Đang tải... (xem toàn văn)
TIỂU LUẬN THỦY PHÂN LÒNG TRẮNG TRỨNG BẰNG ENZYME Hà Nội –2022 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU 4 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 5 1 1 Tổng quan về Trứng 5 1 1 1 Giá trị dinh dưỡng của protein trong lòng trắng trứng 6 1 2 Thà.
TIỂU LUẬN THỦY PHÂN LÒNG TRẮNG TRỨNG BẰNG ENZYME Hà Nội –2022 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU .4 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Trứng 1.1.1 Giá trị dinh dưỡng protein lòng trắng trứng 1.2 Thành phần hóa học lịng trắng trứng 1.3 Tiềm sử dụng protein peptit từ protein tách từ lòng trắng trứng [1] 1.3.1 Sử dụng ngành công nghiệp chế biến thực phẩm 1.3.2 Sử dụng ngành dược phẩm 10 1.3.3 Sản phẩm thủy phân lòng trắng trứng ứng dụng 11 CHƯƠNG 2: THỦY PHÂN LÒNG TRẮNG TRỨNG BẰNG THERMOLYSIN 13 2.1 Nguyên Liệu Phương Pháp 13 2.1.1 Enzyme hóa chất 13 2.1.2 Phương pháp thủy phân .13 2.1.3 Thử nghiệm hoạt tính ức chế ACE 14 2.1.4 Ảnh hưởng màng siêu lọc khác lên hoạt động ức chế ACE 15 2.1.5 Phân bố khối lượng phân tử 15 2.1.6 Tái chế Thermolysin cho trình hàng loạt 15 2.1.7 Đo huyết áp .15 2.2 Kết .16 2.2.1 Mức độ thủy phân hoạt động ức chế ACE 16 2.2.2 Đặc điểm chất thủy phân 17 2.2.3 Tái chế Thermolysin cho quy trình hàng loạt 18 2.2.4 Sự thay đổi huyết áp SHR sau dùng dịch thủy phân 18 2.3 Thảo Luận 19 KẾT LUẬN .20 TÀI LIỆU THAM KHẢO .21 LỜI MỞ ĐẦU Lòng trắng trứng chứa nhiều protein quan trọng mặt chức Ovalbumin (54%), ovotransferrin (12%), ovomucoid (11%), ovomucin (3,5%) lysozyme (3,5%) protein có tiềm ứng dụng cơng nghiệp cao tách riêng Các phương pháp tách protein từ lòng trắng trứng phát triển từ đầu năm 1900, phương pháp điều chế protein cho ứng dụng thương mại phát triển Tính đơn giản khả mở rộng phương pháp, sử dụng hóa chất khơng độc hại để phân tách, phân tách cho nhiều protein tiêu chí quan trọng để sản xuất thương mại ứng dụng protein Các protein tách sử dụng thực phẩm công nghiệp thực phẩm nguyên gốc sau sửa đổi với enzym Ovotransferrin sử dụng chất vận chuyển kim loại, chất chống vi khuẩn chất chống ung thư, lysozyme chủ yếu sử dụng chất bảo quản thực phẩm Ovalbumin sử dụng rộng rãi chất bổ sung chất dinh dưỡng ovomucin chất ức chế khối u Ovomucoid chất gây dị ứng trứng ức chế phát triển khối u, sử dụng chất chống ung thư Các peptit thủy phân từ protein cho thấy hoạt động ức chế men chuyển angiotensin I, chống ung thư, liên kết kim loại chống oxy hóa tốt Do đó, việc tách protein lòng trắng trứng sản xuất peptit có hoạt tính sinh học từ protein lịng trắng trứng lĩnh vực với nhiều ứng dụng [1] CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Trứng [1] Hình 1 Trứng gà Trứng số thực phẩm sử dụng khắp giới không phân biệt tôn giáo dân tộc Trứng gà vật phẩm sinh học bảo quản hoàn hảo tìm thấy tự nhiên coi nguồn cung cấp protein, lipid, vitamin khoáng chất tốt Tuy nhiên, tổng lượng trứng tiêu thụ nước phát triển giảm vài thập kỷ qua hàm lượng cholesterol chất béo cao Các cộng đồng y tế công nhận trứng loại thực phẩm không lành mạnh chứa nhiều cholesterol khơng khuyến khích người ăn chúng, đặc biệt người cao tuổi Tuy nhiên, lợi ích dinh dưỡng trứng cơng nhận Trứng có nhiều đặc tính chức tạo bọt, tạo nhũ, có màu sắc hương vị độc đáo, quan trọng số sản phẩm thực phẩm Trứng gồm thành phần chính: vỏ trứng (9-12%), lịng trắng trứng (60%) lịng đỏ (30-33%) Tồn trứng bao gồm nước (75%), protein (12%), lipid (12%), carbohydrate khoáng chất (1%) Protein có trứng phân bố lịng trắng lòng đỏ trứng, lipid chủ yếu tập trung lòng đỏ Lòng đỏ bao phủ màng sinh tinh chủ yếu bao gồm nước (50%), protein (15– 17%), lipid (31–35%) carbohydrate (1%) Protein có lòng đỏ trứng bao gồm lipovitellins (36%), livetins (38%), phosvitin (8%) lipoprotein mật độ thấp (17%) Ngoài ra, lịng đỏ chứa 1% carotinoit, làm cho có màu vàng 1.1.1 Giá trị dinh dưỡng protein lịng trắng trứng Tồn trứng coi nguồn cung cấp protein lipid tốt, lòng trắng trứng chủ yếu bao gồm water (88%) protein (11%) thiếu lipid Ovomucin protein glycosyl hóa cao khoảng 33% ovomucin tạo thành từ cacbohydrat Vì vậy, ovomucin coi nguồn dinh dưỡng tốt cung cấp chất dinh dưỡng quan trọng protein carbohydrate Ovalbumin protein lịng trắng trứng, có thành phần axit amin cân đối, sử dụng nguồn protein tuyệt vời cho nhiều loại thực phẩm Phần lại protein lòng trắng trứng coi nguồn cung cấp axit amin thiết yếu 1.2 Thành phần hóa học lịng trắng trứng [1] Lòng trắng trứng chủ yếu bao gồm nước (88%) protein (11%), phần lại bao gồm carbohydrate, tro lượng nhỏ lipid (1%) Ovalbumin (54%), ovotransferrin (12%), ovomucoid (11%), lysozyme (3,5%) ovomucin (3,5%) coi protein avidin (0,05%), cystatin (0,05%), ovomacroglobulin (0,5%), ovoflavoprotein (0,8%), ovoglycoprotein (1,0%) ovoin ức chế (1,5%) protein phụ tìm thấy lịng trắng trứng (Kovacs-Nolan cộng sự, 2005) Những protein công nhận tầm quan trọng chức chúng Mỗi protein có nhiều đặc tính chức năng, protein tách khỏi lòng trắng trứng nhiều cách tiếp cận khác Ovalbumin protein lòng trắng trứng tổng hợp ống dẫn trứng gà mái chiếm 54% tổng số proteins lòng trắng trứng Trọng lượng phân tử ovalbumin 45 kDa với 386 axit amin Ovalbumin khơng có trình tự bậc thang đầu N cổ điển, có vị trí biến đổi sau tổng hợp ngồi nhóm acetyl đầu N Thành phần axit amin ovalbumin so với protein khác; axit amin đầu N glycine acetyl hóa đầu cuối C proline Nó cịn gọi glycoprotein chứa nhóm carbohydrate gắn với đầu N Hình Ovalbumin Ovotransferrin glycoprotein đơn phân bao gồm 686 axit amin với trọng lượng phân tử 76 kDa Nó có trình tự axit amin tương tự transferrin huyết người chứa 15 liên kết disulfua Ovotransferrin chiếm 12% tổng số protein lịng trắng trứng Nó gọi conalbumin, đổi tên thành ovotransferrin sau phát liên kết với sắt Một phân tử ovotransferrin liên kết phân tử sắt vận chuyển sắt thể Ovotransferrin gấp thành thùy miền với thùy gồm miền α- β- riêng biệt Hai miền liên kết sợi β- đối song song mở đóng lề Ovotransferrin tìm thấy dạng chính: apo- (khơng chứa sắt) dạng holo- (liên kết với sắt) Tính chất hóa học vật lý dạng ovotransferrin khác đáng kể Dạng apo không màu, dạng holo có màu hồng cá hồi Dạng holo có khả chống lại điều kiện hóa học vật lý dạng apo Sắt (Fe3+) dễ dàng gắn vào ovotransferrin pH> 7,0, giải phóng pH Hình Ovotransferrin Lysozyme loại protein quan trọng khác tìm thấy lịng trắng trứng Đương nhiên, có nhiều dạng lysozyme tìm thấy, lysozyme tìm thấy trứng loại có khả hịa tan ổn định số Lysozyme lần xác định Alderton cộng năm 1946 Nó loại enzyme phổ biến thủy phân liên kết β axit N-acetylneuraminic N-acetylglucosamine thành tế bào vi khuẩn; gọi N-acetyl-muramichydrolase bao gồm lysine leucine đầu N- C- tương ứng Khối lượng phân tử lysozyme 14.400 Da bao gồm chuỗi polypeptit với 129 axit amin Trong tự nhiên, protein tìm thấy dạng monome diện dạng chất dimer với độ bền nhiệt cao Nó coi loại protein mạnh có lịng trắng trứng Lysozyme có cầu nối disulfua dẫn đến độ ổn định nhiệt cao điểm đẳng điện 10,7 Nó có xu hướng liên kết với protein tích điện âm ovomucin lịng trắng trứng Ovomucin loại protein lịng trắng trứng, chiếm 3,5% tổng lượng protein lòng trắng trứng Ovomucin bao gồm thành phần hịa tan khơng hịa tan: thành phần hòa tan bao gồm 8.300 Da thành phần khơng hịa tan nằm khoảng từ 220 đến 270 kDa Nó protein trọng lượng phân tử lớn có gắn cacbohydrate chịu trách nhiệm tạo cấu trúc giống gel lòng trắng trứng Ovomucin chủ yếu bao gồm loại tiểu đơn vị chúng gọi α β; α-ovomucin đồng nhất, β-ovomucin không đồng α-Ovomucin có đơn vị α1 α2, có nhóm cacbohydrat β-ovomucin, đơn vị giàu cacbohydrat Ovomucin có nhiều vùng cuộn đầu nó, giống cấu trúc mucin người Bởi có vùng cuộn dài, cấu trúc cuộn ngẫu nhiên quan sát thấy β-Ovomucin chủ yếu bao gồm serine threonine, α-ovomucin chủ yếu bao gồm axit amin có tính axit axit aspartic axit glutamic, khơng có khác biệt ovomucin từ lòng trắng trứng dày lòng trắng trứng mỏng Các nghiên cứu trước loại chuỗi carbohydrate tìm thấy ovomucin, bao gồm galalctose, galacrosamine, axit si-alic sulfate với tỷ lệ phân tử 1: 1: 1: Trung bình, 33% ovomucin carbohydrate Ovomucoid loại glycosyl hóa cao protein tìm thấy lòng trắng trứng Trọng lượng phân tử ovomucoid 28 kDa, dải SDSPAGE xuất mức 30 đến 40 kDa Nó biết đến nhiều chất ức chế trypsin coi chất gây dị ứng thực phẩm có lịng trắng trứng Mỗi phân tử ovomucoid liên kết với phân tử trypsin, cấu trúc chiều bảo đảm liên kết disulfide Kovacs-Nolan cộng (2000) cho thấy peptit có nguồn gốc từ ovomollen sử dụng pepsin cho thấy hoạt động liên kết IgE trì hoạt động ức chế trypsin Matsuda cộng (1985) báo cáo ovomollen khơng hoạt tính miễn dịch sau thủy phân cách sử dụng pepsin, vai trò carbohydrate hoạt động miễn dịch ovomollen chưa biết đến Nagata Yoshida (1984) báo cáo ovomollen sử dụng để kiểm soát Streptomyces ban đỏ Thậm chí, protein cịn coi chất ức chế trypsin, đặc tính tiêu cực protein; có khả kiểm sốt vi sinh vật Do đó, sử dụng chất chống vi khuẩn cho thực phẩm Hình Ovomucoid 1.3 Tiềm sử dụng protein peptit từ protein tách từ lòng trắng trứng [1] 1.3.1 Sử dụng ngành công nghiệp chế biến thực phẩm Lysozyme protein phân giải vi khuẩn tìm thấy lịng trắng trứng Lysozyme có khả che giấu mầm bệnh thực phẩm Listeria monocy-togens Clostridium botulinum, coi mầm bệnh gây vấn đề ngành công nghiệp thực phẩm Lysozyme kiểm sốt chặt chẽ hình thành độc tố vi khuẩn Clostridium botuli-num cá, gia cầm số loại rau Có thơng tin cho việc thay đổi lysozyme phương pháp xử lý hóa chất nhiệt độ làm tăng đặc tính kháng khuẩn Lysozyme khơng có khả ức chế phát triển vi sinh vật mà có tác dụng kháng virus, kháng vi khuẩn gây bệnh điều trị Tổ chức Y tế Thế giới nhiều tổ chức cố gắng cho phép sử dụng lysozyme thực phẩm chất bảo quản sử dụng dưa chua kimuchi, sushi, mì Trung Quốc, mát sản xuất rượu Ovotransferrin biết có hoạt tính kháng vi khuẩn antimi mạnh đó, sử dụng để cải thiện độ an toàn thực phẩm Babini Livermore (2000) ovotransferrin làm tăng hoạt tính pipercillin-tazobactam chống lại E coli thơng qua hoạt động thải sắt Valenti cộng (1982) báo cáo ovotrans ferrin ức chế Pseudomonas sp., Escherichia coli Streptococcus mutans Gần ovotransferrin sử dụng để kiểm soát vi khuẩn E coli O157: H7 Listeria monocytogens, biết có vấn đề mầm bệnh từ thực phẩm Ibrahim cộng (2000) peptit có nguồn gốc từ ovotransferrin (OTAP-92) có khả tiêu diệt vi khuẩn cách làm hỏng màng tế bào chúng Zhang cộng (2011) báo cáo peptide có nguồn gốc từ ovotransferrin có khả kiểm sốt vi sinh vật Vì vậy, rõ ràng ovotransferrin peptit sử dụng làm chất kháng khuẩn thực phẩm Ovotransferrin có tác dụng chống oxy hóa thịt gia cầm cách thiết lập mơi trường oxy hóa khử tế bào Ovomucin cho thấy có tác dụng ức chế tốt tác nhân E coli, Bacillus sp., Và Pseudomonas sp Theo báo cáo, ovomucin có tác dụng kháng khuẩn mạnh vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm Do đó, ovomucin sử dụng ngành công nghiệp thực phẩm chất bảo quản trước thực phẩm Ngồi ra, có đặc tính tạo bọt tạo nhũ tốt Tạo bọt nhũ hóa yếu tố cần thiết việc thử làm bánh Thêm ovomucin nâng cao mức độ dinh dưỡng tạo kết cấu tốt cho sản phẩm Dávalos cộng (2004) báo cáo peptit thủy phân từ protein lịng trắng trứng thơ cho thấy hoạt động chống oxy hóa mạnh Các peptit chứa TyrAla-GluGlu-Arg-Tyr-ProIle-Leu cho thấy hoạt động thu dọn gốc tự mạnh mẽ Do đó, khơng protein lịng trắng trứng mà peptit chúng sử dụng công nghiệp thực phẩm tác nhân làm giảm q trình oxy hóa lipid thực phẩm 1.3.2 Sử dụng ngành dược phẩm Ovotransferrin liên kết với sắt dễ dàng giải phóng sắt liên kết pH < 4,5 Vì vậy, nguồn bổ sung sắt tuyệt vời cho người Ovotransferrin báo cáo trải qua trình tự động phân cắt liên kết thiol sau khử tạo sản 10 phẩm thủy phân phần có tác dụng chống ung thư mạnh tế bào ruột kết vú Lysozyme hoạt động chất điều chỉnh kích thích miễn dịch có khả ngăn chặn tế bào khối u Vì vậy, lysozyme sử dụng chất chống ung thư Ovomucin báo cáo có hoạt tính chống khối u tác dụng kháng vi rút Do đó, khơng ovotransferrin mà cịn dùng ovomucin để kiểm sốt phát triển khối u Albumin máu người báo cáo chất vận chuyển thuốc tuyệt vời, cho thấy ovalbumin sử dụng chất vận chuyển ma túy Ovalbumin báo cáo có yếu tố giải phóng hoại tử khối u, áp dụng việc ức chế khối u Ovomucoid có tác dụng gây dị ứng mạnh số đối tượng người Vì vậy, ovomucoid nghiên cứu hóa chất miễn dịch, chưa rõ liệu cacbohydrat gắn với protein hay liên kết disunfua protein gây hoạt động miễn dịch Ovomucin báo cáo tăng cường di chuyển bề mặt tế bào mầm nguyên thủy, giúp biểu PGCs từ E3 đến E7 tế bào phơi nam 1.3.3 Sản phẩm thủy phân lịng trắng trứng ứng dụng Khơng protein lịng trắng trứng, mà sản phẩm thủy phân chúng có nhiều đặc tính chức Protein lịng trắng trứng thủy phân cách sử dụng enzym khác điều kiện khác Trong vài thập kỷ qua, nhiều peptide chức có tác dụng có lợi cho sức khỏe phát triển đánh dấu Các peptit hoạt động chức tạo enzym pepsin, trypsin α-chymotrypsin Một số nhà nghiên cứu sử dụng lịng trắng trứng làm chất cho q trình thủy phân enzym tạo peptit có hoạt tính sinh học; Chiang cộng (2006) sử dụng thermolysin để thủy phân lòng trắng trứng tạo peptit hoạt tính sinh học ức chế hoạt động ACE Miguel Aleixandre (2006) tạo peptit cách thủy phân lòng trắng trứng với pepsin Trong số peptit có trình tự axit amin Tyr-Arg-Glu-Glu-Arg-Tyr-Pro-Ile-Leu, Arg-Ala-AspHis-ProPhe-Leu, Ile-Val-Phe cho thấy hoạt động ức chế ACE mạnh mẽ Việc cho chuột tăng huyết áp tự phát ăn peptit làm giảm huyết áp chuột Ovalbumin thủy phân cho thấy hoạt động ức chế ACE mạnh mẽ (Miguel et al., 2007) Fujita cộng (2000) ovalbumin thủy phân với pepsin, trypsin, αchymotrypsin tạo peptit ức chế ACE, bao gồm LKA, LKP, LAP, IKW, FQK 11 PKR, FKGRYYP IVGRPRHQG Một số peptit tạo từ ovalbumin không cho thấy tác dụng ức chế ACE mạnh mà làm giảm hàm lượng lipid máu (Manso cộng sự, 2008) Tác dụng giãn mạch (Miguel cộng sự, 2007) quan sát thấy từ peptit có nguồn gốc từ lòng trắng trứng từ ovalbumin Yu cộng (2012) báo cáo ovokinin ovokinin từ đến cho thấy hoạt động ức chế ACE bật số peptit tạo Không ovalbumin mà ovotransferrin sử dụng để sản xuất peptit có hoạt tính sinh học có giá trị Các sản phẩm thủy phân ovotransferrin cho thấy hoạt động kháng khuẩn mạnh mẽ Ibrahim cộng (2000) báo cáo peptit có nguồn gốc từ ovotransferrin cho thấy hoạt động vi khuẩn antimi tốt Tuy nhiên, ovotransferrin khả liên kết sắt sau thủy phân (Wu AceroLopez, 2012) Peptide có nguồn gốc từ ovotransferrin cho thấy hoạt động chống oxy hóa mạnh mẽ Ovotransferrin thủy phân với enzym protamex, alkalse, trypsin αchymotrypsin cho thấy tác dụng bảo vệ chống lại stress oxy hóa bao gồm tổn thương DNA bạch cầu người (Moon cộng sự, 2013) Ngoài ra, sản phẩm thủy phân tạo từ ovotransferrin, có trình tự peptit Lys-Val-Arg-Glu-GlyThr, có hoạt tính ức chế ACE mạnh hoạt động giãn mạch (Wu Acero-Lopez, 2012) Peptide có nguồn gốc từ ovomucoid cho thấy hoạt động điều hòa miễn dịch chống lại tế bào T peptit từ ovomucin cho thấy hoạt động sinh sản đại thực bào ống nghiệm (KovacsNolan cộng sự, 2005), cho thấy chúng ứng cử viên tốt cho việc sử dụng dược phẩm người 12 CHƯƠNG 2: THỦY PHÂN LÒNG TRẮNG TRỨNG BẰNG THERMOLYSIN 2.1 Nguyên Liệu Phương Pháp [2] 2.1.1 Enzyme hóa chất Thermolysin (EC3.4.24.27) từ Bacillus thermoproteolyticus rokko, metalloendopeptidase ngoại bào điều chỉnh nhiệt có chứa bốn ion canxi Đồng yếu tố kẽm canxi Thermalmolysin thủy phân liên kết peptit phía đầu N gốc axit amin kỵ nước Độ pH nhiệt độ tối ưu cho hoạt động 8,0 65-70° C Thermolysin ổn định từ pH đến 9,5 Thermolysin có độ đặc hiệu phân cắt thấp, tạo số đoạn ngắn Vị trí phân cắt ưu tiên thermolysin: phân cắt XY-Z, X = axit amin nào, Y = Leu, Phe, Ile, Val, Met, Ala Z axit amin khác với Pro Bốn protease bao gồm alcalase, esperase, thermolysin chymotrypsin sử dụng để thủy phân lòng trắng trứng nghiên cứu trước thermolysin chất mạnh tính đặc hiệu thấp Quá trình thủy phân enzyme tốn chi phí enzyme Liều lượng thấp thermolysin sử dụng điều tra Thermolysin (từ Bacillus thermoproteolyticus rokko) angiotensin Iconverting enzyme (ACE) thu từ phổi thỏ Hippury-Lhistidyl-L-leucine (HHL), axit hippuric (HA), chất đánh dấu trọng lượng phân tử bao gồm cytochrome C, aprotinin, gastrin I, chất P, triglycine glycine được mua từ Sigma Chemical Co (St Louis, MO, Hoa Kỳ) Merck (Damdstadt, Đức) Màng siêu lọc cellulose tái sinh lấy từ Millipore Corporation (Bedford, MA, USA) 2.1.2 Phương pháp thủy phân 1,0% (w/v) lòng trắng trứng thơ 0,2% (w/w lịng trắng trứng) Thermolysin sử dụng để sản xuất sản phẩm thủy phân Nhiệt độ độ pH thermolysin xác định nghiên cứu trước 65 ° C 8,0, tương ứng 13 Độ pH dung dịch lòng trắng trứng điều chỉnh thành 8,0 NaOH N đun nóng đến 65 ° C trước tăng nhiệt Phần mẫu, rút 10, 20, 30, 60, 120, 180 240 phút từ hỗn hợp phân giải protein, làm nóng nồi cách thủy sôi 10 phút.Các phần hỗn hợp đun nóng sử dụng để đo độ pH mức độ thủy phân chúng (DH) Phần lại hỗn hợp làm nóng đem ly tâm 10.000 × g máy ly tâm siêu nhỏ 10 phút Các chất phía thử nghiệm hoạt động ức chế ACE chúng Mức độ thủy phân thời điểm đo phương pháp orthophthaldialdehyde (OPA) 2.1.3 Thử nghiệm hoạt tính ức chế ACE Hoạt tính ức chế ACE phân tích quang phổ cách sử dụng HHL làm chất theo phương pháp Cushman Cheung HHL chuẩn bị dung dịch đệm natri borat 0,1 M (pH 8,3) có chứa 0,4 M NaCl ACE từ phổi thỏ hòa tan dung dịch đệm nồng độ 60 mU / mL Một hỗn hợp chứa 225 μL dung dịch HHL 25 μL dịch thủy phân protein ủ 37 ° C phút Thêm 75 μL dung dịch ACE vào hỗn hợp, thời gian ủ kéo dài thêm 30 phút Phản ứng dừng lại với 20 μL axit trifluoroacetic 0,1% (TFA) Hippuric acid (HA) ACE giải phóng xác định RP-HPLC cột LiChrospher C18 (4 × 250 mm, Merck, Đức) Pha động 0,1% TFA 50% metanol với tốc độ dòng 0,8 mL / phút Nước thải đầu theo dõi máy dị tia cực tím (Shimadzu, Tokyo, Nhật Bản) bước sóng 228 nm Giá trị IC50 xác định nồng độ chất ức chế ACE chất thủy phân protein cần thiết để giảm chiều cao đỉnh HA xuống 50%, xác định phân tích hồi quy hoạt động ức chế ACE (%) so với nồng độ protein Giá trị IC50 biểu thị mg protein / mL Hoạt động ức ACE (%) biểu thị Hoạt động ứng chế ACE (%) = (Ho – Hp) x 100 / Ho 14 Trong đó: Ho chiều cao đỉnh HA chưa thủy phân protein; Hp chiều cao đỉnh HA với dịch thủy phân protein 2.1.4 Ảnh hưởng màng siêu lọc khác lên hoạt động ức chế ACE Các sản phẩm thủy phân tạo trình thủy phân enzym xử lý siêu lọc cách sử dụng đĩa cenlulose có kích thước tái tạo với ngưỡng cắt khối lượng phân tử 10; kDa (MWCO), riêng lẻ Mỗi chất thấm thu thập để xác định nồng độ protein, hồ sơ phân bố trọng lượng phân tử IC 50 hoạt động ức chế ACE 2.1.5 Phân bố khối lượng phân tử Sự phân bố trọng lượng phân tử dịch thủy phân phân tích sắc ký loại trừ kích thước hiệu cao (HPSEC) HPSEC bao gồm cột Superdex peptide 10/300 GL, kết nối với máy dò UV đặt bước sóng 214 nm Pha động đệm phosphat 0,02 M (pH 7,2) chứa 0,25 M NaCl tốc độ dòng đặt 0,5 mL / phút 2.1.6 Tái chế Thermolysin cho q trình hàng loạt Lị phản ứng theo mẻ bình phản ứng (250 mL) với áo nước nóng khuấy để cung cấp khuấy trộn gia nhiệt đồng Một trăm ml lòng trắng trứng 1% (pH 8,0) thermolysin đưa vào bình phản ứng hỗn hợp đun nóng Sau phân hủy lòng trắng trứng điều kiện tối ưu giờ, dịch thủy phân ly tâm (3.000 × g) phần phía đưa vào q trình siêu lọc qua màng có MWCO 3kDa Chất thấm (khoảng 80% thể tích) thu hồi để đo hoạt tính ức chế ACE tổng hợp nitơ Phần rút lại (20% thể tích) phía màng, có chứa nhiệt độ cao, tái chế cho q trình thủy phân lơ Việc tái chế thermolysin để thủy phân theo mẻ lặp lại ba lần 2.1.7 Đo huyết áp SHR đực mua từ Trung tâm Động vật Phịng thí nghiệm Quốc gia (Đài Bắc, Đài Loan, Trung Hoa Dân Quốc) Huyết áp tâm thu (SBP) SHR, từ đến tuần tuổi (250 đến 300 g trọng lượng thể), đo sau Những chuột cung cấp dịch thủy phân cách đặt nội khí quản giữ 37 ° C phút, HATT đo dây quấn đuôi với máy đo 15 huyết áp điện lập trình (MK 1030, Muromachi Co LTD, Nhật Bản) Nước muối đệm phosphat (0,15 M NaCl 0,01 M đệm phosphat, pH 7,4) có chứa lòng trắng trứng sử dụng làm chất đối chứng, tác dụng chống tăng huyết áp bột thủy phân hòa tan dung dịch đệm đo 2.2 Kết [2] 2.2.1 Mức độ thủy phân hoạt động ức chế ACE Sự thay đổi pH, mức độ thủy phân (DH) ức chế ACE hỗn hợp thủy phân trình thủy phân thể Hình Độ pH giảm nhanh chóng từ xuống 6,6 30 phút q trình thủy phân sau giảm từ từ xuống 6,5 Hình Quá trình thay đổi theo thời gian pH, mức độ thủy phân hoạt động ức chế ACE dung dịch lòng trắng trứng bị thủy phân nhiệt độ cao Việc tạo đoạn peptit trình thủy phân làm tăng tính axit Sự giảm nồng độ protein tăng độ axit làm giảm hoạt tính enzym làm chậm giảm 16 pH Hoạt động thermolysin trì 60% pH 6,5 Việc kiểm soát pH hỗn hợp thủy phân điều khiển trình thủy phân cách hiệu để cải thiện hoạt tính enzym Ngược lại, DH trình phân hủy tăng nhanh chóng từ đến 11,4% 30 phút ban đầu sau tăng từ từ lên 15,1% Khá giống với thay đổi DH, hoạt tính ức chế men chuyển hỗn hợp thủy phân pha loãng 10 lần tăng nhanh lên 57% 30 phút đầu tiên, 60% 30 phút giữ trạng thái gần ổn định trình thủy phân sau Tất thay đổi pH, DH hoạt động ức chế ACE trình thủy phân enzym điển hình chức hypebol thời gian trình Bốn thủy phân coi đủ cho trình 2.2.2 Đặc điểm chất thủy phân Dung dịch thủy phân suốt có mùi pepton nhẹ khơng có vị đắng Các thuộc tính màu, L, a b, dung dịch thủy phân bột thủy phân 99,3, -0,9, 5,8 93,1, -1,2, 4,93 Chất thủy phân không truyền màu sắc hương vị cho sản phẩm thêm vào chất phụ gia thực phẩm Hầu hết protein thủy phân enzym khác, đặc biệt enzym vi khuẩn cho vị đắng Vị đắng dịch thủy phân hạn chế việc sử dụng làm phụ gia thực phẩm tiêu dùng Hương vị nhạt nhẽo dịch thủy phân lòng trắng trứng tthủy phân thermolysin tính chất đặc hiệu enzym đặc biệt nó, tức thermolysin thủy phân liên kết peptit vị trí đầu N axit amin kỵ nước Đánh giá cảm quan sữa gầy sữa gầy có chứa 1% bột thủy phân lịng trắng trứng trình bày Bảng Khơng có khác biệt đáng kể mùi, vị đắng khả chấp nhận tổng thể sữa gầy sữa gầy có chứa dịch thủy phân Bảng Đánh giá cảm quan sữa gầy sữa gầy có chứa dịch thuỷ phân lịng trắng trứng 17 Giá trị trung bình cột theo sau chữ khác khác đáng kể (p