BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN VIỆN LÖA ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG CHƢƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƢỚC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI TẠO DÕNG ĐẬU TƢƠNG BIẾN ĐỔI GEN KHÁNG SÂU VÀ CHỊU HẠN MÃ SỐ: CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI: VIỆN LÖA ĐBSCL CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: PGS.TS. TRẦN THỊ CÖC HÕA Cần Thơ 11/2010 1 VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VIỆN LÖA ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG __________________ CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự do - Hạnh phúc Viện lúa ĐBSCL, ngày 02 tháng 12 năm 2010. BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI/DỰ ÁN SXTN I. THÔNG TIN CHUNG 1. Tên đề tài/dự án: TẠO DÕNG ĐẬU TƢƠNG BIẾN ĐỔI GEN KHÁNG SÂU VÀ CHỊU HẠN Mã số đề tài, dự án: Thuộc: - Chương trình (tên, mã số chương trình): Công nghệ Sinh Học Nông Nghiệp - Dự án khoa học và công nghệ (tên dự án): - Độc lập (tên lĩnh vực KHCN): 2. Chủ nhiệm đề tài/dự án: Họ và tên: Trần Thị Cúc Hòa Ngày, tháng, năm sinh: 30-03-1955 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Phó giáo sƣ, Tiến sỹ Chức danh khoa học: Nghiên cứu chính Chức vụ Điện thoại: Tổ chức: 07103 862 993 Nhà riêng: 07103 862 214 Mobile: : 0913126130 Fax: 07103 861 457. E-mail: tranthicuchoa@yahoo.com Tên tổ chức đang công tác: Viện lúa Đồng bằng sông Cửu Long Địa chỉ tổ chức: xã Tân Thạnh, huyện Thới Lai, Thành phố Cần Thơ Địa chỉ nhà riêng: Viện lúa ĐBSCL, huyện Thới Lai, Thành phố Cần Thơ 2 3. Tổ chức chủ trì đề tài/dự án: Tên tổ chức chủ trì đề tài: Viện lúa Đồng bằng sông Cửu Long Điện thoại: 07103 862974 Fax: 07103 861 457 E-mail: levanbanh@clrri.org Website: http://www.clrri.org . Địa chỉ: xã Tân Thạnh, huyện Thới Lai, Thành phố Cần Thơ Họ và tên thủ trưởng tổ chức: TS. Lê Văn Bảnh Số tài khoản: 1802201000018 Ngân hàng: Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn, Ô Môn, Cần Thơ Tên cơ quan chủ quản đề tài: Viện Khoa Học Nông Nghiệp Việt Nam II. TÌNH HÌNH THỰC HIỆN 1. Thời gian thực hiện đề tài/dự án: - Theo Hợp đồng đã ký kết: từ tháng 10 năm 2006 đến tháng 06 năm 2010 - Thực tế thực hiện: từ tháng 10 năm 2006 đến tháng 09 năm 2010 - Được gia hạn (nếu có): - Lần 1: từ tháng 06 năm 2010 đến tháng 09 năm 2010 - Lần 2 …. 2. Kinh phí và sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 4.615 tr.đ, trong đó: + Kính phí hỗ trợ từ SNKH: 4.615 tr.đ. + Kinh phí từ các nguồn khác: ……………….tr.đ. + Tỷ lệ và kinh phí thu hồi đối với dự án (nếu có): …………. ……………………………………. 3 b) Tình hình cấp và sử dụng kinh phí từ nguồn SNKH: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt được Ghi chú (Số đề nghị quyết toán) Thời gian (Tháng, năm) Kinh phí (Tr đ) Thời gian (Tháng, năm) Kinh phí (đ) 1 2006 950 2006 950 949,638420 2 2007 450 2007 450 400,229738 3 2008 2.015 2008 2.015 1.880,669842 4 2009 800 2009 800 803,721924 5 2010 400 2010 400 496,292091 c) Kết quả sử dụng kinh phí theo các khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung các khoản chi Theo kế hoạch Thực tế đạt được Tổng SNKH Nguồn khác Tổng SNKH Nguồn khác 1 Trả công lao động (khoa học, phổ thông) 1.481,660 1.481,660 1.481,660 1.431,660 2 Nguyên, vật liệu, năng lượng 2.069,840 2.069,840 2.069,840 2.057,780015 3 Thiết bị, máy móc 736 736 - 736 721,312 4 Xây dựng, sửa chữa nhỏ 30 30 - 30 30 5 Chi khác 297,500 297,500 297,500 289,500 Tổng cộng 4.615,000 4.615,000 4.615,000 4.530,252015 - Lý do thay đổi (nếu có): 4 3. Các văn bản hành chính trong quá trình thực hiện đề tài/dự án: (Liệt kê các quyết định, văn bản của cơ quan quản lý từ công đoạn xác định nhiệm vụ, xét chọn, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực hiện nếu có); văn bản của tổ chức chủ trì đề tài, dự án (đơn, kiến nghị điều chỉnh nếu có) Số TT Số, thời gian ban hành văn bản Tên văn bản Ghi chú 1 Số 494/BNN- KHCN, Hà Nội ngày 18 tháng 01 năm 2007 Thông báo kế hoạch vốn sự nghiệp khoa học năm 2006 cho các đề tài CNSH NN 2006 2 Số 26 QĐ/VL- ĐT/2007 Quyết định Về việc: giao nội dung và kinh phí thực hiện đề tài nghiên cứu khoa học và công nghệ đợt 1, năm 2007 3 Số 85/VL-KH V/v: Xin điều chỉnh kinh phí đề tài CNSH 4 Số 1823/QĐ- BNN-KHCN Quyết định Phê duyệt điều chỉnh tổ chức, cá nhân, mục tiêu, dự kiến kết quả, kinh phí và thời gian thực hiện một số đề tài thực hiện từ năm 2006 và 2007 của “Chương trình trọng điểm phát triển và ứng dụng công nghệ sinh học trong lĩnh vực nông nghiệp và phát triển nông thôn đến năm 2020” 5 Số 267/HĐ- BNN-KHCN Hợp đồng trách nhiệm (thực hiện đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ) 6 Số 68/QĐ-VL- KH Quyết định Về việc giao nội dung và kinh phí thực hiện đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ đợt 1, năm 2008 7 Số 3369 QĐ/ BNN-KHCN Quyết định Về việc thực hiện nội dung tăng cường trang thiết bị 8 Số 04/VL-KH Chuyển kinh phí chưa sử dụng đề tài CNSH năm 2008 sang năm 2009 5 9 Số 484/BNN- KHCN V/v: Chuyển kinh phí chưa sử dụng năm 2008 của đề tài sang năm 2009 10 Số 84/QĐ-BNN- TC Về việc ban hành quy định một số định mức về tiền công, thù lao cho cán bộ kỹ thuật, lao động khác tham gia thực hiện các nội dung nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ áp dụng cho các đơn vị đuợc giao sử dụng nguồn kinh phí sự nghiệp khoa học do BNN & PTNT quản lý 11 Số 647/BNN- KHCN Thông báo kế hoạch Khoa học công nghệ năm 2009 lần 1 13 Số 49/ QĐ-VL- KH Quyết định Về việc giao nội dung và kinh phí thục hiện đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ đợt 1, năm 2009 14 Số 5561/BNN- KHCN V/v Đoàn ra của đề tài thuộc chương trình CNSHNN 15 Số 134/QĐ-VL- TCCB Quyết định Về việc cử cán bộ đi nước ngoài 16 Số 198/VL-KH Về việc điều chỉnh nội dung kinh phí thực hiện đề tài 17 Số 7137/BNN- KHCN Về việc điều chỉnh nội dung đề tài “Tạo dòng đậu tương biến đổi gen kháng sâu và chịu hạn” 19 Số 03/VL-KH V/v: Xin gia hạn đề tài CNSH 20 Số 21/QĐ-VL- KH Quyết định Về việc giao nội dung và kinh phí thực hiện đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ, năm 2010 6 4. Tổ chức phối hợp thực hiện đề tài, dự án: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức đã tham gia thực hiện Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt được Ghi chú * 1 Bộ Nông Nghiệp Và Phát Triển Nông Thôn Viện Lúa ĐBSCL - Thiết kế vector kép mang gen kháng sâu và gen chọn lọc pmi hoặc kháng hygromycine (hpt), glufosinate (bar). - Đánh giá khả năng chuyển nạp gen chỉ thị gusA và pmi (vector pManca) hoặc gusA và bar (pCambia 3301) trên giống đậu tương Bert, Maverick và giống đậu trồng tại Việt Nam để tìm ra giống đậu có khả năng chuyển nạp gen cao - Chuyển nạp các gen kháng sâu trong các vector kép vào các giống đậu tương (giống Model: Bert, Maverick) và giống Việt Nam - Đã thiết kế 5 vector mang gen kháng sâu. Đạt yêu cầu về chất lượng sản phẩm khoa học - Đã xác định được 2 giống đậu tương đang trồng ở Việt Nam là MTĐ 176 và HL202, và 2 giống đậu nhập nội là William 82 và Maverick có hiệu quả chuyển nạp gen cao. Các giống này đang được dùng để chuyển nạp gen - Đối với chuyển nạp gen kháng sâu soycry1Ac (vector pPTN791) đã tạo được 65 dòng T0 biến nạp mang gen kháng sâu trên trên 4 giống đậu tương: Maverick, MTĐ 176, Williams 82 và PC 19. Các dòng này đã được xác định bằng phân tích Southern blot. - Đối với chuyển nạp gen kháng sâu vip3A (vector pCNSH.133.Soy.Vip3A) đã tạo được 10 dòng T0 từ giống 7 - Tách chiết promoter, gen chịu hạn và thiết kế vector kép mang gen chịu hạn - Bắt đầu xác định các dòng đậu tương chuyển nạp gen kháng sâu (PCR, Southern blot, Western blot và RT- PCR) Maverick trồng trong nhà lưới, kết quả phân tích PCR cho thấy có 3 dòng mang gen vip3A (HS12-02, HS12-06, HS13-01) - Đã thiết kế được 1 vector mang gen chịu hạn (bar-rd29A-drebIA) - Đã kiểm tra PCR ở 65 dòng T0 biến nạp gen kháng sâu trên 4 giống đậu tương Maverick, MTĐ 176, Williams 82 và PC 19. Kết quả PCR cho thấy 48 dòng có gen bar, 37 dòng có gen soycry1Ac. Đã phân tích Southern blot các dòng đậu tương biến đổi gen của các thế hệ (T0, T1, T2 và T3) như sau:  65 dòng T0 chuyển nạp gen bằng vector pPTN791 gồm: HS19/Maverick, HS20/Maverick, HS21/Maverick, HS21/Maverick, HS22/Maverick, HS23/Maverick, HS24/Maverick, HS25/Maverick, HS26/Maverick, HS40/Maverick, HS43/Maverick, H3/MTĐ 176, H5/MTĐ 176, H6/MTĐ 176, H9/MTĐ 176, H18/MTĐ 176, H19/MTĐ 176, HW4/William 82, P1/William 82, H1PC20/PC20, và H2PC20/PC20. Kết quả phân tích ghi nhận: cho thấy 44 dòng có gen bar và 35 dòng có gen soycry1Ac. 8  235 dòng T1 từ 19 dòng T0 độc lập trong đó giống Maverick có 129 dòng T1 từ 11 dòng T0 (HS 22-01, HS 22-05, HS 22-13, HS 23-04, HS 23-06, HS 25-10, HS 40-01, HS 40-04, HS 21-05, HS 24-01, HS 22-03) giống MTĐ 176 có 96 dòng T1 từ 6 dòng T0 ( H3- 01a, H5-01, H6-1a, H6-1b, H9-01, H19-01) và giống Williams 82 có 10 dòng T1 từ 2 dòng T0 (HW4-01, P1-1) chuyển nạp gen với vector pPTN 791. Kết quả phân tích ghi nhận: 94 dòng mang cả gen bar và soycry1Ac; 74 dòng không mang gen nào; 44 dòng mang gen bar; 23 dòng mang gen soycry1Ac.  171 dòng T2 từ 11 dòng T1 độc lập trong đó giống MTĐ 176 có 134 dòng T2 từ 9 dòng T1 (H6-1a-01, H6-1a-02, H6-1a-09, H6-1b-07, H6-1b-10, H5-1-13, H19-1-3, H5-1- 11, H19-1-2), giống Maverick có 37 dòng T2 từ 2 dòng T1(HS21-05- 18, HS21-05-03) chuyển nạp gen với vector pPTN 791. Kết quả phân tích nhƣ sau: Trong số 171 dòng T2, kết quả phân tích như sau: - 76 dòng mang cả gen bar và soycry1Ac; - 29 dòng không mang gen nào; - 17 dòng mang gen bar; - 49 dòng mang gen soycry1Ac. 9  98 dòng T3 phát triển từ 5 dòng T2 chuyển nạp gen với vector pPTN 791 gồm: H6-1a-1- 12/MTĐ176 (mang gen soycry1Ac, không có gen bar và nhiễm Liberty ở thế hệ T2), H6-1a-1-17/MTĐ176 (mang gen soycry1Ac, không có gen bar và nhiễm Liberty ở thế hệ T2) và H6-1a-1-8/MTĐ176 (mang gen soycry1Ac, không có gen bar và nhiễm Liberty ở thế hệ T2) và H6-1a-9-4/MTĐ176 (mang gen soycry1Ac, không có gen bar và nhiễm Liberty ở thế hệ T2), và H6- 1a-1-10/MTĐ176 (mang gen soycry1Ac, không có gen bar và nhiễm Liberty ở thế hệ T2). Kết quả ghi nhận : + Trong 17 dòng T3 phát triển từ T2 ( H6-1a-1-12/MTĐ176) có 12 dòng mang gen soycry1Ac và nhiễm Liberty và 5 dòng không mang cả gen soycry1Ac và gen bar. + 30 dòng T3 phát triển từ T2 (H6- 1a-9-4/MTĐ176) có 30 dòng mang gen soycry1Ac và nhiễm Liberty. + 17 dòng T3 phát triển từ T2 (H6- 1a-1-17/MTĐ176) có 17 dòng mang gen soycry1Ac và nhiễm Liberty. + 17 dòng T3 phát triển từ T2 (H6- 1a-1-08/MTĐ176) có 17 dòng mang gen soycry1Ac và nhiễm Liberty. + 17 dòng T3 phát triển từ T2 (H6- 1a-1-10/MTĐ176) có 17 dòng mang gen soycry1Ac và nhiễm Liberty. Phân tích Western blot 12 dòng T5 ( 2 dòng T5 H6-1a-9-13-5-6-9, 3 [...]... đã tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số Tên sản phẩm và chỉ tiêu chất lượng TT chủ yếu 1 Đơn vị đo Số lượng Các dòng chuyển Dòng gen kháng sâu: - Gen hữu dụng Gen Theo kế hoạch Thực tế đạt được 2-3 dòng đậu tương mang gen kháng sâu thế hệ T2, T3 - Gen chọn lọc Gen (kháng thuốc diệt cỏ hoặc kháng sinh) - Loại sâu kháng Sâu 2 Các dòng chuyển Dòng gen chịu hạn - Gen chịu hạn Gen 1-2 dòng đậu tương mang gen chịu. .. tạo ra được các dòng đậu tương biến đổi gen mang gen kháng sâu và tạo được một số dòng thể hiện tính kháng cao đối với sâu xanh da láng ở đậu tương vì vậy mở ra triển vọng ứng dụng vào sản xuất Cây đậu tương chuyển gen kháng sâu hại sẽ giúp tăng và ổn định năng suất đậu tương trong điều kiện thâm canh, tăng vụ và giảm chi phí thuốc trừ sâu ở Việt Nam Qua đó, góp phần gia tăng năng suất, sản lượng và. .. giá các dòng đậu tương biến đổi gen kháng sâu bằng phân tích PCR, Southern blot, Western, RTPCR) Thắng K.S.Nguyễn Đánh giá các dòng đậu tương Trần Hải biến đổi gen Bằng kháng sâu bằng phân tích PCR, Southern blot K.S Võ Thị Đánh giá các Kiều Trang cây biến đổi gen kháng sâu thu được bằng thử nghiệm sinh học tính kháng sâu K.S Trần Đánh giá các dòng đậu tương Thanh Hải biến đổi gen kháng sâu bằng phân... tích PCR các Tháng dòng đậu tương biển đổi gen 1/201 0kháng sâu (T0, T1, T2, ) 6/2010 15b Nội dung 2b: Phân tích Southern Tháng blot các dòng đậu tương biến đổi 1/201 0gen (T0, T1, T2, T3) 6/2010 15c Nội dung 2c: Phân tích Western Tháng blot các dòng đậu tương biến đổi 1/201 0gen thế hệ T3, T4 6/2010 15d Nội dung 2d: Thử Nghệm tính Tháng kháng sâu của các dòng đậu tương 1/201 0biển đổi gen (thế hệ T3, T4,... dòng T0 biến nạp gen kháng sâu trên 4 giống đậu tương Maverick, MTĐ 176, Williams 82 và PC 19 Kết quả PCR cho thấy 48 dòng có gen bar, 37 dòng có gen soycry1Ac Đã phân tích Southern blot các dòng đậu tương biến đổi gen của các thế hệ (T0, T1, T2 và T3) như sau: - 65 dòng T0 chuyển nạp gen bằng vector pPTN791 Kết quả phân tích ghi nhận: cho thấy 44 dòng có gen bar và 35 dòng có gen soycry1Ac - 235 dòng. .. lượng khoa học và đảm bảo đúng tiến độ khoa học 31 II Kiểm tra định kỳ Lần 1 17/11/2007 Kết quả của đề tài: - Dòng đậu tương đáp ứng khả năng chuyển gen: 5 giống - Vector mang gen: 5 - Dòng đậu tương chuyển nạp gen: 35 - Các số liệu nghiên cứu về dòng đậu tương có khả năng chuyển nạp gen: gen kháng sâu, vector mang gen và dòng đậu tương chuyển nạp gen Đề tài đề nghị chuyển một phần nôi dung 4 và 5 sang... của gen soyCry1Ac - Đánh giá các cây biến đổi gen kháng sâu thu được bằng thử nghiệm sinh học tính kháng sâu 10 - Đã thử nghiệm sinh học tính kháng sâu xanh da láng của các dòng đậu tương biến đổi gen T2, T3 và T4 ở phòng thí nghiệm và T3, T4, T5 ở điều kiện ngoài nhà lưới, kết quả : + Trong phòng thí nghiệm : Thế hệ T2: chọn được 13 dòng đậu tương thể hiện tính kháng sâu xanh da láng 10 dòng biến đổi. .. (Bert và Maverick) và giống đậu tương Việt Nam) Nội dung 4: Đánh giá các cây biến đổi gen kháng sâu thu được (PCR, Southern blot, thử nghiệm sinh học) b Nội dung và khối lượng công việc đã thực hiện: - Đã thiết kế một vector mang gen chịu hạn - Đã chuyển nạp gen kháng sâu và thu được các dòng T1, T2, T3 (Vượt so với kế hoạch 2 dòng T1 và T3) - Đã phân tích Southern blot 20 dòng T0, 201 dòng T1 và 29 dòng. .. 1-2 dòng đậu tương mang gen chịu hạn thế hệ T1, T2 -8 cây T0 kháng thuốc diệt cỏ Trong đó có 5 cây T0 có sự hiện diện gen chịu hạn dreb1A 6-8 vector gồm vector đơn và kép mới (kháng sâu, chịu hạn) 6 vector gồm 5 vector kháng sâu và 1 vector chịu hạn - Gen chọn lọc Gen (kháng thuốc diệt cỏ hoặc kháng sinh) - Mức độ kháng Giai đoạn 3 Vật liệu chuyển gen vector - Lý do thay đổi (nếu có): 26 b) Sản phẩm Dạng... dung và khôi lượng công việc theo kế hoạch được duyệt: - Thiết kế vector chịu hạn mang promoter và gen chịu hạn (35S-TPS1, rd2-CBF4 hoặc rd29A/DREB1A) - Nội dung 2: Tiếp tục thực hiện chuyển nạp các gen kháng sâu trong các vector kép vào hai giống đậu tương model (Bert và Maverick) và giống đật tương Việt Nam) Nội dung 3: Bắt đầu chuyển nạp gen chịu hạn trong các hydrid vector vào các giống đậu tương . đã tạo được 10 dòng T0 từ giống 7 - Tách chiết promoter, gen chịu hạn và thiết kế vector kép mang gen chịu hạn - Bắt đầu xác định các dòng đậu tương chuyển nạp gen kháng. nội dung đề tài Tạo dòng đậu tương biến đổi gen kháng sâu và chịu hạn 19 Số 03/VL-KH V/v: Xin gia hạn đề tài CNSH 20 Số 21/QĐ-VL- KH Quyết định Về việc giao nội dung và kinh phí thực. được sử dụng trong tạo giống đậu tương biến đổi gen. - Tạo chọn dòng đậu tương chịu hạn (vector pPTN-rd29A- DREB1A) đã tạo được 12 cây T0 trồng trong nhà lưới có 8 cây kháng thuốc diệt cỏ