Đang tải... (xem toàn văn)
Bài trình bày về "CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG HỢP CHẤT HỌ NITROFURAN TRONG MẬT ONG"
ĐẠI HỌC BÁCH KHOA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KỸ THUẬT HOÁ HỌC MÔN: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÔNG CỤ Tiểu luận: CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG HỢP CHẤT HỌ NITROFURAN TRONG MẬT ONG Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2013. Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ MỤC LỤC Trang MỤC LỤC 1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 2 1.1 Các định nghĩa 2 1.2 Ảnh hưởng đến sức khoẻ 3 1.3 Các tiêu chuẩn quy định đối với nitrofuran 3 CHƯƠNG 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM NITROFURAN TRONG MẬT ONG 4 2.1 Phương pháp ELISA 5 2.2 Phương pháp New Charm II 9 2.3 Phương pháp sắc ký lỏng ghép 2 lần khối phổ LC/MS/MS với đầu dò ESI 10 2.4 Phương pháp sắc ký lỏng ghép 2 lần khối phổ LC/MS/MS với đầu dò DAD (Diode Array Detector) 19 2.5 Phương pháp phân tích dòng chảy dùng chất nhạy quang FI-CL 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 2 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Các định nghĩa a) Mật ong Mật ong là chất ngọt tự nhiên được lấy từ ong mật hút mật hoá của cây ăn quả, rất tốt cho sức khoẻ [1]. b) Thuốc kháng sinh Kháng sinh là thuốc bảo vệ cho người và động vật, có tác dụng ức chế sự phát triển hoặc tiêu diệt vi sinh vật như vi khuẩn, nấm hay sinh vật đơn bào. Có hơn 250 loại thuốc kháng sinh khác nhau được đăng ký trong y học, thú y [1b]. c) Thuốc kháng sinh họ nitrofuran Kháng sinh họ nitrofuran là một nhóm kháng sinh và kháng khuẩn tổng hợp nhằm chống lại vi khuẩn E.coli [2] trong công thức có chứa vòng furan và nhóm 5-nitro. d) Thuốc kháng sinh trong mật ong Ong mật dễ bị nhiễm các bệnh từ vi sinh vật, vi khuẩn, vi rút, nên người ta sử dụng thuốc kháng sinh nhằm tăng năng suất, bảo vệ và điều trị bệnh cho ong mật. Dư lượng thuốc kháng sinh được phát hiện trong sản phẩm mật ong thuộc nhóm A6 [3] gồm - Sulfonamides: Sulfathiazole, sulfamethazine, sulfamethaxazole, sulfanilamide - Aminoglycosides: Streptomycine - Tetracyclines: Oxytetracycline, Chlortetracycline - Amphenicols: Chloramphenicol Thuốc kháng sinh được sử dụng trong quá trình nuôi ong Beta-lactams (penicilins) và macrolides (tylosine, erythromycin) e) Thuốc kháng sinh họ nitrofuran trong mật ong Theo tiêu chuẩn EU năm 2002-2003 [4b] thì nhóm chất thuộc họ nitrofuran được phát hiện trong mật ong gồm - Nitrofurans gốc: furazolidone (FZD), nitrofurazone, furaltadone, and nitrofurantoin - Nitrofuran chuyển hoá: nitrofurazone (SEM) (1.6 μg/kg - ppb), furazolidone (AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone (AMOZ), semicarbazide (SC), and 1- aminohydantoin (AH). - Nitroimidazoles: metronidazole, ronidazole, dimetridazole… 3 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ 1.2 Ảnh hưởng đến sức khoẻ Họ nitrofuran có tác dụng ngăn ngừa nhiễm trùng đường tiết niệu đối với người. Tuy nhiên nhóm chất nitrofuran lại gây tác hại cho sức khỏe con người, đặc biệt là gây ung thư và đột biến ở người. [4] Các tác dụng phụ phổ biến nhất với nitrofurantoin là buồn nôn, nôn, tiêu chảy. Phản ứng ít gặp hơn bao gồm sốt , ớn lạnh, và khác nhau phản ứng. Nó cũng có thể gây xơ hóa phổi và viêm gan tự miễn dịch. Tất cả những tác dụng phụ thường gặp hơn ở người lớn tuổi. Nhiều người cho biết ngứa ran và tê ở cánh tay và chân chỉ sau một vài ngày sử dụng và ngứa ran và tê chỉ trong vài tuần hoặc thậm chí vài tháng. Ngoài ra còn có các báo cáo về trường hợp nghiêm trọng và gây tử vong của suy gan và phổi. Trẻ sơ sinh (trẻ sơ sinh đến tuổi của một tháng) có hệ thống enzyme chưa trưởng thành trong các tế bào máu đỏ (glutathione không ổn định) và nitrofurantoin do đó không được sử dụng vì có thể gây thiếu máu tan máu . Đối với cùng một lý do, nitrofurantoin không nên cho phụ nữ mang thai sau 38 tuần của thai kỳ, hoặc những người sắp sinh con. Nitrofurantoin chống chỉ định ở bệnh nhân có chức năng thận giảm (CrCl < 60ml/phút) do tích tụ và mức độ trong đường tiết niệu thấp hơn trong gan. [2] 1.3 Các tiêu chuẩn quy định đối với nitrofuran Năm 2002, ở Việt Nam, Bộ nông nghiệp và phát triển nông thôn đã quyết định cấm sản xuất, nhập khẩu, lưu thông và sử dụng một số loại kháng sinh hóa chất trong sản xuất và kinh doanh thức ăn chăn nuôi trong đó có nitrofuran [4]. Theo tiêu chuẩn EU thì không có giới hạn cao nhất MRLs (Maximum Residue Limits) thuốc kháng sinh sử dụng cho ong mật, có nghĩa là không cho phép sử dụng kháng sinh đối với ong mật. MRLs tạm thời đối với các chất thuộc họ nitrofuran là 1 ppb [1]. 4 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ CHƯƠNG 2: CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM NITROFURAN TRONG MẬT ONG Các phương pháp xác định nitrofuran và chất chuyển hoá trong mật ong - Định tính, bán định lượng: Charm II Test, ELISA [3] - Định lượng: HPLC, LC/MS [9] Trong đó, phương pháp định lượng nitrofuran trong mật ong gồm: GC/MS/MS (Sánchez-Brunete, Albero, Miguel, & Tadeo, 2005), LC/MS (Tribalat, Paisse, Dessalces, Grenier-Loustalot, 2006), LC-ESI/MS/MS. Phương pháp xác định nitrofuran trong thức ăn cho ong mật: HPLC/UV, LC/MS (McCracken & Kennedy, 1997), LC/DAD (Barbosa et al., 2007), CL/FI. 5 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ 2.1 Phương pháp ELISA 2.1.1 Ưu điểm [4b] Phương pháp ELISA cho giá thành rẻ, linh động, di chuyển được và là phương pháp sàng lọc mẫu cao, khả năng định lượng nhạy. 2.1.2 Cơ chế hoạt động [4b] ELISA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) dựa trên sự cạnh tranh của các chất phân tích hoặc mẫu với một loại enzyme của một kháng thể trong các giếng của một đĩa có độ chuẩn nhỏ (microtitre plate). Xét nghiệm miễn dịch (immunoassays) có độ nhạy cao và cho phép định lượng dẫn xuất của các chất chuyển hoá nitrofuran mà không cần những bước tinh chế phức tạp. 2.1.3 Bộ Kit Immuno nitrofuran ELISA [5] Bộ Kit Immuno Nitrofuran (AOZ) ELISA là dụng cụ thử nghiệm theo phương pháp sắc ký miễn dịch cạnh tranh, dùng để phát hiện bán định lượng nitrofuran (AOZ) trong mẫu thủy sản, gà, mật ong. Thời gian ủ nhiệt: 30 phút +20phút. Thời gian phân tích: 1 giờ. Giới hạn phát hiện: 0.1 ppb. Độ nhạy: 0,025ppb. Tỷ lệ thu hồi: 85 ± 15% Tỷ lệ phản ứng chéo AOZ 100% AHD < 0.01% AMOZ < 0.01% SEM < 0.01% 2.1.3.1 Thành phần bộ Kit - 1 khay Microwell phủ kháng thể (12 thanh tháo rời, mỗi thanh 12 giếng) - 6 lọ dung dịch chuẩn (1ml/lọ):0ng/ml; 0.025ng/ml; 0.05ng/ml; 0.1ng/ml; 0.2ng/ml; 0.5ng/ml - Dung dịch đệm chiết/rửa (10 x 50 ml) - Dung dịch đệm phân tích - Dung dịch cộng hợp (100µL) - Thuốc thử gốc 12 ml - Cơ chất 12 ml 6 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ - Dịch hãm (13 ml) 2.1.3.2 Thiết bị và dụng cụ hoá chất - Máy đọc ELIA có bước sóng: 450nm - Micropipette đa kênh 50 - 200 µL - Micropipette đơn kênh 50, 100 and 200 µL - Máy trộn mẫu, ống đong, ống ly tâm, máy ly tâm - Hóa chất: Ethyl acetate, Hexane, nước cất 2.1.3.3 Chuẩn bị dung dịch thử - Dung dịch rửa/chiết: pha loãng 10 lần dung dịch rửa với nước cất (1 ml + 9 ml) - Dung dịch đệm phân tích: pha loãng 10 lần dung dịch với nước cất (1 ml + 9 ml) - Pha dung dịch cộng hợp Enzyme với dung dịch đệm rửa/chiết (30 µL + 12 ml) Đem tất cả thuốc thử về nhiệt độ phòng (20-25°C) trước khi sử dụng 2.1.3.4 Chuẩn bị mẫu: Mật ong - Hút 1 ml mật ong cho vào ống ly tâm - Thêm 4 ml nước cất + 0,5 ml dd HCl 1M và 10 ml hexan lắc trong 1 phút - Ly tâm 10 phút với tốc độ 3000v/p - Làm lạnh ống ly tâm 30 phút ở nhiệt độ -80°C. - Lấy lớp bên dưới làm nóng chảy ở nhiệt độ 50°C trong 5 phút bằng nồi water bath - Thêm 50 µL thuốc thử gốc và lắc 1 phút - Để ống ly qua đêm (khoảng 16 giờ) trong tủ sấy ở nhiệt độ 37°C - Thêm 5 ml dd đệm phân tích , 0.5 ml dd NaOH 1M và 5 ml ethyl acetate và lắc 1 phút - Ly tâm tốc độ 3000v/p thời gian 10 phút - Dùng pipette hút chính xác 2 ml trên bề mặt (ethyl acetate layer) cho vào ống tube khác. Làm khô ở 50°C bằng khí Nitơ. - Hòa tan cặn với 1 ml hexan lắc đều. - Thêm 1.6 ml dung dịch chiết/rửa và trộn đều 1 phút. - Ly tâm 10 phút với tốc độ 3000v/p - Dùng Micropipette hút 50 µL dung dịch bên dưới đem chuẩn bị phân tích 2.1.3.5 Qui trình - Hút 50 µL mỗi dung dịch chuẩn cho vào giếng chuẩn 7 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ - Hút 50 µL dung dịch mẫu thử cho vào giếng mẫu - Thêm 100 µL dung dịch cộng hợp vào các giếng trên (giếng mẫu, giếng chuẩn và giếng đối chứng âm) - Trộn đều và lắc đều hổn hợp - Ủ ở nhiệt độ phòng (25±2°C) 30 phút - Đổ sạch dung dịch lỏng ra khỏi giếng và vỗ nhẹ trên giấy thấm đến khi không còn dung dịch trong giếng. - Rửa giếng bằng dung dịch rửa (khoảng 250 µL/giếng), vỗ nhẹ các giếng trên giấy thấm. Lặp lại rửa bằng dung dịch rửa 4 lần - Thêm 100 µL dung dịch cơ chất vào mỗi giếng - Giữ và lắc nhẹ các giếng trộn đều dung dịch - Để yên 20 phút ở nhiệt độ phòng (25±2°C). - Thêm 100 µL dung dịch dừng màu vào mỗi giếng, lắc nhẹ - Đọc kết quả trên máy đo màu (máy đọc ELISA) trong vòng 5 phút 2.1.3.6 Kết quả - Màu đậm = ít Nitrofuran (AOZ) - Màu nhạt = nhiều Nitrofuran (AOZ) - So sánh màu hoặc mật độ quang của các giếng mẫu với màu hoặc mật độ quang của các giếng đối chứng âm và dương. Từ đó xác định được mức độ nhiễm Nitrofuran (AMOZ) trong mẫu. - Hoặc chính xác hơn ta vẽ đồ thị đường chuẩn của Nitrofuran (AOZ) và dựa vào đó định lượng mức độ nhiễm của mẫu - Tính toán theo công thức sau: Trong đó: A o : mật độ quang tại giếng đối chứng âm (không có Nitrofuran (AOZ)) A x : mật độ quang tại giếng chuẩn hoặc mẫu Dựng đường chuẩn của Nitrofuran (AOZ) với trục X chia độ logarith 8 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ 2.1.3.7 Lưu ý - Các thuốc thử cần ở nhiệt độ phòng khi tiến hành thí nghiệm, sau đó cần cho trở lại ngay vào tủ lạnh, không nên để bên ngoài quá lâu. Riêng đối với cộng hợp enzyme chỉ nên lấy ra 1 lượng vừa đủ dùng không nên để toàn bộ cộng hợp enzyme ra nhiệt độ phòng. - Bảo quản tại 2 - 8 o C. Lưu ý không được để đông đá, đông đá sẽ làm ảnh hưởng hoạt tính enzyme. - Trộn đều cộng hợp một cách nhẹ nhàng, tránh tạo bọt. - Không để các hoá chất tiếp xúc ánh nắng. - Phải cẩn thận, luôn mang găng tay, áo blouse. Dụng cụ sau khi dùng phải làm vệ sinh sạch sẽ, rửa bằng nước Javen 5% - Không dùng bộ kit khi đã quá hạn. - Sử dụng pipette đúng sẽ giúp có kết quả đúng - Khi cho cộng hợp vào giếng phải cho thật nhanh để thời gian cộng hợp ở trong giếng là gần như bằng nhau giữa các giếng, nếu không kết quả sẽ sai lệch. 9 Tiểu luận các phương pháp phân tích công cụ 2.2 Phương pháp New Charm II [6] Năm 1986 thì phương pháp Charm II là phương pháp hàng đầu trong trong việc phân tích kháng sinh trong sữa. Vì phương pháp này nhanh, đơn giản, nhạy.Ngày nay thì áp dụng trong mọi mẫu, mẫu mật ong vào 2003 [6b]. 2.2.1 Ưu điểm [6] Phương pháp Charm II Test cho kết qủa định lượng trong vòng 10-20 phút nhanh hơn 1 giờ so với các phương pháp định lượng khác trong khi giới hạn phát hiện Furazolidone (FZD) chuyển hoá thành 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) tương đương với phương pháp ELISA và LC/MS. Thêm nữa, phương pháp ELISA, LC/MS, HPLC phải mất thời gian cô cao, lôi cuốn dung môi hữu cơ trong khi cao chiết Charm II sử dụng dung dịch đệm, không ảnh hưởng đến sức khoẻ. Hệ thống Charm II còn có thể phát hiện các chất beta-lactams, sulfonamides, tetracyclines, aminoglycosides, macrolides, amphenicols/chloramphenicol. Năm 2007, định lượng AOZ bằng Charm II cho độ nhạy 0.3 ppb, nồng độ kháng sinh trong mật ong khoảng µg/kg hoặc ppb. 2.2.2 Phương pháp Charm II Test - Cơ chế hoạt động: Charm II sử dụng những tác nhân cần thiết gắn nguyên tử đánh dấu H3 và C14 vào trong mẫu thí nghiệm. Mẫu thuốc có nồng độ cao dư lượng nitrofuran sẽ cho kết quả âm và mẫu có nồng độ thấp cho kết quả dương. - Chuẩn bị mẫu: Mật ong được hoà tan 1 phần trong 3 phần đệm MSU và pH khoảng 7.5 với đệm M2. Cao mật ong được thêm liên tục thuốc thử đã hoạt hoá và sẽ cạnh tranh với mẫu thí nghiệm với nhiệt độ ủ khác nhau, rất nhạy trong định tính thuốc. Sau khi phản ứng hết đem ly tâm, nếu có kết tủa thì nguyên tử đánh dấu không tạo liên kết với mẫu mà tách thành phức gắn liên kết đồng vị đánh dấu. Viên tròn (phức đồng vị đánh dấu) được đem phân tích trong máy bắn tia lửa sau 1 phút cho kết quả. Càng ít thuốc đánh dấu trong mẫu thì kết quả càng cao. 2.2.3 Kết quả - Định tính: Kết quả diễn đạt bằng điểm chuẩn. Điểm chuẩn là một số cho biết âm hay dương, nhỏ hơn 2 SD là mẫu âm, lớn hơn 2 SD là mẫu dương. Mẫu lớn hơn điểm chuẩn là mẫu không có thuốc còn mẫu nhỏ hơn hoặc bằng thì dự đoán là có thuốc. Điểm chuẩn dựa vào giới hạn phát hiện LOD (limit of detection) ± 2-3 cho kết quả chính xác hơn. - Định lượng: dùng tỉ số B/B o sau đó kiểm tra bằng HPLC hoặc LC/MS B: cpm của mẫu thử B o : cpm của mẫu trắng, không có dư lượng nitrofuran 10 [...]... thờm 40 àL methanol lc trong 15 giõy v ỏnh siờu õm trong 2 phỳt Tip theo thờm 160 àL nc lc trong 15 giõy v lc qua u lc mu t ng PTFE 0.2-àm cho vo l nh 300-àL 2.3.5 Phng phỏp trớch ly nitrofurans gc Sn phm trờn tip tc x lý nh lng nitrofurans gc cú trong mu mt ong bnh ó em nh lng cht chuyn hoỏ nitrofuran Sau khi qua ct SPE thu dung dch nc gii cha cht chuyn hoỏ nitrofuran, ra ct SPE trong 1 phỳt vi 3 ml... g mt ong do thnh bỏnh ging mt ming ch hambuger nh 50.02 g ch gm hn hp ng-mt ong t lờn trờn khung t ong ca mt trong s n ong thớ nghim 25.04 g ch ca cựng hn hp em t cựng v trớ ca n th 2 Liu lng bo m lng thuc cho ong bnh Mt ong dựng trong ch thuc c thu t n ong ca nm trc v ó c phõn tớch bo m khụng cũn thuc - Thu mt nhim bnh Collection of Incurred Honey Nhng con ong c 2 n tiờu th nhng ming ch trong 24h... kim tra trong vựng 0.5-8 mg/L Kim tra mi nitrofuran phõn tớch v chớnh xỏc ca phng phỏp bng cỏch phõn tớch 12 mu 4 mg/L trong bng 1, FZD, NFT v NFZ vi lng mu l 120, 123 v 117 chy trong 1 gi + nh hng ca nhng cht gõy nhiu: Mi dung dch chun 4 mg/L nitrofuran khi tiờm mang theo cỏc cation (Ca2+, Na+ v PO43-) v anion (Cl-) cú rt nhiu trong thc n vt nuụi vi t l khi lng ion khỏc nhau Khong phõn tớch trong h... nhng khung cha mt ong dỏn nhón v d tr trong nhng t trng nhit phũng 25oC Nhng khung ly i c thay bng nhng khung vi l t ong trng Thu thờm 2 mu mt ong t mi loi trong 1-2 tun c 4 mu Mt ong c 13 Tiu lun cỏc phng phỏp phõn tớch cụng c chit kit t l t ong bng spatulas lm bng thộp khụng g v em lc qua vi tha ó tit trựng ri ng trong nhng bỡnh trỏng bng methanol Tu thuc loi v s ngy hỳt mt, ong bnh sn xut t 300... cụng c 2.5.5 Chun b mu Nitrofurans c cụ lp t thc n vt nuụi (theo Barbosa, 2007), Cõn 5.0 g thc n bm nh b trong cc beaker polypropylene 250 ml Sau ú thờm 20 ml dung dch CH3COONH4 79 mM (pH 4.6) v thờm NH4OH 30% cho n pH khong 8 Hn hp sau ú c n nh trong 15 phỳt, thờm 30 ml ethyl acetate ri em khuy trong mỏy lc trong 20 phỳt Sau ú, chuyn hn hp sang ng polypropylene v mỏy ly tõm trong 10 phỳt 3000 rpm... 3400 RCF) trong 10 phỳt 15oC B lp hexane trờn b mt, lp nc chia lm 2 vi 6 ml EtOAc Mu v cht chun c trn, quay mnh trong 15 giõy Sau ú em ly tõm 4000 rpm (~ 3400 RCF) trong 5 phỳt 15 C, thu lp trờn EtOAc vo ng polypropylene sch 15 ml Lp EtOAc c ra 2 ln vi nc v sy trong Turbo Vap LV 50 C t chớnh xỏc cao (c bit l NP-AMOZ) ngay khi cao khụ thờm vo 2 ml methanol ra trong thnh ng Quay mnh ng trong 10 giõy... ong con no c p trờn t n ong c nuụi trong phũng thớ nghim USDA-ARS Bee Research Laboratory Beltsville, MD Thớ nghim c bt u u thỏng 5 nm 2005, sut trong mựa b kt gai en (Robinia pseudoacacia) v tulip poplar (Lirodendroan tulipifera) lm ngun mt hoa - Liu lng nitrofuran trong mt ong Dosing Nitrofurans to Bees Furazolidine (23.2 mg), nitrofurazone (25.3 mg), furaltadone (25.8 mg), v nitrofurantoin (25.6 mg)... Validation Mi mu mt ong bnh ly t phũng thớ nghim Bee Research Laboratory c chia nh ng trong ti 3 nhit khỏc nhau: nhit phũng, -20C, v -80C Nhng mu ny c em i phõn tớch bn ca nitrofuran gc v d lng cht chuyn hoỏ nitrofuran trong mt ong bnh nhit phũng Mt ong d tr -80C lm mu 0 nhit phũng Theo nh k, cỏc mu c ly t ong bnh nhit phũng v tr -80C lm chm cỏc phn ng phõn hu S phõn mnh nitrofuran gc v cht... dch phõn tớch - Dung dch gc KMnO4 (10-2 M) pha bng cỏch ho tan 0.1587 g KMnO4 (Ajax, Australia) trong nc kh ion v trong t lnh trong 1 tun - Dung dch cht mang H2SO4 0.1M chun b hng ngy t dung dch axit sulphuric 2M (Merck, Germany) trong nc - Dung dch thuc th KMnO4 ó axit hoỏ (2.5 x 10-5 M) chun b hng ngy trong lỳc pha dung dch gc KMnO4 thnh dung dch cht mang Tt c cỏc dung dch u c kh oxi bng cỏch sc N2... c n nh trong mt nm bo qun di nhit < -10C - Mu chun nh lng Calibration Standards Chun 5 cht chuyn hoỏ nitrofuran AOZ, SC, AH, AMOZ cỏc nng 0.250, 0.500, 1.00, 2.00, and 4.00 ng/g (vi nng ppb trong mt ong) thờm vo 100 àL dung dch chun (0.00500, 0.0100, 0.0200, 0.0400, 0.0800 ng/àL) v 50 àL dung dch ni chun (tng ng1 ng/g trong mt ong) cho vo ng ly tõm polypropylene 50 ml Chun kim tra mu mt ong nhm . NITROFURAN TRONG MẬT ONG Các phương pháp xác định nitrofuran và chất chuyển hoá trong mật ong - Định tính, bán định lượng: Charm II Test, ELISA [3] - Định lượng: HPLC, LC/MS [9] Trong đó, phương. II là phương pháp hàng đầu trong trong việc phân tích kháng sinh trong sữa. Vì phương pháp này nhanh, đơn giản, nhạy.Ngày nay thì áp dụng trong mọi mẫu, mẫu mật ong vào 2003 [6b]. 2.2.1 Ưu. 5 năm 2005, suốt trong mùa bồ kết gai đen (Robinia pseudoacacia) và tulip poplar (Lirodendroan tulipifera) làm nguồn mật hoa. - Liều lượng nitrofuran trong mật ong. Dosing Nitrofurans to Bees Furazolidine