng PN108 PN116 Error: Reference source not found Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 DANH MỤC HÌNH ẢNH .2 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC Kí HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 12 TLRR : Tỷ lệ rễ .12 ĐẶT VẤN ĐỀ Mục đích yêu cầu Mục đích: CHƯƠNG .4 TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung bạch đàn: a Bạch đàn urụ (Eucalyptus urophylla ) 1.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống trồng .7 1.2.1 Khái niệm chung 1.2.2 Cơ sở lý thuyết công nghệ nuôi cấy mô, tế bào thực vật 1.3 Các nhân tố ảnh hưởng tới trình nhân giống nuôi cấy mô tế bào .10 1.3.1 Môi trường nuôi cấy: .10 1.3.2 Các chất điều hòa sinh trưởng: 12 1.3.3 Môi trường vật lý 13 1.3.4 Vật liệu nuôi cấy 14 1.3.5 Điều kiện vô trùng 14 1.4 Mục đích giai đoạn q trình nhân giống invitro .15 1.4.1 Mục đích: .15 1.4.2 Các giai đoạn trình nhân giống in vitro .16 1.4.2.1 Giai đoạn chuẩn bị 16 1.4.2.2 Giai đoạn cấy khởi động .16 1.4.2.3 Giai đoạn nhân nhanh 16 1.4.2.4 Tạo hoàn chỉnh (ra rễ) 17 1.4.2.5 Đưa môi trường tự nhiên 17 1.5 Tình hình nghiên cứu thành tựu nhân giống invitro bạch đàn cõy thõn gỗ giới Việt Nam .18 1.5.1 Trên giới .18 1.5.2 Nhân giống bạch đàn gỗ phương pháp nuôi cấy mô Việt Nam Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 20 CHƯƠNG .23 MỤC TIÊU, ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2.2 Đối tượng nghiên cứu .23 2.2.1 Một số đặc điểm dịng PN108 .23 2.2.2 Một số đặc điểm dòng PN47 23 2.2.3 Vật liệu nuôi cấy 24 2.3 Nội dung nghiên cứu 24 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 Bảng 2.1: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ rễ ống nghiệm 26 2.4.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng tổng hợp chất điều hòa sinh trưởng IBA (Indol Butyric Acid) ABT1 lên q trình tạo rễ dịng bạch đàn .26 Bảng 2.2: Ảnh hưởng IBA+ABT1 đến tỷ lệ rễ ống nghiệm 26 2.4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chiều cao vườn ươm 27 2.4.4 Địa điểm, điều kiện bố trí thí nghiệm 28 2.4.5 Thời gian thực tập 29 2.4.6 Bố trí thí nghiệm 29 2.4.7 Phương pháp thống kê xử lí số liệu 29 CHƯƠNG .33 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .33 3.1 Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bỡnh/cõy chiều dài rễ 33 Bảng 3.1: Ảnh hưởng IBA đến tỷ lệ chồi rễ, số rễ trung bình 34 chiều dài rễ dịng PN108 PN116 .34 a Dòng PN108: .34 b Dòng PN116: .37 a Dòng PN108: 40 b Dòng PN116: .43 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 luyện đạt tỷ lệ sống thấp (Dòng PN108 đạt 45,6%, dòng PN116 đạt 44,4%) Tỷ lệ sống tăng lên rõ rệt thời gian huấn luyện ngày, 75,6% dòng PN108 72,2% dòng PN116 Thời gian huấn luyện ngày đạt tỷ lệ sống cao cơng thức thí nghiệm (93,3% dòng PN108 92,2% dòng PN116) Khi tăng thời gian huấn luyện 12 ngày tỷ lệ sống giảm không đáng kể, tỷ lệ sống giảm thời gian huấn luyện 16 ngày Quan sát công thức huấn luyện 16 ngày cho thấy, rễ bình thường bị đen, xuất nhiều rễ chết, bị chết cấy vườn ươm Ngược với tỷ lệ sống, chiều cao trung bình dịng thay đổi khơng đáng kể cơng thức thí nghiệm So sánh phương sai ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chiều cao của dòng thu kết sau (Phụ lục 3.3): - Với dòng PN108, giá trị Sig bảng phương sai tổng thể tiêu tỷ lệ sống 0,250, tiêu chiều cao trung bình 0,556 Với dòng PN116 giá trị Sig tiêu tỷ lệ sống 1,71, tiêu chiều cao trung bình 1,71 Như vậy, phương sai biến ngẫu nhiên - Bảng phân tích phương sai thu giá trị Sig bảng Anova tiêu tỷ lệ sống dòng 0,00 Vì vậy, tỷ lệ sống dịng cơng thức có sai khác rõ rệt với α = 0,05 Giá trị Sig chiều cao trung bình dịng > 0,05 (bằng 0,186 dịng PN108 0,32 dịng PN116) Do đó, chiều cao trung bình dịng khơng có sai khác cơng thức huấn luyện - Phân nhóm tiêu chuẩn Duncan cho thấy, tỷ lệ sống khoảng thời gian huấn luyện ngày, 12 ngày 16 ngày nhóm tốt với dịng Có nghĩa cơng thức huấn luyện khơng có sai khác rõ rệt mặt thống kê Các kết trờn cú độ tin cậy 95% Như vậy, đưa mầm ngồi mơi trường thời gian huấn luyện tốt từ – 16 ngày cho tỷ lệ sống cao Khoa Công Nghệ Sinh Học 48 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Cây dòng PN108 Cây dòng PN116 Cây dòng PN14 Ảnh 2: Cây vườn ươm dòng PN108, PN116 PN14 3.4 So sánh kết nghiên cứu dòng bạch đàn PN108 PN116 với dũng nghiên cứu Do dịng bạch đàn PN108 PN116 giai đoạn nghiên cứu để đưa vào sản suất nên đưa tiêu theo dõi so với dòng bạch đàn nghiên cứu thành cơng q trình sản xuất Kết nghiên cứu lấy từ cơng trình đánh giá sản xuất Đoàn Thị Thanh Nga, 2003 với dòng bạch đàn PN14 Tỷ lệ rễ dòng PN108 PN116 kết tốt thu thí nghiệm Tỷ lệ sống vườn ươm đánh giá sau tuần nuôi cấy Kết sau: Bảng 3.4: Các tiêu so sánh dòng Tờn dòng Tỷ lệ chồi rễ (%) Tỷ lệ sống (%) PN14 PN108 PN116 90,6 82,2 81,7 94,4 93,3 92,2 Khoa Công Nghệ Sinh Học 49 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Kết cho thấy, tiêu so sánh hai dòng PN108 PN116 nhỏ so với dòng PN14 So với q trình nhân giống dịng PN14 sản xuất TLRR dịng PN108 PN116 thấp Xảy khác biệt mơi trường chất phụ gia có mơi trường đặc điểm dịng PN14 có phẩm chất tốt hai dịng PN108 PN116 Do để đưa vào sản xuất in vitro dòng cần phải nghiên cứu chi tiết đặc biệt chất phụ gia nồng độ chất điều hồ sinh trưởng bổ sung vào mơi trường 3.5 Thảo luận chung Trong giai đoạn rễ, tạo hồn chỉnh q trình nhân giống in vitro hai dịng PN108 PN116 mơi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng IBA ABT1 cho kết tốt Từ thí nghiệm cho thấy tổ hợp IBA ABT1 kích thích trình rễ chồi cấy Tuy nhiên đạt kết tốt với nồng độ định, nồng độ cao gây ức chế phát triển rễ, rễ thường bị đen phần đỉnh sinh trưởng Thời gian huấn luyện khoảng đến 16 ngày không ảnh hưởng đến tỷ lệ sống đưa vườn ươm Tỷ lệ sống cao, khỏe mạnh sinh trưởng tốt Khoa Công Nghệ Sinh Học 50 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Ảnh 3: Q trình ni cấy mơi trường tạo rễ chuyển vườn ươm Khoa Công Nghệ Sinh Học 51 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 CHƯƠNG KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua nghiên cứu trình rễ invitro dòng bạch đàn PN108 PN116 đề tài nhận thấy trình sinh trưởng phát triển mẫu nuôi cấy chịu ảnh hưởng mạnh mẽ chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm Auxin Thành phần nồng độ ảnh hưởng mạnh rõ đến hiệu tạo hoàn chỉnh Đồng thời, thời gian huấn luyện ảnh hưởng đến q trình đưa ngồi môi trường tự nhiên Từ kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận sau: Mơi trường tốt tạo hồn chỉnh dòng là: MS/2 + 15 g/l sucrose + g/l agar + 2.0 mg/l IBA + 0.5 mg/l ABT Dòng PN108 TLRR đạt 82,2 %, số rễ trung bình 2,85 rễ/cõy, chiều dài trung bình rễ 1,29 cm Dịng PN116 TLRR đạt 81,7 %, số rễ trung bình 2,59 rễ/cõy, chiều dài trung bình rễ 1,16cm Cây trước đưa vườn ươm cần huấn luyện từ – 16 ngày Tỷ lệ sống cao cho dòng PN108 93,3%, dòng PN116 92,2% 4.2 Tồn Do điều kiện thời gian có hạn kinh nghiệm kỹ thuật phịng thí nghiệm kỹ viết báo cáo khoa học thân nên đề tài khơng tránh khỏi thiếu sót hạn chế như: - Hai dòng bạch đàn PN116 PN108 q trình nghiên cứu hồn thiện kỹ thuật nhân giống vơ tính phương pháp ni cấy mô tế bào - Mới thực nghiệm số công thức ảnh hưởng IBA ABT1 thang nồng độ rộng mà chưa tìm nồng độ tối ưu cho trình tạo rễ invitro - Chưa có bình luận sâu kết thực nghiệm đề tài đạt so với kết nghiên cứu nước Khoa Công Nghệ Sinh Học 52 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 4.3 Kiến nghị Để nâng cao tỷ lệ rễ rễ invitro tỷ lệ sống mầm mô hai dòng bạch đàn PN116 PN108 cấy vườn ươm Đồng thời hạ giá thành đủ tiêu chuẩn xuất vườn cần có nghiên cứu chi tiết hơn, cụ thể cho hai dòng bạch đàn Khoa Công Nghệ Sinh Học 53 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Andrew I, 1991 Thiết kế đơn giản cho thí nghiệm lâm nghiệp Bản tin Viện nghiên cứu lâm nghiệp số 71, 39 trang Lê Văn Chi, 1992 Cách sử dụng chất điều hoà sinh trưởng vi lượng hiệu cao Nhà xuất Khoa học – Kỹ thuật, trang – 23 Lê Đình Khả (1999), Nghiên cứu sử dụng giống lai tự nhiên Keo tai tượng Keo tràm Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 170-172 Lê Đình Khả Nguyễn Việt Cường, (2001) Ưu lai sinh trưởng tính chống chịu số tổ hợp lai khác loài Bạch đàn, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội, tr 41- 43 Mai Đình Hồng, 1999 Ứng dụng cơng nghệ sinh học để sản xuất nguyên liệu giấy chất lượng cao Thông tin khoa học công nghệ môi trường tỉnh Phú Thọ tháng 9, trang 46 – 48 Đoàn Thị Mai, Trần Hồ Quang, Ngô Thị Minh Duyên, 1998 Kỹ thuật nhân giống keo lai nuôi cấy mô phân sinh Tạp chí lâm nghiệp số 7, trang 35-36 Trần Văn Minh, 1994 Nuôi cấy mô tế bào thực vật Phân viện công nghệ sinh học thành phố Hồ Chí Minh, 124 trang Trần Văn Minh cộng sự, 1998 Nhân giống trầm qua nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Tạp chí lâm nghiệp số 11, trang 44 – 45 Đoàn Thanh Nga, 2003 Báo cáo hoàn thiện cơng nghệ nhân giống số dịng bạch đàn Trung tâm nghiên cứu nguyên liệu giấy, 35 trang 10 Trần Thị Ngân, 2000 Nghiên cứu phản ứng cỏc dũng lan gấm (Anoectochilus formosalus) môi trường nuôi cấy in vitro Luận án thạc sĩ khoa học sinh học, Trường đại học sư phạm Hà Nội, 63 trang Khoa Công Nghệ Sinh Học 54 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 11.Vũ Ngọc Phượng cộng sự, 2002 Nhân giống in vitro tre tàu (Sinocalamus latiflorus) tre mạnh tơng (Dendrocalamus asper) Tạp chí sinh học số 6, trang 59 – 64 12 Nguyễn Quang Thạch, (2000), Giáo trình sinh lý thực vật, Nhà xuất Nơng nghiệp, Hà Nội 13 Nguyễn Quang Thạch cộng sự, 2004 Nhân nhanh in vitro dũng lỳa bất dục đực PEI ải 64S Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thôn số 6, trang 836 – 838 14 Nguyễn Đức Thành, 2001 Nuôi cấy mô tế bào thực vật – Nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Khoa học – Kỹ thuật, Hà Nội, 125 trang 15 Đoàn Thị Ái Thuyền cộng sự, 2001 Nhân giống vơ tính cõy hụng – Paulowvina fortunei (seem) Hemsi phương pháp ni cấy mơ Tạp chí sinh học số 9, trang 46 – 50 16.Nguyễn Văn Uyển, 1993 Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Nhà xuất Nông nghiệp, trang – 40 17 Vũ Văn Vụ, 1994 Sinh lý học thực vật Nhà xuất Khoa học – Kỹ thuật, Ha Nội, trang 182 – 237 18 Dự án giống lâm nghiệp Việt Nam, 2001 Hội thảo quốc gia loài ưu tiên cho trồng rừng Công ty giống lâm nghiệp trung ương, báo cáo số 1, trang 42 – 43 19.Dương Mộng Hùng (1993), Chọn trội nhân giống nuôi cấy mơ tế bào cho hai lồi Bạch đàn E camaldulensis E urophylla, Báo cáo đề tài, trường Đại học Lõm nghiệp, Hà Tây 20 Nguyễn Ngọc Tân cộng (1995), “Nhõn giống Keo lai nuôi cấy mô phân sinh”, Kết nghiên cứu khoa học công nghệ giai đoạn 1990- 1995, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 21 Đoàn Thị Mai cộng (2000), “Kết bước đầu nhân giống Bạch đàn lai phương pháp ni cấy mơ phân sinh”, Tạp chí Lâm nghiệp, (số10/2000), tr 46-47 Khoa Công Nghệ Sinh Học 55 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 II Tài liệu tiếng nước 22 Bhat K M and Hwanok Ma (2004), Teak growers unite, in ITTO tropical forest update, pp 3-4 23.Darus H Ahmad, 1994 Multiplication of Acacia mangium by stem cutting and tissue culture techniques Advances in tropical acacia research, p 32-34 24.Handley L, 1997 commercialization of plant tissue culture in vitro India plant cell Tissue and organ culture, Westvaco Corp, USA., p 65 – 73 25.Murashige T and Skoog F, 1962 A resied medium for rapid growth and bioassays wirh tobacco tissue cultures Physiol Plant., 15, p 473-495 26.Semsuntud N and Nitiwattanachai W, 1992 Tissue culture of Acacia auriculiformis Advances in tropical acacia research, p 39 - 41 Khoa Công Nghệ Sinh Học 56 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 PHỤ LỤC Phụ lục 2.1 Thành phần môi trường MS Đa lượng CaCl2 KH2PO4 KNO3 MgSO4 NH4NO3 332.02 170.00 1900.00 180.54 1650.00 mg/l 2.99 1.25 18.79 1.50 20.61 mM mM mM mM mM mg/l 0.11 0.10 0.10 0.10 5.00 0.10 1.03 29.91 µM µM mM mM Vi lượng CoCl2.6H2O CuSO4 FeNaEDTA H3BO3 KI MnSO4 H2O Na2MoO4.2 H2O ZnSO4.7 H2O Vitamin Glycine 0.025 0.025 36.700 6.200 0.830 16.900 0.250 8.600 2.00 mg/l µM mM µM µM 26.64 µM Myo-Inositol 100.00 0.564 mM Nicotinic acid 0.50 4.06 µM Pyridoxine HCl (vitamin B6) 0.50 2.43 µM Thiamine HCl (vitamin B1) 0.10 0.30 µM Khoa Cơng Nghệ Sinh Học 57 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Phụ lục 3.1 Ảnh hưởng IBA đến hiệu rễ, số rễ trung bình chiều dài trung bình a Dịng PN108 Test of Homogeneit y of Variances Levene Statistic 2.509 2.955 Ty le re (%) So re TB (re/cay) df1 df2 4 Sig .109 075 10 10 ANOVA Sum of Squares 6211.424 34.233 6245.657 2.671 244 2.915 Ty le re (%) Between Groups Within Groups Total So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1552.856 3.423 F 453.609 Sig .000 668 024 10 14 10 14 27.354 000 Ty le re (%) Subset for alpha = 05 Duncan a Nong IBA (mg/l) N 14.433 4.0 3.0 2.0 3 1.0 45.000 53.300 59.433 76.100 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 So re TB (re/cay) Subset for alpha = 05 Nong IBA (mg/l) 4.0 N 1.400 1.560 1.0 2.040 3.0 2.073 2.0 Duncan a Sig 2.593 238 799 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khoa Công Nghệ Sinh Học 58 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Chieu dai re (cm) Subset for alpha = 05 Duncan a,b Nong IBA (mg/l) N 5244 41 4.0 180 6733 3.0 180 7778 2.0 180 1.0 180 7778 8700 1.1578 Sig 1.000 077 119 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 72.638 b The group sizes are unequal The harmonic mean of the group sizes is used Type I error levels are not guaranteed b Dòng PN116 Test of Homogeneit y of Variances Levene Statistic 1.329 1.438 Ty le re (%) So re TB (re/cay) df1 df2 4 Sig .325 291 10 10 ANOVA Sum of Squares 6323.697 286.120 6609.817 2.419 173 2.591 Ty le re (%) Between Groups Within Groups Total So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total df 10 14 10 14 Mean Square 1580.924 28.612 F 55.254 Sig .000 605 017 34.976 000 Ty le re (%) Subset for alpha = 05 Duncan a Nong IBA (mg/l) N 13.900 4.0 42.233 3.0 51.667 1.0 2.0 Sig 51.667 61.133 75.000 1.000 056 055 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khoa Công Nghệ Sinh Học 59 Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 So re TB (re/cay) Subset for alpha = 05 Duncan a 1.280 3 4.0 1.807 1.0 1.833 3.0 2.027 2.0 2.527 Sig 1.000 078 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Subset for alpha = 05 Nong IBA (mg/l) Duncan a,b N 37 4811 4.0 180 6578 3.0 180 7111 2.0 180 1.0 180 Sig .8600 1.0878 1.000 294 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 69.958 b The group sizes are unequal The harmonic mean of the group sizes is used Type I error levels are not guaranteed Phụ lục 3.2 Ảnh hưởng IBA+ABT đến hiệu rễ, số rễ trung bình chiều dài trung bình a Dịng PN108 Test of Homogeneit y of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 988 4.059 df1 df2 4 10 10 Sig .457 033 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Mult iple Comparisons Dependent Variable: So re TB (re/cay) Tamhane Mean Difference (I) Nong ABT (mg/l) (J) Nong ABT (mg/l) (I- J) - 200 1.0 - 043 1.5 430 2.0 593 200 1.0 157 1.5 630 2.0 793 1.0 043 - 157 1.5 473 2.0 637* 1.5 - 430 - 630 1.0 - 473 2.0 163 2.0 - 593 - 793 1.0 - 637* 1.5 - 163 Std Error 1579 1107 1222 1073 1579 1229 1334 1199 1107 1229 0715 0411 1222 1334 0715 0662 1073 1199 0411 0662 Sig .960 1.000 294 230 960 977 161 171 1.000 977 060 003 294 161 060 681 230 171 003 681 95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound - 1.088 688 - 1.132 1.045 - 394 1.254 - 683 1.870 - 688 1.088 - 1.125 1.439 - 341 1.601 - 677 2.263 - 1.045 1.132 - 1.439 1.125 - 029 976 369 904 - 1.254 394 - 1.601 341 - 976 029 - 468 794 - 1.870 683 - 2.263 677 - 904 - 369 - 794 468 * The mean difference is significant at the 05 level ANOVA Ty le re (%) Between Groups Within Groups Total So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 2886.017 74.047 2960.064 1.096 087 1.184 df 10 14 10 14 Mean Square 721.504 7.405 F 97.439 Sig .000 274 009 31.359 000 So re TB (re/cay) Subset for alpha = 05 Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 N 2.020 1.5 2.497 1.0 2.543 2.603 Sig 2.850 1.000 212 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội Khoá luận tốt nghiệp SV Phạm Thế Phúc_0801 Ty le re (%) Subset for alpha = 05 Duncan a Nong ABT (mg/l) 2.0 N 42.200 1.5 1.0 3 59.433 66.667 75.567 82.233 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Chieu dai re (cm) Subset for alpha = 05 Nong ABT (mg/l) 2.0 N 180 1.5 180 7789 1.0 180 180 Duncan a 6711 180 9100 1.0878 1.2889 Sig .059 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 90.000 b Dòng PN116 Test of Homogeneity of Variances Ty le re (%) So re TB (re/cay) Levene Statistic 2.000 879 df1 df2 10 Sig .171 10 510 ANOVA Ty le re (%) Between Groups Within Groups Total So re TB (re/cay) Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 2633.151 119.267 2752.417 1.371 183 1.555 df 10 14 10 14 Mean Square 658.288 11.927 F 55.195 Sig .000 343 018 18.722 000 Khoa Công Nghệ Sinh Học Viện Đại Học Mở Hà Nội ... DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2. 1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2. 2 Đối tượng nghiên cứu .23 2. 2.1 Một số đặc điểm dòng PN108 .23 2. 2 .2 Một số đặc điểm dịng PN47 23 ... nghiờn cứu ảnh hưởng số yếu tố đến trình rễ dịng bạch đàn PN108 PN116 phương pháp ni cấy mô tế bào điều kiện huấn luyện ngồi mơi trường tự nhiên” Viện nghiên cứu nguyên liệu giấy đơn vị đầu ni cấy. .. DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2. 1 Mục tiêu nghiên cứu 23 2. 2 Đối tượng nghiên cứu .23 2. 2.1 Một số đặc điểm dịng PN108 .23 2. 2 .2 Một số đặc điểm dịng PN47 23