i LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc đến: Các Thầy Cô giáo viện Công Nghệ Sinh Học Mơi Trường tồn thể Thầy Cơ dạy em suốt thời gian học tập trường đặc biệt TS Tạ Thị Minh Ngọc, người tận tình hướng dẫn để em hoàn thành cách tốt đồ án tốt nghiệp Các Thầy Cô giáo, anh chị công tác Trung tâm thí nghiệm thực hành, Trường Đại học Nha Trang nhiệt tình hướng dẫn giúp đỡ em, tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian làm nghiên cứu Cảm ơn gia đình bạn bè người bên cạnh cổ vũ động viên em suốt bốn năm học tập nghiên cứu trường Đại học Nha Trang Nha Trang, tháng năm 2012 Sinh viên thực ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC HÌNH .vi KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm men 1.1.1 Đặc điểm phân bố 1.1.2 Đặc điểm hình dạng kích thước nấm men 1.1.3 Đặc điểm dinh dưỡng nấm men .2 1.1.3.1 Nguồn cacbon 1.1.3.2 Nguồn nitơ .3 1.1.3.3 Dinh dưỡng nguyên tố vô 1.2 Màng tế bào 1.2.1 Đặc điểm, cấu trúc màng .4 1.2.1.1.Lipid màng 1.2.1.2 Protein màng 1.2.1.3 Glucide 1.2.2 Phương thức vận chuyển chất qua màng 1.2.2.1 Vận chuyển thụ động (passive transport) 1.2.2.2.Vận chuyển chủ động (active transport) 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm men 11 1.3.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon 11 1.3.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ 11 1.3.3 Ảnh hưởng nguyên tố khoáng 12 1.3.4 Ảnh hưởng oxy 12 iii 1.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ 12 1.3.6 Ảnh hưởng pH môi trường 13 1.4 Giới thiệu chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae Yarrowia lipolytica 13 1.4.1 Saccharomyces cerevisiae 13 1.4.1.1 Một số đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa S cerevisiae 13 1.4.2 Yarrowia lipolytica 14 1.4.2.1 Một số đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa Y lipolytica 14 1.4.2.2 Ảnh hưởng điều kiện ni cấy đến q trình sinh trưởng Y lipolytica 15 1.5 β-carotene 16 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng – vật liệu 18 2.1.1 Đối tượng 18 2.1.2 Vật liệu 18 2.1.2.1 Thiết bị 18 2.1.2.2 Hóa chất 18 2.1.3 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 19 2.1.3.1 Mơi trường hoạt hóa, giữ giống 19 2.1.3.2 Môi trường quan sát đặc điểm khuẩn lạc nhiệt độ nuôi cấy khác 19 2.1.3.3 Môi trường nuôi cấy khảo sát đường cong sinh trưởng nấm men 21 2.2 Các phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Phương pháp giữ giống, cấy chuyền 21 2.2.2 Một số phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm men 21 2.2.2.1 Phương pháp quan sát đặc điểm khuẩn lạc 21 2.2.2.2 Phương pháp làm tiêu tế bào sống 21 iv 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm khuẩn lạc điều kiện nuôi cấy khác 22 2.2.4 Xây dựng đường cong sinh trưởng môi trường khác 22 2.2.5 Phương pháp xác định lượng sterol màng tế bào 22 2.2.6 Phương pháp xác định tính thấm màng tế bào nấm men chất kỵ nước β-carotene điều kiện nuôi cấy lựa chọn 23 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Kết nghiên cứu: 24 3.1.1 Quan sát đặc điểm hình thái chủng nấm men 24 3.1.1.1 Chủng nấm men Y lipolytica 24 3.1.1.2 Chủng nấm men S cerevisiae 27 3.1.2 Khảo sát khả sinh trưởng môi trường khác 28 3.1.2.1 Chủng Y lipolytica W29 28 3.1.2.2 Chủng S cerevisiae 29 3.1.3 Xây dựng đường cong sinh trưởng Y lipolytica S cerevisiae môi trường nuôi cấy khác 36 3.1.3.1 Y lipolytica 36 3.1.3.2 S cerevisiae 37 3.1.4 Khả thấm β-carotene qua màng tế bào 38 3.1.5 Xác định lượng sterol màng tế bào nuôi cấy môi trường khác 40 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 KẾT LUẬN 42 KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Thành phần môi trường hoạt hóa, giữ giống 19 Bảng 2.2: Thành phân môi trường quan sát đặc điểm khuẩn lạc nhiệt độ nuôi cấy khác 20 Bảng 3.1: Khả sinh trưởng Y lipolytica W29 môi trường khác nhiệt độ khác 30 Bảng 3.2: Khả sinh trưởng Y lipolytica 0544 môi trường khác nhiệt độ khác 32 Bảng 3.3: Khả sinh trưởng phát triển S cerevisiae TNS.c môi trường khác nhiệt độ khác 34 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc màng sinh chất Hình 1.2: Hiện tượng nhập bào 10 Hình 1.3: Hiện tượng xuất bào 10 Hình 1.4: Cấu trúc hóa học β-carotene 16 Hình 1.5: Quang phổ hấp thụ β-carotene 17 Hình 3.1: Hình thái khuẩn lạc Y lipolytica W29 môi trường YPDA 27oC 24 Hình 3.2: Hình thái tế bào Y lipolytica W29 nuôi YPDA 27oC 25 Hình 3.3: Hình thái khuẩn lạc Y lipolytica 0544 mơi trường YPDA 27oC 26 Hình 3.4: Hình thái tế bào Y lipolytica 0544 ni mơi trường YPDA 27oC 26 Hình 3.5: Hình thái khuẩn lạc S cerevisiae TNS.c mơi trường YPDA 27oC 27 Hình 3.6: Hình thái tế bào S cerevisiae TNS.c môi trường YPDA 27oC 28 Hình 3.7: Đường cong sinh trưởng Y lipolytica W29 số môi trường 36 Hình 3.8: Đường cong sinh trưởng Y lipolytica 0544 số môi trường 37 Hình 3.9: Đường cong sinh trưởng S cerevisiae TNS.c số mơi trường 38 Hình 3.10: Đường cong sinh trưởng S cerevisiae HNS.c môi trường YPD 38 Hình 3.11: Hàm lượng β-carotene 1g sinh khối nấm men chủng 39 Hình 3.12: Hàm lượng sterol mơi trường khác (Y lipolytica W29) 40 vii KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT Y lipolytica: Yarrowia lipolytica S cerevisiae: Saccharomyces cerevisiae RDA: rice dextrose agar PDA: potato dextrose agar YNBA: yeast nitrogen base YPOA: yeast pepton oleate agar YPDA: yeast pepton dextrose agar YNBOA: yeast nitrogen base oleate agar YNBDA: yeast nitrogen base dextrose agar YPA: yeast pepton agar NXB: nhà xuất LỜI MỞ ĐẦU Khả sinh trưởng phát triển nấm men chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố nhiệt độ, oxy, đặc biệt môi trường nuôi cấy Các chủng nấm men khác có khả sinh trưởng mơi trường có nguồn dinh dưỡng khác Các nguồn dinh dưỡng sinh trưởng nấm men gồm nguồn cacbon (đường, tinh bột, chất kỵ nước ankan, lipid, acid béo ) nguồn nitơ (cao nấm men + pepton, acid amin ) Các nguồn dinh dưỡng tác động mạnh đến sinh trưởng nấm men ảnh hưởng đến phận tế bào, đặc biệt bề mặt tế bào Để khảo sát khả sinh trưởng phát triển ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng ảnh hưởng đến tính chất bề mặt màng tế bào nấm men nên thực đề tài: “Khảo sát khả sinh trưởng số chủng nấm men ảnh hưởng môi trường ni cấy tới tính chất bề mặt tế bào nấm men” gồm bước thực sau: - Xây dựng đường cong sinh trưởng số chủng nấm men điều kiện nuôi cấy khác - Khảo sát tính chất bề mặt màng tế bào nấm men số điều kiện nuôi cấy lựa chọn Vì lần làm quen với công tác nghiên cứu, với kinh nghiệm thực tế kiến thức thân hạn chế, thời gian thực có hạn nên q trình thực đề tài khơng tránh khỏi thiếu sót, sai lầm Rất mong nhận đóng góp ý kiến quý Thầy Cô bạn để đề tài hoàn thiện CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm men 1.1.1 Đặc điểm phân bố Nấm men phân bố rộng rãi tự nhiên, mơi trường có chứa đường, có pH thấp, chẳng hạn hoa quả, rau dưa, mật mía, rỉ đường, mật ong, đất vườn trồng ăn quả, đất có nhiễm dầu mỏ Trong sản phẩm sữa, sữa chua, bánh mì chứa lượng lớn loài nấm men Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces marxianus, Debaromuces hanseni, Torulopsis lactis condense 1.1.2 Đặc điểm hình dạng kích thước nấm men Nấm men vi sinh vật điển hình cho nhóm nhân thật (eukaryote) Tùy lồi nấm men mà tế bào hình trịn (Torulopsis utilis), hình trứng, hình ovan (Saccharomyces cerevisiae), hình chanh, hình elip, hình trụ… Tế bào nấm men thường lớn gấp 10 lần so với vi khuẩn, dạng đơn bào kích thước chúng 2,5-10µm x 4,1-21µm Kích thước hình thể nấm men phụ thuộc vào điều kiện nuôi cấy nhiệt độ, pH, thành phần môi trường, oxy tuổi tế bào nấm men Ví dụ S cerevisiae có hình bầu dục ni môi trường giàu chất dinh dưỡng Trong điều kiện yếm khí có hình trịn ngược lại điều kiện hiếu khí tế bào có dạng kéo dài Một số tế bào nấm men có hình dài nối tiếp thành dạng sợi gọi khuẩn ty (mycelium) khuẩn ty giả (pseudomycelium), thường gặp giống Endomycopsis, Candida, Trichosporon Nhiều nấm men sinh khuẩn ty giả không cung cấp đầy đủ oxy 1.1.3 Đặc điểm dinh dưỡng nấm men 1.1.3.1 Nguồn cacbon Nguồn dinh dưỡng cacbon nấm men loại đường dẫn xuất, rượu, acid hữu cơ, acid amin… Hầu hết loài nấm men khơng có enzyme polyhydrolase, khơng có amylase cellulase không sử dụng trực tiếp tinh bột, cellulose, hemicellulose Đường hexose tất lồi nấm men sử dụng Trong mơi trường có hỗn hợp nguồn cacbon dinh dưỡng nguồn cacbon cung cấp cho nấm men sinh trưởng sử dụng trước Trong họ hàng men rượu Saccharomyces với chủng khác cần có nguồn cacbon khác nhau, đường khác lên men khác Lên men rượu etylic cần vật liệu lý tưởng cho lên men đường glucose, lên men bia đường maltose, lên men rượu vang đường fructose sau glucose Đối với disaccharide trước nấm men sử dụng phải trải qua trình thủy phân sơ thành đường đơn nhờ enzyme tương ứng nấm men Các acid béo làm nguồn cacbon dinh dưỡng phụ thuộc vào chủng loại nấm men, nồng độ axit, chiều dài mạch cacbon phân tử acid mức độ điện ly Mạch từ C2- C4 làm nguồn chất tốt nồng độ tương đối thấp Ngồi sử dụng nguồn cacbon từ dầu mỏ khí đốt cịn nhiều e ngại ứng dụng sinh khối nấm men vào sản phẩm thức ăn chăn ni tồn dư chất ít, khơng thể xác định chúng có ảnh hưởng đến sức khỏe người động vật hay không 1.1.3.2 Nguồn nitơ Là hợp chất hữu vô có sẵn mơi trường Các hợp chất hữu chứa nitơ tế bào acid amin, nucleotide purin, protein, pirimidin số vitamin Nấm men có khả tổng hợp tất acid amin, đa số nấm men khơng đồng hóa nitrate Nguồn nitơ vô nấm men sử dụng tốt muối amoni acid vô hữu cơ: amoni phosphate, muối acetat, lactat, malat… 1.1.3.3 Dinh dưỡng nguyên tố vô Được quan tâm trước hết phospho, sau đến kali, magie, lưu huỳnh… 29 mơi trường hình thành YPOA 43 khuẩn lạc, môi trường PDA, số khuẩn lạc hình thành 28, cịn mơi trường RDA có chấm li ti Với nguồn nitơ khác nhau: giàu dinh dưỡng (cao nấm men pepton), nghèo dinh dưỡng (YNB) khả sinh trưởng mơi trường giàu dinh dưỡng tốt Với môi trường nguồn cacbon YNBA hình thành vài khuẩn lạc với kích thước nhỏ Ở nhiệt độ khác nhau, nhiệt độ 27oC nấm men sinh trưởng tốt 30oC 20oC 3.1.2.2 Chủng S cerevisiae Kết sau ngày nuôi cấy chủng S cerevisiae TNS.c (bảng 3.3), nguồn cacbon khác nhau, chủng S cerevisiae sinh trưởng mơi trường có nguồn cacbon đường, mơi trường có nguồn cacbon lipid chúng khơng có khả sinh trưởng, mơi trường có nguồn cacbon tinh bột khả sinh trưởng tốt môi trường PDA tốt mơi trường RDA Trên mơi trường có nguồn nitơ khác mơi trường chứa cao nấm men pepton sinh trưởng tốt mơi trường có chứa acid amin Chủng có khả sinh trưởng mơi trường khơng có nguồn cacbon YNBA Ngồi ra, nhiệt độ ni ảnh hưởng đến khả sinh trưởng chúng, 30oC 27oC tốt 20oC, với việc hình thành khuẩn lạc có kích thước to nhiều nuôi điều kiện thời gian 30 Bảng 3.1: Khả sinh trưởng Y lipolytica W29 môi trường khác nhiệt độ khác W29 YPDA YPA YPOA YNBDA YNBA 20oC 27oC 30oC 31 YNBOA PDA RDA 32 Bảng 3.2: Khả sinh trưởng Y lipolytica 0544 môi trường khác nhiệt độ khác 0544 YPDA YPA YPOA YNBDA YNBA 20oC 27oC 30oC 33 YNBOA PDA RDA 34 Bảng 3.3: Khả sinh trưởng phát triển S cerevisiae TNS.c môi trường khác nhiệt độ khác TNS.c YPDA YPA YPOA YNBDA YNBA 20oC 27oC 30oC 35 YNBOA PDA RDA 36 3.1.3 Xây dựng đường cong sinh trưởng Y lipolytica S cerevisiae môi trường nuôi cấy khác Chủng nấm men Y lipolytica nuôi cấy môi trường YPD, YPO, YNBO, YNBD S cerevisiae nuôi môi trường YPD, YNBD nhiệt độ 27oC, tốc độ lắc 150 vòng /phút để xây dựng đường cong sinh trưởng chúng 3.1.3.1 Y lipolytica Hình 3.7: Đường cong sinh trưởng Y lipolytica W29 số môi trường Từ đồ thị ta thấy, sau khoảng 48 nuôi cấy, chủng W29 phát triển tốt môi trường YPD, môi trường YNBO phát triển yếu Đồng thời cho thấy với nguồn cacbon đường phát triển tốt mơi trường có nguồn cacbon lipid, với nguồn nitơ cao nấm men pepton tốt mơi trường có nguồn nitơ acid amin Trên mơi trường có lipid YPO, YNBO sau khoảng 24 giờ, trình sinh trưởng bước vào pha cân bằng, trong môi trường khơng có lipid YPD, YNBD sau 19 trình sinh trưởng bước vào pha cân Thời gian vào pha cân chủng mơi trường có nguồn cacbon 37 lipid lâu chủng phải thời gian để thực trình hấp thụ phân tử chất béo có lực lớn lớp màng phospholipid nên việc nhả hấp phụ chúng khỏi màng tế bào lâu Cũng tương tự W29, YNBO khả sinh trưởng 0544 yếu, ba môi trường YPD, YPO, YNBD khả sinh trưởng tốt Hình 3.8: Đường cong sinh trưởng Y lipolytica 0544 số môi trường 3.1.3.2 S cerevisiae Do chủng S cerevisiae khơng có khả sinh trưởng mơi trường có nguồn cacbon lipid nên ta khảo sát khả sinh trưởng môi trường có nguồn cacbon đường 38 Hình 3.9: Đường cong sinh trưởng S cerevisiae TNS.c số mơi trường Hình 3.10: Đường cong sinh trưởng S cerevisiae HNS.c môi trường YPD Sau khoảng 48 nuôi cấy, khả sinh trưởng chủng môi trường Thời gian bước vào pha cân khoảng 19 3.1.4 Khả thấm β-carotene qua màng tế bào Chúng nghiên cứu khả thấm qua màng phân tử kỵ nước βcarotene chủng nấm men W29, 0544, TNS.c HNS.c ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới hiệu suất thấm Sinh khối sau nuôi cấy thu thời điểm pha log, ủ với dầu carotene qua đêm Khả 39 thấm qua màng tế bào thể qua hàm lượng carotene vào tế bào Kết thu sau: Hình 3.11: Hàm lượng β-carotene 1g sinh khối nấm men chủng Khả thấm qua màng carotene phụ thuộc vào chủng giống nấm men sử dụng Trên môi trường nuôi cấy YPD, hai chủng Y lipolytica cho kết tương tự với hiệu suất chuyển chất đạt 1,1 – 1,2 (µg/g sinh khối ướt), cao gấp 1,7 lần hiệu suất chuyển chất hai chủng S cerevisiae (0,6 – 0,7 (µg/g sinh khối ướt) Như vậy, màng tế bào chủng nấm men Y lipolytica có tính thấm β-carotene cao màng tế bào chủng S cerevisiae Khi tiến hành thí nghiệm với hai chủng Y lipolytica ni cấy môi trường sử dụng lipid làm nguồn cacbon, nhận thấy hai chủng nấm men thí nghiệm, khả thấm β-carotene ni mơi trường có lipid cao ni mơi trường glucose từ 5,5 – 5,9 lần chủng 0544 từ 2,3 tới 8,6 lần chủng W29 Như ta biết, Y lipolytica có khả sử dụng lipid để làm nguồn cacbon cho sinh trưởng tế bào Điều giải thích khả hấp thụ phân tử kỵ nước qua màng tế bào Y lipolytica cao so với chủng truyền thống S cerevisiae Ngồi ra, ni cấy mơi trường có lipid, 40 màng tế bào thích nghi thường có tính linh động cao so với nuôi cấy môi trường glucose Điều giải thích khả xâm nhập phân tử kỵ nước β-carotene qua màng tế bào nuôi môi trường lipid dẽ dàng xâm nhập qua màng tế bào nuôi môi trường glucose 3.1.5 Xác định lượng sterol màng tế bào nuôi cấy môi trường khác Trong tế bào nấm men, sterol tồn dạng sterol tự dạng ester (steryl) Dạng sterol tự cư trú chủ yếu màng tế bào, vi cấu trúc (raft) chịu trách nhiệm điều hịa tính lỏng màng Hàm lượng sterol tỷ lệ sterol tự tế bào phụ thuộc vào điều kiện nuôi cấy Trong nghiên cứu này, lựa chọn chủng Y lipolytica W29 để nghiên cứu hàm lượng sterol tự tổng số nuôi cấy môi trường khác tìm hiểu liên hệ chúng tới tính thấm màng tế bào phân tử β-carotene Hình 3.12: Hàm lượng sterol mơi trường khác (chủng Y lipolytica W29) Kết cho thấy hàm lượng sterol tổng số thu cao môi trường YNBO, thấp môi trường YPD; đồng thời sterol tự chiếm 41 96% môi trường YPD, 63% môi trường YNBO 56% mơi trường YPO Sterol có vai trị chất điều hịa tính lỏng màng tế bào Khi bổ sung sterol vào màng tế bào làm cho màng trở nên lỏng Tuy nhiên, tới giới hạn đó, hàm lượng sterol tăng màng tế bào chuyển từ trạng thái lỏng sang trạng thái đơng rắn Điều chứng minh đo tính linh động màng tế bào sử dụng phương pháp mồi huỳnh quang (Tạ cộng sự, 2010) Điều giải thích khả xâm nhập dễ dàng βcarotene qua màng tế bào trường hợp nuôi môi trường YNBO 42 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã tiến hành mơ tả hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào chủng Y lipolytica S cerevisiae Đã xây dựng đường cong sinh trưởng chủng Y lipolytica S cerevisiae môi trường nuôi cấy khác nhau, xác định thời gian để chủng nấm men vào pha cân mơi trường có nguồn cacbon lipid khoảng 24 giờ, môi trường có nguồn cacbon đường khoảng 19 Quá trình phân tích sterol màng, chúng tơi nhận thấy % sterol tự chủng nấm men mơi trường có nguồn cacbon đường nhiều % sterol chủng nấm men nuôi môi trường có nguồn cacbon lipid Kết phân tích hàm lượng β-carotene thấm qua màng tế bào môi trường có nguồn cacbon lipid cao mơi trường có nguồn cacbon đường Hàm lượng β-carotene thấm qua màng phụ thuộc vào nồng độ sterol tế bào KIẾN NGHỊ Ngồi yếu tố mơi trường ni cấy, khảo sát thêm yếu tố ngoại cảnh như: pH, oxy, nhiệt độ… đến việc hình thành sterol màng Khảo sát nhiều chủng nấm men để có đánh giá tổng quát tính chất bề mặt màng tế bào Đánh giá thêm ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới tính tồn vẹn trao đổi điện tử màng Đối với chủng Y lipolytica có khả sử dụng nguồn cacbon lipid, nghiên cứu để sử dụng chủng nấm men xử lý ô nhiễm chất thải dầu 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Như Hiền, Trịnh Xuân Hậu (2006): Giáo trình sinh học tế bào, nhà xuất Giáo Dục Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyền, Phạm Văn Ty (2002): Vi sinh vật học, nhà xuất Giáo Dục Lương Đức Phẩm (2006): Nấm men công nghiệp, nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Tiếng Anh Michel E van der Rest et al., 1995, The plasma membrane of Saccharomyces cerevisiae, Vol 59, 304 – 318 Thi Minh Ngoc Ta et al., 2010, New insights into effect of mediumchain-length lactones on yeast membranes Importance of the culture medium, Appl Microbiol Biotechnol, Vol 87, No 3, 1089-1099 France Thevenieau et al., 2009, Applications of non-conventional yeast Yarrowia lipolytica, 590 – 610 H Katsuki Konrad Bloch, 1967, Studies on the biosynthesis of ergosterol in yeast, The journal of biological chemistry, Vol 242, No 2, 222-227 M.A.Z Coelho, P.F.F Amaral and I Belo,2010,Yarrowia lipolytica: an industrial workhorse, Applied Microbiology and Microbial Biotechnology, 930-944 ... nấm men ảnh hưởng đến phận tế bào, đặc biệt bề mặt tế bào Để khảo sát khả sinh trưởng phát triển ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng ảnh hưởng đến tính chất bề mặt màng tế bào nấm men nên thực đề tài: ? ?Khảo. .. ? ?Khảo sát khả sinh trưởng số chủng nấm men ảnh hưởng mơi trường ni cấy tới tính chất bề mặt tế bào nấm men? ?? gồm bước thực sau: - Xây dựng đường cong sinh trưởng số chủng nấm men điều kiện nuôi cấy. .. Môi trường nuôi cấy khảo sát đường cong sinh trưởng nấm men Chủng nấm men nuôi cấy môi trường YPD, YPO, YNBO, YNBD ( cách pha tương tự khơng bổ sung agar) nhiệt độ 27oC, 150 vịng/phút, khảo sát